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제안 방법
- 갈파래 추출물의 항균 및 항곰팡이에 대한 활성을 각각의 농도별로 최소억제농도 (minimal inhibitory concentration, MIC)를 측정하였다 (Table 1). 활성의 세기를 관찰하기 위 해 positive control (표준물질)로는 벌독 유래의 강력한 항 균활성 물질인 melittin을 사용하였다.
- 000xg, 10 min)를 행하였다. 그 상층액을 Microplate multi-detection (Synergy HT, Biotek, USA)을 이용하여 450nm에서 측정하 였다. 적혈구에 시료액이 포함되지 않는 것을 0% (A)로 하 고, 1.
- 본 연구에서는 갈파래 (Ulva lacmca)肖 두가지 종류의 유기용매 추출물을 사용하여 gram-positive bacteria와 gram negative bacteria^ 다양한 균주를 대상으로 항균 활성을 측정 하였고, 더불어 항산화 효과, 용혈작용 등의 생화학적 실험을 수행하였다.
- 표준 시료로는 a-tocopherol (500 卩M을 사용하 였다. 시료의 흡광도를 (As)로 표준 시료의 흡광도를 (Ao)로 하여 항산화 효과를 측정하였다.
- 용혈 활성을 측정하기 위해서 신선한 적혈구를 150 mM NaCl을 포함한 50 mM phosphate buffer (pH 7.4)로 세정하 여 최종 적혈구의 농도를 5% (v/v)가 되도록 조정하였다 (Park et al., 1996). 적혈구 용액과 연속적으로 희석한 시료 액을 넣어 37。(2에서 1시간 배양 후, 원심분리 (8.
- 적혈구 막에 대한 갈파래 추출물의 용혈 활성을 조사하기 위하여 인간의 적혈구를 사용하여 조사하였다 (Table 2). 두 추출물 모두 200 卩g/mL의 농도에서는 90% 이상의 강력한 용혈활성을 보였고, 100昭/mL 이 농도에서는 약 70%, 50 卩g/mL의 농도에서 68%의 용혈활성을 나타내었다.
- 그 상층액을 Microplate multi-detection (Synergy HT, Biotek, USA)을 이용하여 450nm에서 측정하 였다. 적혈구에 시료액이 포함되지 않는 것을 0% (A)로 하 고, 1.0% Triton X-100을 넣었을 때의 흡광도를 100% (B) 로 정의하여, 시료액을 첨가했을 때 나타나는 상대적인 흡광 도 (C)로부터 용혈활성 %를 계산하였다. 표준 시료로는 강력 한 Mastoparan (Park et al.
- 갈파래 (Ulva lactuca)의 두 종류인 ethyl-ether과 ethyl acetate 주줄물을 가지고 radial diffusion methods. 항균활 성을 측정하였고, dear zone의 크기로 활성의 강도를 비교 하였다 (Fig. 1). 그 결과를 보면 ethyl-ether 추출물보다는 ethyl-acetate 추출물의 활성이 E.
대상 데이터
- Tryptic soy broth (TSB)와 Lactose-Boullion (LB), potato dextrose agar (PDA) 및 muller-hinton broth (MHB)는 Merck사 (Darmstadt, Germany)에서 구입하여 실험 에 사용하였다. HPLC-grade의 water (H2O) 및 acetonitrile (CH3CN)은 TEDIA사 (Ohio, USA) 와 Merck사 (Darmstadt, Germany)에서 각각 구입하였고, trifluroacetic acid (TFA), melittin, low EEO agar, streptomycin, a-tocopherol 및 DPPH (1, 1 -diphenyl-2-picrylhydrazyl)^- Sigma사 (St. Louis, MO, USA)로부터 구입하였고, 그 이외의 모든 시약은 특급을 사용 하였다.
- Sep-Pak Cis cartridge는 Whteis사 (Milifbrd, MA, USA)에 서 구입하였다. Tryptic soy broth (TSB)와 Lactose-Boullion (LB), potato dextrose agar (PDA) 및 muller-hinton broth (MHB)는 Merck사 (Darmstadt, Germany)에서 구입하여 실험 에 사용하였다.
- Sep-Pak Cis cartridge는 Whteis사 (Milifbrd, MA, USA)에 서 구입하였다. Tryptic soy broth (TSB)와 Lactose-Boullion (LB), potato dextrose agar (PDA) 및 muller-hinton broth (MHB)는 Merck사 (Darmstadt, Germany)에서 구입하여 실험 에 사용하였다. HPLC-grade의 water (H2O) 및 acetonitrile (CH3CN)은 TEDIA사 (Ohio, USA) 와 Merck사 (Darmstadt, Germany)에서 각각 구입하였고, trifluroacetic acid (TFA), melittin, low EEO agar, streptomycin, a-tocopherol 및 DPPH (1, 1 -diphenyl-2-picrylhydrazyl)^- Sigma사 (St.
- 갈파래 추출물의 최소저해농도를 조사하기 위해 gram positive bacteria로서 Bacillus subtilis PM125, Micrococcus luteus KCTC 1056 및 Staphylococcus aureus KCTC 1916 등을 사용하였고, gram-negative bacteria로는 Escherichia coli KCTC 1184, Enterobacter aerogenes KCTC 2190, Klebsiella pneumoniae KCTC 2208, Pseudomonas aeruginosa KCTC 2004 및 Salmonella typhimurium KCTC「1925를 사용하였으며, 어병 세균으로는 Vibrio parahaemolyticus KCTC 24기과 Edward tarda NUF251 을 사용하였다.
- 본 연구에 사용된 갈파래 (Ulva lactuca)^: 2005년 12월 에 부산 소재의 민락동 수변공원에서 수집하여 실험에 사용 하였다 시료는 ethyl-ether (Merk, Darmstadt, Germany)와 ethyl-acetate (Merk, Darmstadt, Germany)에 주줄하여 동 결 건조하여 사용하였으며 실험에 사용하기 전까지는 -70。。 에 보관하였다.
- 이들은 3UC에서 48시간동안 배양한 후 Microplate multi-detection (Synergy HT, Biotek, USA)을 이용하여 630nm에서 측정하였다. 표 준시료로서 벌독 유래의 항균활성 펩타이드인 melittirr을 사 용하였다.
- 0 mL 되도록 EtOH를 첨가하셔 실온 에서 30분간 반응 시킨 후, spectrophotometer 517nm에서 측정한다. 표준 시료로는 a-tocopherol (500 卩M을 사용하 였다. 시료의 흡광도를 (As)로 표준 시료의 흡광도를 (Ao)로 하여 항산화 효과를 측정하였다.
- 0% Triton X-100을 넣었을 때의 흡광도를 100% (B) 로 정의하여, 시료액을 첨가했을 때 나타나는 상대적인 흡광 도 (C)로부터 용혈활성 %를 계산하였다. 표준 시료로는 강력 한 Mastoparan (Park et al., 1996)이라는 물질을 사용하였다.
- 갈파래 추출물의 항균 및 항곰팡이에 대한 활성을 각각의 농도별로 최소억제농도 (minimal inhibitory concentration, MIC)를 측정하였다 (Table 1). 활성의 세기를 관찰하기 위 해 positive control (표준물질)로는 벌독 유래의 강력한 항 균활성 물질인 melittin을 사용하였다. 먼저 ethyl-ether 주출 물을 살펴보면 gram-positive bacteria인 B.
이론/모형
- Free radical scavenging activity를 측정하기 위하여 1, 1- diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) 방법을 사용하였다 (Kitagaki et aL, 1999, Koleva et al., 2002). DPPH method는 다 음과 같다.
- 각 추출 분획에 대한 항균활성의 측정은 Radial diflusion assay법을 이용하여 E. coli D31 와 B. subtilis PM125에 대한 성장 억제를 관찰하였고 활성 측정법은 다음과'”같다 (Lehrer et al., 1991). E.
- 갈파래 추출물의 항산화 효과를 조사하기 위하여 1, 1- diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) 방법을 이용하여 라디칼 소거능력을 조사하였다 (Fig. 2). Fig.
- 항곰팡이의 활성 측정은 liquid growth assay method로 측정하였다 (Gibson et al., 1991). Candida albicans KCTC 1940는 potato dextrose broth (PDB) 배지를 사용하여 30°C 에서 48시간 배양하였다.
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