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문제 정의
- 그리하여 본 연구에서는 vibrio parahaemolyticus에 의한 식중독 예방의 일환으로 인천연안 지역에서 Vibrio parahaemolyticus의 분포상태를 조사하고, 아울러 유산과 과산화수소의 단독 및 병용처리함으로써 Vibrio parahaemolyticus의 증식 억제효과를 연구하여 소비자에게 보다 안전한 식품을 제공함으로써 국민보건에 기여하고자 한다.
- 본 연구에서는 Vibrio parahaemolyticus에 의한 식중독 예방의 일환으로 인천연안지역에서 Vibrio parahaemolyticus^ 분포상태를 조사하고, 유산과 과산화수소의 단독 및 병용처리함으로써 Vibrio parahaemolyticus 의 증식 억제효과를 실험한 결과는 다음과 같았다.
제안 방법
- 증균 배양 시킨 배양액으로부터 백금선을 사용하여 TCBS (Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose) Agar에 획선을 도말한 후 35℃,18-24시간 배양한 다음 sucrose를 분해하지 않는 전형적인 녹색 집락을 선택하고, 감별배지인 KIA(Klingler Iron Agar)에 접종하여 35℃, 18-24시간 배양한 후 K/A(Alkaline Slant/Acid butt)성상과 Gas(-), H2S(-)인 Vibrio속 균을 분리하였다. API 20E kit(analytical profile index, FranceX 용하여 생화학적 특성을 조사하고 아울러 K 항원진단용혈청 (Denka Seiken Co) 으로 slide 응집반응을 실시하여 생리식염수에 응집반응을 일으키는 것과 K항원 혈청에 응집되지 않는 것은 제외하여 최종 Vibrio parahaemolyticus으로 동정하였다.
- 6ml를 분주하였다. 그 다음 tryptic soy agar에 24시간 배양한 전형적인 집락을 백금 루프로 따서 멸균 생리식염수에 적당히 희석한 시험 균을 McFarland Scale No. 0.5에 탁도를 맞추고, 이 배양액을 다시 100배 희석하여 시험하였다. 희석한 배양액을 0.
- 2ml씩 각 시험관에 접종하여 균 초기농도를 106CFU/ml로 조정하였다. 시험관을 진탕 배양기에 넣고 100rpm으로 37℃에서 48시간 동안 진탕 배양한 후 균의 증식 유무를 세균이 증식하지 않은 최저 발육억제농도를 결정하였다.
- 유산과 과산화수소 병용처리 시 최소발육억제농도와의 상관관계를 구하기 위해 첨가한 유산의 농도를 X축, 과산화수소의 농도를 Y축으로 하여 비선형회귀모형을 구하였다. 이 때 얻어진 Y 변수의 값을 역수 변환하여 직선의 회귀방정식을 구한 결과는 Fig.
- 유산과 과산화수소의 단독 및 병용 처리한 시험액을 각각 5.0, 5.5, 6.0, 6.5 및 7.0으로 제조한 Muller Hinton broth에서 37℃에서 72시간까지 균의 증식 양상을 실험하였다.
대상 데이터
- Vibrio parahaemolyticus 분리를 위해채취한 시료 중 해수는 연안 3개 지역에서 멸균병에 1L를 채취하여 냉장상태로 실험실에 운반하여 Millipore filter system(pore size 0.45mm)로 여과한 여과지를 3% NaCl alkaline peptone water(3% NaCl APW, pH 8.4) 100ml에 넣고 35℃, 16-18시간증균 배양하였으며, 어패류 및 갯벌은 멸균병에 100g씩 채취하여 냉장상태로 실험실에 운반한 후 마쇄하여 해수의 시험방법과 같이 증균 배양하였다. 증균 배양 시킨 배양액으로부터 백금선을 사용하여 TCBS (Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose) Agar에 획선을 도말한 후 35℃,18-24시간 배양한 다음 sucrose를 분해하지 않는 전형적인 녹색 집락을 선택하고, 감별배지인 KIA(Klingler Iron Agar)에 접종하여 35℃, 18-24시간 배양한 후 K/A(Alkaline Slant/Acid butt)성상과 Gas(-), H2S(-)인 Vibrio속 균을 분리하였다.
- 본 실험에 사용한 균주는 인천 연안에서 분리한 Vibrio parahaemolyticus를 사용하였다. 실험 균주는 1% peptone, 37% glycerol에 진하게 부유시킨 다음 -70℃에 동결 보존하면서 사용하였다.
- 본 실험에서 Vibrio parahaemolyticus 의 분포조사를 위한 시료의 채취는 2005년 인천지역, 강화군, 옹진군의 3개 지역을 선정하여 해수, 갯벌 및 어패류를 대상으로 장소별, 분기별로 각각 시료를 채취하여 시험하였다.
- 실험 균주는 1% peptone, 37% glycerol에 진하게 부유시킨 다음 -70℃에 동결 보존하면서 사용하였다.
- 유산의 실험용액은 2500ppm, 1250ppm, 625ppm, 312ppm, 156ppm, 78ppm, 39ppm, 19.5ppm으로 각각 조제하였으며, 과산화수소의 실험용액은 lOOppm, 75ppm, 50ppm, 25ppm, 12.5ppm, 6.25ppm, 3.13ppm, 1.56ppm으로 각각 조제한 후 냉장 보관하여 사용하였다.
- 이 중 전형적인 집락을 따서 멸균생리식염수에 현탁시켜 McFarland Scale No. 0.5(1% Bad + H2SO4 99.5ml : 1.5×109 CFU/ml)에 맞춘 후 이를 100ml 에 희석한 액을 표준 균액으로 사용하였다.
성능/효과
- 1. 검체 종류별 Vibrio parahaemolyticus의 분포현황은 해수에 181건(60.3%), 갯벌과 어패류는 각각 90건(75.0%), 568(51.1%)의 검출을 하였으며, 검체 장소별 Vibrio parahaemolyticus의 분포를 살펴보면 인천지역에서 483건(49.3%), 강화군 336건(66.1%), 옹진군 20건 (44.4%)이 검출되었으며, 분기별로 Vibrio parahaemolyticus의 분포현황을 살펴보면 1-3월에 25건(12.5%), 4-6월에 176건(41.0%), 7-9월에 386건 (72.4%), 10-12월에 252건(68.1%)으로 나타났다.
- 2. Vibrio parahaemolyticus에 대한 유산의 최소발육억제농도는 pH 6.5 및 7.0에서 1250 ppm에서 발육이 억제되었으며, pH 6.0에서는 유산의 최소허용한계량인 625ppm에서도 발육이 억제되지 않았다. PH5.
- 3. Vibrio parahaemolyticus에 대한 유산과 과산화수소의 병용 처리 시 최소발육억제농도(MIC)에 관한 결과 과산화수소의 농도 25 ppm 이상에서는 유산을 첨가하지 않아도 모두 발육 억제되었으며, 과산화수소의 농도 12.5 ppm 이하에서는 유산 625 ppm을 첨가하였을 때 억제되었다.
- 4. 유산과 과산화수소 병용 처리시 최소발육억제농도와의 상관관계를 구한 결과, Vibrio parahaemolyticus에 대한 최소발육억제농도에 필요한 유산과 과산화수소의 첨가량의 결정계수 값은 R2=1.000으로 높은 상관관계를 나타내었으며, 상승효과가 확인되었다.
- Vibrio parahaemolyticus에 대한 과산화수소의 최소발육억제농도(MIC)에 관한 결과는 Table 5와 같다. Vibrio parahae-molyticus에 대한 과산화수소의 최소발육억 제농도는 pH 6.5, 7.0에서 25 ppm에서 발육이 억제되었으며, pH 6.0에서는 과산화수소의 최대허용한계량인 12.5 ppm도 발육이 억제되지 않았다. pH 5.
- Vibrio parahaemolyticus에 대한 과산화수소의 최소발육억제농도(MIC)에 관한 결과는 Table 5와 같다. Vibrio parahae-molyticus에 대한 과산화수소의 최소발육억 제농도는 pH 6.5, 7.0에서 25 ppm에서 발육이 억제되었으며, pH 6.0에서는 과산화수소의 최대허용한계량인 12.5 ppm도 발육이 억제되지 않았다. pH 5.
- Vibrio parahaemolyticus에 대한 유산의 최소발육억제농도(MIC)에 관한 결과는 Table 4과 같은데 Vibrio parahaemolyticus에 대한 유산의 최소발육억제농도는 pH 6.5 및 7.0에서 1250 ppm에서 발육이 억제되었으며, pH 6.0에서는 유산의 최소허용한계량인 625ppm에서도 발육이 억제되지 않았다. pH 5.
- 1과 같다. Vibrio parahaemolyticus에 대한 최소발육억제농도에 필요한 유산과 과산화수소의 첨가량의 결정계수 값은 R2=1,000으로 높은 상관관계를 나타내었다. 장 등9, 13)은 식중독균인 Escherichia coli O157:H7, Salmonella Enteritidis, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus에 대한 최소발육억제농도에 필요한 유산과 과산화수소의 첨가량의 결정계수 값을 구한 결과 각각 0.
- Vibrio parahaemolyticus에 대하여 과산화수소의 농도 25 ppm 이상에서는 유산을 첨가하지 않아도 모두 발육 억제 되었으며, 과산화수소의 농도 12.5 ppm 이상에서는 유산 625 ppm을 첨가하였을 때 억제되었다. Lin 등12)과 장 등13)도 식중독균에 대한 과산화수소와 유산의 병용처리가 식중독균의 증식억제 효과가 있었다고 보고한 바 있어 이에 본 실험 결과와 유사한 경향을 나타내었다.
- 3M 정도 포함되어 있다. 따라서 식중독의 원인 식품이 되는 어패류에 귤이나 레몬 등을 곁들여 먹을 시 pH 저하에 따른 본 균의 사멸에 상당한 영향을 줄 것으로 사료된다.
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