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고온내성 연료용 알코올 효모균주 Saccharomyces cerevisiae KNU5377에서 HSF1 유전자의 변이주 구축
Construction of hsf1 Knockout-mutant of a Thermotolerant Yeast Strain Saccharomyces cerevisiae KNU5377 원문보기

생명과학회지 = Journal of life science, v.16 no.3 = no.76, 2006년, pp.454 - 458  

김일섭 (경북대학교 미생물학과) ,  윤혜선 (질병관리본부 바이러스부) ,  최혜진 (경북대학교 미생물학과) ,  손호용 (안동대학교 식품영양학과) ,  유춘발 (대구대학교 식품공학과) ,  김종국 (경북대학교 미생물학과) ,  진익렬 (경북대학교 미생물학과)

초록
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출아효모인 Sacharomyces cerevisiae S288C균주를 이용한 효모의 게놈이 완성된 후 S. cerevisiae는 다양한 연구 모델로 이용되어져 왔다. 현재까지 효모를 이용한 기능 유전체학 측면에서의 연구는 laboratory strainin인 S288C 균주 또는 그 유래의 균주들이다. 그러나 자연에서 분리된 효모 또는 산업적으로 이용되어지고 있는 S. cerevisiae의 유전학 측면에서의 연구는 낮은 포자형성률 및 형질전환률, 그리고 S288C 균주와의 게놈상의 상이성 때문에 거의 이루어지지 않고 있다. 여기서 우리 연구진은 자연에서 분리된 Saccharomyces cerevisiae KNU5377 균주를 이용하여 random spore analysis를 통해 MATa 및 $MAT{\alpha}$ 타입의 각각의 haploid cell을 분리 후 이미 보고된 KanMX module를 가지고 round PCR기법에 의한 short flanking homology 기법을 이용하여 전사조절인자인 HSF1 유전자가 치환된 변이주를 구축할 수 있었다. 덧붙여, 모든 유전자에 이 기법을 적용할 수는 없다는 것을 확인하였다. 앞으로 이 변이주를 통해 기능 유전체학적인 측면에서 이 유전자의 스트레스와의 관련성을 연구하고자 한다.

Abstract ▼ AI-Helper 아이콘AI-Helper

HSF1 is the heat shock transcription factor in Saccharomyces cerevisiae. S. cerevisiae KNU5377 can ferment at high temperature such as $40^{\b{o}}C$. We have been the subjects of intense study because Hsf1p mediates gene expression not only to heat shock, but to a variety of cellular and ...

주제어

#Gene disruption   #hsf1 gene   #Saccharomyces cerevisiae KNU5377  

AI 본문요약
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제안 방법

  • The isolated plasmid DNA was used as a template for PCR reaction. A PCR-generated deletion strategy was used to systematically replace each open reading frame from its start- and stp-co- don with a kanMX module and two unique 20 mer molecular bar codes. Deletion cassette was constructed using two sequential PCR reactions.
  • analysis to separate haploid cells. After sporulation, each single band indicating MATa or MATa was obtained by colony-PCR with growing colony by random spore analysis. PCR product size of MATa was 544 bp, while that of MATa was 404 bp.

이론/모형

  • cerevisiae KNU5377 for geneticin resistance. The transformation was performed by CiC12 method [3]. The transformed cells were selected for kanr recombinants on YPED plus G418 plates.
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참고문헌 (14)

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