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문제 정의
- 이에 저자는 合歡皮의 성기능 개선 효과를 규명하기 위하여 흰쥐에 장기간 ethan胡을 음용 시켜 발기부전을 유도하고 음경해면체내의 NOS 활성, nitrite 와 이utathione 및 testosterone 함량, 음경 발기능 등에 미치는 영향을 관찰하여 유의성 있는 결과를 얻었으므로 보고한다.
제안 방법
- Glutathione 함량은 Ellman의 방법匀에 준해 조직 마쇄 액 일정 량에 4% sulfosalicylic acid를 가해 제 단백 시켜 얻은 상징액 일정량에 0.1 mM 5, 5'-dithiobis (2-nitrobenzoic acid)를 함유한 0.1 M sodium phosphate buffer (pH 8.0) 일정량을 넣고 반응 시켜 생성된 p-nitrothiophen이의 흡광도를 파장 412 nm에서 측정하여 농도를 산정하였다. GSH 함량은 조직 1 g당 함유되어 있는 GSH의양을 nm이e로 나타내었다.
- 준하여 측정하였다”). Griess 시액은 1% sulfanilamide, 0.1% naphtylethylene diamine 및 2.5% 인산을 혼합하여 제조하였으며, 효소원 200 111에 동량의 Griess 시액을 실온에서 10분간 반응 시켜 550 nm에서 흡광도의 변화를 측정하였다. Nitrite 양의 측정은 sodium nitrite를 이용한 표준 곡선을 이용하여 산출하였고, 흰쥐 조직 g당 nitrite 의 양을 jimole로 환산하여 나타내었다.
- 5% 인산을 혼합하여 제조하였으며, 효소원 200 111에 동량의 Griess 시액을 실온에서 10분간 반응 시켜 550 nm에서 흡광도의 변화를 측정하였다. Nitrite 양의 측정은 sodium nitrite를 이용한 표준 곡선을 이용하여 산출하였고, 흰쥐 조직 g당 nitrite 의 양을 jimole로 환산하여 나타내었다.
- Testosterone 농도는 radioimmunoassay인 Coat A-count total testosterone kit를 사용하여 측정하였다 32). Heparin 처리하여 분리한 혈장에 dispense reagent를 가하여 37 ℃ 에서 3시간 동안 반응시킨 다음 꺼내어 반응액을 이용하여 Gamma counter 로 측정하였다.
- 合歡皮의 성기능 개선 효과를 규명하기 위하여 ethanol을 장기간 섭취시켜 발기부전을 유도한 흰쥐를 대상으로 nitric oxide, 과산화지질 및 testosterone 함량, 음경 발기능 등을 검토하였다. 合歡皮추출물은 흰쥐 음경해면체의 nitric oxide synthase 활성과 nitrite 함량을 유의성 있게 증가시켰으며 과산화지질 함량을 유의성 있게 감소시켰다.
- 가하여 음경발기를 일으켰다. 그 후 해면체 내압이 기저치로 떨어지고 15분 후에 동일 강도의 전기자극을 가하여 발기능을 측정 하였다33). 실험동물의 골반신경 및 음경해면체 신경을 박리한 다음 신경 자극을 위하여 백금전극을 음경해면체 신경에 설치하여 전기자극기 (SEN-7103, Nihon Kohden, Japan)와 연결하였다.
- 대조군과 실험군은 알코올 중독에 의한 발기부전을 유도하기 위하여 물 대신 25% ethanol을 30일간 섭취시켰다. 실험군에는 合歡皮 추출물을 실험동물의 체중 kg 당 100 mg을 ethanol 투여 10일째부터 1일 1회 20일간 경구 투여하였고 대조군에는 동량의 생리식염수를 투여하였다.
- 본 실험에 사용된 合歡皮는 安神解鬱 효능으로 心神不安, 憂鬱, 失眠, 健忘 등의 치료에 활용되고 있지 만 活血 효능도 가지고 있다끄콩과에 속하는 葫蘆巴가 음경해면체의 NOS 활성을 증가시키고 항산화 효과를 나타내는 것으로 보고되었고, 酒 合歡皮를 위주로 한 合歡湯이 陽痿의 치료에 활용되고 있다”) 특히 혈관내피세포에서 NO 분비를 촉진하여 혈관 이완 작용을 나타내었다는 실험보고가 있으므로, 26)NO와 관련되어 음경 발기에 효과를 나타낼 것으로 기대하고 본 실험을 시도하였다.
- 대조군과 실험군은 알코올 중독에 의한 발기부전을 유도하기 위하여 물 대신 25% ethanol을 30일간 섭취시켰다. 실험군에는 合歡皮 추출물을 실험동물의 체중 kg 당 100 mg을 ethanol 투여 10일째부터 1일 1회 20일간 경구 투여하였고 대조군에는 동량의 생리식염수를 투여하였다.
- 실험동물은 정상군, 발기부전을 유도한 대조군, 발기부전 유도을 유도하면서 合歡皮추출물을 투여한 실험군으로 나누었으며, 각 군에 10마리씩 배정하였다. 대조군과 실험군은 알코올 중독에 의한 발기부전을 유도하기 위하여 물 대신 25% ethanol을 30일간 섭취시켰다.
- 그 후 해면체 내압이 기저치로 떨어지고 15분 후에 동일 강도의 전기자극을 가하여 발기능을 측정 하였다33). 실험동물의 골반신경 및 음경해면체 신경을 박리한 다음 신경 자극을 위하여 백금전극을 음경해면체 신경에 설치하여 전기자극기 (SEN-7103, Nihon Kohden, Japan)와 연결하였다. 또한 음경포피를 절개하여 음경해면체를 노출시킨 후 해면체 내압을 측정하기 위하여 26 G 주사바늘을 일측 음경해면체 내에 유치하였다.
- 이용하였다的. 실험동물의 조직 효소원에 50 mM Hepes (pH 7.4) 용액과 L-arginine, NADPH, EDTA, CaCl2, dithiothreitol, calmodulin 및 NBT를 가하여, 37℃ 에서 5분간 반응시켜 585 nm에서 흡광도 변화를 측정하였다. 효소의 활성도는 파장 585 nm에서 측정 한 흡광도 수치 에 사용한 단백질의 함량을 나눈 값으로 산정하였다.
- 또한 음경포피를 절개하여 음경해면체를 노출시킨 후 해면체 내압을 측정하기 위하여 26 G 주사바늘을 일측 음경해면체 내에 유치하였다. 압력 측정용 침은 silicon 관, Sorenson transpac (Abbot critical care system, USA) 을 통해 차등증폭기 (DA 100, Biopac system, USA), Data Acquisition (MP 100, Biopac system, USA)으로 연결하였고, 측정치들은 Data Analysis program (Acknowledge 1.5.5 program, Biopac sy마em, USA) 및 Mackintosh Ilsi Computer를 이용하여 기록 분석하였다. 압력 전달관의 혈액 응고 방지를 위해 heparinized saline (5000 IU/ml)으로 간헐적인 관류를 시행하였다.
- 음경 발기능 관찰은 동물마다 정상 음경발기의 기준을 정하기 위하여 해면체 신경자극 (frequency: 1 Hz, intensity: 3-5V, pulse duration: 1 msec)을 1 분간 가하여 음경발기를 일으켰다. 그 후 해면체 내압이 기저치로 떨어지고 15분 후에 동일 강도의 전기자극을 가하여 발기능을 측정 하였다33).
- 4) 용액과 L-arginine, NADPH, EDTA, CaCl2, dithiothreitol, calmodulin 및 NBT를 가하여, 37℃ 에서 5분간 반응시켜 585 nm에서 흡광도 변화를 측정하였다. 효소의 활성도는 파장 585 nm에서 측정 한 흡광도 수치 에 사용한 단백질의 함량을 나눈 값으로 산정하였다.
- 흡입마취제인 ether를 이용하여 가볍게 마취시킨 동물의 하복부를 절개하여 복부대동맥으로부터 혈액을 채취하고 음경해면체를 적출하였다. 적출한 음경해면체를 생리식염수로 깨끗하게 세척한 후, 남아 있는 이물질 및 혈액을 여지로 제거하였다.
대상 데이터
- L-arginine, bovine serum albumin, calmodulin, dithiothreitol, ethylene diamine tetra sodium salt, glutathione reduced form, L-N-nitroarginine methyl ester, naphtylethylene diamine, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate reduced form, nitroblue tetrazolium, sodium citrate, sulfanilamide, sodium nitrite, thiobarbituric acid sodium salt는 Sigma 사의 제품을 사용하였으며 potassium phosphate mono and dibasic는 Wako사의 제품을, 5, 5'-dithiobis (2-nitrobenzoic acid), trichloroacetic acid는 Nakarai 사의 제품을 사용하였다. 그밖에 본 실험에 사용한 시약은 시중에서 구입한 특급품 내지 일급 품을 사용하였다.
- 合歡皮는 시중에서 상등품을 구입한 후 정선하여 사용하였다.
- 제품을 사용하였다. 그밖에 본 실험에 사용한 시약은 시중에서 구입한 특급품 내지 일급 품을 사용하였다.
- 일정한 온도와 습도가 유지되는 조건에서 사육된 체중 250 g 내외의 외관상 건강한 웅성 Sprague Dawley계 흰쥐를 실험 전 24시간 동안 물만 주고 절식 시켜 사용하였다.
데이터처리
- 실험 결과의 유의성 검정은 Students t-test를 이용하여 행하였으며, p value가 0.05 미만일 때 유의한 것으로 판정하였다.
이론/모형
- NOS 활성은 비색법 (colorimetric assay)으로 NADPH diaphorase 활성도 측정법을 이용하였다的. 실험동물의 조직 효소원에 50 mM Hepes (pH 7.
- 과산화지질 함량은 Ohkawa 등의 방법3°)에 준하여 조직 마쇄균질액 일정량에 8.1% sodium dodesyl sulfate, 20% acetate buffer (pH 3.5) 및 0.8% thiobarbituric acid (TBA) 용액을 가해 95 ℃ 에서 1시간 동안 반응시키고 실온으로 냉각한 다음 생성된 홍색의 TBA reactive substance를 n-Butanol: Pyridine (15:1) 혼액으로 이행시켜 파장 532 nm 에서 흡광도의 변화를 측정하여 정 량하였다. 과산화지질의 함량은 조직 g당 MDA의 양을 n mole로 단백질의 정량은 Lowry 등의 방법‘身에 준해 bovine serum albumin을 표준품으로 하여 행하였다.
- 조직 중의 nitrite (NO2 ) 양은 비색법으로 Griess reaction에 준하여 측정하였다”). Griess 시액은 1% sulfanilamide, 0.
성능/효과
- 정상군의 음경해면체 조직 중 nitrite 함량은 0.52W.04 ymoles이었으나 대조군의 경우는 0.37±0.03 "moles로 정상군에 비하여 유의하게 감소되었다. 반면에 실험군의 경우는 0.
- 음경해면체 조직중의 이utathione 과 혈중의 testosterone 함량은 ethanol 투여에 의해 유의성 있게 저하되었으나 合歡皮추출물 병용투여에 의해 증가되었다. 30일간 ethanol을 섭취시킨 흰쥐에서 해면체 전기 자극에 의한 음경 발기능이 현저하게 억제되었으나 合歡皮추출물 병용 투여에 의해 유의성 있게 증가되었다. 이상의 결과로 合歡皮는 음경해면체의 nitric oxide synthase 활성을 조절하여 nitric oxide 생합성을 증가시켜 음경 발기능을 개선시키며, testosterone 함량을 증가 시켜 성기능을 향상시키는 것으로 생각된다.
- 감소되었다. NOS 활성도 알코올 장기 섭취에 의해서 현저하게 억제되었으나 合歡皮추출물의 병용 투여로 정상수준 가깝게 증가됨을 관찰할 수 있었으며, nitrite 함량도 알코올 장기 섭취에 의해서 감소되었으나 合歡皮추출물의 병용 투여로 인해서 정상수준 가깝게 증가되었다. 이러한 성적으로 유추해 보건데 合歡皮추출물은 체내에서 항산화작용을 발휘하여 음경조직 세포의 손상을 경감시키고 또한 음경조직 중의 NOS 활성 및 nitrite 함량을 적절히 조절하여 발기부전 증상을 개선할 수 있을 것으로 생각된다.
- 조직세포의 기능적, 기질적 이상을 초래할 수 있는 인자 중의 하나가 활성산소인데 활성산소는 체내 생화학적 연쇄반응에 의해서 생성되어지며 이것은 불안정한 조직세포를 공격하여 과산화지질을 다량 생성시키고 이때 생성된 과산화지질은 세포의 구성 막 성분을 파괴시켜 세포 손상을 유발시키는 내 인성 독성물질로 알려져 있다.功 合歡皮추출물을 20일 동안 투여 한 흰쥐의 음경 조직중 과산화지질 함량을 관찰하였을 때 정상군에 비하여 현저하게 감소되었다. 이 결과는 合歡皮의 성분 중에 강한 항산화 작용을 나타내는 성분이 함유되어 있으며 이것이 지질의 과산화반응을 억제하여 조직 중의 과산화지질 생성을 감소시켜 음경조직 세포의 손상을 억제하여 성기능 저하를 예방할 수 있을 것으로생각되어진다.
- 合歡皮추출물을 흰쥐에 20일 동안 경구투여한 후 음경해면체 조직 중의 NOS 활성 변화를 관찰하였을 때 효소 활성이 유의성 있게 증가하였으며 이와 더불어 nitrite 함량도 증가하는 것으로 나타났다. 이는 合歡皮추출물이 음경 조직 중의 NOS 를 활성화시켜 혈관 확장인자로 작용하는 NO의 생합성을 증가시키고 이것에 의해서 음경의 발기가 보다 더 강하게 나타날 것이라고 생각된다.
- 또한 알코올을 30일 동안 섭취시켜 성기능 저하를 유도한 흰쥐에서 음경 내압의 변화를 측정하였을 때 음경 강직도가 정상군에 비해 유의성 있게 저하되었으나 合歡皮추출물을 병용 투여한 경우에는 정상 수준 가까이 회복되는 경향을 나타내었다.
- 인자인 활성산소의 공격으로부터 방어하여 음경 조직의 피로도를 경감 시켜 음경의 발기능을 강화시킬 것으로 생각되어진다. 또한 외부에서 유입되는 조직 공격인자들에 대한 방어작용도 지u고 있어 부가적으로 나타나는 성 기능 저하 현상에 대하여 상당한 개선효과가 있음을 입증할 수 있었다.
- 啊 남성의 성기능 저하는 나이가 들어감에 따라서 체내에서 testosterone의 분비량 감소로 인해 나타나는 경우가 많다. 본 실험에서 흰쥐에 장기간 알코올을 섭취시켰을 때 혈액 중의 testosterone 함량이 현저하게 감소되었으나 合歡皮추출물을 병용 투여한 경우에 정상수준으로 회복되는 효과를 관찰할 수 있었다. 이는 合歡皮추출물이 내분비계에 작용하여 testosterone의 분비량을 증가시켜 저하된 성기능을 회복시킬 수 있는 효능을 가지는 것으로 생각된다.
- 30일간 ethanol을 섭취시킨 흰쥐에서 해면체 전기 자극에 의한 음경 발기능이 현저하게 억제되었으나 合歡皮추출물 병용 투여에 의해 유의성 있게 증가되었다. 이상의 결과로 合歡皮는 음경해면체의 nitric oxide synthase 활성을 조절하여 nitric oxide 생합성을 증가시켜 음경 발기능을 개선시키며, testosterone 함량을 증가 시켜 성기능을 향상시키는 것으로 생각된다. 또한 항산화 작용에 의해 음경조직의 피로를 경감 시켜 발기부전에 효과를 나타낼 것으로 사료된다.
- 이상의 실험성적들을 종합하여 볼 때 合歡皮추출물은 음경 조직 중의 NOS 활성을 증가시켜 혈관 확장 인자인 NO 생성을 증가시킴으로써 음경 발기능을 개선시키는 것으로 생각된다. 아울러 合 歡皮추출물은 음경 조직세포에 대한 항산화 작용을 나타내어 세포독성 .
- 정상군의 음경해면체 조직 중의 nitrite 함량이 0.52±0.04 jimole/g인데 비하여 合歡皮추출물을 투여한 경우에 0.66±0.05 pmole/g으로 정상군에 비하여 유의성 있게 증가되었다(fig. 2).
- 정상군의 음경해면체 조직 중의 과산화지질 함량이 6.02±0.18 nmoles/g이었으나 合歡皮추출물을 투여한 경우에 5.15±0.15 nmoles/g으로 정상군에 비하여 유의하게 감소되었다(fig. 3).
- 흰쥐에 30일 동안 물 대신 알코올을 섭취 시켜 발기부전을 유도한 후 음경 조직 중의 과산화 지질함량을 관찰하였을 때 현저하게 증가되었으나 合 歡皮추출물을 20일 동안 병용 투여한 경우에 현저하게 감소되었다. NOS 활성도 알코올 장기 섭취에 의해서 현저하게 억제되었으나 合歡皮추출물의 병용 투여로 정상수준 가깝게 증가됨을 관찰할 수 있었으며, nitrite 함량도 알코올 장기 섭취에 의해서 감소되었으나 合歡皮추출물의 병용 투여로 인해서 정상수준 가깝게 증가되었다.
- 合歡皮추출물은 흰쥐 음경해면체의 nitric oxide synthase 활성과 nitrite 함량을 유의성 있게 증가시켰으며 과산화지질 함량을 유의성 있게 감소시켰다. 흰쥐에 30일간 25% ethanol을 섭취시켰을 때 음경해면체조직 중의 과산화지질 함량이 증가되고 nitric oxide synthase 활성과 nitrite 함량이 현저하게 감소되었으나 合歡皮추출물 병용 투여에 의해 정상 수준으로 회복되었다. 음경해면체 조직중의 이utathione 과 혈중의 testosterone 함량은 ethanol 투여에 의해 유의성 있게 저하되었으나 合歡皮추출물 병용투여에 의해 증가되었다.
후속연구
- 功 合歡皮추출물을 20일 동안 투여 한 흰쥐의 음경 조직중 과산화지질 함량을 관찰하였을 때 정상군에 비하여 현저하게 감소되었다. 이 결과는 合歡皮의 성분 중에 강한 항산화 작용을 나타내는 성분이 함유되어 있으며 이것이 지질의 과산화반응을 억제하여 조직 중의 과산화지질 생성을 감소시켜 음경조직 세포의 손상을 억제하여 성기능 저하를 예방할 수 있을 것으로생각되어진다.
- NOS 활성도 알코올 장기 섭취에 의해서 현저하게 억제되었으나 合歡皮추출물의 병용 투여로 정상수준 가깝게 증가됨을 관찰할 수 있었으며, nitrite 함량도 알코올 장기 섭취에 의해서 감소되었으나 合歡皮추출물의 병용 투여로 인해서 정상수준 가깝게 증가되었다. 이러한 성적으로 유추해 보건데 合歡皮추출물은 체내에서 항산화작용을 발휘하여 음경조직 세포의 손상을 경감시키고 또한 음경조직 중의 NOS 활성 및 nitrite 함량을 적절히 조절하여 발기부전 증상을 개선할 수 있을 것으로 생각된다.
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