선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구에서는 ursolic acid가 청각 세포주 (auditory ce11 line)인 HEI-OC1 세포에서 과산화수소에 대한 보호 효과가 있음을 알아보고, 과산화수소로 유도된 항산화효소의 활성에 미치는 효과를 검색하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
제안 방법
- Cell lysates 10 ill에 100 mM PBS (pH 7.2) 200 μ1와 2.4 U/ml GR, 10 mM GSH, 3 mM NADPH를 각각 10 ill씩 첨가하였다. 최종적으로 12 mM cumene hydroperoxide를 10 pl 첨가하여 반응을 개시한 후 37 ℃에서 5분 동안 340 nm에서 흡광도 변화를 측정하여 GPX 활성도는 단백질 1 mg 당 1분 동안 소비된 NADPH nmole을 1 mUnit로 표시하였다 (mUnit/mg protein)
- 하루 동안 배양한 세포는 PBS로 용해한 MTT 용액 300 μ1을 각 well에 첨가하여 4시간 동안 배양하였다. DMSO (200 μ1)를 첨가하여 용해시킨 formazan 결정의 흡광도는 96-well plate로 이동하여' 540 nm 파장의 ELISA analyser (Spectra MAX 250, Molecular Devices Co., USA)를 이용하여 측정하였으며 세포독성은 대조군에 대한 백분율로 산출하였다. ImM N-acetyl-cystein (NC)은 양성대조군으로 사용하였다.
- 측정하였다. HEI-OC1 세포는 24-w이 1 plate의 각 well당 4xl04 세포를 분주하였다' 세포를 배양기에서 24시간 동안 안정화 시킨 후, 0.1%의 dimethylsulfoxide (DMSO, Junsei, Japan) 에 녹인 ursolic acid (0.05, 0.1, 0.5, lz 2Z 5 Ug/ml)은 실험군에 그리고 0.1% DMSO는 대조군에 첨가하였다. 하루 동안 배양한 세포는 PBS로 용해한 MTT 용액 300 μ1을 각 well에 첨가하여 4시간 동안 배양하였다.
- Ursolic acid가 과산화수소의 세포독성에 대한 또 다른 보호기 전을 알아보기 위해, ursolic acid가 과산화수소로 처리한 HEI-OC1 세포의 SOD, CAT, GPX 활성에 미치는 영향을 조사해보았다. 과산화수소를 처리한 HEI-OC1 세포에 ursolic acid를 넣어도 SOD 활성은 변하지 않은 반면 CAT와 GPX 활성은 유의적으로 증가하였다.
- 과산화수소로 유도된 HEI-OC1 세포의 지질과산화와 항산화 효소 활성에 미치는 ursolic acid의 효과를 측정하기 위해 ursolic acid (0.05, 0.1, 0.5, 1, 2 iig/ml)은 과산화수소 (40 μM)을처리하기 1시간 전처리하였다. 1일 후 배양액과 세포를 모아 원심분리 (3000 X g, 6분)하여 상청액을 제거한 후 남은 cell pallet 에 phosphate buffer saline (PBS, pH 74) 를 넣고 다시 원심분리 (3000 X g, 6분)한 후 상청액을 제거하였다.
-
2. Ursolic acid의 과산화수소 세포독성 억제 효과
과산화수소로 처리한 세포독성에 대한 ursolic acid의 보호 효과를 조사하기 위하여, 과산화수소 (40 11M)을 처리 1시간 전 다양한 농도의 ursolic acid (0.05-2 ng/ml)을 HEI-OC1 세포에 처리한 후 세포 생존율을 조사하였다. Fig.
-
3. Ursolic acid의 지질과산화 억제 효과
과산화수소에 의한 HEI-OC1 세포의 지질과산화에 대한 ursolic acid의 효과를 조사하기 위하여 과산화수소 (40 pM) 처리 1시간 전 ursolic acid (0.05-2 iig/ml)을 처리한 후 지질과산화량을 측정하였다 (Fig. 4). Ursolic acid 처리는 0.
- ImM N-acetyl-cystein (NC)은 양성대조군으로 사용하였다. 또한 과산화수소로 유도된 HEI-OC1 세포 독성 억제 효과를 측정하기 위해 ursolic acid (0.05, Q.1, 0.5, 1, 2 ug/ml)은 과산화수소 (40 μ M)을 처리하기 1시간 전처리한 후 1일 배양 후, 세포의 생존율은 MTT assay 방법으로 측정하였다.
- 5, 1, 2 ug/ml을 24시간 동안 처리한 결과 2 pg/ml 이하 농도에서는 세포 생존율에 유의한 차이를 관찰할 수 없었으나, 5 Ug/ml 농도의 ursolic acid는 유의한 세포독성을 나타냈다. 이 결과를 근간으로 ursolic acid의 HEI-OC1 세포 보호효과 및 지질과산화, 항산화 효소 실험은 2 ug/ml 이하의 농도에서 수행하였다 (Fig. 2).
- ?i-buthanobpyridine (1:3)을 1ml을 첨가한 후에 15000 X g에서 5분간 원심분리하여 상층액의 흡광도는 532 nm 파장에서 측정히였다. 지질과산화 생성물은 thiobarbituric acid reactive substance (TBARS) 로 측정하였으며, malonedialdehyde nmole/mg protein으로 표시하였으며 ImM NCe 양성대조군으로 사용하였다.
대상 데이터
- , USA)를 이용하여 측정하였으며 세포독성은 대조군에 대한 백분율로 산출하였다. ImM N-acetyl-cystein (NC)은 양성대조군으로 사용하였다. 또한 과산화수소로 유도된 HEI-OC1 세포 독성 억제 효과를 측정하기 위해 ursolic acid (0.
- 산수유는 전북, 익산, 대학한약국에서 국내산을 구입한 후 냉 암소에 보관하여 사용하였다. 산수유 2.
- 형질변환 쥐 (ImmortomouseHz Charles River Laboratories, USA) 의 와우 (cochlea) 로부터 분리 배양한 HEI-OC1 세포는”) Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM, Gibco, USA)에 10% fetal bovine serum (FBS, Gibco, USA)과 50 U/ml gamma-interferon (INF-幻 R&D System, USA)이 첨가된 배양액으로 배양하였다. 세포 배양기 (5% CC知 33℃)의 세포 배양액은 2일 마다 교환해 주었다.
데이터처리
- 실험은 모두 3회 반복하였으며, 얻은 결과는 통계프로그램인 SPSS (ver 10.0)를 사용하여, 평균과 표준오차로 제시하였으며, a=0.05 수준에서 실험군과 대조군의 평균치에 대하여 Student's t-test로 유의성을 검증하였다.
이론/모형
- CAT의 활성도는 Carrillo 등33)의 방법을 적용하였다. 50 mM의 PBS (pH 7.
- GPX의 활성도는 Flohe와 Gunzle产)의 방법에 의하여 측정하였다. Cell lysates 10 ill에 100 mM PBS (pH 7.
- Lowry 등闾의 방법에 의하여 bovine serum albumin (Sigma-Aldrich Co.)을 표준용액으로 사용하여 측정하였다.
- SOD 의 활성 도는 SOD assay Kit (Dojindo Molecular Technologies Inc., Tokyo, Japan)를 사용하여 측정하였다彩). 흡광도는 microplate reader (Spectra Max 250, Molecular Devices C이를 이용하여 450 nm에서 측정하였다.
- Ursolic acid 의 HEI-OC1 세포에 대한 세포독성 측정은 MTT (3-(4/5-dimethylthiazol-2-yl)-2/5-diphenyl tetrazolium bromidez Sigma, USA) assay29, 30) 이용하여 측정하였다. HEI-OC1 세포는 24-w이 1 plate의 각 well당 4xl04 세포를 분주하였다' 세포를 배양기에서 24시간 동안 안정화 시킨 후, 0.
- 지질과산화는 TBA 방법3D 에 의해 측정하였다. 초음파로 분쇄한 cell lysate 80 μ1에 8.
성능/효과
- 05-2 ng/ml)을 HEI-OC1 세포에 처리한 후 세포 생존율을 조사하였다. Fig. 3과 같이 과산화수소 단독처리 군의 세포 생존율은 대조군에 日〕교하여 55%로 감소한 반면, ursolic acid 처리군은 처리농도 0.05 pg/ml 이상에서부터 농도 의존적인 세포 생존율 증가를 관찰할 수 있었다 (p<0.05). 특히, 2 Ug/ml 처리군에서는 77%의 높은 생존율을 보였으며, 양성 대조군인 NC (1 mM) 처리군에 비교하여 높은 생존율을 나타냈다.
- 05 ug/ml 이상으로 처리한 군은 대조군보다 높은 활성도를 나타내었다. GPX 활성도는 ursolic acid 0.05-2 ng/ird을 동시에 처리한 군에서 과산화수소만을 처리한 군에 비하여 GPX 활성도가 유의적으로 증가하였으며 (p«.O5), 1 Ug/ml을 처리한 군이 가장 높은 활성도를 나타내었다.
- 이에 산수유의 열매 (Corni fructus) 로부터 ursolic acid를 분리하여 청각세포주인 HEI-OC1 에 미치는 영향을 알아본 결과, 가산화수소에 의한 HEI-OC1 세포독성에 대한 ursolic acid의 보호 효과를 관찰할 수 있었다. HEI-OC1 세포에서 40 11M 과산화수소의 세포독성은 대조군의 55% 수준으로 생존율을 감소하였으나, ursolic acide 농도 의존적으로 과산화수소 세포독성을 억제하여 2 pg/ml 농도 처리군의 생존율은 77%까지 증가하였다. 이것은 양성 대조군인 NC (1 mM) 처리군보다 높은 생존율이었다.
- 관련이 있데)고 한다. HEI-OC1 세포에서 과산화수소는 대조군에 비교하여 6배 정도 증가된 지질과산화를 유도하였으나, ursolic acid의 전처리에 의하여 농도 의존적으로 억제됨을 관찰할 수 있었다. 이러한 ursolic acid의 지질과산화 억제 효과는 과산화수소에 의한 세포독성을 방어하는 주된 작용기전의 하나로 추정된다.
- Ursolic acid의 HEI-OC1 세포에 대하여 직접적인 독성작용은 MTT 방법으로 조사하였다 다양한 농도의 ursolic acid 0.05, 0.1, 0.5, 1, 2 ug/ml을 24시간 동안 처리한 결과 2 pg/ml 이하 농도에서는 세포 생존율에 유의한 차이를 관찰할 수 없었으나, 5 Ug/ml 농도의 ursolic acid는 유의한 세포독성을 나타냈다. 이 결과를 근간으로 ursolic acid의 HEI-OC1 세포 보호효과 및 지질과산화, 항산화 효소 실험은 2 ug/ml 이하의 농도에서 수행하였다 (Fig.
- 산수유로부터 추출한 ursolic acid가 청각세포주인 HEI-OC1 세포의 산화적 손상 억제에 미치는 효과를 조사하기 위하여 ursolic acid (0.05, 0丄 0.5, lz 2 μg/ml)을 처리한 후 40 pM 과산화수소를 처리한 결과 ursolic acid은 과산화今소에 의한 HEI-OC1 세포의 세포독성을 유의하게 억제하는 효과를 나타냈었으며 (p<0.05)z 과산화수소에 의한 세포의 지질과산화를 억제하였다 (p<0.05) 또한 ursolic acid가 과산화수소를 처리한 HEI-OC1 세포의 SOD, CAT, GPX 의 활성도에 미치는 영향을 알아본 결과 SOD 활성도는 차이가 없었지만 CAT 활성도는 0.1, 0.5, 1, 2 ug/ml 농도로 처리한 군에서 대조군에 비하여 유의적으로 높았으며 (p《).O5), GPX 활성도는 0.
- 이상의 결과에서 보는 바와 같이 ursolic acid은 HEI-OC1 세포 내에서의 항산화효소를 활성화 시켜 과산화수소의 산화적 손상으로부터 세포 보호 효파를 나타내게 할 수 있을 것으로 생각된다. 특히 ursolic acid 2 ug/ml 처리군은 CAT 활성도가 가장 높게 나타났으며, 1 pg/ml 처리군은 GPX 활성도를 현저하게 증가 시켜 항산화효과를 보였다.
- 있다. 이에 산수유의 열매 (Corni fructus) 로부터 ursolic acid를 분리하여 청각세포주인 HEI-OC1 에 미치는 영향을 알아본 결과, 가산화수소에 의한 HEI-OC1 세포독성에 대한 ursolic acid의 보호 효과를 관찰할 수 있었다. HEI-OC1 세포에서 40 11M 과산화수소의 세포독성은 대조군의 55% 수준으로 생존율을 감소하였으나, ursolic acide 농도 의존적으로 과산화수소 세포독성을 억제하여 2 pg/ml 농도 처리군의 생존율은 77%까지 증가하였다.
- 특히 ursolic acid 2 ug/ml 처리군은 CAT 활성도가 가장 높게 나타났으며, 1 pg/ml 처리군은 GPX 활성도를 현저하게 증가 시켜 항산화효과를 보였다.
- 05). 특히, 2 Ug/ml 처리군에서는 77%의 높은 생존율을 보였으며, 양성 대조군인 NC (1 mM) 처리군에 비교하여 높은 생존율을 나타냈다.
후속연구
- 앞으로 ursolic acid의 세포 내 항산화효소 활성 기전을 밝히기 위해서는 더 많은 연구가 이루어져야 할 것이며, 본 연구의 결과로 보아 ursolic acid의 청각세포주인 HEI-OC1 세포의 산화적 손상을 억제하기 위한 이용 가능성을 전망해 볼 수 있다.
- 05). 이상의 결과, ursolic acid은 HEI-OC1 세포 내에서 항산화 효소의 활성을 증가시킴으로 인해 ROS의 발생을 억제시켜 산화적 손상에 대한 방어효과가 있는 것으로 생각되며, 임상에서 적용하기 위해서는 추가적인 연구가 필요할 것으로 보인다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.