포도나무 잎의 메탄올 추출물을 n-hexane, ethylacetate, n-butanol $H_2O$으로 순차적으로 용매분획 하였다. Ethylacetate 분획으로부터 silica gel chromatography와 재결정하여 활성물질을 분리 정제하였다. 이 화합물의 화학구조를 EI-MS의 조각 데이터를 근거로 분석한 결과 betulin으로 구조결정 되었다. 이 화합물이 고추 역병균(Phytophthora capsici), 고추 탄저병균(Colletotrichum acutatum)에 대한 항균활성(in vitro)을 측정한 결과, 100 ${\mu}g\;mL^{-1}$에서 각각 52.1%, 40.8%의 균사생육 억제효과를 보였으나, 잔디 마름병(Rhizoctonia solani) 균의 균사생육 억제 효과는 나타나지 않았다.
포도나무 잎의 메탄올 추출물을 n-hexane, ethylacetate, n-butanol $H_2O$으로 순차적으로 용매분획 하였다. Ethylacetate 분획으로부터 silica gel chromatography와 재결정하여 활성물질을 분리 정제하였다. 이 화합물의 화학구조를 EI-MS의 조각 데이터를 근거로 분석한 결과 betulin으로 구조결정 되었다. 이 화합물이 고추 역병균(Phytophthora capsici), 고추 탄저병균(Colletotrichum acutatum)에 대한 항균활성(in vitro)을 측정한 결과, 100 ${\mu}g\;mL^{-1}$에서 각각 52.1%, 40.8%의 균사생육 억제효과를 보였으나, 잔디 마름병(Rhizoctonia solani) 균의 균사생육 억제 효과는 나타나지 않았다.
Methanol extract obtained from aerial parts of Vitis vinifero L. was successively fractionated with n-hexane, ethylacetate, n-butanol, and water. From ethylacetate fraction, an active compound was isolated through silica gel column chromatography and recrystallization, and was identified as Lup-20(2...
Methanol extract obtained from aerial parts of Vitis vinifero L. was successively fractionated with n-hexane, ethylacetate, n-butanol, and water. From ethylacetate fraction, an active compound was isolated through silica gel column chromatography and recrystallization, and was identified as Lup-20(29)-ene-3,28-diol on the basis of EI-MS data. The compound, at 100 mg $mL^{-1}$, inhibited the mycelial growth of Phytophthora capsici and Colletotrichum acutatum by 52.1 % and 40.8%, respectively.
Methanol extract obtained from aerial parts of Vitis vinifero L. was successively fractionated with n-hexane, ethylacetate, n-butanol, and water. From ethylacetate fraction, an active compound was isolated through silica gel column chromatography and recrystallization, and was identified as Lup-20(29)-ene-3,28-diol on the basis of EI-MS data. The compound, at 100 mg $mL^{-1}$, inhibited the mycelial growth of Phytophthora capsici and Colletotrichum acutatum by 52.1 % and 40.8%, respectively.
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문제 정의
본 연구는 포도재배 과정에서 발생하는 잎과 어린 가지로부터 생리활성 물질을 분리하여 활용 방안을 제시하고자 MeOH 추출물을 대상으로 항진균 활성 검정을 실시하였다. 포도나무 잎과 어린가지를 포함 한지 상부의 NfeOH 추출물을 증류수 1,000 mL에 현탁 시켜 n-hexane, EtOAc, n-BuOH 용매로 용매 분획하여각 분획을 대상으로 in vitro test에 의한 고추역병과탄저병균의 균사생육 억제효과를 조사하였다.
본 연구에서는 포도재배 과정에서 발생하는 부산물인 하계전정 가지와 잎으로부터 항진균성 활성 물질을 구명하기 위하여 지상부를 methanolOVfeOH)로 추출하여 용매분획과 chromatography로 분리, 정제하여 활성 화합물을 얻었다.
제안 방법
사용하였다. Agilent AMDIS software의 NIST library 자료와 비교하여 동정하였다.
Column chromatogmphy의 분획을 고추 역병과 탄저병 균에 대하여 in vizro에서 균사의 생육억제 활성실험을 실시하여 활성물질의 분리.정제를 위한 지표로 탄저병균의 균사생육 억제효과를 분석한 결과, EtOAc fraction(fr.
Columne DB-5MS(5% phenyl 95% dimethyl arylene siloxane 30 m x 0.25 mm i.d., film thickness 0.25 pm) 를 사용하였고, Inlet 온도는 330℃, oven 온도는 120℃에서 5분간 머무른 후, 10℃ min-1으로 280℃ 후 10분간 머무른 후 10℃ min-1으로 300℃ 후 10분간 진행하였으며, 유량은 0.9 mL min-1(He 99.99995%)이고, MSD transfer line heater는 280℃ 10분간 훅, 10℃ min-1으로 300℃로 하였다.
03 g를 얻었다. MeOH 추출물을 증류수(1, 000 mL) 에 현탁시켜 n-hexane(l, 000 mL), ethyl acetate(EtOAc, 1,000 mL), n-butanol(BuOH, 1,000 mL) 을 사용하여 각각 3회씩 순차적으로 용매 분획하였다
그 결과 EtOAc 분획에서 강한 활성을 나타냈다. in vitro 균사생장 억제 실험의 결과를 지표로 하여 EtOAc 분획으로부터 시리카겔 크로마토그래피와 MeOH 재결정 과정으로 활성물질로 compound 1을 분리.정제하였다(그림.
1, 1, 5, 50 및 100 ug ml;'조절한 검정용 배지를 이용하였다. 각각의 병원균은 동일배지에서 5 일간 전배양하여 이용하였으며, 균총의 가장자리로부터 직경 5 mm의 agar 절편을 취하여 검정 배지의 중앙에 접종하였다. 접종된 배지는 고추 역병균과 잔디 라이족토니아 마름 병균 25℃와 탄저병균 27℃에서 5일간 배양 후 대조구 대비 균총의 길이를 측정하여 균사 생육 억제효과를 검정하였다.
검정농도는 KX) pg ml?로 조절하여 측정하였다 최종 분리된 물질의 항진균 활성은 배지 내 최종농도가 0.01, 0.1, 1, 5, 50 및 100 ug ml;'조절한 검정용 배지를 이용하였다. 각각의 병원균은 동일배지에서 5 일간 전배양하여 이용하였으며, 균총의 가장자리로부터 직경 5 mm의 agar 절편을 취하여 검정 배지의 중앙에 접종하였다.
이 화합물에 대하여 MS 분석 기법을 이용하여 화학적 구조를 결정하였고 고추역병, 탄저병 및 잔디 라이족토니아 마름병균의 균사생육 억제효과를 검토하였다.
각각의 병원균은 동일배지에서 5 일간 전배양하여 이용하였으며, 균총의 가장자리로부터 직경 5 mm의 agar 절편을 취하여 검정 배지의 중앙에 접종하였다. 접종된 배지는 고추 역병균과 잔디 라이족토니아 마름 병균 25℃와 탄저병균 27℃에서 5일간 배양 후 대조구 대비 균총의 길이를 측정하여 균사 생육 억제효과를 검정하였다.
실시하였다. 포도나무 잎과 어린가지를 포함 한지 상부의 NfeOH 추출물을 증류수 1,000 mL에 현탁 시켜 n-hexane, EtOAc, n-BuOH 용매로 용매 분획하여각 분획을 대상으로 in vitro test에 의한 고추역병과탄저병균의 균사생육 억제효과를 조사하였다. 그 결과 EtOAc 분획에서 강한 활성을 나타냈다.
대상 데이터
GC 는 Agilent 6890N을 사용하였으며, EI/MS 는 agilent 5973N mass selective detector를 사용하였다. Agilent AMDIS software의 NIST library 자료와 비교하여 동정하였다.
본 연구에 사용된 포도나무 (품종 : 켐벨) 잎과 어린 가지는 2006년 7월과 8월 사이 경북 상주시 모 서와 모동면 일원의 과원으로부터 채집하였으며 -40℃ 초저온 냉동고에 보관하며 실험에 사용하였다.
성능/효과
포도나무 잎과 어린가지를 포함 한지 상부의 NfeOH 추출물을 증류수 1,000 mL에 현탁 시켜 n-hexane, EtOAc, n-BuOH 용매로 용매 분획하여각 분획을 대상으로 in vitro test에 의한 고추역병과탄저병균의 균사생육 억제효과를 조사하였다. 그 결과 EtOAc 분획에서 강한 활성을 나타냈다. in vitro 균사생장 억제 실험의 결과를 지표로 하여 EtOAc 분획으로부터 시리카겔 크로마토그래피와 MeOH 재결정 과정으로 활성물질로 compound 1을 분리.
본 연구를 조사된 betulin의 기존 보고와 다른 항균활성은 본 시험에 공시한 균주의 감수성과 생물 검정법의 차이로 생각된다. 또한 고추 탄저병에 대한 균사생육 억제효과는 동일농도에서 29%로 나타났다(그림 4). 그러나 동일농도에서 잔디 라이족토니아 마름병균의 균사생육 억제 효과는 나타나지 않았다(그림 4).
실시하여 활성물질의 분리.정제를 위한 지표로 탄저병균의 균사생육 억제효과를 분석한 결과, EtOAc fraction(fr.) 에서 강한 활성을 나타내었다. EtOAc fr.
후속연구
Kiprono (2000) 등은 Senecio lymtiis으로부터 분리한 betulin과 동일계열 물질인 P~sitostgl는 50 mg mL1 농도에서 Fusarium molniliforme의 포자 발아관 신장을 82% 억제함을 보고하였다. 앞으로 분리된 betulin의 역병과 탄저병균의 포자형성 및 발아 등의 다양한 생활사에 미치는 영향과 성체를 이용한 실험이 필요 할 것으로 생각된다.
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