균주보존기관에서 분양받은 버섯 원균은 선발된 한천배지 시험관에 배양한 다음 $4{\sim}10^{\circ}C$ 정도에서 간이보존하면서 일정기간 마다 계대배양하여 이용하고 있다 이때 일부 버섯균은 균사체 재생이 지연되어 어려움을 겪는 경우가 있다. 본 시험은 왕송이버섯(Tricholoma giganteum)균의 간이보존 방법을 구명하기 위하여 저장온도(4, 15, $25^{\circ}C$), 용기종류(시험관, 바이알), 저장기간(배양직후, 1, 2, 3, 6, 12개월)을 달리한 후 균사절편(코르크보러, 직경 8 mm)을 한천배지상에 옮겨 $30^{\circ}C$에서 7일간 배양하고 균사직경을 비교하였다. 왕송이버섯균은 저장온도 $4^{\circ}C$에서 한천배지에 $1{\sim}12$개월간 저장시는 모두 균사생장이 안되었으나, 톱밥배지에 저장 2개월까지는 균사생장이 양호하였고, 6개월 이후에는 재생이 안 되었다. 저장온도 $15^{\circ}C$에서는 한천배지의 용기종류, 톱밥배지 공히 6개월 저장까지는 균사생장이 되었으나 12개월에는 조금 낮아지는 경향이었다. 이에 비하여 느타리버섯(춘추2호)은 $4^{\circ}C$ 및 $15^{\circ}C$에서 6개월까지 배지종류에 상관하지 않고 균사생장이 잘 되었으며 12개월에는 조금 낮아지는 경향이었다. 따라서 왕송이버섯균은 저장온도에 민감하게 반응하는 것으로 판단되며, $15^{\circ}C$에서 저장하면서 6개월 이내에 계대 배양하는 것이 바람직하다고 생각된다.
균주보존기관에서 분양받은 버섯 원균은 선발된 한천배지 시험관에 배양한 다음 $4{\sim}10^{\circ}C$ 정도에서 간이보존하면서 일정기간 마다 계대배양하여 이용하고 있다 이때 일부 버섯균은 균사체 재생이 지연되어 어려움을 겪는 경우가 있다. 본 시험은 왕송이버섯(Tricholoma giganteum)균의 간이보존 방법을 구명하기 위하여 저장온도(4, 15, $25^{\circ}C$), 용기종류(시험관, 바이알), 저장기간(배양직후, 1, 2, 3, 6, 12개월)을 달리한 후 균사절편(코르크보러, 직경 8 mm)을 한천배지상에 옮겨 $30^{\circ}C$에서 7일간 배양하고 균사직경을 비교하였다. 왕송이버섯균은 저장온도 $4^{\circ}C$에서 한천배지에 $1{\sim}12$개월간 저장시는 모두 균사생장이 안되었으나, 톱밥배지에 저장 2개월까지는 균사생장이 양호하였고, 6개월 이후에는 재생이 안 되었다. 저장온도 $15^{\circ}C$에서는 한천배지의 용기종류, 톱밥배지 공히 6개월 저장까지는 균사생장이 되었으나 12개월에는 조금 낮아지는 경향이었다. 이에 비하여 느타리버섯(춘추2호)은 $4^{\circ}C$ 및 $15^{\circ}C$에서 6개월까지 배지종류에 상관하지 않고 균사생장이 잘 되었으며 12개월에는 조금 낮아지는 경향이었다. 따라서 왕송이버섯균은 저장온도에 민감하게 반응하는 것으로 판단되며, $15^{\circ}C$에서 저장하면서 6개월 이내에 계대 배양하는 것이 바람직하다고 생각된다.
In some cases, the problem with the mycelium of Tricholoma giganteum is delayed mycelial growth or non-regeneration. Therefore, this study was conducted to understand the mycelial storage condition of T. giganteum and to investigate the regeneration ratio of mycelial growth. T. giganteum obtained fr...
In some cases, the problem with the mycelium of Tricholoma giganteum is delayed mycelial growth or non-regeneration. Therefore, this study was conducted to understand the mycelial storage condition of T. giganteum and to investigate the regeneration ratio of mycelial growth. T. giganteum obtained from KACC in RDA was evaluated for its simple preservation at $10^{\circ}C$ and subcultured on different media. Mycelium of T. giganteum was cultured on the PBA (potato bamboo extract medium) for seven days at $30^{\circ}C$. Using simple preservation method, the mycelium of T. giganteum (MKACC 50852) and Pleurotus ostreatus (Chunchu No. 2) were stored on six different media in two kinds of storage vessels (tube and vial) for a period of 1-12 months at $4^{\circ}C,\;15^{\circ}C$, and $25^{\circ}C$ storage temperatures. At $4^{\circ}C$ storage condition, mycelial regeneration was failed in all agar media, but was successful in the sawdust medium for 3 months. At $15^{\circ}C$ storage, mycelial activity was maintained up to six months. On the other hand, P. ostreatus produced well-regenerated mycelia both at $4^{\circ}C$ and $15^{\circ}C$ storage up to 12 months. In conclusion, it is estimated that the mycelia storage condition of T. giganteum must be done at $15^{\circ}C$ and subcultured within six months.
In some cases, the problem with the mycelium of Tricholoma giganteum is delayed mycelial growth or non-regeneration. Therefore, this study was conducted to understand the mycelial storage condition of T. giganteum and to investigate the regeneration ratio of mycelial growth. T. giganteum obtained from KACC in RDA was evaluated for its simple preservation at $10^{\circ}C$ and subcultured on different media. Mycelium of T. giganteum was cultured on the PBA (potato bamboo extract medium) for seven days at $30^{\circ}C$. Using simple preservation method, the mycelium of T. giganteum (MKACC 50852) and Pleurotus ostreatus (Chunchu No. 2) were stored on six different media in two kinds of storage vessels (tube and vial) for a period of 1-12 months at $4^{\circ}C,\;15^{\circ}C$, and $25^{\circ}C$ storage temperatures. At $4^{\circ}C$ storage condition, mycelial regeneration was failed in all agar media, but was successful in the sawdust medium for 3 months. At $15^{\circ}C$ storage, mycelial activity was maintained up to six months. On the other hand, P. ostreatus produced well-regenerated mycelia both at $4^{\circ}C$ and $15^{\circ}C$ storage up to 12 months. In conclusion, it is estimated that the mycelia storage condition of T. giganteum must be done at $15^{\circ}C$ and subcultured within six months.
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문제 정의
그러나 이 버섯의 대량생산 체계를 확립하기 위하여 2002년도부터 실험을 추진하던 중, 균주 증식이 지연되는 문제점을 발견하고 이 버섯균의 저장조건에 관한 실험을 실시하게 되었다.
본 시험은 왕송이버섯균의 간이보존 방법을 구명하기 위하여 저장온도, 저장기간, 저장용기를 달리하여 저장한 후 꺼내어, 균사절편을 한천배지상에 옮겨 배양하고 균사직경을 비교하였으며, 그 결과를 보고하고자 한다.
제안 방법
비교하였다. PBA 배지는 15 들이 바이알에 5 nil을 넣고 살균 후 사면으로 굳혀서 접종하였으며, 톱밥배지는 30들이 바이알에 207 정도의 용량에 채워지도록 다지고 살균하여 균을 접종하였다(Fig. 1). 왕송이버섯균은 저장온도 4℃에서 바이알을 사용한 PBA 배지에 저장시 1, 2, 3, 6, 12개월간 모두 균사생장이 되지 않았으나, 바이알의 톱밥 배지에 1~2개월 저장시에는 균사생장이 양호하였고, 3개월에는 균사생장이 지연되었으며 6개월 이후에는 재생이 되지 않았다.
각각의 용기에서 균배양이 완료된 후 저장온도 4℃, 15℃, 25℃에서, 저장기간은 1, 2, 3, 6, 12개월로 달리하였다. 각 저장기간이 완료되는 시점을 맞추기 위하여 용기와 버섯 종류에 따른 균사생장기간과 저장기간을 역산하여 배지제조 및 균접종을 실시하였다. 즉 왕송이버섯 균은 시험관의 PBA 사면배지에서 균사생장이 15일 정도, 바이알 15, 들이에서 7일 정도 소요되며, 느타리 버섯균은 7일과 5일이 소요되므로 이를 역산하여 균을 접종하였다.
바이알 30들이에는 미송톱밥과 미강 20%(v/v) 을 혼합하여 수분함량을 65%로 조절한 후 용적 20 로 채워 넣고(용기 높이의 70% 정도) 121℃에서 30분간 살균하였다. 각각의 용기에서 균배양이 완료된 후 저장온도 4℃, 15℃, 25℃에서, 저장기간은 1, 2, 3, 6, 12개월로 달리하였다. 각 저장기간이 완료되는 시점을 맞추기 위하여 용기와 버섯 종류에 따른 균사생장기간과 저장기간을 역산하여 배지제조 및 균접종을 실시하였다.
그리고 바이알 들이의 톱밥배지에 왕송이버섯 균은 저장개시 20일 전, 느타리버섯균은 10일 전에 균을 접종하였다. 또한 저장기간도 12, 6, 3, 1개월 역순으로 처리하여, 저장 후 새로운 배지에 옮겼을 때 균사 생장직경을 같은 시점에서 비교할 수 있도록 하였다.
이때 일부 버섯균은 균사체 재생이 지연되어 어려움을 겪는 경우가 있다. 본 시험은 왕송이버섯(7/og giganteum) 균의 간이보존 방법을 구명하기 위하여 저장온도(4, 15, 25℃), 용기종류(시험관, 바이알), 저장기간(배양직후, 1, 2, 3, 6, 12개월)을 달리한 후 균사절편(코르크보러, 직경 8 mm)을 한천배지상에 옮겨 30℃에서 7일간 배양하고 균사직경을 비교하였다. 왕송이버섯균은 저장온도 4℃에서 한천배지에 1~12개월간 저장시는 모두 균사생장이 안되었으나, 톱밥배지에 저장 2개월까지는 균사생장이 양호하였고, 6개월 이후에는 재생이 안 되었다.
왕송이버섯균의 저장온도, 저장기간, 저장용기를 달리하여 처리하고 저장이 끝난 후 균사절편의 직경이 8 mm 가 되도록 코르크보러를 사용하여 직경이 87 mm인 샤레의 PBA 배지에 옮겨 30℃에서 15일간, 느타리버섯균은 25℃에서 7일간 PDA 배지에 배양하고 균사 생장직경을 비교하였다.
왕송이버섯균의 저장을 위하여 바이알 용기를 사용하여 균사 생장이 잘 되는 PBA 배지와 톱밥배지를 비교하였다. PBA 배지는 15 들이 바이알에 5 nil을 넣고 살균 후 사면으로 굳혀서 접종하였으며, 톱밥배지는 30들이 바이알에 207 정도의 용량에 채워지도록 다지고 살균하여 균을 접종하였다(Fig.
왕송이버섯균의 증식을 위해서 PBA 배지(potato bamboo extract agar; potato 200 g, bamboo sawdust 20 g, sugar 10 g, malt extract 7 g, peptone 1 g, KH2PO4 1 g, MgSO4 0.5 g, agar 20 g, DW 1, 000 ml: Cheong et al., 2000)를이용하여 30℃에서 15일간 petri-dish에 배양하여 사용하였다. 느타리버섯은 PDA 배지(potato dextrose agar < Difco-213400>39g, DW 1, 000 m* Z) 이용하여 25℃에서 7일간 배양하여 사용하였다.
각 저장기간이 완료되는 시점을 맞추기 위하여 용기와 버섯 종류에 따른 균사생장기간과 저장기간을 역산하여 배지제조 및 균접종을 실시하였다. 즉 왕송이버섯 균은 시험관의 PBA 사면배지에서 균사생장이 15일 정도, 바이알 15, 들이에서 7일 정도 소요되며, 느타리 버섯균은 7일과 5일이 소요되므로 이를 역산하여 균을 접종하였다. 그리고 바이알 들이의 톱밥배지에 왕송이버섯 균은 저장개시 20일 전, 느타리버섯균은 10일 전에 균을 접종하였다.
대상 데이터
느타리버섯은 PDA 배지(potato dextrose agar 39g, DW 1, 000 m* Z) 이용하여 25℃에서 7일간 배양하여 사용하였다.
갓 표면의 색은 옅은 황색에서 성장하면서 옅은갈색~연분홍색을 띤다. 대의 크기는 160~450X 15~41 mm로 원통형이며 하부 쪽이 굵고, 대 표면의 색은 백색~갓보다 옅은 색을 띤다. 그리고 어린 버섯일 때는 아린 맛이 있으므로 성숙한 버섯을 식용으로 한다(김 둥, 2004).
본 시험에 사용한 균주는 농업과학기술원 응용 미생물 과에 보존 중인 왕송이버섯균(Tkic/Wowia giganteuni) 'MKACC 50852, 이며, 대조균주로는 느타리버섯( ostreatus) , 춘추2호, 를 사용하였다.
왕송이버섯균의 저장방법을 구명하기 위하여 균 배양 용기는 시험관(직경 18 mm, 길이 18 cm)과 바이알(15 와 30이) 2종을 사용하였다(Fig. 1). 시험관에는 PBA 배지(느타리는 PDA)를 10씩, 바이알 15들이에는 5씩 분주하여 121 ℃에서 20분간 살균한 후 사면으로 굳혔다.
성능/효과
저장온도 15℃에서는 PDA 배지에서 12월까지 균사생장이 되었으나 톱밥 배지는 6개월 이후 균이 재생하지 못하였다. 또한 저장온도 25℃에서는 PDA 배지에서 2개월 까지 균사생장이 되었고 3~6개월에는 현저하게 낮아졌으며 12개월이 경과하였을 때는 균이 재생하지 못하였다. 그리고 톱밥 배지에서는 1 개월까지 균사생장이 되었고 2개월 이후에는 균이 재생하지 못하였다.
그리고 톱밥 배지에서는 1 개월까지 균사생장이 되었고 2개월 이후에는 균이 재생하지 못하였다. 본 시험 결과를 종합하여 볼 때 왕송이버섯 균은 15~25℃, 느타리버섯균은 4~15℃ 범위에 3~6 개월간 저장시 균사생장이 되었으며 배지의 종류나 저장 용기에 따라서는 저장기간이 12개월까지 경과되어도 균사 생장이 되었다. 버섯균의 저장 원리는 주어진 용기 내의 기질을 근간으로 하여 균의 대사활동을 억제하면서도 장기간 활력을 유지하고자 하는 점을 감안할 때, 저장 가능한 온도범위 내에서 가급적 저온으로 관리하는 것이 장기간 보존에 유리할 것이다.
1). 왕송이버섯균은 저장온도 4℃에서 바이알을 사용한 PBA 배지에 저장시 1, 2, 3, 6, 12개월간 모두 균사생장이 되지 않았으나, 바이알의 톱밥 배지에 1~2개월 저장시에는 균사생장이 양호하였고, 3개월에는 균사생장이 지연되었으며 6개월 이후에는 재생이 되지 않았다. 저장온도 15℃에서는 PBA 배지, 톱밥배지 공히 6개월 저장까지는 균사생장이 되었으며 12개월에는 조금 낮아지는 경향이었다.
본 시험은 왕송이버섯(7/og giganteum) 균의 간이보존 방법을 구명하기 위하여 저장온도(4, 15, 25℃), 용기종류(시험관, 바이알), 저장기간(배양직후, 1, 2, 3, 6, 12개월)을 달리한 후 균사절편(코르크보러, 직경 8 mm)을 한천배지상에 옮겨 30℃에서 7일간 배양하고 균사직경을 비교하였다. 왕송이버섯균은 저장온도 4℃에서 한천배지에 1~12개월간 저장시는 모두 균사생장이 안되었으나, 톱밥배지에 저장 2개월까지는 균사생장이 양호하였고, 6개월 이후에는 재생이 안 되었다. 저장온도 15℃ 에서는 한천배지의 용기종류, 톱밥배지 공히 6개월 저장까지는 균사생장이 되었으나 12개월에는 조금 낮아지는 경향이었다.
저장온도 25℃에서 PBA 배지에서는 3개월 까지 균사생장이 되었으며 그 이후는 현저하게 낮아지고, 톱밥배지에서는 6개월까지 균사생장이 되었고 12개월 저장시에는 현저히 낮아지는 경향이었다. 이에 비하여 느타리버섯은 4℃에서 바이알 PDA 배지에 저장시 6개월까지는 균사생장이 되었고 12개월에는 현저히 낮아졌으며, 톱밥배지에서는 3개월까지 균사생장이 되었고 6 개월 이후에는 균이 재생하지 못하였다. 저장온도 15℃에서는 PDA 배지에서 12월까지 균사생장이 되었으나 톱밥 배지는 6개월 이후 균이 재생하지 못하였다.
저장온도 15℃에서는 PBA 배지, 톱밥배지 공히 6개월 저장까지는 균사생장이 되었으며 12개월에는 조금 낮아지는 경향이었다. 저장온도 25℃에서 PBA 배지에서는 3개월 까지 균사생장이 되었으며 그 이후는 현저하게 낮아지고, 톱밥배지에서는 6개월까지 균사생장이 되었고 12개월 저장시에는 현저히 낮아지는 경향이었다. 이에 비하여 느타리버섯은 4℃에서 바이알 PDA 배지에 저장시 6개월까지는 균사생장이 되었고 12개월에는 현저히 낮아졌으며, 톱밥배지에서는 3개월까지 균사생장이 되었고 6 개월 이후에는 균이 재생하지 못하였다.
저장온도 4℃, 15℃, 25℃에서 저장기간 1, 2, 3, 6, 12 개월까지의 저장이 끝난 후 직경 87 mm 샤레의 PBA 배지에 옮겨 30℃에서 15일간 배양하고 균사생장 직경을 조사한 결과(Fig. 2), 저장온도 4℃에서 1개월 이상 경과하였을 때 왕송이버섯균은 균사재생이 되지 않았다. 저장온도 15℃에서는 12개월이 경과한 경우에도 균사재생이 이루어졌으며, 25℃에서 6개월 까지는 저장이 가능하였으나 12개월이 경과하였을 때는 균사생장이 지연되는 경향이었다.
저장이 끝난 각각의 왕송이버섯균을 직경 87 mm 샤레의 PBA 배지에 옮겨 30℃에서 15일간 배양하고 균사 생장 직경을 조사한 결과(Fig. 2), 저장온도 4℃와 15℃에서는 시험관과 바이알 저장 간에 차이가 없었으나 25℃에서 시험관 저장은 6개월까지 균사생장이 되었으나 바이알 저장은 3개월까지만 균사생장이 되어 시험관 저장이 유리한 것으로 보였다. 이는 25℃에 저장시 균의 호흡에 의한 배지의 양분 요구량으로 인하여 배지 양이 5 인 바이알보다는 10 인 시험관의 배지용량 차이에 기인하는 것으로 생각된다.
Cheong, J. C., Kim, G P., Kim, H. K., Park, J. S. and Chung, B. K. 2000. Cultural characteristics of veiled lady mushroom, Dictyophora spp. Mycobiology 28: 165-170
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