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문제 정의
- 그러므로 본 연구에서는 뽕잎의 지질대사 개선효과를 입증하고자, 고콜레스테롤 식이를 공급한 쥐에게 뽕잎 추출물을 식수로 공급한 후 혈액, 간장, 부고환 지방 및 분변에서의 지질 함량 측정 및 간 조직의 UDP-glucuronyl transferase와 부고환지방조직의 lipoprotein lipase 활성 측정을 통하여 지질대사 개선 효과를 검토하였다.
제안 방법
- 간 조직의 지질은 Folch 등(26)의 방법에 따라 추출하였고, 간조직의 총콜레스테롤 및 중성지방 함량은 Sale 등(27)에의해 변형된 방법을 이용하였다. Folch 등(26)의 방법에 따라 간조직 0.
- 결과는 Table 5와 같다. 본 실험은 총 4주간의 실험기간 동안 1주, 2주, 4주째 분변으로 실험을 행하였다. 총지질 함량은 1주째에 N 군(62.
- 효소 활성을 위한 기질은 triolein(600 mg)에 lecithin(in chloroform) 36 mg과 glycerol 10 mL를 가하여 균질화시켜 제조하였다. 제조된 기질과 apolipoprotein C-II 기질을 위한 horse serum을 preincubation 한한 후 20% albumin sol-ution(pH 8.1)과 0.7 M Tris-HCl buffer(pH 8.1), 증류수를 섞어 assay mixture를 만들었다. 효소 반응은 assay mixture 1 mL와 효소원 0.
- 재배한 것으로 2003년 5월 말부터 6월 중순까지 채취한 것을 사용하였다. 채취한 뽕잎은 생잎을 채취하여 수세한 후 동결건조하였으며 뽕잎 167.5 kg을 5.5 ton의 정제수로 65℃에서 4시간 동안 추출농도 5°Brix로 추출하여 여과한 후 65℃에서 6시간 동안 추출농도 52°Brix로 농축하여 수율 65%, 추출농도 36°Brix의 농축액 110 祯을 제조하여 본 실험에 엑기스제조용 원료로 사용하였다.
- 32%(HCH 군) 뽕잎추출물 공급 군 등으로 나누어 4주간 사육하였다 (Table 1). 체중은 실험 기간 동안 3일에 한 번씩 측정하였고 식이 섭취량은 전 실험 기간 동안 매일 일정시간에 측정하였다. 사육실의 온도는 22±3℃, 습도는 50±10%로 조절하였다.
- , Seoul, Korea)에서 구입하여 실험에 사용하였다. 환경에 적응시키기 위해 일주일간 예비사육 후 난괴 법에 의해 크게 정상군과 고콜레스테롤군으로 구분하였고, 정상군은 정 상식 이 군(N 군)과 정상식이에 뽕잎 추출물 0.16% 공급한 군(NM군)으로나누었으며 , 고콜레스테롤 군은 1% 고콜레스테롤 식 이군 (HC군)과 1% 고콜레스테롤 식이에 뽕잎추출물 공급수준에 따라 각각 0.08%(HCL군), 0.16%(HCM군)및 0.32%(HCH 군) 뽕잎추출물 공급 군 등으로 나누어 4주간 사육하였다 (Table 1). 체중은 실험 기간 동안 3일에 한 번씩 측정하였고 식이 섭취량은 전 실험 기간 동안 매일 일정시간에 측정하였다.
대상 데이터
- 본 실험에 사용한 YK-209 뽕잎은 영천 양잠농협 협동 조합에서 재배한 것으로 2003년 5월 말부터 6월 중순까지 채취한 것을 사용하였다. 채취한 뽕잎은 생잎을 채취하여 수세한 후 동결건조하였으며 뽕잎 167.
- 실험동물은 체중 100 + 10 g 내외의 Sprague-Dawley종수컷을 (주바이 오 제노믹스사(Biogenomics, Inc., Seoul, Korea)에서 구입하여 실험에 사용하였다. 환경에 적응시키기 위해 일주일간 예비사육 후 난괴 법에 의해 크게 정상군과 고콜레스테롤군으로 구분하였고, 정상군은 정 상식 이 군(N 군)과 정상식이에 뽕잎 추출물 0.
- LPL 활성은 Parkin 등(29)에의 해 수정된 Riley와 Robinson 법 (30) 에 의해 측정되었다. 효소 활성을 위한 기질은 triolein(600 mg)에 lecithin(in chloroform) 36 mg과 glycerol 10 mL를 가하여 균질화시켜 제조하였다. 제조된 기질과 apolipoprotein C-II 기질을 위한 horse serum을 preincubation 한한 후 20% albumin sol-ution(pH 8.
데이터처리
- 모든 실험 결과에 대한 통계처리는 각 실험군 별로 표준 차이가 있는가를 검증하기 위해 분산분석을 수행하였으며 분산 분석(ANOVA 검증) 결과 유의성이 발견된 경우 군 간의 유의도는 Tukey's HSD test에 의해 분석하였다.
이론/모형
- 변형된 방법을 이용하였다. Folch 등(26)의 방법에 따라 간조직 0.5 g을 취한 후 5 mL chloroform:methanol(2: 1) 용액으로 균질화하여 조직 지질을 추출하였으며, 동량의 추출용매로 3번 추출하였다. 추출액은 여과지 WhatmanCNo.
- , Korea)을 사용하여 500 nm에서 흡광도를 측정하여 혈청 콜레스테롤 농도를 계산하였다. HDL-콜레스테롤 측정을 위하여 2% dextron sulfate와 1 M MgCh 침전액(1:1)을 가하여 그 상층액을 시료로 표준효소법에 의한 kit(Asan Co., Korea)을 사용하여 500 nm에서 흡광도를 측정하였다. LDL-콜레스테롤은 Friedewald 식 (23){Total cholesterol — (HDL cholesterol + TG/5)}에 의하여 계산하고, atherogenic index는 (Total cholesterol — (HDL cholesterol)/HDL cholesterol} 식 (24)으로 산출하였다.
- , Korea)을 사용하여 500 nm에서 흡광도를 측정하였다. LDL-콜레스테롤은 Friedewald 식 (23){Total cholesterol — (HDL cholesterol + TG/5)}에 의하여 계산하고, atherogenic index는 (Total cholesterol — (HDL cholesterol)/HDL cholesterol} 식 (24)으로 산출하였다.
- 부고환 지방 균질액은 4℃, 12, 000xg-에서 15분간 원심분리 후 상층 액을 취하여 LPL활성 측정을 위한 효소원으로 사용하였다. LPL 활성은 Parkin 등(29)에의 해 수정된 Riley와 Robinson 법 (30) 에 의해 측정되었다. 효소 활성을 위한 기질은 triolein(600 mg)에 lecithin(in chloroform) 36 mg과 glycerol 10 mL를 가하여 균질화시켜 제조하였다.
- 간 microsome에서 UDP-glucuronyl transferase 활성도는 Reinke 등(25)의 방법으로 측정하였다. 시험관에 working substrate용액 (0.
- 혈청 내 중성지방 측정은 표준 효소 비색법에 의한 kit (Asan Co., Korea)을 사용하여 550 nm에서 흡광도를 측정하여 혈청 중성지방 농도를 계산하였다. 혈청내 총 콜레스테롤 측정은 표준 효소 비색법에 의한 kit(Asan Co.
- , Korea)을 사용하여 550 nm에서 흡광도를 측정하여 혈청 중성지방 농도를 계산하였다. 혈청내 총 콜레스테롤 측정은 표준 효소 비색법에 의한 kit(Asan Co., Korea)을 사용하여 500 nm에서 흡광도를 측정하여 혈청 콜레스테롤 농도를 계산하였다. HDL-콜레스테롤 측정을 위하여 2% dextron sulfate와 1 M MgCh 침전액(1:1)을 가하여 그 상층액을 시료로 표준효소법에 의한 kit(Asan Co.
- 1), 증류수를 섞어 assay mixture를 만들었다. 효소 반응은 assay mixture 1 mL와 효소원 0.4 mL를 섞어 37℃에서 1시간동안 incubation시켜 수행하였고 이때 생성된 free fatty acids 양을 ACS-ACOD법을 이용한 효소시 약 kit(榮硏 Co, JapaQ으로 측정하였다. LPL활성 단위는 조직 g당 1시간 동안 방출된 pmole fatty acids로 표시하였다.
성능/효과
- 결과는 Table 4와 같다. 간 조직 중의 총지방 함량을 측정한 결과 N군(67.00±11.51)에 비해 HC군(256.25±13.77)이 유의적 (p<0.05)으로 증가되었으나 HC 군에 비해 HCL, HCM 및 HCH군에서는 각각 197.14±26.12, 197.14±16.04 및 197.14±16.04로 유의적(p<0.05)으로 감소되었다. 간 조직의 중성지방 함량은 N 군 11.
- 05)으로 감소되었다. 동맥경화를 유도하는 물질인 LDL-콜레스테롤 함량은 N군(48.27±6.36)에 비해 HC 군(324.16±17.38)에서 유의적 (p<0.05)으로 증가되었으나 HC 군에 비해 HCL, HCM 및 HCH군에서는 각각 257.15±11.80, 237.60±13.41 및 264.84 ±19.51 로 유의적 (p<0.05)으로 감소되었다. 반면 말초 조직의 콜레스테롤을 제거하는 HDL-콜레스테롤은 N군(60.
- 감소시켰다. 또한 말초조직에서의 중성지방 제거하는 LPL의 활성을 통하여 혈액 및 부고환 지방에서의 중성 지방 함량을 감소시켜 체내의 지질대사를 개선 기능이 우수한 것을 관찰할 수 있었다. 이로써 뽕잎 추출물은 지질대사 개선 작용이 우수하므로 이를 이용한 건강보조식품 개발이 기대되며 앞으로 더 심도 있는 연구가 필요하겠다.
- 05)으로 감소되었다. 반면 말초 조직의 콜레스테롤을 제거하는 HDL-콜레스테롤은 N군(60.96 士 1.75) 에 비해 HC군(16.85 ±0.84) 이 유의적 (p<0.05)으로 감소되었으나 HC군에 비해 HCL, HCM 및 HCH군에서는 각각 21.40 ±2.43, 24.44 ±2.23 및 24.44 ±1.58로 유의적 (p<0.05)으로 증가되었다. 동맥경화지수(atherogenic index)는 N군(1.
- 뽕잎 추출물의 지질대사 개선 기능을 관찰하기 위한 혈청 지질 조성 결과(Table 3)에서 혈청 중성지방의 농도는 N군 (39.61 ±7.00)에 비해 HC 군(70.42±3.11)이 유의적(p<0.05) 으로 증가되 었으나, HC 군에 비해 HCL, HCM 및 HCH군은 각각 54.10 ±3.26, 55.75 ±3.44 및 53.30 ±2.93으로 유의적 (p<0.05)으로 감소되었다. 이러한 결과는 Kang과 Kyoung (32)의 5% 뽕잎 분말 투여군이 5% 셀룰로오스 분말 투여군에 비해 유의적으로 감소되었다는 보고 및 Kim 등(33)의 뽕잎 추출물을 투여 함으로써 중성 지질이 저 하된 보고와도 유사하였다.
- 생활의 편리화와 식생활의 풍요로움은 에너지 및 동물성지방 섭취량의 증가와 함께 당뇨, 비만 환자나 고지혈증, 심장병, 뇌졸중, 고혈압 및 동맥경화증 등의 만성 성인병 환자가 증가되었다. 이러한 만성 퇴행성 질환 중에서도 심혈관계 환자의 수가 급증되어 그로 인한 사망률이 전체 사망요인의 3순위를 차지하고 있다(1).
- 15 로 HC군에 비해 유의적(p<Q05)으로 감소되었다. 이로써 뽕잎 추출물 0.32% 공급군인 HCH군에서 HC 군에 비해 간장의 총지방 및 콜레스테롤 농도가 유의적 (p<0.03으로 저하되어 지방간에 대한 보호 효과를 살펴볼 수 있었다.
- 3-A). 중성지방 함량은 N 군에 비해 HC 군이 유의적 (p<0.05)으로 증가되었으나, HCM 및 HCH군은 HC 군에 비해 유의적 (p<0.05)으로 감소되었다(Fig. 3-B). Cruz와 Williamson (42)은 흰쥐 지방조직 내 LPL 활성과 중성지방의 지방 조직내로의 유입은 서로 상관관계가 매우 높음을 시사하면서 LPL이 지방 조직내 지방 축적을 조절하는 인자라고 보고하였다.
- 본 실험은 총 4주간의 실험기간 동안 1주, 2주, 4주째 분변으로 실험을 행하였다. 총지질 함량은 1주째에 N 군(62.50 ±2.89) 에 비해 HC군(145.00 士 0.00) 이 유의적(p<0.05)으로 증가되었으며 HCM(230.00±20.49) 및 HCH(275.00±21.24)군은 HC 군에 비하여 유의적(p< 0.05으로 증가되었다. 2주째에도 1주째와 동일한 경향이었다.
- 32)군은 HC군에 비해 유의적으로 감소되었다 (Table 5). 콜레스테롤 함량은 1, 2, 4주째 모두 N군에 비해 고콜레스테롤 공급군들이 유의적으로(p<0.05)으로 증가되었으나 뽕잎추출물 공급으로 인한 유의적인 차이는 없었다 (Table 5).
- 5%를 급여한 식 이 군에서의 중성지질 수준 개선에 효과적이었다고 보고한 결과와 유사하였다. 혈청 총 콜레스테롤 함량은 N 군(127.63±40.31)에 비해 HC 군 (396.45 ± 26.84) 에서 유의적 (p<0.05)으로 증가되 었으나 HC 군에 비해 HCL, HCM 및 HCH군에서는 각각 259.78 ± 32.82, 265.74 ±53.10 및 294.50 ±27.91로 유의적 (p<0.05)으로 감소되었다. 동맥경화를 유도하는 물질인 LDL-콜레스테롤 함량은 N군(48.
후속연구
- 이러한 결과는 뽕잎에 다량 함유되어있는 섬유소 중 불용성 섬유소가 체내에 존재하는 독성물질의 배설을 증가시켜주고 장의 운동도 활발하게 해 주며 또한 불포화지방산인 oleic acid, linoleic acid 및 linolenic acid와 B-sitosterol과 같은 식물성 스테롤이 콜레스테롤의 배설을 증가시킴으로써 혈중 콜레스테롤 함량을 감소시키는 것으로 알려져 있으나(33) 확실한 기전은 앞으로 더욱 연구가 필요하겠다.
- 또한 말초조직에서의 중성지방 제거하는 LPL의 활성을 통하여 혈액 및 부고환 지방에서의 중성 지방 함량을 감소시켜 체내의 지질대사를 개선 기능이 우수한 것을 관찰할 수 있었다. 이로써 뽕잎 추출물은 지질대사 개선 작용이 우수하므로 이를 이용한 건강보조식품 개발이 기대되며 앞으로 더 심도 있는 연구가 필요하겠다.
- 26 으로 유의적 (p<Q05)으로 감소되었다. 이와 같이 뽕잎 추출물 투여가 혈중 콜레스테롤을 유의적으로 저하시키고 중성 지방 농도의 저하에도 영향을 미치는 것으로 볼 때 고지혈증의 예방뿐만 아니라 동맥경화증에 대한 예방 및 치료 효과에도 기대할 수 있을 것으로 본다.
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