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문제 정의
- 본 연구에서는, 네 개 매립지의 내부 및 외부 영향 지역의 지하수를 채취한 후 대표적인 미생물의 특이적 유전자와 매립지의 주된 반응에 관여하는 효소를 발현하는 유전자를 real time PCR을 사용, 정량하여 지하수 수질 인자에 대한 분석 결과와의 상관관계를 분석함으로써 생태학적 분석 기법의 매립지 평가도구로써의 이용 가능성을 평가하고자 하였다.
- 연구대상으로 선정된 네 개 매립지(P, N, W, C)의 지하수로부터 미생물 종 분석을 실시한 후 대표 미생물 및 특이 효소 유전자를 대상으로 real-time PCR을 수행하여 각 유전자별로 정량하여 지하수 수질분석 데이터와 비교함으로써 매립지의 상태, 오염도 및 안정화 정도를 확인할 수 있는 모니터링 인자로 사용가능성을 평가하고자 하였다.
제안 방법
- 그 후 X-Gal과 IPTG로 처리된 LB(Luria-Bertani) 배지에 형질전환 된 세포를 배양하여 균주의 접합이 확인된 콜로니의 경우 해당 콜로니의 플라스미드를 회수하여 특정 세균의 16S rDNA 염기서열을 분석 하였다.'3)미생물 염기서열 분석은 NCBI(Nation시 Center for Biotechnology Information : http://www.ncbi.nlm. nih.gov/) Gene Bank에 등록된 데이터베이스에 기초하여 실시되었으며 이 과정에서 본 연구에 사용된 미생물 대표 종 및 효소 유전자를 결정하였다.
- 16S rDNA 방법을 이용한 미생물 종 분석을 위해 2005년 C와 W 사용 종료 비위생 매립지를 선택하여 관측 공에서 계절별로 지하수를 채취하여 미생물 군집 조사를 실시한 후 연구 대상 대표 미생물 종 및 효소유전자를 결정하였다. 그 후 추가로 2006년 P 비위생 매립지와 N 매립지를 본 연구의 대상 매립지로 선정하여 2006년 봄(4월), 여름(7월), 가을 (10월)과 겨울(12월)로 구분하여 C와 W 매립지를 포함한 총 4개의 매립지를 대상으로 연구를 수행하였다.
- 4개 지역에서 분석된 각 유전자 및 미생물 그리고 수질 인자 간의 상관관계를 평가하였다. 우선 탈질효소인 nirS gene과 탈질 균인 Dde gene의 경우 그 상관계수가 약 0.
- 이용되어 왔다.Mi) 따라서 본 연구에서는 Real-Time PCR(Bio Rad, MiniOpticon Real-time Detection System)을사용하여 각 시료에서 추출된 총 genomic DNA 증 매립지를 대표하는 종에 대한 특이 유전자(gene)의 양을 정량 평가하였으며 실험에 사용된 각 primer쌍에 대한 정보는 Table 2와 같다.
- 그 후 FastDNASPIN Kit(Biol01 system, Q-Bio gene)롤 사용하여 침전물의 총 genomic DNA를 추출하고 종 다양성을 확인하기 위하여 16S universal primer(27F-5' AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG 3', 1492R-5' TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACT T 3)에 의한 증폭을 수행하였다(PCR Machine, Techgene). PCR 증폭산물은 WinzardSV Gel 및 PCR Clean- Up System(Promega, USA)으로 정제하였으며 정제된 16S rDNA PCR 산물을 pGEM-T easy vector(Promega, USA) 에 접합(liga- tion)시켰다. 접합된 PCR 산물을 숙주세포(host cell : E.
- 3 uL, 목적 primer 각 200 uM, 그리고 SYBR Green dye가 포함된 iQ SYBR Green Supermix(2X, Bio-Rad, USA) 25 uL에멸균 중류수를 첨가하여 시료의 총 부피는 50 uL가 되도록 조정하였다. 그 후 50 uL의 시료를 MJ white PCR tube에 넣고 Real-Time PCR을 이용하여 PCR 증폭과정 중에 생성되는 dsDNA로 인해 발광하는 SYBR Green I dye 형광 세기를 실시간으로 측정하였다. 중폭과정은 Table 3과 같다.
- 침전물로부터 cell을 분리하기 위하여 FastPrep®Instrument(Q-Bio gene)를 이용해 Speed 4에서 5초간 bead beating하여 침전물 입자로부터 cell을 분리시켰다. 그 후 FastDNASPIN Kit(Biol01 system, Q-Bio gene)롤 사용하여 침전물의 총 genomic DNA를 추출하고 종 다양성을 확인하기 위하여 16S universal primer(27F-5' AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG 3', 1492R-5' TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACT T 3)에 의한 증폭을 수행하였다(PCR Machine, Techgene). PCR 증폭산물은 WinzardSV Gel 및 PCR Clean- Up System(Promega, USA)으로 정제하였으며 정제된 16S rDNA PCR 산물을 pGEM-T easy vector(Promega, USA) 에 접합(liga- tion)시켰다.
- coli XLl-Blue)로 형질전환(Transfbrmation)하였다. 그 후 X-Gal과 IPTG로 처리된 LB(Luria-Bertani) 배지에 형질전환 된 세포를 배양하여 균주의 접합이 확인된 콜로니의 경우 해당 콜로니의 플라스미드를 회수하여 특정 세균의 16S rDNA 염기서열을 분석 하였다.'3)미생물 염기서열 분석은 NCBI(Nation시 Center for Biotechnology Information : http://www.
- 매립지의 생물학적 안정화 과정에 주로 관여하는 미생물 종인 탈질, 메탄생성 및 황 환원균'7)과 불량 매립지 주변에 유출된 침출수의 영향권역에서 발생되는 생물학적 질산화 및 메탄 산화 반응에 관여하는 박테리아가 분비하는 specific 한 유전자 및 관련 효소를 암호화하는 유전자를 증폭할 수 있는 primer를 Table 5와 같이 제작하였다. 특히 생물학적 철 환원 반응의 경우 본 연구 조사지역에서 빈번하게 동정된 철 환원 균인 R ferrireducens와 F.
- 세부적인 정량과정은 먼저 시료의 genomic DNA 0.3 uL, 목적 primer 각 200 uM, 그리고 SYBR Green dye가 포함된 iQ SYBR Green Supermix(2X, Bio-Rad, USA) 25 uL에멸균 중류수를 첨가하여 시료의 총 부피는 50 uL가 되도록 조정하였다. 그 후 50 uL의 시료를 MJ white PCR tube에 넣고 Real-Time PCR을 이용하여 PCR 증폭과정 중에 생성되는 dsDNA로 인해 발광하는 SYBR Green I dye 형광 세기를 실시간으로 측정하였다.
- 중폭과정은 Table 3과 같다. 실험 결과의 재현성을 높이기 위해 모든 gene의 정량은 reference gene과 함께 2회씩 반복 측정하였다.
- PCR 증폭산물은 WinzardSV Gel 및 PCR Clean- Up System(Promega, USA)으로 정제하였으며 정제된 16S rDNA PCR 산물을 pGEM-T easy vector(Promega, USA) 에 접합(liga- tion)시켰다. 접합된 PCR 산물을 숙주세포(host cell : E.coli XLl-Blue)로 형질전환(Transfbrmation)하였다. 그 후 X-Gal과 IPTG로 처리된 LB(Luria-Bertani) 배지에 형질전환 된 세포를 배양하여 균주의 접합이 확인된 콜로니의 경우 해당 콜로니의 플라스미드를 회수하여 특정 세균의 16S rDNA 염기서열을 분석 하였다.
- 시료로 사용하였다. 침전물로부터 cell을 분리하기 위하여 FastPrep®Instrument(Q-Bio gene)를 이용해 Speed 4에서 5초간 bead beating하여 침전물 입자로부터 cell을 분리시켰다. 그 후 FastDNASPIN Kit(Biol01 system, Q-Bio gene)롤 사용하여 침전물의 총 genomic DNA를 추출하고 종 다양성을 확인하기 위하여 16S universal primer(27F-5' AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG 3', 1492R-5' TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACT T 3)에 의한 증폭을 수행하였다(PCR Machine, Techgene).
- primer를 Table 5와 같이 제작하였다. 특히 생물학적 철 환원 반응의 경우 본 연구 조사지역에서 빈번하게 동정된 철 환원 균인 R ferrireducens와 F. limineticum^ 대한 특이적인 primer를 제작하였으며, 탈질 반응을 대표하는 균도 본 연구 조사지역에서 가장 빈번하게 관측된 D. denitrijiccms을 선정하여 해당 primer를 제작하여 연구에 이용하였다.
대상 데이터
- 그 후 추가로 2006년 P 비위생 매립지와 N 매립지를 본 연구의 대상 매립지로 선정하여 2006년 봄(4월), 여름(7월), 가을 (10월)과 겨울(12월)로 구분하여 C와 W 매립지를 포함한 총 4개의 매립지를 대상으로 연구를 수행하였다. 각 매립지에 설치된 지하수 관정에 1 L 용량의 베일러(Cole-Parmer, USA) 를 이용해 약 우물 부피의 3배에 달하는 유량을 미리 배제한 후 실험에 이용되는 지하수를 별도로 1 L 무균 채 수병에 채취하였다. 그 후 4℃ 냉암소에 보관하여 실험실로 이동 시켜 실험 개시 전까지 냉장 보관하였다.
- 그 후 추가로 2006년 P 비위생 매립지와 N 매립지를 본 연구의 대상 매립지로 선정하여 2006년 봄(4월), 여름(7월), 가을 (10월)과 겨울(12월)로 구분하여 C와 W 매립지를 포함한 총 4개의 매립지를 대상으로 연구를 수행하였다. 각 매립지에 설치된 지하수 관정에 1 L 용량의 베일러(Cole-Parmer, USA) 를 이용해 약 우물 부피의 3배에 달하는 유량을 미리 배제한 후 실험에 이용되는 지하수를 별도로 1 L 무균 채 수병에 채취하였다.
- 메탄생성기작에 관여되는 효소 중 methyl coenzyme M re- ductase(MCR)는 메탄생성과정 중 마지막 단계를 촉매 한다고 알려져 있어 각 매립지별 메탄생성 비교 유전자로 이용하였다. 혐기성 반응인 메탄화 반응 역시 DO가 높은 N 매립지의 경우 가장 낮은 값을 보였으나 C매립지의 경우 가장 높은 농도를 나타내었다.
- 용존산소(DO)는 DO meter(YSI 550A Portable DO Meter, USA) 를 사용하여 현장에서 측정되었으며 so:-, cr과 no3- 등의 음이온 농도는 이온 크로마토그래피(IC, Yong Lin Instrument, Water 432 Conductivity Detector, Korea)에 의하여 결정되었다.
- 종을 판별하기 위하여 작성되었다. 표에 나타낸 미생물 종은 NCBI Database 등록된 종과 본 연구과정에서 분석된 16S rDNA의 염기서열이 서로 98% 이상 일치하는 종을 기준으로 선정된 것이다. 이 가운데 98% 이상 일치하는 uncul tured bacteria가 50% 이상 검출되는 것으로 밝혀졌다.
성능/효과
- 16S gene을 정량한 결과는 매립지 내 전체 세균 군집의 특성을 파악하고자 수행하였으며 매립지별로 큰 차이는 없었으나 w에서 가장 높았으며 C, N, P 매립지의 순서로 나타났다. 탈질과정 중 nitrite reductase 를 coding 하는 nirS 효소 유전자의 경우 그 농도가 W매립지에서 약 1E+12 copies/gL 로 가장 높았으며 N 매립지에서 가장 낮게 '나타났다.
- 것으로 알려져 있다. C 매립지의 경우 MTOT gene 농도가 가장 높았으며 W, N 및 P 매립지 순서로 감소하는 것으로 나타났다. MCR gene 경우와 비교해 보면 N 및 P 매립지에 대한 농도가 서로 역전되어 탄소원의 농도가 P 지점이 N 지점에 비하여 약 2배 이상 높음에도 불구하고MTOT gene의 농도가 오히려 P지점이 더 낮은 것으로 나타났다.
- C 매립지의 경우 다른 3개 지역보다 매우 높은 암모니아성 질소 농도를 나타내었으나 DO농도가 매우 낮아 질산화를 위한 산화 조건의 형성이 충분히 제공되지 못해 NSR의 농도가 W 지역의 농도보다도 낮은 값을 나타냄을 알 수 있었다. 한편 P 매립지의 경우도 암모니아성 질소의 농도는 W 매립지보다 높은 평균 135.
- 41 mg/L 순서로 BOD 농도 분석 결과와 유사한 경향을 보였다. CODcr 의 침출수에 배출허용기준 농도는 청정지역의 경우 400 mg/L 이하로 모든 지점에서 기준을 만족하는 것으로 나타났다.
- Fig. 1(d)은 용존산소의 농도와 분자생물학적 인자 증 nirS, Dde, MCR 및 DSR genes의 농도를 상호 비교한 결과 4개 유전자 모두 0.850 이상의 매우 높은 용존산소와의 상관관계를 보였다. 이 가운데 DSR gene은 약 0.
- C 매립지의 경우 MTOT gene 농도가 가장 높았으며 W, N 및 P 매립지 순서로 감소하는 것으로 나타났다. MCR gene 경우와 비교해 보면 N 및 P 매립지에 대한 농도가 서로 역전되어 탄소원의 농도가 P 지점이 N 지점에 비하여 약 2배 이상 높음에도 불구하고MTOT gene의 농도가 오히려 P지점이 더 낮은 것으로 나타났다. 이는 결국 DO농도가 N지점이 P지점보다 높은 더 유리한 메탄의 산화 조건에 노출되어 있기 때문임을 알 수 있었다.
- 이는매립지의 경우 탄소원인 BOD 와 COD의 농도가 4개 매립지 중 가장 높고 DO농도가 가장 낮아 상대적으로 메탄생성에 더 유리한 환원성 조건이 형성되었기 때문으로 여겨진다. P 및 W 매립지는 MCR gene 의 농도가 N 매립지보다 높고 C 매립지에 비하여 낮아 두 매립지 모두 DO(1.5~2 mg/L)와 탄소원 농도가 그 증간 범위의 값을 갖는 것과 상관관계가 있음을 알 수 있었다.
- 2). 네 유전자 증 MTOT gene과 MCR gene의 상관계수가 가장 높았으며 메탄산화균인 MTOT의 경우 100%의 상관관계를 보이고 있어 기존 안정화 인자 중 하나인 BOD/COD 비율과 연계하여 안정화를 보다 더 정확하게 판별할 수 있는 분자생물학적 인자임을 확인할 수 있었다.
- 12 mg/L으로 Fli gene의 정량 결과와 정확히 일치하였다. 또 다른 철환원균인 Rhodoferax ferrireducens(Re gene)의 경우 Fli gene의 경우와 다르게 W지점에서 가장 높고 C, N 그리고 P 매립지 순서로 감소하는 것으로 나타났다. Rfe gene 의 경우 2가철, 3가철 및 DO 등 여러 인자들과 비교하였을 때 상호 연관성이 부족하여 매립지 및 주변 환경변화를 모니터링하기 위한 인자로 사용하기에는 부적합함을 알 수 있었다.
- 또한, 황환원과 유기물, 혐기성 반응과 용존산소, 철환원균과 3가철이온의 순서로 상관관계가 높았다. 또한 안정화지표인 BOD/COD비율과 MTOT의 상관관계는 100%에 달하는 것으로 나타나 가장 높은 연관성을 보였다.
- 82 mg/L로 가장 높게 검출되었으나 다른 세 매립지에서는 모두 100 mg/L이 하로 측정되었다. 또한 철의 환원과정을 모니터링 하기 위해 2가철(Ferrous iron ; F*) e과 3가철(Ferric iron ; F*) e' 의 농도를 정량한 결과 2가철과 3가철 모두 C매립지에서 가장 높게 측정되었다.
- 7 이상으로 질산화와 질산성질소의 농도의 관련성이 매우 높았다. 또한, 황환원과 유기물, 혐기성 반응과 용존산소, 철환원균과 3가철이온의 순서로 상관관계가 높았다. 또한 안정화지표인 BOD/COD비율과 MTOT의 상관관계는 100%에 달하는 것으로 나타나 가장 높은 연관성을 보였다.
- 매립지 지하수 수질분석과 DNA정량 결과의 상관관계를 살펴보면 NSR gene과 질산성질소의 상관계수가 0.9 이상으로 가장 높았으며 DSR gene과 BOD, DO와 nirS, MCR, Dde, DSR gene의 상관계수가 0.8 이상, 3가철이온의 농도와 Fli gene의 상관계수는 0.7 이상으로 질산화와 질산성질소의 농도의 관련성이 매우 높았다. 또한, 황환원과 유기물, 혐기성 반응과 용존산소, 철환원균과 3가철이온의 순서로 상관관계가 높았다.
- 농도를 나타내었다. 반면 침출수 처리장이 효율적으로 운영되고 있는 N 매립지 주변 영향지역의 오염도가 가장 낮아 침출수 처리장의 존재 여부가 불량매립지의 주변 지역에 미치는 영향을 최소화할 수 있는 인자로 작용함을 알 수 있었다.
- 본 연구 결과 수질분석 방법이 매립지 환경을 단편적으로 나타내 주는 한계를 분자생물학적 방법의 결과와 비교함으로써 오염 환경 영향 및 매립지의 생물학적 자연정화 조건에 대한 더 넓은 이해를 가능하게 하였다. 그러나 앞으로 환경 샘플에 존재하는 알려지지 않은 많은 미생물 및 관련 효소들에 대한 다양하고 깊은 연구와 유용한 분자생물학적 기술에 대한 이해가 필요할 것으로 사료된다.
- 생물화학적 산소요구량(BOD)도 C매립지의 경우 57.97 mg/L 로 가장 높았으며 P, W 및 N 매립지 순서로 그 농도가 감소하여 DO 농도 분포와 상호 연관이 있음을 보였다. 폐기물관리법에 의한 매립시설 침출수의 BOD 배출허용기준은 청정지역의 경우 30 mg/L 이하로 W 및 N 매립지의 경우 청정지역의 기준에 만족하는 것으로 나타났으나 C, P는 그보다 높은 값을 보였다.
- 수질 분석 결과 C 매립지의 용존 산소 농도가 1.1 mg/L로 가장 낮고 N 매립지의 용존산소 농도가 3.7 mg/L로 가장 높았다. 유일하게 침출수 처리시설을 갖춘 N매립지를 제외하면 P, W 및 C 매립지의 매립종료 시기가 각각 1992년, 1995년 및 1998년으로 매립 종료 후 시간 경과가 짧을 수록 용존산소 농도는 낮은 경향을 보였다.
- 암모니아성 질소(NHj-N)의 배출 허용기준은 청정지역의 경우 50 mg/L 이하로 N매립지의 경우 모두 기준을 만족하는 것으로 나타났다. 그러나 P 매립지의 경우 기준을 초과하는 것으로 나타났으며 W매립지의 경우도 매립 발생원 지역과 근접한 W0 ~W2지점은 50 mg/L을 초과하는 것으로 나타났다.
- 상관관계를 평가하였다. 우선 탈질효소인 nirS gene과 탈질 균인 Dde gene의 경우 그 상관계수가 약 0.997로 매우 높은 비례관계를 보였다(Fig. 1(a)).
- 7 mg/L로 가장 높았다. 유일하게 침출수 처리시설을 갖춘 N매립지를 제외하면 P, W 및 C 매립지의 매립종료 시기가 각각 1992년, 1995년 및 1998년으로 매립 종료 후 시간 경과가 짧을 수록 용존산소 농도는 낮은 경향을 보였다.
- 850 이상의 매우 높은 용존산소와의 상관관계를 보였다. 이 가운데 DSR gene은 약 0.974의 가장 높은 용존산소에 대한 상관관계를 보여 4개 지역 모두 DO 농도가 산화 상태를 나타내고 있어 해당 유전자가 혐기성 상태의 황 환원보다 호기성 상태의 유기탄소의 산화에 유리함을 알 수 있었으며 이는 BOD와 DSR 상관관계가 황산이온의 경우에 비하여 더 높은 값을 보인 이유를 구체적으로 입증하는 것이다.
- 21 mg/L를 나타내었으나 DSR gene 농도는 4개 매립지 증 2번째로 높은 농도를 나타내었다. 이는 W 매립지의 DO 농도가 다른 두 개의 매립지의 경우보다 상대적으로 가장 낮기(1.6 mg/L) 때문인 것으로 판단되며 결과적으로 DSR gene에 의한 황환원 반웅은 황산이온의 농도보다는 용존 산소 농도에 더 의존한다는 것을 알 수 있었다.
- 폐기물관리법에 의한 매립시설 침출수의 BOD 배출허용기준은 청정지역의 경우 30 mg/L 이하로 W 및 N 매립지의 경우 청정지역의 기준에 만족하는 것으로 나타났으나 C, P는 그보다 높은 값을 보였다. 중크롬산칼륨법에 의한 화학적 산소요구량(CODg)의 경우 P 및 C 매립지의 경우 각각 185.00, 176.08 mg/L로 모두 높은 값을 나타내었으나 W 매립지 83.83 mg/L, N 매립지 25.41 mg/L 순서로 BOD 농도 분석 결과와 유사한 경향을 보였다. CODcr 의 침출수에 배출허용기준 농도는 청정지역의 경우 400 mg/L 이하로 모든 지점에서 기준을 만족하는 것으로 나타났다.
- 이와 같이 비교적 높은 상관관계는 황환원균이 황산이온 및 acetate 등을 동시에 이용할 수 있는 종속영양 균이므로 황산이온이 부족한 상태에서 BOD만 증가하더라도 황환원균의 양도 증가하였기 때문으로 판단되었다. 즉 황산이온(SQj)과 DSR gene 의 농도의 상관관계를 분석한 결과 약 0.534의 낮은 상관관계를 보였다. 이것은 결국 DSR gene이 주변 환경변화에 따라 황산이온보다는 탄소원을 더 선택적으로 이용하는 것이기 때문으로 판단되었다.
- 지하수 수질 조사 결과 N 매립지의 유기물과 질소 등의 오염물질 농도는 대부분 수질기준을 만족하였으나 C 매립지는 대부분의 오염물질의 농도가 가장 높게 검출되었다. 이는 real-time PCR을 사용하여 각 유전자를 정량한 결과와 일치하였다.
- 철환원균인 Ferribacterium limineticum(Xi gene) 을 정량한 결과 C매립지에서 가장 높은 농도로 검출되었으나 N 매립지의 경우 가장 낮은 농도가 관측되었다. P 및 W 매립지에서는 그 중간 정도 값인 약 1.
- 97 mg/L 로 가장 높았으며 P, W 및 N 매립지 순서로 그 농도가 감소하여 DO 농도 분포와 상호 연관이 있음을 보였다. 폐기물관리법에 의한 매립시설 침출수의 BOD 배출허용기준은 청정지역의 경우 30 mg/L 이하로 W 및 N 매립지의 경우 청정지역의 기준에 만족하는 것으로 나타났으나 C, P는 그보다 높은 값을 보였다. 중크롬산칼륨법에 의한 화학적 산소요구량(CODg)의 경우 P 및 C 매립지의 경우 각각 185.
- 한편 매립지의 안정화지표인 BOD/COD와 여러 분자생물학적 지표들을 비교한 결과 MTOT, MCR, Dde 및 nirS gene 모두 상관계수가 0.8 이상으로 높았다(Fig. 2). 네 유전자 증 MTOT gene과 MCR gene의 상관계수가 가장 높았으며 메탄산화균인 MTOT의 경우 100%의 상관관계를 보이고 있어 기존 안정화 인자 중 하나인 BOD/COD 비율과 연계하여 안정화를 보다 더 정확하게 판별할 수 있는 분자생물학적 인자임을 확인할 수 있었다.
- 한편 질산화균인 NSR gene과 질산성질소(Nitrate nitrogen : NOj-N)의 상관관계를 분석한 결과 0.936의 높은 상관계수를 얻을 수 있었다(Fig. 1(e)).
- 그 이유는 C 매립지에 비하여 W 매립지의 경우 질산이온 농도가 4개조사 지역 중 가장 높은 농도가 검출되어 탈질과정의 영양원으로 충분히 이용될 수 있는 조건을 갖추고 있기 때문으로 판단되었다. 한편 탈질균의 일종인 Dde gene의 정량 결과 W, C, P 및 N 매립지 순으로 그 농도가 높게 검출되었으며 이는 nirS gene의 지역별 검출 농도의 경향과 일치하였다.
- 혐기성 반응인 메탄화 반응 역시 DO가 높은 N 매립지의 경우 가장 낮은 값을 보였으나 C매립지의 경우 가장 높은 농도를 나타내었다. 이는매립지의 경우 탄소원인 BOD 와 COD의 농도가 4개 매립지 중 가장 높고 DO농도가 가장 낮아 상대적으로 메탄생성에 더 유리한 환원성 조건이 형성되었기 때문으로 여겨진다.
- 황환원균인 DSR gene과 생화학적 산소요구량(BOD) 농도를 비교한 결과 상관계수 값은 0.868로 나타났다. 이와 같이 비교적 높은 상관관계는 황환원균이 황산이온 및 acetate 등을 동시에 이용할 수 있는 종속영양 균이므로 황산이온이 부족한 상태에서 BOD만 증가하더라도 황환원균의 양도 증가하였기 때문으로 판단되었다.
후속연구
- 더 넓은 이해를 가능하게 하였다. 그러나 앞으로 환경 샘플에 존재하는 알려지지 않은 많은 미생물 및 관련 효소들에 대한 다양하고 깊은 연구와 유용한 분자생물학적 기술에 대한 이해가 필요할 것으로 사료된다.
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