• 나타났다. PCR을 이용한 방법은 Escherichia coh ATCC43888 (vtf)를 제외한 6균주(vtx")에서 200~300 bp사이에 뚜렷한 밴드를 확인할 수 있었다(Fig. 2). ELISA방법의 경우 O.
• 이 중 22건의 시료에서 200-300 bp 사이의 뚜렷한 밴드가 확인되었다. 22건 중 EMB- Agar, Vitek 및 API 로 14건, 30주의 A coli를 확정 분리하였으며 5.4%의 분리율을 보였다.
• 비교된 GLISA, PCR 그리고 ELISA 검사법들 중 PCR 방법을 이용하였을 때 그 감도(sensitivity)가 가장 높게 나타났고, PCR 방법을 이용하여 경인지역에 유통 중인 분쇄육 257건에 대하여 베로독소 생성 대장균(VTEC)을 확인하였다. 257건의 분쇄육중 14건에서 베로독소 생성 대장균(VTEC)을 확인할 수 있었고 30 주를 분리하였다. 14건의 분쇄육에서 분리된 30주의 월별 분포를 보면 5월에는 총 29건 중 1건, 6월에는 총 67건 중 9건이, 7월에 는 72건 중 2건, 8월 66건 중 1건 및 9월에는 25건 중 I건에서 각각 분리되었다.
• 7%의 분리율을 보였으며 4주의 VTEC를 분리하였다. 66건을 확인한 8월에는 1건을 확인하였으며 2주의 VTEC를 분리하였으며 9월에는 25건의 시료를 확인해 본 결과 재래시장에서 1건이 확인되어 4%의 분리율을 보였으며 3주의 VTEC를 분리하였다(Fig. 6). 총 14건 중 수입산이 10건, 20주가 분리되었으며 국내산 분쇄육은 4건에서 VTEC가 10주 분리되었으며 6월에 3건, 8월에 I건이 확인되었다.
• 3333px;">5 CFU/g이하로 확인되었다. 97건이 10⁵-10⁶ CFU/g으로 확인되었으며, 28건은 10⁷-5×10⁷ CFU/g의 세균수가 확인되었다(Fig. 4). 대장균의 경우 >10⁴ MPN/g 으로 나타난 시료가 91건, <10 MPN/g으로 나타난 시료는 45건으로 확인되었다(Fig.
• Boiling과 Qiagen kit를 이용한 template 제조 전처리를 검토한 PCR 방법은 접종시료 A와 B의 PCR 결과 두 가지 전처리 방법에서 200-300 bp 사이 뚜렷한 밴드가 확인되었다. Qiagen kit의 비용을 고려하여 PCR방법의 template 제조는 mEC broth에서 41.
• mEC broth에서 4IS, C에서 6시간 증균 후 Carbadox에 처리하는 방법과 18시간 증균 한 후 polymyxin 처리하는 증균 방법을 비교 검토한 ELISA 의 O.D 판독 결과 접종 균량이 <10CFU/ 25g인 식육검체를 이용하였올 때 판독을 위한 배양액의 O.D.값의 뚜렷한 차이를 나타났다. Carbadox를 처리하는 방법에서 위음성의 결과를 보였다.
• 표준균주 배양액의 mix(Esc/ier- ichia coli ATCC 43889, 43890, 43894)의 접종균량이 5 CFU/25 g 일 때 PCR, ELISA 및 GLISA에서 양성의 결과를 확인할 수 있었으며 EMB-agai에서도 녹색금속성광택의 집락을 확인할 수 있었다. 그러나 접종 균량이 0.5 CFU/25 g 일때는 PCR, EL1SA 및 GLISA 모두에서 양성의 결과를 확인할 수 없었으나 EMB-agar 에서 녹색금속성광택이 확인되었다. Sample 9(분리균주 #3 접종) 의 경우 접종 균량이 3 CFU/25 g일때 PCR 빙.
• 대조군으로 비접종 식육의 오염도를 확인결과 세균수 5.2×10⁵ CFU/g, 대 장균군 3.7×10³ CFU/g 및 대장균 <10 CFU/g으로 나타났으며 대장균의 경우 정량분석은 불가능했으나, EC에서 가스 발생 및 indole test에서 양성의 결과를 나타내었다. 표준균주(Escherichia coli ATCC 43889, 43890, 43894)를 혼합·배양한 액, 접종 균량이 각각 50CFU/25g, 6CFU/25g인 시료를 사용하였다.
• 분리된 30주중 16주는 O serotyping이 불가능했으며 05 type 8주 그 외에 015, 0108, 046, 0110 및 0103 type이 각각 확인되었다. 그 중 05, 0103, 046 type 이 장출혈성대장균으로 분류(13)되며 10주가 분리확인 되었다.
• 14건의 분쇄육에서 분리된 30주의 월별 분포를 보면 5월에는 총 29건 중 1건, 6월에는 총 67건 중 9건이, 7월에 는 72건 중 2건, 8월 66건 중 1건 및 9월에는 25건 중 I건에서 각각 분리되었다. 분리된 균주에 대하여 serotyping을 실시해 본 결과 병원성대장균으로 문제되고 있는 장출혈성대장균(EHEC)의 전형적인 혈청형인 026, 0111, 0157은 확인되지 않았다.
• 비교된 GLISA, PCR 그리고 ELISA 검사법들 중 PCR 방법을 이용하였을 때 그 감도(sensitivity)가 가장 높게 나타났고, PCR 방법을 이용하여 경인지역에 유통 중인 분쇄육 257건에 대하여 베로독소 생성 대장균(VTEC)을 확인하였다. 257건의 분쇄육중 14건에서 베로독소 생성 대장균(VTEC)을 확인할 수 있었고 30 주를 분리하였다.
• 표준균주(Escherichia coli ATCC 43889, 43890, 43894)를 혼합·배양한 액, 접종 균량이 각각 50CFU/25g, 6CFU/25g인 시료를 사용하였다. 비접종 대조군 시료(control)은 세가지 방법에서 모두 음성으로 확인되었다. 접종시료에 대하여 GL1SA를 이용하여 검토해 본 결과, 제조사에서 권장하는 mEC broth에서 41.
• Petrifilm을 사용하여 세균수를 측정하였으며 MPN 방법으로 대장균량을 확인하였다. 세균수가 5×i0, CFU/g 이상 측정되어 오염도가 높게 나타난 것이 9건이며 이 중 8건은 TNTC(too numerous to counting)으로 조사되었으며, 61건이 10⁵ CFU/g이하로 확인되었다. 97건이 10⁵-10⁶ CFU/g으로 확인되었으며, 28건은 10⁷-5×10⁷ CFU/g의 세균수가 확인되었다(Fig.
• 대조군(비접종) 시료에서의 VTEC 존재유무를 확인하기 위하여 오염도 조사를 실시하였다. 식육의 총 생균수 5.0 X 105 CFU/g, 대장균군 2.9 X 10, CFU/g, 대 장균 15 MPN l00mL으로 확인되었으며, VTECe 검출되지 않았다.
• 법으로만 양성의 결과를 확인할 수 있었는데 EMB agar에서 녹색금속성 광택이 확인되지 않아 위 양^ 결과에 대한 확인실험이 요구되어졌다(Table 4). 위와 같은 실험의 반복으로 식육에 대한 VTEC 검출방법으로 PCR이 가장 적합한 것으로 나타났다. 그러나 Katherine 등(12)의 보고에 의하면 식육에 대한 VTEC 검출방법을 ELISA 방법의 sensitivity가 가장 높게 나타났다, 또한 식육을 제외한 사과쥬스, 우유 등 다른 식품에 대한 VTEC 검출방법은 PCR을 이용한 방법의 sensitivity가 높게 나타났다.
• 비접종 대조군 시료(control)은 세가지 방법에서 모두 음성으로 확인되었다. 접종시료에 대하여 GL1SA를 이용하여 검토해 본 결과, 제조사에서 권장하는 mEC broth에서 41.5℃, 6시간 증균하고, CAYE broth(with carbadox)에서 18시간 2차 증균하는 방법은 식육의 검체에 접종 균량이 <I0CFU/25g인 경우 판독이 어려웠으며 반복실험 결과 우](ftilse)음성의 결과가 나타났다. mEC broth에서 18시간 증균하고, CAYE brothfwith carbadox)에서 6시간 증균한 것과 2차증균 없이 바로 polymyxin 처리하는 방법에서는 큰차이가 나타나지 않았다.
• 6). 총 14건 중 수입산이 10건, 20주가 분리되었으며 국내산 분쇄육은 4건에서 VTEC가 10주 분리되었으며 6월에 3건, 8월에 I건이 확인되었다.
• 표준균주 및 분리균주 배양액을 이용하여 GLISA 방법을 검토한 결과 표준균주의 경우 독소 typing 정보에 부합된 결과가 나왔으나 분리균주 #3는 독소 type 정보에 따르면 vtx2를 생성하였으나 GLISA로 확인해 본 결과 독소형 vtxl&2에서 모두 양성의 결과가 나타났다. PCR을 이용한 방법은 Escherichia coh ATCC43888 (vtf)를 제외한 6균주(vtx")에서 200~300 bp사이에 뚜렷한 밴드를 확인할 수 있었다(Fig.
• 따라서 접종량의 제조를 다시 수행하여 일련의 실험을 다시 반복하였으며 그 결과를 Table 4에 나타내었다. 표준균주 배양액의 mix(Esc/ier- ichia coli ATCC 43889, 43890, 43894)의 접종균량이 5 CFU/25 g 일 때 PCR, ELISA 및 GLISA에서 양성의 결과를 확인할 수 있었으며 EMB-agai에서도 녹색금속성광택의 집락을 확인할 수 있었다. 그러나 접종 균량이 0.
• 표준균주 혼합액의 접종 균량이 6CFU/25g인 시료를 PCR, EL1SA 및 GLISA 각 방법으로 검출한계를 확인한 결과 세 가지 방법에서 모두 양성을 나타내었다. VTEC 접종 균량이 3CFU/ 25 g인 경우, PCR에서만 약한 양성을 나타냈고, ELISA와 GLISA 에서는 음성의 결괴를 나타내었다.

후속연구

• 그 중 05, 0103, 046 type 이 장출혈성대장균으로 분류(13)되며 10주가 분리확인 되었다. 그러나 본 연구에서는 발생빈도가 높은 것으로 보고(8)된 026, 0111, 0157 혈청형 등은 발견되지 않았으나 식육의 취급자 및 소비자에 대한 위생 교육의 필요성이 요구되어지며 앞으로 대상 시료의 다양화 및 오 염인자 분석으로 장출혈성대장균의 발생빈도에 영향을 미치는 위 험요소에 관한 추가적인 연구가 요구되어 진다.
• Sample 9(분리균주 #3 접종) 의 경우 접종 균량이 3 CFU/25 g일때 PCR 빙.법으로만 양성의 결과를 확인할 수 있었는데 EMB agar에서 녹색금속성 광택이 확인되지 않아 위 양^ 결과에 대한 확인실험이 요구되어졌다(Table 4). 위와 같은 실험의 반복으로 식육에 대한 VTEC 검출방법으로 PCR이 가장 적합한 것으로 나타났다.