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문제 정의
- ,illelO)의 방법에 따라 흰쥐의 난소적출로 골다공증을 인위적으로 유도한 다음, 난소를 절제한 흰쥐에 한국산 산수유의 물 추출물을 투여하여 척추골, 대퇴골, 비골경골의 골밀도에 미치는 영향, 혈청 중 osteocalcin 함량, alkaline phosphatase 활성도, calcium 함량, phosphorus 함량에 미치는 영향, 뇨 중 무기성분의 변화. deoxypyridinoline 함량에 미치는 영향, 골의 calcium 함량, phosphorus 함량, ash 무게에 미치는 영향, 체중 변화에 미치는 영향, 자궁 무게에 미치는 영향을 측정한 결과, 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
- 골다공증에 대한 적절한 대처가 효과적으로 이루어지지 못한다면 삶의 질 저하는 물론 인간의 수명은 제한될 수밖에 없다. 따라서 골다공증 치료에효과 있는 약제를 개발하고 실험적 연구를 통해 검증해야 할 필요성이 여기에 있는 것이다. 이러한 배경으로 본 실험적 연구에서는 肝腎을 보양하고 정기를 수렴하고 허탈한 기를 고착시키는 효능이 있는산수유가 골다공증 치료에도 적용 될 수 있음을 착안하여 증류추출법에 의해 얻어진 산수유 물 추출물이 난소 적출로 유발된 횐쥐의 골다공증에 대한 치료효과를 검증하고자 하였다.
- 따라서 골다공증 치료에효과 있는 약제를 개발하고 실험적 연구를 통해 검증해야 할 필요성이 여기에 있는 것이다. 이러한 배경으로 본 실험적 연구에서는 肝腎을 보양하고 정기를 수렴하고 허탈한 기를 고착시키는 효능이 있는산수유가 골다공증 치료에도 적용 될 수 있음을 착안하여 증류추출법에 의해 얻어진 산수유 물 추출물이 난소 적출로 유발된 횐쥐의 골다공증에 대한 치료효과를 검증하고자 하였다.
- 자하거 약침이 골다공증에 일정한 영향이 있다고 보고하였으나, 아직까지 山茱萸 單味의골다공증 치료효과에 대한 실험적 연구는 없었다. 이에 저자는 골다공증에 대한 한방치료의 가능성을 제시하고, 산수유가 골다공증에 효과가 있음을 실험적 연구를 통해 밝히고자 하였다.
제안 방법
- Ash에 3N-HC1 을 加하고 잘 녹인 다음 蒸溜水로 稀釋하여 大腿骨의 calcium 含量과 inorganic phosphorus 含量을 유도 결합발광분석기 (ICP-0ES, Thermo eletron Co., U.S.A)를 이용하여 다음과 같은 조건으로 측정하였다.
- Sham 手術과 卵巢切除術을 行하고 난 다음날부터 실험동물을 모두 3군으로 나누었으며, 各 群에는 7마리씩 配定하였다.
- Sham群과 對照群(이하 OVX群)에는 0.9% 生理食鹽水를 매일 같은 량과 같은 회수로 8주간 經 口 投與하였다.
- 手術 直前과 卵巢摘出 수술을 실시한 後 6주 및 약물 투여 후 4주와 8주가 되는 날 脊椎, 오른쪽 大 腿骨 및 脛骨의 骨密度(bone mineral density, 이하 BMD) 를 골밀도측정기 (PIXIMUSTM, Lunar, U.S.A.)를 利用하여 測定하였다.
- 手術은 卵巣를 切除하지 않고 단지 등 쪽의 皮膚 만 切開하여 開腹한 群 (sham-operation, 이하 Sham群), 등 쪽의 皮膚를 切開하여 양쪽의 卵巣를 切馀한 群(ovariectomized group, 이하 0V辰群) 및등 쪽의 皮膚를 切開하여 양쪽의 卵巢를 切除하고 6 주 후부터 한국산 山茱萸를 투여한 群(Korean Comi Fructus group, 이하 KCF群)으로 나누었다. 마취는 pentobarbital sodium(entobal, 한림제약)으로 마취(50㎎/㎏/BW, i.
- 건강한 Sprague-Dawley系 雌性 흰쥐를 固形飼 料(삼양사)로 飼育하다가 240g 이상이 되었을 때 手 術하였다.
- 검액 투여후 8週 되는 날 動物을 희생시키고 子 宮을 摘出하여 群間의 子宮 무게를 比較하였다. 3.
- 검액 투여후 8週 되는 날 動物을 희생시키고 오른쪽 大腿骨을 절취하였다. 脂肪 및 周圍組織을 깨끗이 除去하고 항량으로 만든 도가니에 각각 담고 6N-HC1 을 數滴 가하면서 600℃ 灰化爐에서 24時 間 동안 완전히 灰化시킨 다음 30분 정도 放冷한후 ash 무게를 測定하였다 15).
- 변화를 관찰하였다. 단, 8주에는 絶食 前의 體重 을 觀察하였다.
- 검액을 투여한 후 8주되는 혈액의 채취는 8주되는 날 전날부터 24시간 絶食시킨 횐쥐를 pentobarbital sod.로 0.1cc/100g을 복강에 주사하여 마취한 후, 복부 정중선을 따라 開腹하고 복부대동맥에서 혈액을 채취하였다. 채취한 全血의 일정량을 CBC bottle에 넣고 나머지 혈액은 실온에서 30분간 방치하여 응고시킨 후, 원심분리기로 3, 000rpm에서 15분간 원심분리하여 혈청을 분리시켜 실험에 사용하였다.
- 나누었다. 마취는 pentobarbital sodium(entobal, 한림제약)으로 마취(50㎎/㎏/BW, i.p.)한 다음 實施하였으며 모든 쥐는 手術한 直後부터 精製水를 食水로 供給하였다.
- 수술 직전과 卵巣摘岀 수술을 실시한 후 6주 및 약물 투여 후 4주와 8주되는 날의 체중을 측정하여 그 변화를 관찰하였다. 단, 8주에는 絶食 前의 體重 을 觀察하였다.
- Durbiridge 등28)은 흰쥐에서 난소절제술을 시행하여 골소주 용적이 유의하게 감소되었음을 보고하였다. 이에 저자는 성숙한 흰쥐의난소를 적출한 후 6주간 기다려 폐경기로 인한 estrogen 결핍성 골다공증을 유발시킨 후 약물 투여 후 4주와 8주에 각각 척추골, 대퇴골, 비골경골의 골밀도에 미치는 영향, 혈청 중 osteocalcin 함량, alkaline phosphatase 활성도, calcium 함량, phosphorus 함량에 미치는 영향, 뇨 중 무기성분의변화, deoxypyridinoline 함량에 미치는 영향, 골의 calcium 함량, phosphorus 함량, ash 무게에 미치는 영향, 체중 변화에 미치는 영향, 자궁 무게에 미치는 영향을 관찰하였다.
- 적출 후 6주가 되고, 검액을 투여한 후 8주 되는 전날 물을 자유롭게 섭취하게 하면서 1마리씩 횐쥐대사 cage에 넣고 24시간 동안 採尿하고 원심분리하여 뇨량을 잰 다음, 뇨 중 Ca와 P를 측정하였다. Calcium의 함량은 比色法 12)(spectrophotometri c method)에 따라 분석용 kit(히타치, 일본)를 사용하여 spectrophotometer(Hitachi 7170A, 히타치, 일본)로 측정하였다.
- 한국산 山茱萸投與群에는 卵巢切除術을 行하고 6 주가 지난 후 골다공증이 유발된 다음, 한국산 山茱 萸 물 추출액을 매회 體重 100g當 lcc(體重 100g 當 한국산 山茱萸 1g)씩 1일 2회 8주간 經口 투여하였다. Sham群과 對照群(이하 OVX群)에는 0.
- 혈액은 난소를 적출하기 전, 난소를 적출한 후 6 주와 검액을 투여한 후 4주와 8주되는 날에 채취하였는데, 난소를 적출하기 전, 摘出한 後 6주와 검액을 투여한 후 4주되는 날에는 鎖骨下靜脈에서 혈액을 채취하였다. 검액을 투여한 후 8주되는 혈액의 채취는 8주되는 날 전날부터 24시간 絶食시킨 횐쥐를 pentobarbital sod.
대상 데이터
- 本 實驗에 使用한 한국산 山茱萸(경북 군위 생산 (한국산), 계림약업사(대구))는 대구한의대학교 本草 學敎室에서 검증한 후에 精選處理하여 使用하였다. 2) 動物
- 한국산 山茱萸 100g에 증류수 l, 200cc를 가하고 냉각관을 장치하여 직화상에서 2시간 30분 동안 가열(대웅약탕기, 한국), 추출, 여과한 후 100cc로 감압 농축하여 한국산 山茱萸 물 추출액을 얻었다. 2) 骨多孔症의 誘發
데이터처리
- 各 群間의 實驗 結果 分析은 Student's t-test를 하여 有意性(PV0.05)을 檢證하였다.
이론/모형
- 저자는 Sal.,illelO)의 방법에 따라 흰쥐의 난소적출로 골다공증을 인위적으로 유도한 다음, 난소를 절제한 흰쥐에 한국산 산수유의 물 추출물을 투여하여 척추골, 대퇴골, 비골경골의 골밀도에 미치는 영향, 혈청 중 osteocalcin 함량, alkaline phosphatase 활성도, calcium 함량, phosphorus 함량에 미치는 영향, 뇨 중 무기성분의 변화. deoxypyridinoline 함량에 미치는 영향, 골의 calcium 함량, phosphorus 함량, ash 무게에 미치는 영향, 체중 변화에 미치는 영향, 자궁 무게에 미치는 영향을 측정한 결과, 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
- Calcium의 함량은 比色法 12)(spectrophotometri c method) 에 따라 분석용 kit(히타치, 일본)를 사용하여 spectrophotometer(Hitachi 7170A, 히타치, Japan)로 측정하였다.
- 측정하였다. Calcium의 함량은 比色法 12)(spectrophotometri c method)에 따라 분석용 kit(히타치, 일본)를 사용하여 spectrophotometer(Hitachi 7170A, 히타치, 일본)로 측정하였다. Inorganic phosphorus의 含量 은 比色法 12, 13)(spectrophotometric method)에 따라 phosphorus 분석용 kit(히타치, 일본)를 사용하여 spectrophotometer(Hitachi 7170A, 히타치, 일본)로 측정하였다.
-
Inorganic phosphorus 의 含量은 比色法 12, 13)(spectrophotometric method) 에 따라 phosphor
us 분석용 kit(히타치, 일본)를 사용하여 spectrophot
ometer(Hitachi 7170A, 히타치, 일본)로 측정하였다
. - 尿 中 deoxypyridinoline 測定을 위한 試藥으로는 Gamma-BCT DPD RIA (Immuno diagnostic systems)제를 使用하였고 機器는 Gamma-counter (Packad, Auto gamma 5550)을 利用하였다.
- 血淸 中 osteocalcin 含量은 osteocalcin RIA kit(Brahms co.)를 使用하여 Radioimmunoassay® A)法11)에 의하여 測定하였다.
- 혈청중 alkaline phosphatase의 활성도 측정은 UW법12)에 따라 분석용 kit(히타치, 일본)를 사용하여 spectrophotometer(Hitachi 7170A, 히타치, 일본)로 측정하였다.
성능/효과
- (2) 血淸 中 phosphorus 含量에 미치는 影響 혈청 중 phosphorus 含量을 보면, 0 VX 群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 생리식염수를 투여한 후 4주와 8주에서, 각각 7.55+0.15, 7.65±0.29 mg/ dl 로 나타났으며, Sham群에 비하여 증가하였으나, 유의성은 인정되지 않았다.
- 2) 尿 中 deoxypyridinoline 含量에 미치는 影響 뇨 중 deoxypyridinoline 含量을 보면, 0 VX 群에서는 121.45±8.56로 Sham群에 비하여 유 의성 있게 증가하였다. 반면에 한국산 山茱萸投與群에서는 120.
- 혈청 중 무기성분에서 calcium 함량은 8주값이 OVX 군에 비하여 유의성있게 증가하였으며, phosphorus 함량은 0VX군에 비하여 유의성있는 변화는 없었다. 3. 뇨 중의 성분변화를 측정한 결과 뇨 중 clacium 함량은 한국산 산수유투여군이 0VX군에비하여 유의성있게 감소하였고, 뇨 중 phosphorus 함량은 0VX군에 비하여 유의성있게 감소하였다. 뇨중 deoxypyridinoline 함량은 0V宏군에 비하여 감소하였으나, 유의성은 없었다.
- 4. 골의 무기성분변화를 측정한 결과 대퇴골, 비골경골 중 calcium 함량은 한국산 산수유투여군이 0VX 군에 비하여 유의성있는 변화가 없었으며, phosphorus 함량 또한 0VX군에 비하여 유의성있는 변화가 없었다. ash 무게는 0VX군에 비하여 증가하였으나 유의성은 없었다.
- 5. 체중 변화를 측정한 결과 약물투여 후 4주와 8주 모두 한국산 산수유투여군이 0VX군에 비하여유의성있게 감소하였다.
- 6. 자궁 무게 변화를 측정한 결과, 한국산 산수유투여군이 0VX군에 비하여 유의성있게 증가하였다.
- 혈청성분을 측정한 결과. osteoclacin 함량은약물 투여 후 4주와 8주에서 모두 한국산 산수유투여군이 0VX군에 비하여 유의성있게 감소하였으며. alkaline phosphatase(ALP) 함량은 약물 투여 후 4 주값이 OVX군에 비하여 유의성있게 감소하였다.
- 大腿骨密度의 변화를 보면, 0VX群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 생리식염수 투여한 후 4주와 8주가 각각 106.47±1.06, 106.48±0.66%로 나타났으며, 모두 Sham群에 비하여 有意하게 減少되었다. 한국산 山茱萸投與群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 약물을 투여한 후 4주와 8주가 각각 109.
- 大腿骨密度의 변화를 보면, 0V成群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 생리식염수 투여한 후 4주와 8주가 각각 106.47±1.06, 106.48±0.66%로 나타났으며, 모두 Sham群에 비하여 有意하게 減少되었다. 한국산 山茱英投與群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 약물을 투여한 후 4주와 8주가 각각 109.
- 등이 나타난다29). 脊椎骨密度의 변화를 보면, 0VX群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 생리식염수 투여한 후 4주와 8주가 각각 94.56±2.87, 99.76±2.16%로 나타났으며, 모두 Sham群에 비하여 有意하게 減少되었다. 한국산 山茱萸投與群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 약물을 투여한 후 4 .
- 脊椎骨密度의 변화를 보면, 0V成群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 생리식염수 투여한 후 4주와 8주가 각각 94.56±2.87, 99.76±2.16%로 나타났으며, 모두 Sham群에 비하여 有意하게 減少되었다. 한국산 山茱英投與群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 약물을 투여한 후 4주와 8주가 各各 95.
- 91 呷로 0V成群에 비하여 유의성있게 증가하였다(Table 15). 이상에서 난소를 제거하여 골다공증을 유발한 흰쥐에 대하여 한국산 산수유 물 추출물을 투여한 결과, 골다공증 치료에 유의한 효과가 있었으며, 여성의 폐경기 이후 골다공증에 대한 치료에 한국산 산수유가 효과적이라 판단된다. 향후 임상실험을 통해효능을 더욱 검증할 필요성이 있으며, 가장 효과적인 투여량에 대한 실험연구나, 한국산 산수유를 우선 투여 후 난소를 제거하여 골다공증 예방효과를검증할 실험연구도 진행되어야 할 것이다.
- estrogen 의 투여는 체중증가를 억제한다고 하였다33). 제중의 변화를 보면, OVX群에서는 골다공증의 유발을확인하고 생리식염수 투여한 후 4주와 8주에서, 각각 330.71±5.27, 337.42±6.12(g)로 나타났으며, 모두 Sham群에 비하여 有意하게 증가되었다. 한국산 山茱萸投與群에서는 골다공증의 유발을 확인하고약물을 투여한 후 4주와 8주에서, 각각 291.
- 한국산 山茱萸投與群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 약물을 투여한 후 4주와 8주에서, 각각 11.50±0.08, 11.78±0.27 mg/dl로 나타났으며, 8주 값이 0VX群에 비하여 유의성있게 증가하였다 (Table 7).
- 한국산 山茱萸投與群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 약물을 투여한 후 4주와 8주에서, 각각 126.42±3.49, 129.00±5.51 ng/血로 나타났으며, 4 주값이 0VX群에 비하여 유의성있게 감소하였다 (Table 6).
- 한국산 山茱萸投與群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 약물을 투여한 후 4주와 8주에서, 각각 291.28±2.44, 275.00±1.34로 나타났으며, OVX群 에 비하여 유의성 있게 감소하였다(Table 14).
- 98 ng/而로 나타났으며, Sham群에 비하여 모두 유의성있게 증가하였다. 한국산 山茱萸投與群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 약물을 투여한 후 4주와 8주에서, 각각 39.94±3.02, 26.90±0.95 ng/此로 나타났으며, 0VX群에 비하여 유의성있게 감소하였다(Table 5). ALP(alkaline phosphatase)는 골아세포에서 분비되는 당단백질이며, 임상에서 가장.
- 한국산 山茱萸投與群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 약물을 투여한 후 4주와 8주에서, 각각 291.28±2.44, 275.00±1.34로 나타났으며, OVX群 에 비하여 유의성 있게 감소하였다(Table 14).
- 05 mg/dl로 나타났으며, Sham群에 비하여 8주값이 유의성있게 감소하였다. 한국산 山茱萸投與群에서는 골다공증의유발을 확인하고 약물을 투여한 후 4주와 8주에서, 각각 11.50±0.08, 11.78+0.27 mg/dl로 나타났으며, 8주값이 0VX群에 비하여 유의성있게 증가하였다 (Table 7).
- 30 ng/ml 로 나타났으며, Sham群에 비하여 모두 유의성있게증가하였다. 한국산 山茱萸投與群에서는 골다공증의유발을 확인하고 약물을 투여한 후 4주와 8주에서, 각각 126.42±3.49, 129.00±5.51 ng/ml로 나타났으며, 4주값이 OVX群에 비하여 유의성있게 감소하였다(Table 6).
- 혈청 중 alkaline phosphatase(ALP) 含量을 보면, 0VX群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 생리식염수를 투여한 후 4주와 8주에서 155.57±4.03, 139.85±3.30 ng/ml 로 나타났으며, Sham群에 비하여 모두 유의성있게 증가하였다.
- Morris30)는 난소절제후 osteocalcin이 증가되는 경향이 있다고 하였다. 혈청 중 osteocalcin 含量을 보면, 0VX群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 생리식염수를 투여한 후 4주와 8주에서 53.42±2.70, 36.44±0.98 ng/而로 나타났으며, Sham群에 비하여 모두 유의성있게 증가하였다. 한국산 山茱萸投與群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 약물을 투여한 후 4주와 8주에서, 각각 39.
- 있을 때 증가한다. 혈청 중 phosphorus 含 量을 보면, 0VX群에서는 골다공증의 유발을 확인하고 생리식염수를 투여한 후 4주와 8주에서, 각각 7.55+0.15, 7.65+0.29 mg/dl 로 나타났으며, Sham 群에 비하여 증가하였으나, 유의성은 인정되지 않았다. 한국산 山茱萸投與群에서는 골다공증의 유발을확인하고 약물을 투여한 후 4주와 8주에서, 각각 7.
- alkaline phosphatase(ALP) 함량은 약물 투여 후 4 주값이 OVX군에 비하여 유의성있게 감소하였다. 혈청 중 무기성분에서 calcium 함량은 8주값이 OVX 군에 비하여 유의성있게 증가하였으며, phosphorus 함량은 0VX군에 비하여 유의성있는 변화는 없었다. 3.
- 혈청중 calcium 含量을 보면, 0V瀟에서는 골다공증의유발을 확인하고 생리식염수를 투여한 후 4주와 8 주에서, 각각 11.65±0.06, 10.90±0.05 mg/dl로 나타났으며, Sham群에 비하여 8주값이 유의성있게 감소하였다. 한국산 山茱萸投與群에서는 골다공증의유발을 확인하고 약물을 투여한 후 4주와 8주에서, 각각 11.
후속연구
- 이상에서 난소를 제거하여 골다공증을 유발한 흰쥐에 대하여 한국산 산수유 물 추출물을 투여한 결과, 골다공증 치료에 유의한 효과가 있었으며, 여성의 폐경기 이후 골다공증에 대한 치료에 한국산 산수유가 효과적이라 판단된다. 향후 임상실험을 통해효능을 더욱 검증할 필요성이 있으며, 가장 효과적인 투여량에 대한 실험연구나, 한국산 산수유를 우선 투여 후 난소를 제거하여 골다공증 예방효과를검증할 실험연구도 진행되어야 할 것이다. 그리하여골다공증 예방과 치료에 한의학의 우수함을 밝히고활용도를 높여야 하겠다.
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