선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 그러므로 본 연구는 정향피 물 추출물의 NO/cGMP계를 통한 혈관 내피세포 의존적 이완효과를 보고하고 있으며, 이 결과는 심혈관계 질환의 동물모델에 있어서 정향피의 연구에 유용한 정보를 제시해준다.
- 본 연구는 정향피 물 추출물이 백서에서 적출한 흉부 대동맥의 phenylephrine에 의한 혈관 수축을 이완시키는 효과가 있음을 보여준다. 혈관 내피세포를 제거한 후 정향피의 혈관 이완 효과가 차단된 것은 정향피의 혈관 이완효과가 혈관 내피세포 (endothelium)에 의존적임을 의미한다.
- 본 연구에서는 정향피 물 추출물의 혈관 내피세포 의존적 이완 효과를 확인하고, 내피세포 유래 인자들과 정향피의 혈관 이완 효과와의 관련성을 알아보기 위하여 산화질소 차단제, 가용성 guanylate cyclase 억제제, K* 통로에 대한 억제제, Ca2+ 통로 차단제와 같은 여러가지 약물들을 사용하여 그 기전에 대한 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
- 혈관 평활근의 수축과 이완은 혈압을 조절하는 중요한 기전으로 본 연구에서는 정향피 물 추출물이 지닌 혈관 이완 효과의 기전에 대해 연구하였다. 정향피 물 추출물은 농도 의존적으로 흉부 대동맥을 이완시켰으며 이러한 혈관 이완효과는 혈관 내피세포를 제거함에 따라 사라졌다.
제안 방법
- , San Diego, CA, USA) 와 1251 가 결합된 cGMP (10, 000 cpm per 100 此 specific activity 2200 ci mmole-lz Dupont-New England Nuclear, Wilmington, DE, USA)를 함께 넣은 다음 4C에서 24시간 반응시켰다. 결합형과 비 결합형은 charcoal을 이욤하여 분리하였으며, Y-counter 를 이용하여 방사능을 측정하였다.
- 먼저 1 x 10-6 M의 phenylephrine으로 수축시키고 10 분후 1 X 10-6 M의 acetykholine (ACh)으로 이완반응을 시켜 혈관 내피 세포의 안전성을 측정한 후 Krebs용액으로 3회 세척하고 실험을 수행하였다. 여러가지 약물들에 의한 정향피 물 추출물의 혈관 이완효과 변화 측정은 먼저 약물을 20 분간 전 처리하고 phenylephrine으로 수축시킨 후 정항피 물 추출물에 의한 이완반응을 농도 의존적으로 관찰하였다.
- 혈관 조직은 바로 액체 질소에 넣어 반응을 정지시킨 다음 -76 ℃ 에 보관한 후 cGMP 농도를 측정하였다. 무게 (wet weight)를 측정한 혈관 조직을 6% trichloroacetic acid 존재 하에서 균질화시킨 후 13, 000 g에서 15 분간 원심 분리하여 얻은 상층 액을 물이 포화된 diethylether< 이용하여 4회 주출하였다. 추출액은 Speed-vac 농축기를 이용하여 농축하였고, cGMP 측정은 방사 면역 분석법을 이용하여 분석하였다, 간단히 설명하면, 시료와 표준물질을 50 mM sodium acetate 완충용액(pH 4.
- 대동맥을 분리하였다. 분리된 흉부 대동맥을 118 mM NaCL 4.7 mM KC1, 1.1 mM MgSO4, 1.2 mM KH2PO4, 1.5 mM CaCh, 25 mM NaHCO* 10 mM glucose가 들어있는 차가운 Krebs용액 (pH 7.4)에 넣고 연결 조직과 지방을 제거한 후 약 3 mm의 길이의 절편으로 만들었다.
- 수행하였다. 여러가지 약물들에 의한 정향피 물 추출물의 혈관 이완효과 변화 측정은 먼저 약물을 20 분간 전 처리하고 phenylephrine으로 수축시킨 후 정항피 물 추출물에 의한 이완반응을 농도 의존적으로 관찰하였다. 혈관 내피세포 비의존형 실험을 수행할 때에는 혈관 내피세포를 작은 면봉으로 제거한 후 phenylephrine 수축과 ACh 이완반응으로 혈관 내피세포의 제거를 확인 후 실험을 수행하였다.
- 정향피 물 추출물의 혈관 이완효과가 cGMP와 관련이 있는지를 알아보기 위히여 세포질 guanylate cyclase 억제제인 ODQ(1 x 1甘 M)를 전 처리한 후 혈관 이완효과를 측정하였다. 그 결과 정향 피 물 추출물의 혈관 이완효과가 완전히 억제되었다(Fig.
- 추출하였다. 정향피 전탕액을 2500 g 4℃ 조건에서 20 분간 원심분리 시킨 후, Whatman NO. 3 여과지를 이용하여 여과하였다. 감압 농축 후 동결 건조하여 얻은 정향피 물 추출물은 약 57.
- 무게 (wet weight)를 측정한 혈관 조직을 6% trichloroacetic acid 존재 하에서 균질화시킨 후 13, 000 g에서 15 분간 원심 분리하여 얻은 상층 액을 물이 포화된 diethylether< 이용하여 4회 주출하였다. 추출액은 Speed-vac 농축기를 이용하여 농축하였고, cGMP 측정은 방사 면역 분석법을 이용하여 분석하였다, 간단히 설명하면, 시료와 표준물질을 50 mM sodium acetate 완충용액(pH 4.8)에 최종 용적이 100 成 가 되도록 첨가한 후 100 成 의 희석된 cGMP 항체 (Calbioche m-Novabiochem, Co., San Diego, CA, USA) 와 1251 가 결합된 cGMP (10, 000 cpm per 100 此 specific activity 2200 ci mmole-lz Dupont-New England Nuclear, Wilmington, DE, USA)를 함께 넣은 다음 4C에서 24시간 반응시켰다. 결합형과 비 결합형은 charcoal을 이욤하여 분리하였으며, Y-counter 를 이용하여 방사능을 측정하였다.
- 여러가지 약물들에 의한 정향피 물 추출물의 혈관 이완효과 변화 측정은 먼저 약물을 20 분간 전 처리하고 phenylephrine으로 수축시킨 후 정항피 물 추출물에 의한 이완반응을 농도 의존적으로 관찰하였다. 혈관 내피세포 비의존형 실험을 수행할 때에는 혈관 내피세포를 작은 면봉으로 제거한 후 phenylephrine 수축과 ACh 이완반응으로 혈관 내피세포의 제거를 확인 후 실험을 수행하였다.
- 흉부 대동맥 절편에 95% O25% CO2 기체로 포화시킨 37℃ 의 Krebs 용액에서 고정시킨 후 isometric tension 을 force-displacement transducer(Grass FT 03, GRASS Instrument, MA, USA)가 장착된 생리 기록계(Grass Mod이 7E, Grass Instrument MA, USA)를 이용하여 측정하였다.
대상 데이터
- 내피세포 유래 인자들과 정향피의 혈관 이완효과와의 관련성을 알아보기 위하여 산화질소 차단제, 가용성 guanylate cyclase 억제제, K* 통로에 대한 억제제, Ca2+ 통로 차단제와 같은 여러 가지 약물들을 실험에 사용하였다.
- 본 연구에 사용된 acetylcholine (ACh), phenylephrine HC1, NG-nitro arginine methyl ester (L-NAME), lH-[l, 2, 4]-oxadiaz이e- [4/3-a]-quinoxalin-l-one(ODQ)/ indomethacin, glibenslamide, tetraethylammonium (TEA), verapamib atropine, propranolol 등은 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA)으로부터 구입하여 사용하였다.
- 실험 약재인 정향피는 원광대학교 익산한방병원에서 구입한후 정선하여 사용하였다.
- 실험동물은 체중 200 g 정도의 Sprague-Dawley계 수컷 흰쥐를 (주)샘타코바이오코리아(경기도, 오산)로부터 구입하여 사용하였으며, 2 주일 이상 실험실 환경에 적응시키는 동안 고형사료와 물을 충분히 공급하면서, 표준적인 사육조건인 온도 23±2℃Z 상대습도 50±10%의 환경조건을 유지하였다.
데이터처리
- 실험 결과의 유의성은 실험결과를 Student's t~test 나 one-way ANOVA test를 통하여 p가 0.05 이하인 경우를 유의한차이로 판정하였다.
성능/효과
- K* 통로 차단이 정향피 물 추출물의 혈관 이완효과에 영향을 주는지를 측정하기 위하여 ATP-감수성 K+ 통로 억제제인 1 X IO-6 M glibenclamide 와 비 선택적 K* 통로 억제제인 1 x 10'5 M TEA를 전 처리한 결과, TEA를 전 처리한 경우 정향피 물 추출물 3 X I* O "前 농도까지는 혈관 이완효과가 완전히 억제되었고, 1 X 1* 0 g/ml 이상의 농도에서는 혈관 이완효과가 부분적으로 억제되었다. 또한 glibenclamide를 전 처리한 경우 정향피물 추출물의 혈관 이완효과가 낮은 농도에서부터 부분적으로 억제되었다(Fig.
- Ca2+ 통로 차단이 정향피 물 추출물에 의한 혈관 이완 효과에 미치는 영향을 측정하기 위하여 Ca2+ 통로 차단제인 verapamil(l X 1萨 M)과 diltiazem (1 x 1萨 m)을 각각 전 처리한 후 정향피물 추출물에 의한 혈관 이완정도를 측정한 결과, verapamil과 diltiazem 모두 정향피 물 추출물 3 x 1(广 g/ml 농도까지는 혈관 이완 효과가 완전히 억제되었고, 1沪 g/ml 이상의 농도에서는 혈관 이완효과가 부분적으로 억제되었다(Fig. 7).
- NO/cGMP 계가 정향피에 의한 혈관 이완효과에 관여한다면 산화질소에 의하여 활성화 되는 가용성 guanylate cyclase 또한 정향피에 의한 혈관 이완효과에 관여할 것으로 유추되어 가용성 guanylate cyclase 억제제인 ODQ를 전 처리한 후 혈관 이완 효과를 측정한 결과, 정향피 의한 혈관 이완효과가 억제되었다. 이러한 결과는 정향피에 의한 혈관 이완효과가 NO/cGMP 계를 경유하여 일어나는 것을 의미한다.
- M)를 전 처리한 후 혈관 이완효과를 측정하였다. 그 결과 정향 피 물 추출물의 혈관 이완효과가 완전히 억제되었다(Fig. 3).
- 내피세포 유래 혈관 이완인자의 본체인 산화질소(NO)가 정향 피 물 주출물의 혈관 이완효과에 관여하는지를 알아보고자 먼저 산화질소 합성 억제제인 L-NAME를 전 처리한 후 측정한 결과, 정향피의 혈관 이완효과가 완전히 차단되었다. 산화질소는 L・arginine으로부터 산화질소 합성 효소(NOS)에 의하여 합성되고, 혈관에는 산화질소 합성 효소인 3가지의 동위 효소가 존재 억제되었다. 또한 glibenclamide를 전 처리한 경우 정향피물 추출물의 혈관 이완효과가 낮은 농도에서부터 부분적으로 억제되었다(Fig. 8).
- 이러한 산화질소는 세포질의 guanylate cyclase를 활성화시키고 cGMP의 생성을 증가시켜 신호 전달체계를 통해 혈관 평활근을 이완시킨다 3D. 본 연구에서 L-NAME의 전 처리에 의해 정향 피의 이완 효과가 억제되는 것으로 보아 정향피에 의한 혈관 이완 효과는 산화질소계를 경유하여 일어나는 것으로 생각된다.
- 이 연구에서는 정향피가 자율 신경계의 수용체를 경유하여 혈관을 이완시키는지 여부를 알아보기 위하여 콜린성 수용체 중에서 무스카린성 수용체를 선택적으로 차단하는 atropine 과 P 수용체를 선택적으로 차단하는 항 아드레날린성 약물인 propranolol을 전 처리한 결과, atropine을 전 처리한 경우, propranolol과 atropine을 전 처리하지 않은 군과 유의한 차이가 없었다. 이와 같은 결과로 볼 때, 정향피의 혈관 이완효과는 교감신경계와 무관한 것으로 보여 진다3&39).
- 이러한 결과로 볼 때, 정향피는 혈관 내피세포에서 산화질소의 합성을 증가시키고 가용성 guanylate cyclase를 활성화시켜 cGMP의 생성을 증가시킴으로써 혈관을 이완시키는 것으로 생각된다. 35'36).
- 게다가 정향피 물 추출물을 혈관 절편과 반응시켰더니 조직 내 cGMP의 생성량이 농도 의존적으로 증가하였다. 이와 같은 결과를 종합하여 볼 때 정향피 물 추출물은 혈관내피세포 의존적이고 NO/cGMP 계 의존적으로 혈관을 이완시키고, 이 과정에서 L-형 Ca2+ 통로와 K+ 통로가 부분적으로 관여하는 것으로 사료된다.
- 정향피 물 추言물에 의한 혈관 이완 효과는 비 특이성 산화질소 합성효소(nitric oxide synthase) 의 억제제인 NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME)나 가용성 guanylate cyclase의 억제제인 lH-[l, 2, 4]-oxadiazole-[4, 3- a]-quinoxalin-l-one (ODQ)를 전 처리하면 사라졌다. 정향피 물 추출물에 의한 혈관 이완효과는 Ca2+ 통로 차단제인 verapamil 과 diltiazem, K+ 통로 차단제인 glibenclamide, tetraethylammonium(TEA)에 의하여 유의하게 억제 되었지만 indomethacine, atropine, propranolol 등의 전 처리에 의해서는 억제되지 않았다. 게다가 정향피 물 추출물을 혈관 절편과 반응시켰더니 조직 내 cGMP의 생성량이 농도 의존적으로 증가하였다.
- 정향피 물 추출물에 의한 혈관 이완효과와 신경계와의 연관성을 알아旦기 위하여 비 선택성 ◎아드레날린성 길항제인 propranolol, 항 무스카린성 약물인 atropine을 1 x 10'6 M로 각각 전 처리한 후 정향피 물 추출물의 혈관 이완 효과를 측정한 결과, propranolole atropine을 전 처리하지 않은 군과 유의한 차이가 없었다(Fig. 6).
- 정향피 물 추출물의 혈관 이완효과가 산화 질소계와 관련이 있는지를 알아보기 위하여 비 특이적인 산화질소 억제제인 L-NAME(1 X 1(广 M)을 전 처리하고 정향피 물 추출물의 혈관 이완 효과를 측정한 결과, 혈관 이완효과가 완전히 억제되었다 (Fig- 2).
- 78%의 혈관 이완효과를 관찰할 수 있었다. 정향피 물 추출물의 혈관 이완효과가 혈관 내피세포 의존적인지를 밝히기 위하여 혈관 내피세포를 제거한 후 혈관 이완 효과를 측정한 결과 거의 완벽하게 혈관 이완효과가 억제되었다 (Fig. 1).
- 정향피 물 추출물이 혈관 조직에서 cGMP의 생성에 영향을 미치는지를 관찰하기 위하여 정향피 물 추출물을 흉부대동맥에 직접 투여한 후 흉부대동맥에서 cGMP 생성량을 측정한 결과, 정향피 물 추출물을 투여하지 않은 군에 비해 정향피 물 추출물을 투여한 군이 농도 의존적으로 cGMP의 생성량을 증가시킴을 관찰할 수 있었다(Fig. 4).
- 정향피에 의한 혈관 평활근의 이완효과가 NO/cGMP 계를 경유하여 일어난다면, 정향피를 혈관 평활근과 반응시키면 cGMP의 생성을 변화시킬 것으로 생각되어, 정향피를 혈관 평활근과 반응시킨 결과 혈관 평활근의 cGMP의 생성량이 증가되었다. 이러한 결과로 볼 때, 정향피는 혈관 내피세포에서 산화질소의 합성을 증가시키고 가용성 guanylate cyclase를 활성화시켜 cGMP의 생성을 증가시킴으로써 혈관을 이완시키는 것으로 생각 세포 내 Ca?+ 농도가 증가하면 calmodulin과 결합하여 myosine light chain (MLC)의 인산화를 촉진시켜 평활근을 수축시킨다. 정향피의 혈관 이완 효과가 Ca2+ 통로와 연관이 있는지를 알아보기 위하여 Ca2+ 통로 차단제인 verapamil과 diltiazem을 전 처리한 후 혈관 이완효과를 측정한 결과, verapamil과 diltiazem 모두 정향피 물 추출물 3 x 10'5 g/ml 농도까지는 혈관 이완효과가 완전히 억제되었고, 1* 0 g/ml 이상의 농도에서는 혈관 이완효과가 부분적으로 억제되었다. 이와 같은 결과로 볼 때, 정향피에 의한 혈관 이완효과에서 Ca2+ 통로가 어느 정도 역할을 하고 있는 것으로 보여진다.
- Prostacycline arachidonic acid로부터 ey아ooxygenase에 의하여 생성되고, 이때 생성된 prostacyclin 은 혈관 이완작용을 갖는다. 정향피의 혈관 이완효과가 prostacyclin 의 생성과 관련이 있는지를 알아보기 위하여 cyclooxygenase 억제제인 indomethacin을 전 처리하고 정향 피의 이완 효과를 측정한 결과 ir너omethacin을 전 처리하지 않은 군과 비교하여 차이가 없었다. 이와 같은 결과로 볼 때 prostacyclin 계는 정향피의 혈관 이완작용과는 무관한 것으로 생각된다*初.
- 혈관 이완효과가 있는 prostacyclin이 정향피 물 추출물의 혈관 이완효과에 영향을 미치는지를 판단하기 위하여 비 선택성 cyclooxygenase 억제제인 indomethacin을 1 x 10-5 M 전 처리한 후정향피 물 추출물의 혈관 이완 효과를 측정한 결과, indomethacin 전 처리하지 않은 군과 유의한 차이가 없었다(Fig. 5).
- 흉부대동맥을 Phenylephrine(l x IO'6 M)으로 수축시킨 후정향피 물 추출물의 농도에 따른 혈관 이완효과를 측정한 결과, 농도 의존적으로 혈관을 이완시켰으며, 1 X W4 g/ml의 정향피물 주출물 농도에서는 91.24 ± 1.78%의 혈관 이완효과를 관찰할 수 있었다. 정향피 물 추출물의 혈관 이완효과가 혈관 내피세포 의존적인지를 밝히기 위하여 혈관 내피세포를 제거한 후 혈관 이완 효과를 측정한 결과 거의 완벽하게 혈관 이완효과가 억제되었다 (Fig.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.