선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 녹차 와 유산균제제 첨가사료가 닭에서 E. maxima 감염에 미치는 영향을 관찰하고, E. maxima 감염 닭의 싸이토카인 생성에 미치는 영향을 구명하고자 일련의 시험을 수행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 녹차 및 유산균 첨가사료를 급여한 후 E.
- 숙주 면역반응 역시 매우 복잡하다(10, 12). 본 연구에서는 녹차와 유산균제제 첨가사료가 닭에서 E. maxima 감염에 미치는 영향을 관찰하고, 또한, 녹차 및 유산균제제가 E. maxima 감염 닭의 싸이토카인 생성에 미치는 영향을 구명하고자 일련의 시험을 수행하였다.
- 본 연구에서는 녹차와 유산균제제를 사료에 첨가하여 닭에 급여한 후, E. maxima를 인공감염시켜 분변으로 배출되는 난포낭의 변화를 관찰하였다, 또한, 녹차 및 유산균제제가 E. maxima 감염 닭의 면역기전에 미치는 영향을 구명하고자, 실험계군에 대해 IL-2 및 IFN-/의 유전자 발현양상을 분석하고, 비장세포 배양액에 대한 IL-2와 IFN* 분비 농도의 변화를 측정하였다.
제안 방법
- 1% 유산균 사료를 동량 혼합)를 각 각 급여하였다(Table 1). 47일령 째에 E. maximc를 감염시켰으며, 감염 후 6일 부터 5일 동안 분변을 매일 수거하여 배설된 난포낭의 수를 측정하였다(4, 10, 29). 대조군 I과 II는 항콕시듐제제가 첨가되지 않은 일반사료를 급여하였으며, 무처치 대조군 I은 E.
- 5U, Solgent, Korea), 멸균증류수 6 μl를 가하여 총용량 20 μl reaction mixture로 하여 T-Gradient (Biometra, Germany)를 사용하여PCR을 수행하였다. 94℃(2에서 5분간, 그리고 94℃(3에서 1분간 열처리하고, 551에서 1분간 접합, 72℃(2에서 1분간 연장 과정을 38회 반복 실시하고, 마지막으로 72P에서 5분간 처리하였다. 반응이 끝난 후 8 μl의 PCR 산물을 1.
- E. maxima 감염에 미치는 녹차 및 유산균제제의 효과를 구명하기 위하여 Table 1과 같이 30일령의 닭 105마리를 선정하여 7개 군(I~VII)에 15마리씩 배정하였으며, 33일령 부터 57일령 까지 녹차 첨가사료 사료 당 녹차의 비율; 0.5% 및 2.0%; g/g)와 유산균 첨가사료 (사료 당 균액량; 0.1% 및 0.5%; ml/g), 그리고 녹차 및 유산균 혼합 첨가사료 (2.0% 녹차사료와 0.1% 유산균 사료를 동량 혼합)를 각 각 급여하였다(Table 1). 47일령 째에 E.
- E. maxima를 인공감염 시킨 후 1일, 3일 그리고 7일에 닭의 비장을 무균적으로 적출한 후 만든 미세 조직 파편을 Hanks's balanced salt solution (HBSS, Sigma, USA)에 부유하여 채집된 세포 부유액을 Histopaque(Sigma, USA)과 밀도구배원심 기법 (l, 800rpm, 20분, 실온)을 이용하여 림프구를 수집하고 HBSS에 부유하여 250g에서 5분간 원심하여 2회 세척하였다. 수집된 림프구는 10% 우태아혈청 (Sigma, USA), 페니실린(100 U/ml), 스트랩토마이신 (100ug/ml)이 포함된 RPMI 1640 배지에 재 부유키고 Trypan blue dye exclusion 방법으로 산정한 세포 농도를 5× 106cells/ml로 조정한 후 마이클로플레이트 (96-well, tissue culture)에 분주하고 Con A(12.
- Lactococcus DH1, Lactobacillus Km37, 그리고 Pediococcus SL4는 각 각 MRS broth (Difco, USA) 에서 16시간 배양하였고, Bacillus BLS는 LB broth (Difco, USA) 에서 16시간 배양하였다. Lactococcus DH1, Lactobacillus Km37, 그리고 Pediococcus SL4 혼합액과 Bacillus BLS 배양액은 4℃ 냉장고에 보관하였고, 사용전에 LactococcusDH1, Lactobacillus Km37, Pediococcus SL4, 그리고 BacillusBLS균의 혼합비율이 30:30:30:10 되도록 제조한 다음 에어로졸 분무기 (aerosol spray, Nalgene, USA)를 이용하여 사료에 골고루 혼합하였다.
- Lactococcus DH1, Lactobacillus Km37, 그리고 Pediococcus SL4는 각 각 MRS broth (Difco, USA) 에서 16시간 배양하였고, Bacillus BLS는 LB broth (Difco, USA) 에서 16시간 배양하였다. Lactococcus DH1, Lactobacillus Km37, 그리고 Pediococcus SL4 혼합액과 Bacillus BLS 배양액은 4℃ 냉장고에 보관하였고, 사용전에 LactococcusDH1, Lactobacillus Km37, Pediococcus SL4, 그리고 BacillusBLS균의 혼합비율이 30:30:30:10 되도록 제조한 다음 에어로졸 분무기 (aerosol spray, Nalgene, USA)를 이용하여 사료에 골고루 혼합하였다.
- 침전물을 10 μl의 DEPC (Sigma, USA)로 처리한 멸균증류수를 넣어 잘 섞은 후 total RNA를 얻은 후 -70℃ 저온냉동고에 보관하면서 사용하였다. Total RNA template 5 μl, 5 × reverse transcriptase (RT) buffer 3μl, dNTP 4μl (2.5 mM), RNase inhibitor 0.5 μl(20U, Invitro, USA), reverse transcriptase 0.5 μl(100U, invitro, USA), oligo dT (20mer, bioneer) 1 μl, 멸균된 3차증류수 6 μl를 넣어 총용량 20 로 하여 T-gradient PCR (Biometra, Germany) 기기를 사용하여 42℃(2에서 60분간, 그리고 95P에서 5분간 반응하여 reverse transcription을 수행하여 cDNA를 합성하였다(11).
- cDNA template 2μl, 15 mM MgCl2를 포함한 10× PCR buffer 5 μl, dNTP 4 μl(2.5 mM), IL-2 및 IFN-/ primer를 각각 1 μl(10 pmol), Tag polymerase 1 μl(2.5U, Solgent, Korea), 멸균증류수 6 μl를 가하여 총용량 20 μl reaction mixture로 하여 T-Gradient (Biometra, Germany)를 사용하여PCR을 수행하였다. 94℃(2에서 5분간, 그리고 94℃(3에서 1분간 열처리하고, 551에서 1분간 접합, 72℃(2에서 1분간 연장 과정을 38회 반복 실시하고, 마지막으로 72P에서 5분간 처리하였다.
- maxima의 난포낭수를 측정하기 위하여 인공감염 후 6일부터 5일 동안 매일 채취된 분변에 증류수를 가하여 1, 000 ml가 되도록 조정하였고, 실온에서 18시간 처리 후, 호모게나이져 (Fisher, USA)에 넣어 균질화 하였다. 그 중 1 ml를 취한 후 원침관에 넣고 Sheathed 49 ml를 가한 후 잘 혼합하고 150μl를 취해 McMaster OPG 계산판에 넣어 현미경 (× 100)하에서 병아리당 평균 난포낭 수를 다음 공식에 의해 산정하였다.
- 녹차 및 유산균 첨가사료를 2주일 동안 급여한 후 1×10, oocysts/ml 농도의 E. maxima를 닭에게 경구로 인공 감염시킨 후 6일(생후 53일령)부터 10일(생후 57일령)까지 5일 동안 매일 분변을 수거하여 난포낭의 수를 측정하고 병아리 당 배설한 총 난포낭을 계수하여 비교하였다. 그 결과 (Fig 1), 감염대조군(II)은 55.
- 녹차와 유산균 첨가사료 급여가 E. maxima 감염에 따른 싸이토카인 변화에 미치는 영향을 알기 위해 E. maxima 감염 후 1일과 3일, 5일 그리고 7일에 IL-2와 IFN-y RNA을 검출하였다. IL-2 RNA는 감염 후 1일에 III군(0.
- 녹차와 유산균 첨가사료를 급여하고 있는 닭에 E. maxima 를 인공접종한 후, 1일, 3일, 및 7일에 적출한 비장으로 준비한 비장세포 (5X106cells/mlX Con A와 함께 48시간 동안 배양 후 상층액을 회수하고 ELISA를 이용하여 IL-2와 IFN-/의 발현양상을 측정하였다. IL-2는 E.
- 1% BSA-PBS로 peroxidase-conjugated goat anti-mouse IgG antibody (Sigma,USA)를 2000배 희석하여 각 well에 100μl씩 첨가하였다. 다음에 상온에서 1시간 배양 시키고 세척한 후 각 well에 O-phenylenediamine•2HCl 첨가된 발색제(TMB substrate)를 가하고 5분 배양한 후에 2N H2SO4 50 μl로 반응을 정지시켜 450 nm(GENios, Tecan, USA)에서 측정하였다.
- maxima의 난포낭이 검출되지 않은 병아리를 선별하여 1개월간 적응 사육시킨 후 본 실험에 사용하였다. 닭 사육용 케이지를 사용하여 격리사육 하였으며, 항콕시듐제제가 첨가되지 않은 사료를 별도 주문생산 하여 급여하였고, 지하수를 공급하였다.
- maximc를 감염시켰으며, 감염 후 6일 부터 5일 동안 분변을 매일 수거하여 배설된 난포낭의 수를 측정하였다(4, 10, 29). 대조군 I과 II는 항콕시듐제제가 첨가되지 않은 일반사료를 급여하였으며, 무처치 대조군 I은 E. maxima 대신에 PBS를 투여하였고, 무처치 대조군 II는 E. maxig를 감염시켰다.
- RT-PCR을 위한 primers는 Lillehoj 등(11)의 방법을 이용하여 제작하였으며, IL-2 (400bp; 201-600nt) 에 대한 forward primer 로는 5'-CAGGAGTGCACCCAGCAAACT-3', reverse primei.로는 5'-GAACAGACGTCATATCACCCA-3', 그리고 IFN-/ (435 bp; 154-588nt)에 대한 forward primer로는 5'-CATACTGCAAGTAGTCTAAAT-J, reverse primer로는 5'-GCAATTGCATCTCCTCTGAGA-3'를 각각 제작하여 공시하였다.
- 94℃(2에서 5분간, 그리고 94℃(3에서 1분간 열처리하고, 551에서 1분간 접합, 72℃(2에서 1분간 연장 과정을 38회 반복 실시하고, 마지막으로 72P에서 5분간 처리하였다. 반응이 끝난 후 8 μl의 PCR 산물을 1.2% 아가로즈겔 (Gibco, USA)에 전기영동한 후 ethidium bromide (EtBr, Gibco, USA)에 염색하여 유전자의 유무를 Image analyzer (Pharmacia, US A)로 분석하였다. RT-PCR을 위한 primers는 Lillehoj 등(11)의 방법을 이용하여 제작하였으며, IL-2 (400bp; 201-600nt) 에 대한 forward primer 로는 5'-CAGGAGTGCACCCAGCAAACT-3', reverse primei.
- 수행하였다. 분변으로 배줄되는 E. maxima의 난포낭수를 측정하기 위하여 인공감염 후 6일부터 5일 동안 매일 채취된 분변에 증류수를 가하여 1, 000 ml가 되도록 조정하였고, 실온에서 18시간 처리 후, 호모게나이져 (Fisher, USA)에 넣어 균질화 하였다. 그 중 1 ml를 취한 후 원침관에 넣고 Sheathed 49 ml를 가한 후 잘 혼합하고 150μl를 취해 McMaster OPG 계산판에 넣어 현미경 (× 100)하에서 병아리당 평균 난포낭 수를 다음 공식에 의해 산정하였다.
- maxima를 인공감염 시킨 후 1일, 3일 그리고 7일에 닭의 비장을 무균적으로 적출한 후 만든 미세 조직 파편을 Hanks's balanced salt solution (HBSS, Sigma, USA)에 부유하여 채집된 세포 부유액을 Histopaque(Sigma, USA)과 밀도구배원심 기법 (l, 800rpm, 20분, 실온)을 이용하여 림프구를 수집하고 HBSS에 부유하여 250g에서 5분간 원심하여 2회 세척하였다. 수집된 림프구는 10% 우태아혈청 (Sigma, USA), 페니실린(100 U/ml), 스트랩토마이신 (100ug/ml)이 포함된 RPMI 1640 배지에 재 부유키고 Trypan blue dye exclusion 방법으로 산정한 세포 농도를 5× 106cells/ml로 조정한 후 마이클로플레이트 (96-well, tissue culture)에 분주하고 Con A(12.5 μg/ml)를 첨가하여 5% CO2-41℃에서 48시간 동안 배양하여 상층액을 수거하였다. 비장세포 상층액은 시험에 사용하기 전까지 -7℃에 저장하였다(23).
- 는 장상피 세포내에서 증식하는 기생충으로 숙주 방어 기전에서 장관임파절에 의한 세포매개 면역반응이 매우 중요하기 때문에 닭 구포자충 감염에 대한 세포성 면역을 평가하는 수단으로서 사용되고 Tcell markers. 알려진 싸이토카인 IL-2와 IFN-/에 대한 시험을 수행하였다(14, 28, 29, 3, 22).
- 1 Mcarbonate-bicarbonate buffer 로 mouse anti-chicken IL-2 monoclonal antibody (Serotec, UK) 및 mouse anti-chicken IFN-/ monoclonal antibody (Serotec, UK)를 100배 희석하여 각각 100 pl 첨가하였다. 플레이트는 상온에서 1시간 배양 시키고 PBS-T로 5회 세척한 후, 0.1% BSA-PBS로 peroxidase-conjugated goat anti-mouse IgG antibody (Sigma,USA)를 2000배 희석하여 각 well에 100μl씩 첨가하였다. 다음에 상온에서 1시간 배양 시키고 세척한 후 각 well에 O-phenylenediamine•2HCl 첨가된 발색제(TMB substrate)를 가하고 5분 배양한 후에 2N H2SO4 50 μl로 반응을 정지시켜 450 nm(GENios, Tecan, USA)에서 측정하였다.
대상 데이터
- 유산균제제는 엠디랩 (충남대학교 소재)에서 분양받아 사용하였으며, 유산균제제 "Lacto-BLS" 는 Bacillus BLS주 (IX 1011CFU/ml) 10%, Lactococcus DH1주 (3×109 CFU/ml) 30%, Lactobacillus Ktn37주 (3×109 CFU/ml) 30%, 그리고 Pediococcus SL4주 (3×109 CFU/ml) 30%를 혼합하여 제조하였다. Lactococcus DH1, Lactobacillus Km37, 그리고 Pediococcus SL4는 각 각 MRS broth (Difco, USA) 에서 16시간 배양하였고, Bacillus BLS는 LB broth (Difco, USA) 에서 16시간 배양하였다.
- 1일령 육용계 (한국 토종닭로드아일랜드레드오) 150마리를 축산연구소(대전시 소재)에서 분양받아 1주일 간격으로 2회 분변검사 하여 E. maxima의 난포낭이 검출되지 않은 병아리를 선별하여 1개월간 적응 사육시킨 후 본 실험에 사용하였다. 닭 사육용 케이지를 사용하여 격리사육 하였으며, 항콕시듐제제가 첨가되지 않은 사료를 별도 주문생산 하여 급여하였고, 지하수를 공급하였다.
- E. maxima는 중앙백신연구소(대전시 소재)에서 분양 받았으며, Sheathei액(자당 500 g에 물 600 ml를 가한 용액; 비중; L2)을 이용한 부유법으로 분변 중 난포낭을 집충하여 증류수로 수세한 다음 2.5% 중크롬산칼륨용액에 넣어, 포자를 형성시킨 후 4℃에 보관하면서 사용하였다. 난포낭은 접종하기 전 phosphate bufifered-saline (PBS, pH 7.
- 사료첨가제로 사용된 녹차는 전라남도 보성에서 재배된 녹차 잎을 6월에 수확하여 오븐(105℃)에서 24시간 동안 처리한 후 세절한 녹차로 보성 녹돈 영농조합(광주광역시 소재)에서 구입하여 Table 1과 같이 사료에 첨가하여 실험하였다.
데이터처리
- E. maximA 닭에 감염 시킨 후 채취한 분변에서 난포낭의 수와 ELISA를 이용한 IL-2 및 IFN-/농도를 측정한 결과를 GraphPad InStat(GraphPad Software, INC, USA)를사용하여 통계학적으로 분석하였다.
이론/모형
- 2% 아가로즈겔 (Gibco, USA)에 전기영동한 후 ethidium bromide (EtBr, Gibco, USA)에 염색하여 유전자의 유무를 Image analyzer (Pharmacia, US A)로 분석하였다. RT-PCR을 위한 primers는 Lillehoj 등(11)의 방법을 이용하여 제작하였으며, IL-2 (400bp; 201-600nt) 에 대한 forward primer 로는 5'-CAGGAGTGCACCCAGCAAACT-3', reverse primei.로는 5'-GAACAGACGTCATATCACCCA-3', 그리고 IFN-/ (435 bp; 154-588nt)에 대한 forward primer로는 5'-CATACTGCAAGTAGTCTAAAT-J, reverse primer로는 5'-GCAATTGCATCTCCTCTGAGA-3'를 각각 제작하여 공시하였다.
- 앞에서 준비된 비장세포 배양 상층액을 여과멸균(0.45 μm, Nalgene, USA)한 다음 Okamura 등(23)의 술식에 준해 실험하였다. 96-well ELISA plates를 준비하여 상층액 100 μl를 0.
성능/효과
- 1), 2.0% 녹차 첨가사료 투여군(IV)과 2.0% 녹차와 0.1%유산균 첨가 사료 급여군(V)의 난포낭 배설량이 감염대조군에 비해 유의하게 감소되는 효과를 나타냈으며, 또한 0.5% 유산균 첨가사료 급여군(VII)에서도 IV군과 Ⅴ군보다는 약하지만 다소 감소하는 경향이 인정되었다 (Fig 1).
- 미약하게 검출되었다. III군(0.5% 녹차)은 감염 3일, 5일 및 7일에, IV군(2.0% 녹차)에서는 감염 1일과 7일에 강하게 검출되었고, 녹차와 유산균 혼합 투여군(V)에서는 1일, 3일, 5일 및 7일에 약하게 나타났다. VI군(0.
- maxima 감염 후 1일과 3일, 5일 그리고 7일에 IL-2와 IFN-y RNA을 검출하였다. IL-2 RNA는 감염 후 1일에 III군(0.5% 녹차)에서 일반사료 또는 유산균을 급여한 군 보다 현저한 증가를 보였다. 또한 V군(2.
- 0% 녹차)에서는 감염 1일과 7일에 강하게 검출되었고, 녹차와 유산균 혼합 투여군(V)에서는 1일, 3일, 5일 및 7일에 약하게 나타났다. VI군(0.1% 유산균)은감염 1일, 3일, 그리고 5일에 약하게, 그리고 VII군(0.5% 유산균)은 감염 후 1일에 강하게, 5일과 7일에 약하게 검출되었다 (Fig 3, Table 2).
- 05). V군(2.0% 녹차+0.1 % 유산균 혼합), VI군 (0.1 % 유산균) 및 VII군(0.5% 유산균)은 I군에 비해서는 유의한 차이가 있었으나 (P<0.05), II군과는 유의한 차이가 없었다 (Fig 4). IFN-y는 III군(0.
- 05). V군(2.0% 녹차+0.1% 유산균혼합), VI군 (0.1 % 유산균) 및 VII군(0.5% 유산균)은 I군에 비해서는 유의한 차이가 있었으나 (P<0.05), II군과는 유의한 차이가 없었다 (Fig 5).
- maxima를 닭에게 경구로 인공 감염시킨 후 6일(생후 53일령)부터 10일(생후 57일령)까지 5일 동안 매일 분변을 수거하여 난포낭의 수를 측정하고 병아리 당 배설한 총 난포낭을 계수하여 비교하였다. 그 결과 (Fig 1), 감염대조군(II)은 55.38X106±4.74X106의 난포낭을 배설하였으며, 0.5% 녹차 첨가사료 투여군(III)은 33.91X106±3.57 X106의 난포낭을 배설하여 감염대조군(II)에 비해 매우 유의한 난포낭 수의 감소를 나타내었다 (p<0.001). 또한 2.
- maxima 감염 닭의 싸이토카인 생성에 미치는 영향을 구명하고자 일련의 시험을 수행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 녹차 및 유산균 첨가사료를 급여한 후 E. maxima를 닭에게 경구 감염시키고 5일 동안 분변 중에 배설되는 난포낭의 수를 측정하여 비교한 그 결과,2.0% 녹차 첨가사료 투여군 (IV)과 2.0% 녹차와 0.1% 유산균 첨가 사료 급여군(V)의 난포낭 배설량이 감염대조군에 비해 유의하게 감소되는 효과를 나타냈으며, 또한 0.5% 유산균 첨가 사료 급여군(VII)에서도 감소하는 경향이 관찰되었다. 닭의 비장세포에서 세포매개면역반응 관련 싸이토카인 수준을 시험하였던 바, IL-2 RNA는 감염 후 1일과 3일에 III군(0.
- 5% 유산균 첨가 사료 급여군(VII)에서도 감소하는 경향이 관찰되었다. 닭의 비장세포에서 세포매개면역반응 관련 싸이토카인 수준을 시험하였던 바, IL-2 RNA는 감염 후 1일과 3일에 III군(0.5% 녹차), V군(2.0% 녹차와 0.1% 유산균 혼합 투여군)과 VU군(0.5% 유산균)에서 다양한 수준으로 검출되었으며, IFN-/ RNA는 III군, IV군, V군, VI군 및 VII군에서감염 후 1일에서 7일 사이에 감염대조군에 비해 높게 검출되었다. 또한 Con A와 함께 배양된 비장세포의 IL-2 및 IFN-y발현 양상을 ELISA법으로 시험한 바, III군과 IV군에서 감염대조군에 비해 증가하는 경향을 보였으며, V군, VI 군 및 VII군은 차이가 없었다.
- 001). 또한 2.0% 녹차 첨가사료 투여군(IV)은 40.24X106±2.17X106, 2.0% 녹차와 0.1% 유산균 첨가사료 급여군(V)은 41.77 X 106 ± 2.39X106의 난포낭을 배설하여 유의성 (p< 0.01) 있게 감소 효과를 나타냈다. 또한 0.
- 5% 유산균)에서 다양한 수준으로 검출되었으며, IFN-/ RNA는 III군, IV군, V군, VI군 및 VII군에서감염 후 1일에서 7일 사이에 감염대조군에 비해 높게 검출되었다. 또한 Con A와 함께 배양된 비장세포의 IL-2 및 IFN-y발현 양상을 ELISA법으로 시험한 바, III군과 IV군에서 감염대조군에 비해 증가하는 경향을 보였으며, V군, VI 군 및 VII군은 차이가 없었다. 이상과 같은 결과를 종합해볼 때 녹차와 유산균제제는 항구포자충증용 사료첨가제로 실용화될 수 있는 잠재력이 있다고 생각된다.
- 5% 유산균)에서 감염 후 1일에서 7일 사이에 감염대조군(II)에 비해 높게 검출되었다 (Fig 3, Table 2). 또한 ConA와 함께 배양된 비장세포의 IL-2 및 IFN-;발현 양상은 III군(0.5% 녹차)과 IV군(2.0% 녹차)에서 감염대조군(II)에 비해 증가하는 경향을 보였으며, V군, VI군 및 VII군은 차이가 없었다 (Fig 5). 본 실험에서 일반사료를 급여한 후 E.
- 5% 녹차)에서 일반사료 또는 유산균을 급여한 군 보다 현저한 증가를 보였다. 또한 V군(2.0% 녹차와 0.1% 유산균 혼합 투여군)과 VI군(0.5% 유산균)에서는 낮은 수준의 RNA가 검출되었다. 또한 감염 후 3일에는 III군(0.
- 5% 유산균)에서는 낮은 수준의 RNA가 검출되었다. 또한 감염 후 3일에는 III군(0.5% 녹차), V군 (2.0% 녹차와 0.1% 유산균 혼합 투여군) 그리고 VII군 (0.5% 유산균)에서 미약하게 검출되었으며, 이 후 5일과 7일에는 IL-2 RNA가 검출되지 않았다 (Fig 2, Table 2).
- 의 감염 상태를 측정하는 기준이 되며, 항구포자충제제 및 사료첨가제의 효능 평가를 위해 일반적으로 이용되고 있다(15). 본 시험에 얻어진 결과로 볼 때, 녹차 첨가 사료가 유산균제제 첨가사료 보다 닭 구포자충증의 감염을 막아주는 효과가 더 높다는 사실을 알 수 있었다. 사료에 첨가된 유산균제제의 항구포자충 효과는 유산균 충체의 장관내 세포의 침입을 방해하고, 숙주의 자연 및 획득 면역을 자극하여 면역이 증강되었기 때문이며, 유산균제제에 의한 점막면역은 병원균에 대항하는 방어효과가 있다고 하였다(4, 15).
- 0% 녹차)에서 감염대조군(II)에 비해 증가하는 경향을 보였으며, V군, VI군 및 VII군은 차이가 없었다 (Fig 5). 본 실험에서 일반사료를 급여한 후 E. maxima를 인공감염 시킨 대조군에서도 약하게INF-y의 발현이 일어난 현상은 E. tenella, E. acervulina 및 E. maxima 가 닭에 감염되면 IFN-/ mRNA 증가된다는 보고와 일치하였으며(9, 29), 녹차 투여군에서 싸이토카인이 더 강한 발현이 나타난 것은 녹차중의 카테킨 성분이 IkB의 활성화로 NF-kB를 인산화 시키고 면역관련 유전자의 전사를 유발하여 싸이토카인 발현을 자극하므로서 세포매개 관련 면역증강이 일어난 것이라고 추정된다(2, 16).
- 본 연구에서는 녹차 및 유산균제제 첨가사료 급여가 닭의비장세포에서 IL-2 및 IFN-/ RNA 합성능과 배출 효능을 RT-PCR과 ELISA 법으로 시험 하였던 바, IL-2는 감염 후 1일과 3일에 III군(0.5% 녹차), V군(2.0% 녹차와 0.1% 유산균 혼합 투여군)과 VII군(0.5% 유산균)에서 다양한 수준으로 검출되었으며, IFN-/ RNA는 III군(0.5% 녹차), IV군 (2.0% 녹차), 녹차와 유산균 혼합 투여군(V), VI군(0.1% 유산균), 및 VII군(0.5% 유산균)에서 감염 후 1일에서 7일 사이에 감염대조군(II)에 비해 높게 검출되었다 (Fig 3, Table 2). 또한 ConA와 함께 배양된 비장세포의 IL-2 및 IFN-;발현 양상은 III군(0.
- 유산균제제가 숙주 체내에서 면역기능을 증가 시킨다는 사실과, 본 실험의 유산균제제 첨가 사료 급여 군에서 난포낭배출 감소와 아울러 싸이토카인 유전자 발현 증가가 있다는 성적은 유산균제제의 투여가 면역세포를 활성화 시켜 면역증강 효과에 영향을 미쳤음을 추정할 수 있었다. 그러나 녹차 첨가사료 급여군에서 현저하게 난포낭 배설의 양이 감소된 것은 늑차의 항산화작용에 의한 항미생물효과와 면역증강 효과에 기인된 것으로 추정되나 작용기전에 대한 시험이 필요하였다.
- 이상과 같은 결과를 종합해 볼 때 녹차제제와 유산균제제를 첨가한 사료의 급여가 E. maxima 김-염 닭에서 난포낭배설을 감소시키고, 세포매 개면역체계를 촉진하여 세포면역을 항진시키는 효과가 있으며, 특히 녹차제제가 E. maxima의 닭 체내 증식을 현저히 저지하였다고 생각된다. 본 제제의 작용기전을 보다 구체적으로 구명하고, 녹차와 유산균 제제를 항구포자충증용 사료첨가제로 실용화하기 위해서는 추가 시험이 필요하다고 생각된다.
- 또한 Con A와 함께 배양된 비장세포의 IL-2 및 IFN-y발현 양상을 ELISA법으로 시험한 바, III군과 IV군에서 감염대조군에 비해 증가하는 경향을 보였으며, V군, VI 군 및 VII군은 차이가 없었다. 이상과 같은 결과를 종합해볼 때 녹차와 유산균제제는 항구포자충증용 사료첨가제로 실용화될 수 있는 잠재력이 있다고 생각된다.
후속연구
- maxima의 닭 체내 증식을 현저히 저지하였다고 생각된다. 본 제제의 작용기전을 보다 구체적으로 구명하고, 녹차와 유산균 제제를 항구포자충증용 사료첨가제로 실용화하기 위해서는 추가 시험이 필요하다고 생각된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.