본 연구는 복강경을 이용하여 한국흑염소의 난소를 연속적으로 관찰하여 그 형태적 변화를 확인함으로써 한국흑염소의 성주기를 판정하고 그 결과를 한국흑염소의 수정란 이식시에 활용하고자 하는 목적으로 수행하였다. $CIDR^(R)$ 제거 2일 후부터 복강경 수술을 통해 난소의 형태적 변화를 관찰하였다. 난소의 크기와 황체의 변화를 관찰하였으며, 황체는 그 성숙과 퇴축 과정에 따라 corpus hemorrhagicum(CH), corpus luteum(CL), corpus albicans(CA)로 나누었다. 배란 전일(Day 0)에는 배란 직전의 대형난포(Graafian follicle)가 존재하였고, 배란일(Day 1)에는 배란 직후의 함몰 부위(OD)를, 그리고 배란 2일째(Day 2)에는 초기 출혈체$(CH_1)$가 관찰되었다. 배란 3일 및 4일째에는 배란된 자리로부터 형성된 출혈체가 성숙하여 $CH_2,\;CH_3$로 발육되며 점차 그 크기가 커지고 주위에 잘 발달된 혈관의 분지들을 관찰할 수 있었다. 배란 5일째와 6일째에는 완전히 성숙하여 난소의 절반 이상을 차지하는 성숙 황체$(CL_3)$를 관찰하였다. 배란 10일째에는 더욱 발달한 성숙 황체와 함께 같은 쪽 또는 반대편 난소에 작은 난포가 생성된 것을 확인하였고, 배란 15일째에는 10일째 생성된 난포와는 다른 새로운 난포가 나타나 발육되는 것을 확인하였다. 배란 17일과 18일째에는 점차 황체의 크기가 작아져 $CL_2,\;CL_1$의 단계로 퇴행하였고, 배란 20일과 22일째에는 완전히 퇴행된 황체, 즉 백체(CA)의 존재와 함께 같은 쪽 또는 반대편 난소에 발육된 우세난포를 확인하였다. 본 연구에서 복강경을 통한 난소의 변화상을 관찰한 결과, 한국흑염 소의 발정주기는 estrus기(성숙 난포기)가 1일(성주기제 0일), metestrus기(배란 및 황체 발육기)는 4일(성주기 제 $1{\sim}4$일), diestrus기(황체기)는 $12{\sim}13$일(성주기 제$5{\sim}16/17$일), proestrus기(황체퇴행 및 난포 형성기)는 5일(성주기 제 $17/18{\sim}21/22$일)인 것으로 확인되었다. 난소의 육안적 관찰을 위해 사용한 복강경 시술은 개복술에 비래 수술 상처와 감염이 적고 수술 후 회복도 빨랐으며 최소한의 유착과 수술 시간의 단축 등 많은 장점을 가지고 있어 한국흑염소의 수정란이식 등에 그 활용 가치가 클 것으로 사료된다.
본 연구는 복강경을 이용하여 한국흑염소의 난소를 연속적으로 관찰하여 그 형태적 변화를 확인함으로써 한국흑염소의 성주기를 판정하고 그 결과를 한국흑염소의 수정란 이식시에 활용하고자 하는 목적으로 수행하였다. $CIDR^(R)$ 제거 2일 후부터 복강경 수술을 통해 난소의 형태적 변화를 관찰하였다. 난소의 크기와 황체의 변화를 관찰하였으며, 황체는 그 성숙과 퇴축 과정에 따라 corpus hemorrhagicum(CH), corpus luteum(CL), corpus albicans(CA)로 나누었다. 배란 전일(Day 0)에는 배란 직전의 대형난포(Graafian follicle)가 존재하였고, 배란일(Day 1)에는 배란 직후의 함몰 부위(OD)를, 그리고 배란 2일째(Day 2)에는 초기 출혈체$(CH_1)$가 관찰되었다. 배란 3일 및 4일째에는 배란된 자리로부터 형성된 출혈체가 성숙하여 $CH_2,\;CH_3$로 발육되며 점차 그 크기가 커지고 주위에 잘 발달된 혈관의 분지들을 관찰할 수 있었다. 배란 5일째와 6일째에는 완전히 성숙하여 난소의 절반 이상을 차지하는 성숙 황체$(CL_3)$를 관찰하였다. 배란 10일째에는 더욱 발달한 성숙 황체와 함께 같은 쪽 또는 반대편 난소에 작은 난포가 생성된 것을 확인하였고, 배란 15일째에는 10일째 생성된 난포와는 다른 새로운 난포가 나타나 발육되는 것을 확인하였다. 배란 17일과 18일째에는 점차 황체의 크기가 작아져 $CL_2,\;CL_1$의 단계로 퇴행하였고, 배란 20일과 22일째에는 완전히 퇴행된 황체, 즉 백체(CA)의 존재와 함께 같은 쪽 또는 반대편 난소에 발육된 우세난포를 확인하였다. 본 연구에서 복강경을 통한 난소의 변화상을 관찰한 결과, 한국흑염 소의 발정주기는 estrus기(성숙 난포기)가 1일(성주기제 0일), metestrus기(배란 및 황체 발육기)는 4일(성주기 제 $1{\sim}4$일), diestrus기(황체기)는 $12{\sim}13$일(성주기 제$5{\sim}16/17$일), proestrus기(황체퇴행 및 난포 형성기)는 5일(성주기 제 $17/18{\sim}21/22$일)인 것으로 확인되었다. 난소의 육안적 관찰을 위해 사용한 복강경 시술은 개복술에 비래 수술 상처와 감염이 적고 수술 후 회복도 빨랐으며 최소한의 유착과 수술 시간의 단축 등 많은 장점을 가지고 있어 한국흑염소의 수정란이식 등에 그 활용 가치가 클 것으로 사료된다.
This study was performed to determine the estrous cycles by macroscopic observation of the ovarian changes using the laparoscopy and to make use of these results for embryo transfer in Korean black goat (Copra hircus aegagrus). Laparoscopic examinations of the ovaries were performed from 2 days afte...
This study was performed to determine the estrous cycles by macroscopic observation of the ovarian changes using the laparoscopy and to make use of these results for embryo transfer in Korean black goat (Copra hircus aegagrus). Laparoscopic examinations of the ovaries were performed from 2 days after $CIDR^(R)$ removal to 22 days after ovulation. The serial morphological changes of follicles and corpus luteum (CL) were observed. CL was classified corpus hemorrhagicum(CH), corpus luteum (CL) and corpus albicans (CA) by its maturation and regression. On the day before ovulation (Day 0), Graafian follicles (GF) were found on one or both ovaries. On the day (Day 1) and $2^{nd}$day (Day 2) of ovulation, and ovulation depression (OD) and an early stage corpus hemorrhagicum $(CH_1)$ were observed at the site of GF, respectively. On Days 3 to 4, more developed and enlarged corpus hemorrhagicum $(CH_2\;and\;CH_3)$ arised from the ovulation of the GF with well vascularization. On Days 5 to 6, it was identified that mature corpus luteum $(CL_3)$ was grown on the ovary, and fully developed CL with adjacent follicles were occupied most part of the ovary on Days 17 and 18. Then the size of CL was diminished, and completely luteal regression $(CL_1\;or\;CA)$ with new large follicle was identified on Days 20 and 22. From these results, the 4 stages of the estrous cycle in Korean black goats were 1) estrus (Day 0) for 1 day, 2) metestrus $(Day\;1{\sim}4)$ for 4 days (stage of CH development), 3) diestrus $(Day\;5{\sim}16/17)$ for 12 or 13 days (luteal stage), and 4) proestrus $(Day\;17/18{\sim}20/22)$ for 4 or 5 days (stage of luteal regression and follicular growing). Laparoscopy for observation of ovarian changes was invasive than laparotomy. Additionally, it had advantages of reduced adhesion and quick operation time. It was considered that laparoscopic examination of ovarian changes will be useful for embryo transfer in the Korean black goats.
This study was performed to determine the estrous cycles by macroscopic observation of the ovarian changes using the laparoscopy and to make use of these results for embryo transfer in Korean black goat (Copra hircus aegagrus). Laparoscopic examinations of the ovaries were performed from 2 days after $CIDR^(R)$ removal to 22 days after ovulation. The serial morphological changes of follicles and corpus luteum (CL) were observed. CL was classified corpus hemorrhagicum(CH), corpus luteum (CL) and corpus albicans (CA) by its maturation and regression. On the day before ovulation (Day 0), Graafian follicles (GF) were found on one or both ovaries. On the day (Day 1) and $2^{nd}$day (Day 2) of ovulation, and ovulation depression (OD) and an early stage corpus hemorrhagicum $(CH_1)$ were observed at the site of GF, respectively. On Days 3 to 4, more developed and enlarged corpus hemorrhagicum $(CH_2\;and\;CH_3)$ arised from the ovulation of the GF with well vascularization. On Days 5 to 6, it was identified that mature corpus luteum $(CL_3)$ was grown on the ovary, and fully developed CL with adjacent follicles were occupied most part of the ovary on Days 17 and 18. Then the size of CL was diminished, and completely luteal regression $(CL_1\;or\;CA)$ with new large follicle was identified on Days 20 and 22. From these results, the 4 stages of the estrous cycle in Korean black goats were 1) estrus (Day 0) for 1 day, 2) metestrus $(Day\;1{\sim}4)$ for 4 days (stage of CH development), 3) diestrus $(Day\;5{\sim}16/17)$ for 12 or 13 days (luteal stage), and 4) proestrus $(Day\;17/18{\sim}20/22)$ for 4 or 5 days (stage of luteal regression and follicular growing). Laparoscopy for observation of ovarian changes was invasive than laparotomy. Additionally, it had advantages of reduced adhesion and quick operation time. It was considered that laparoscopic examination of ovarian changes will be useful for embryo transfer in the Korean black goats.
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문제 정의
따라서 인위적으로 발정을 유도한 한국흑염소에서 복강경을 이용하여 난포의 발육, 배란, 황체의 형성 등 성주기에 따른 난소의 형태적 변화를 확인하고 그 정상적인 지표를 마련함으로써 한국흑염소의 수정란 이식 및 번식 장애의 치료 등에 활용하고자 이 실험을 수행하였다.
본 연구는 복강경을 이용하여 한국흑염소의 난소를 연속적으로 관찰하여 그 형태적 변화를 확인함으로써 한국 흑염소의 성주기를 판정하고 그 결과를 한국흑염소의 수정란 이식 시에 활용하고자 하는 목적으로 수행하였다.
가설 설정
4. The ovary on the 17th(a), 18th(b) and 20th(c) day of ovulation, a) The size of corpus luteum (CL2) was dimini shed. b) A CL2 after ovulation, c) A regressed small corpus luteum (CL1) and a follicle, d) A corpus albicans and small follicle.
3. The ovary on the 6th(a), 7th(b), 10th(c, d) and 15th(e, f) day of ovulation, a) A mature corpus luteum (CL3) was formed at the site of ovulation, b) The CL3 was larger than that of 6th day. c) A CL3 occupied most part of the ovary, d) A CL3 with adjacent follicle, e) A CL3 with new large follicle, f) The right ovary had a CL3 and the left ovary had a large follicle (LF).
제안 방법
6마리의 흑염소를 각 2마리씩 3개군으로 나누어 CIDR®제거 48시간 후부터 개체마다 3〜6회(평균 4.3회) 수술하였다.
CIDR®제거 2일 후부터 복강경 수술을 통해 난소의 형태적 변화를 관찰하였다. 난소의 크기와 황체의 변화를 관찰하였으며, 황체는 그 성숙과 퇴축 과정에 따라 corpus hemorrhagicum (CH), corpus luteum(CL), corpus albicans(CA)로 나누었다.
관찰하였다. 난소의 크기와 황체의 변화를 관찰하였으며, 황체는 그 성숙과 퇴축 과정에 따라 corpus hemorrhagicum (CH), corpus luteum(CL), corpus albicans(CA)로 나누었다. 배란 전일(Day 0)에는 배란 직전의 대형난포(Graafian follicle) 가 존재하였고, 배란일(Day 1)에는 배란 직후의 함몰 부위 (OD)를, 그리고 배란 2일째(Day 2)에는 초기 출혈 체(CR)가 관찰되었다.
2a). 배란 3일째 (Day 3)와 4일째(Day 4)에는 배란 부위에 돌출된 형태의 황체가 형성되어 CHi보다 더욱 성숙한 CH2 및 CR로 발육되는 모습을 확인하였다(Fig. 2b).
복강경(5 mm, MGB, Germany)과 charge coupled device (IK-C43H47, Toshiba, Japan), flexible fiber-optic cable(Olym- pus, Japan), camera control unit (IK-Cu43A, Toshiba), lightsource(CLV-E, Olympus)를 연결시켜 복강경 장비를 장착하였다. 실험 동물을 48시간 정도 절식시킨 후 복부의 유선 전방 부와 정중선에서 각 10 cm 정도 털을 제거하였다.
복강경을 이용한 관찰과 조작을 용이하게 하기 위해 하복부에 verres needle을 삽입하고 CO2 automatic insufflation(UHI} Olympus)을 작동시켜 CO2 gas를 주입하였다. 유선의 전방 2 cm, 좌우 과 cm 범위 내에 피부를 약 5 cm 정도 절개하고 tro- car로 피하와 복벽을 관통시 킨 후 trocar sleeve(5.
복강경을 통해 먼저 방광을 확인한 후 방광의 앞쪽에서 자궁체를 관찰하였고 좌우 자궁각 끝에 정상적으로 난소 간 막과 난관 각막에 싸여 있는 난소를 관찰하였다. 즉, 한 개 또는 두 개의 보조 겸자를 이용하여 자궁각을 들어올려 난소 간 막에 덮여있는 난소를 찾은 후 난소걸이인대를 잡고 난소를 좌우로 돌리면서 한쪽 난소의 관찰이 끝나면 곧바로 다른 쪽 난소를 동일한 방법으로 관찰하였다.
관찰이 끝나면 복강경과보조겸자 그리고 각 trocar 이eeve와 verres needle을 조심스럽게 제거하였다. 복강경이 삽입된 창면의 복막과 피하 silk를사용하여 봉합하였다. 영상은 녹화기(MD830m, Panasonic, Ja-pan)를 이용하여 녹화하였으며, 정지 화상은 감열지가 내장된color video copy processor(CP701U, Mitsubishi, Japan)를 이용하여 출역하였다.
Seeger 등(1980)은 양과 염소에서도 겸부를 통해 접근할 수 있으나, 이는 자궁과 난소 관찰에서 정중 접근보다 덜 효과적이라고 설명하였다. 본 실험에서도 유선 앞쪽의 털을 넓게 깎은 후 유방 앞쪽 약 2 cm 되는 지점에 복강경을 삽입하였다. 보정법은 Hulet과 Foote(1968)가 최초로 고안한 것과 유사한 형태의 수술대를 제작하여 사용하였는더), 약 45도로 머리쪽을 아래로 기울여 복강내 장기가 아래쪽으로 밀려 내려가 trocar의 삽입에 대한 위험을 줄이고 더 많은 시야를 확보할 수 있도록 하였다.
7 mg/kg의 xylazine HCl(rumpun®, Bayer, Korea)을 정맥 주사하여 진정시켰으며, 수술을 용이하게 하기 위해서 내부 장기가 머리 쪽으로 내려가도록 자체 제작한 수술대를 이용하여 후지가 높게 45도 정도 기울이는 trendelenburg 자세로 보정하였다. 수술을 시작하기 전에 지속성 광범위 항생제(PPS®, (주)대성미생물연구소)를 3 ml 근육 주사하였고, 유선의 전방 부를 중심으로 수술 부위를 넓게 소독한 후 광원과 보조겸자(5 mm, MGB) 그리고 verres needle(2><120 mm, Vomed)이 삽입될 부위에 소량의 2% lidocaine HC1((주)국전약품)을 피하주사하여 국소 마취시켰다.
Japan), camera control unit (IK-Cu43A, Toshiba), lightsource(CLV-E, Olympus)를 연결시켜 복강경 장비를 장착하였다. 실험 동물을 48시간 정도 절식시킨 후 복부의 유선 전방 부와 정중선에서 각 10 cm 정도 털을 제거하였다. 흑염소는0.
gas를 주입하였다. 유선의 전방 2 cm, 좌우 과 cm 범위 내에 피부를 약 5 cm 정도 절개하고 tro- car로 피하와 복벽을 관통시 킨 후 trocar sleeve(5.5 mm, MGB)를 장착하여 복강경 광원을 삽입하였다. 복강경이 삽입된 부위로부터 약 3 cm 전방에 trocar sleeve를 장착하고 보조 겸자를 삽입하였다.
그러나 본 실험에서는 짧은 기간 내에 반복적인 복강경 수술을 실시하였기 때문에 예상보다 심한 유착이 발생하였고, 광범위한 유착은 수술을 매우 어렵게 하기도 하였다. 이를 고려하여 복강경 및 보조 겸자의 삽입부를 좌우 4 cm 범위 내로 조금씩 달리 하였다. 유착이 심하지 않은 경우에는 같은 위치에 복강경을 반복해서 삽입하였다.
난관 각막에 싸여 있는 난소를 관찰하였다. 즉, 한 개 또는 두 개의 보조 겸자를 이용하여 자궁각을 들어올려 난소 간 막에 덮여있는 난소를 찾은 후 난소걸이인대를 잡고 난소를 좌우로 돌리면서 한쪽 난소의 관찰이 끝나면 곧바로 다른 쪽 난소를 동일한 방법으로 관찰하였다. 관찰이 끝나면 복강경과보조겸자 그리고 각 trocar 이eeve와 verres needle을 조심스럽게 제거하였다.
한국흑염소의 발정 동기화를 위해 질 내에 삽입하는 pro gesterone 제인 CIDR® sheep and goat(Inter Ag, New Zealand) 를 2주간 삽입하였고, 제거 후 pregnant mares' serum gona-dotropin(Pregnecol , Horizon Technology, Australia) 400 IU를 근육 주사하였다.
실험 동물을 48시간 정도 절식시킨 후 복부의 유선 전방 부와 정중선에서 각 10 cm 정도 털을 제거하였다. 흑염소는0.7 mg/kg의 xylazine HCl(rumpun®, Bayer, Korea)을 정맥 주사하여 진정시켰으며, 수술을 용이하게 하기 위해서 내부 장기가 머리 쪽으로 내려가도록 자체 제작한 수술대를 이용하여 후지가 높게 45도 정도 기울이는 trendelenburg 자세로 보정하였다. 수술을 시작하기 전에 지속성 광범위 항생제(PPS®, (주)대성미생물연구소)를 3 ml 근육 주사하였고, 유선의 전방 부를 중심으로 수술 부위를 넓게 소독한 후 광원과 보조겸자(5 mm, MGB) 그리고 verres needle(2><120 mm, Vomed)이 삽입될 부위에 소량의 2% lidocaine HC1((주)국전약품)을 피하주사하여 국소 마취시켰다.
대상 데이터
유착이 심하지 않은 경우에는 같은 위치에 복강경을 반복해서 삽입하였다. 복강의 공기 주입장치는 자동 C6주입기를 사용하였다. Seeger 등 (1980)은 양에서 pneumoperitoneum을 만드는데 COz, 이산화질소, 공기 등 모두 사용할 수 있다고 하였으며, 특히 C6는다른 연구에서도 좋은 결과가 보고되었으며(Dukelow 등, 1971; Jarosz 등, 1971), 본 실험에서도 CO2를 이용하여 만족한 pneu- moperitoneum을 유도할 수 있었다.
본 연구에 사용된 동물은 대전 근교 농장에서 구입하여 충남대학교 수의과대학 염소 사육사에서 사육된 체중 15〜20 kg, 1년령 이상의 임상적으로 건강하다고 인정되는 한국 흑염소 6마리를 이용하여 실시되었다.
복강경이 삽입된 창면의 복막과 피하 silk를사용하여 봉합하였다. 영상은 녹화기(MD830m, Panasonic, Ja-pan)를 이용하여 녹화하였으며, 정지 화상은 감열지가 내장된color video copy processor(CP701U, Mitsubishi, Japan)를 이용하여 출역하였다.
성능/효과
Woolf 등(1987)은 woodchuck에서 verres needle을 이용하여 보조 forceps을 대신하여 자궁각을 조작하였다고 보고한 바 있으나 본 실험에서 시도해본 결과 오히려 시야를 가리는 좋지 않은 결과를 가져왔다. 난소의 형태를 관찰하거나 녹화할 때 조명이 너무 밝으면 중심부가 심하게 반사되어 좋은 상을 만들 수 없었고, 복강경 렌즈 끝과 난소 사이의 거리를 적절히 유지하여야 양호한 화상을 얻을 수 있었다.
난소주기를 관찰한 후 유착이 적고, 수술시간이 단축됨을 강조하였다. 또한 Phillippo 등(1971)은 자궁의 맥관과 확장 정도, 황체의 크기와 형태를 근거로 복강경을 암양의 초기 임상진단에 이용할 수 있다고 하였으며, Seeger 등(1980)은 양과 염소에서의 복강경에 관한 체계적인 방법을 설명하면서 조기 임상진단과 함께 태아 관찰, 수정 란 이식 등의 가능성을 제시하였다.
배란일(Day 1)에는 전날 관찰되었던 Graafian fbllicle이 사라지고 그 부위에 배란 직후의 함몰 부위가 관찰되었으며, 배란 2일째(Day 2)에는 0.2〜0.5 cm 정도 크기의 초기 출혈체인 CH】 단계의 황체를 관찰할 수 있었다(Fig. 2a). 배란 3일째 (Day 3)와 4일째(Day 4)에는 배란 부위에 돌출된 형태의 황체가 형성되어 CHi보다 더욱 성숙한 CH2 및 CR로 발육되는 모습을 확인하였다(Fig.
3일인 것으로 Song 등(1984)이 보고한 바 있으나 이는단순히 발정 징후로만 판단한 자료였다. 본 실험에서 복강경을 통해 난소의 형태를 육안적으로 검사한 결과, 배란 전일에는 배란 직전의 0.5 cm 이상의 대형 성숙 난포가 관찰되었고, 배란일에는 대형 난포가 파열된 자리에 배란와가 형성되었으며, 배란 1 〜2일에는 점차 함몰 부위가 차오르며 초기 단계의 황체인 출혈체(CHi〜CH)가 형성되어 발육되는 모습.이 관찰되었다.
본 연구에서 복강경을 통한 난소의 변화상을 관찰한 결과, 한국흑염소의 발정 주기는 estrus기(성숙 난포기)가 1일(성주기 제 0일), metestrus기(배란 및 황체 발육기)는 4일(성주기제 1〜4일), diestrus기(황체기)는 12〜13일(성주기 제 5일〜 16/17일), proestrus기(황체 퇴행 및 난포 형성기)는 5일(성주기 제 17/18〜21/22일)인 것으로 확인되었으며 난소의 육안적 관찰을 위해 사용한 복강경 시술은 개복술에 비해 수술 상처와 감염이 적고 수술 후 회복도 빨랐으며 최소한의 유착과 수술 시간의 단축 등 많은 장점을 가지고 있어 한국흑염소의 수정란이식 등에 그 활용 가치가 클 것으로 사료된다.
본 연구에서 복강경을 통한 난소의 변화상을 관찰한 결과, 한국흑염소의 발정주기는 estrus기(성숙 난포기)가 1일(성주기제 0일), metestrus기(배란 및 황체 발육기)는 4일(성주기 제 1〜4일), diestrus기(황체기)는 12〜13일(성주기 제 5-16/17 일), proestrus기(황체퇴행 및 난포 형성기)는 5일(성주기 제 17/18〜21/22일)인 것으로 확인되었다. 난소의 육안적 관찰을 위해 사용한 복강경 시술은 개복술에 비래 수술 상처와 감염이 적고 수술 후 회복도 빨랐으며 최소한의 유착과 수술 시 간의 단축 등 많은 장점을 가지고 있어 한국흑염소의 수정란이식 등에 그 활용 가치가 클 것으로 사료된다.
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