보이차를 물로 추출하고, 항산화성 물질을 얻기위해 n-hexane, ethyl acetate(EA), butanol(BuOH)로 분획하였다. 분획은 자유라티칼 소거 활성과 환원력 측정의 두가지 방법으로 항산화활성 정도를 조사하였다. 이들 항산화활성을 butylated hydroxyanisole(BHA), butylated hydroxytoluene(BHT) 그리고 ${\alpha}$-tocopherol 같은 비교표준 항산화제와 비교하였다. 보이차의 EA분획은 BHA와 BHT 보다 더 높은 항산화활성을 보였다.
보이차를 물로 추출하고, 항산화성 물질을 얻기위해 n-hexane, ethyl acetate(EA), butanol(BuOH)로 분획하였다. 분획은 자유라티칼 소거 활성과 환원력 측정의 두가지 방법으로 항산화활성 정도를 조사하였다. 이들 항산화활성을 butylated hydroxyanisole(BHA), butylated hydroxytoluene(BHT) 그리고 ${\alpha}$-tocopherol 같은 비교표준 항산화제와 비교하였다. 보이차의 EA분획은 BHA와 BHT 보다 더 높은 항산화활성을 보였다.
Puh-erh tea was extracted with water and then fractionated sequentially with n-hexane, ethyl acetate, n-butanol to find antioxidative compounds. The fractions were examined on the antioxidant activity using two different methods, free radical scavenging activity measurement and reductive potential. ...
Puh-erh tea was extracted with water and then fractionated sequentially with n-hexane, ethyl acetate, n-butanol to find antioxidative compounds. The fractions were examined on the antioxidant activity using two different methods, free radical scavenging activity measurement and reductive potential. Those antioxidant activities were compared to standard antioxidants such as butylated hydroxyanisole(BHA), butylated hydroxytoluene (BHT), and ${\alpha}$-tocopherol. EA fraction of Pu-erh tea was showed excellent antioxidative activities over BHA and BHT.
Puh-erh tea was extracted with water and then fractionated sequentially with n-hexane, ethyl acetate, n-butanol to find antioxidative compounds. The fractions were examined on the antioxidant activity using two different methods, free radical scavenging activity measurement and reductive potential. Those antioxidant activities were compared to standard antioxidants such as butylated hydroxyanisole(BHA), butylated hydroxytoluene (BHT), and ${\alpha}$-tocopherol. EA fraction of Pu-erh tea was showed excellent antioxidative activities over BHA and BHT.
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제안 방법
Pu-erh tea를 n-hexane, EA, BuOH 등으로 추출하여 DPPH법과 환원력 측정법으로 항산화 활성을 검색하였다. 항산화 활성 효과가 좋은 EA 추출물을 silica gel 칼럼으로 2차, 3차 분리하고 분획들의 항산화 활성을 측정하여 BHA, BHT, α-tocopherol과 비교하였다.
n-hexane을 추출하고 남아있는 물층에 위와 같은 방법으로 ethyl acetate, butanol로 각각 추출하여 모으고, 마지막으로 남아 있는 물층도 농축하여 보관하였다. n-hexane 층에는 추출된 성분이 매우 소량이어서 주로 ethyl acetate, n-butanol, water의 농축물로 이후 실험을 진행하였다.
액상으로 되어있는 보이차(pu-erh tea) 1 Kg을 증류수 1 L에 완전히 녹인 후, n-hexane 1 L를 넣어 일정 시간 동안 흔들어 분배한 다음 n-hexane 층만을 따로 모았으며, 위의 과정을 2회 반복하여 합친 것을 농축하였다. n-hexane을 추출하고 남아있는 물층에 위와 같은 방법으로 ethyl acetate, butanol로 각각 추출하여 모으고, 마지막으로 남아 있는 물층도 농축하여 보관하였다. n-hexane 층에는 추출된 성분이 매우 소량이어서 주로 ethyl acetate, n-butanol, water의 농축물로 이후 실험을 진행하였다.
본 연구에서는 항산화 효과가 기대되는 보이차 추출물을 칼럼상에서 분획으로 분리추출하였다. 각 분획의 자유라디칼 소거활성(free radical scavenging activity)과 환원력(reductive potential)을 측정하여 항산화 효과를 조사하고 상호관련성을 비교하였다.
Silica gel (60Å)로 채워진 칼럼(직경 3 cm ×길이 30 cm) 상에서 EA : acetone 혼합물로 용리하면서 EA 층을 분리하였다. 각각 20개의 분획으로 분리되었는데 TLC로 확인하여 P-2-1, P-2-2, P-2-3, P-2-4의 4개 fraction으로 나누었다. P-2-1, P-2-2, P-2-3, P2-4에 대하여 항산화 활성을 검색한 결과 P-2-3가 가장 높은 효과를 보였다.
본 연구에서는 항산화 효과가 기대되는 보이차 추출물을 칼럼상에서 분획으로 분리추출하였다. 각 분획의 자유라디칼 소거활성(free radical scavenging activity)과 환원력(reductive potential)을 측정하여 항산화 효과를 조사하고 상호관련성을 비교하였다.
Pu-erh tea를 n-hexane, EA, BuOH 등으로 추출하여 DPPH법과 환원력 측정법으로 항산화 활성을 검색하였다. 항산화 활성 효과가 좋은 EA 추출물을 silica gel 칼럼으로 2차, 3차 분리하고 분획들의 항산화 활성을 측정하여 BHA, BHT, α-tocopherol과 비교하였다. 각 분획에서 환원력 측정과 DPPH법의 결과는 비슷한 경향의 항산화 활성을 보였으며, EA 추출물이 가장 높은 항산화 활성 효과를 가지는 것으로 나타났다.
원심분리기(Hanil Industrial Company)와 UV-visible spectrophotometer (Molecular Devices Spectra Max 190.)를 사용하였다.
용매로 사용된 methanol(MeOH), ethanol(EtOH), chloroform, ethyl acetate(EA), butanol(BuOH), n-hexane, dimethyl sulfoxide(DMSO), ethyl ether(EE) 등은 Aldrich Co.제품을 구입하여 정제과정 없이 사용하였다.
이론/모형
시료의 환원력(reductive potential) 검색은 Oyaizu11방법에 따라 진행하였다. 여러 농도 범위(0.
용매 추출(1차)된 시료와 기준 물질들에 대하여 DPPH법으로 항산화활성을 측정하였다. DPPH와 EA 추출물, DPPH와 기준항산화제 그리고 DPPH 만의 uv-visible 스펙트럼을 비교하여 Fig.
추출물의 자유라디칼 소거활성 검색은 Shimada17 방법에 따라 DPPH법으로 측정하였다. Ethanol에 녹인 0.
성능/효과
각각 20개의 분획으로 분리되었는데 TLC로 확인하여 P-2-1, P-2-2, P-2-3, P-2-4의 4개 fraction으로 나누었다. P-2-1, P-2-2, P-2-3, P2-4에 대하여 항산화 활성을 검색한 결과 P-2-3가 가장 높은 효과를 보였다. Silica gel (60Å)을 채운 칼럼에서 chloroform : acetonitrile 혼합물로 용리하면서 P2-3 층을 분리하였다.
항산화 활성 효과가 좋은 EA 추출물을 silica gel 칼럼으로 2차, 3차 분리하고 분획들의 항산화 활성을 측정하여 BHA, BHT, α-tocopherol과 비교하였다. 각 분획에서 환원력 측정과 DPPH법의 결과는 비슷한 경향의 항산화 활성을 보였으며, EA 추출물이 가장 높은 항산화 활성 효과를 가지는 것으로 나타났다. 분리단계가 진행될수록 항산화효과는 약간씩 감소되는 경향을 보였다.
보이차를 추출한 3개 용매분획의 항산화 활성을 검색한 결과 EA 층(8.65 g)이 가장 효과가 큰 것으로 확인되었다. Silica gel (60Å)로 채워진 칼럼(직경 3 cm ×길이 30 cm) 상에서 EA : acetone 혼합물로 용리하면서 EA 층을 분리하였다.
P-2-7'~P-2-12' 는 비슷한 성분들의 혼합물인 것을 TLC로 확인하였고, 모두 합하여 P-2-3으로 하였다. 항산화 활성이 높은 P-2-3 분획을 silica gel (60Å)이 채워진 칼럼(직경: 3 cm×길이 30 cm)에서 분리(3차)하였다 항산화 활성을 측정한 결과 9개의 분획 중에서 P-2-3-2와 P-2-3-3의 IC50 값들이 BHT, BHA 등의 기준 물질과 비슷한 것으로 나타났다. 이들 분획들과 기준 물질들의 IC50 값을 정리하여 Table 3에 나타내었으며, 농도에 따른 % 저해율의 그래프는 Fig.
참고문헌 (18)
S. H. Kim, D. S and J. D. Pack, Korean J. Food Sci. Technol., 36, 542-547(2004)
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