선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 切 염증부위에서 생산되는 과잉의 NO는 생체 방어의 역할을 하는 반면, 각종 장기 장해, 염증성 질환을 악화시키는 요인이 되고 있으며, 발암의 과정에도 관여하는 것으로 알려져 있다.IT, 본 연구는 국화과 식물에서 유래되는 유효성분의 개발을 목표로 하여, 특히 여성 특유의 암에 관련된 활성물질의 탐색을 목적으로 유방암 세포인 MCF-7과 MDA-MB-453에 대한 성장억제 활성을 지표로 목향의 EtOH 엑스에 대한 활성성분의 분리를 실시하였다.
제안 방법
- 그 결과 HM4(78mg)는 TLC의 발색반응에 의하여 sesqui-terpene의 함유가 예상되었다. HM4 대하여 preparative TLC를 실시하여 sesquiterpenee] 발색 부위를 UV 254nm에서 관측하여 취하였다. 이와 같은 방법으로 얻어진 각각의 부분을 CHCI3 을 이용하여 용출시켜, HM41~HM43의 세 개의 费ction을 얻었으며 , 그 중 HM42는 각종 NMR 스펙트럼 및 MS와 IR의 측정에 의하여 dehydrocostuslactone(l)으로 구조결정 하였다.
- 실험기간동안 세포주는 10%의 FBS(Gibco)가 포함된 RPMI 1640(Gibco) 배지를 사'§하여 37℃, 5% COz의 환경이 유지되는 incubator에서 배양하였다. 각 fraction 추출물과 화합물 1 및 2를 다양한 농도 범위 (fraction 추출물: 12.5-100 ug/m/, 화합물 1과 2: 12.5-50 ug/ m/)에서 24시간 처리한 뒤, MTT(methyl thiazolyl tetrazolium) 용액 첨가로 형성된 formazan cryst사을 DMS0로 녹여 microplate reader (SpectraMax Plus; Molecular Devices)기의 흡광도 490 nm에서 확인하였다.
- 여기서 얻어진 fraction HM112는 TLC에 의해서 sesquiterpene의 함유가 예상되었으며, 그 재결정(CHCI3)에 의하여 costunolide(2) 를 얻었다. 그 구조는 각종 NMR 스펙트럼 및 MS와 IR에 의하여 결정하였다.
- 가용부(HM) 약 24 g을 얻었다. 그 중 우선 일부(300 mg) 를 취하여 silica gel column 산iromatography에 의한 분리를 실시 하였다. 이 동싱-(mobile phase)으로 hexane : CHC13(30: 70, v/v)을 이용하여 여섯 개의 fraction(HMl~HM6)으로 분리하였다.
- 1327을 나타내어, 이들의 분자식을 CmHi8(&로 결정하였다. 또한, IR spectrum에서는 y-lactone의 존재를 나타내는 1780 cm-1 의 흡수 밴드를 관측하였다. NMR에서는 6.
- 사용된 기기로는, IRe Spectrophotometer FT-IR 300E(Jasco, Tokyo, Japan)를 사용하여 측정하였으며, Fast Atom Bombar血lent-Mass Spectrometry (FAB-MS)^- VG Autospec spectrometer (Micromass, Manchester; UK)을, 그리고 Electrospray ionizationmass spectrometry(ESI-MS)은 LCT(Micromass, Manchester; UK)을 사용하여 즉정하였다. Nuclear Magnetic Resonance(NMR) 은 DPX-300 및 DRX-500(Bruckei; Rheinstetten, Germany) 을 사용하였으며 내부표준물질로는 CDCleH : 726 ppm, 13C NMR : 77.
- 또한, 위의 HM의 나머지 부분 약 23 g에 대하여 hexane : CHCl3 (25 : 75, v/v)을 이용한 silica gel column chromatography# 실시, 총 14개의 fraction을 얻었다. 얻어진 fraction 중 sesquiterpenee] 함유가 예상된 HM11(4.5 ©을 hexane: EtOAc(85 :15~ 6:4~4:6)의 gradient 용매 조건하에서 silica gel column chromatogmphy에 의한 분리를 실시하여 총 7개의 fraction> 얻었다. 여기서 얻어진 fraction HM112는 TLC에 의해서 sesquiterpene의 함유가 예상되었으며, 그 재결정(CHCI3)에 의하여 costunolide(2) 를 얻었다.
- 위의 과정에서 얻어진 각각의 hexane, CHC13, 1-BuOH fraction 및 화합물dehydrocostuslactone(l)과 costunolide(2)에대하여 MTT assay를 실시하였다.
- 이를 %0에 현탁하여, hexane, CHC13, LBuOH을 이용하여 순차적으로 추출하여 각각의 fractione- 얻었다. 이들의 fraction에 대하여 cell proliferation 활성에 관한 MTT assay를 실시한 결과를 바탕으로 hexane fraction에 대한 자세한 분리를 실시하였다.
- COSY의 결과에 의하여 H-1/H-2/H-3의 상관과 H-7/H-8/H-9의 correlation 등이 관측되었으며, H-13/H-14/H-15의 methylene proton 사이의 correlation 역시 관측되었다. 이와 같은 NMR의 결과 및 참고문헌을 종합하여, 화합물 1을 dehydrocostuslactone으로 결정하였다 (Eble 1).妇6)
- HM4 대하여 preparative TLC를 실시하여 sesquiterpenee] 발색 부위를 UV 254nm에서 관측하여 취하였다. 이와 같은 방법으로 얻어진 각각의 부분을 CHCI3 을 이용하여 용출시켜, HM41~HM43의 세 개의 费ction을 얻었으며 , 그 중 HM42는 각종 NMR 스펙트럼 및 MS와 IR의 측정에 의하여 dehydrocostuslactone(l)으로 구조결정 하였다. 또한, 위의 HM의 나머지 부분 약 23 g에 대하여 hexane : CHCl3 (25 : 75, v/v)을 이용한 silica gel column chromatography# 실시, 총 14개의 fraction을 얻었다.
대상 데이터
- 사용하여 즉정하였다. Nuclear Magnetic Resonance(NMR) 은 DPX-300 및 DRX-500(Bruckei; Rheinstetten, Germany) 을 사용하였으며 내부표준물질로는 CDCleH : 726 ppm, 13C NMR : 77.0ppm)을 이용하였다.
- 실험에 사용한 목향(Saussurea lappa)은 2006년 5월 경상북도 의성에서 채취하여, 일본 고치현 마키노식물원의 Koyama 원장에 의하여 감정을 거친 후 음건하여 이용하였다. 그 표본은 마키노식물원에 보관하였다(표본 번호: MBG-1708212).
- 이들의 암세포주에 대한 생육저해효과를 확인하기 위하여, 유방암 세포주 MCF-7과 MDA-MB-453을 KCLB(Korean Cell Line Bank, Korea) 에서 분양 받아 사용하였다. 실험기간동안 세포주는 10%의 FBS(Gibco)가 포함된 RPMI 1640(Gibco) 배지를 사'§하여 37℃, 5% COz의 환경이 유지되는 incubator에서 배양하였다.
- 중국산 목향(Saussureae Radix)에서 얻어진 EtOH 추출물을 물에 현탁시킨 후, hexane, CHC13, 1-BuOH를 이용하여 순차적으로 분배하여, 각각의 fraction을 얻었다. 이들에 대한 cell proliferation assay를 실시하여, Fig.
성능/효과
- 4)이 관측되었다. tH NMR로부터는 1.43, 1.71 ppm의 methyl proton과 5.53, 6.27 ppm의 exomethylene을 확인하였으며, 4.86 ppm과 4.75 ppm의 olefnic proton의 존재가 확인되었다. 이들 protone 13C NMR에서 확인된 oleiinic carbon(5c 127.
- 이 동싱-(mobile phase)으로 hexane : CHC13(30: 70, v/v)을 이용하여 여섯 개의 fraction(HMl~HM6)으로 분리하였다. 그 결과 HM4(78mg)는 TLC의 발색반응에 의하여 sesqui-terpene의 함유가 예상되었다. HM4 대하여 preparative TLC를 실시하여 sesquiterpenee] 발색 부위를 UV 254nm에서 관측하여 취하였다.
- 0) 과 관련하여 그 위치가 각각 C-1과 C-5에 위치하는 것을 알 수 있었다. 또한 170.4 ppm의 carbonyl peak에 의하여, IR에서도 확인된 바와 같이 화합물 2에는 y-lactone환이 존재하는 것도 확인할 수 있었다. 또한, COSY에 의하여 화합물 2는 macrocyclic 화합물인 것을 알 수 있었으며, 이상의 결과 및 참고문헌을 종합하여 화합물 2는 germacrane골격의 costunolideS.
- 4 ppm의 carbonyl peak에 의하여, IR에서도 확인된 바와 같이 화합물 2에는 y-lactone환이 존재하는 것도 확인할 수 있었다. 또한, COSY에 의하여 화합물 2는 macrocyclic 화합물인 것을 알 수 있었으며, 이상의 결과 및 참고문헌을 종합하여 화합물 2는 germacrane골격의 costunolideS. 그 구조를 확정지었다(Table 1).
- 5 ppm의 olefin carbon 시그널에 의하여 확인할 수 있었다. 또한, NMR의 3.95ppm과 함께 13C NMR의 85.2 ppm의 시그널은 산소 관능기에 인접한 tertiary carbon에 해당하는 것으로 예상되었다. COSY의 결과에 의하여 H-1/H-2/H-3의 상관과 H-7/H-8/H-9의 correlation 등이 관측되었으며, H-13/H-14/H-15의 methylene proton 사이의 correlation 역시 관측되었다.
- 3%) fraction에 비하여 우수한 암세포에 대한 생육저해 효과를 나타내었다. 또한, hexane fraction에서 분리된 두 화합물 dehydrocostuslactone(l) 및 costunolide(2)에 대하여 동일한 실험을 실시한 결과, 1 및 2는 12.5ug/m/의 농도에서부터 유의적인 생육저해활성을 나타냈으며, 이러한 결과는 농도 의존적인 저해 경향으로 관찰되었다<0.05, Fig. 2의 B). 또한, 최고 처리농도 50ug/mZ에서 화합물 μ牛 2는 각각 27.
- 2의 B). 또한, 최고 처리농도 50ug/mZ에서 화합물 μ牛 2는 각각 27.9% 및 40.0%의 MDA-MB-453 세포주의 생육을 억제하였으며, 이러한 경향은 MCF-7 세포주에서 보다 뚜렷하게 관찰되었다.
- 75 ppm의 olefnic proton의 존재가 확인되었다. 이들 protone 13C NMR에서 확인된 oleiinic carbon(5c 127.2, 127.0) 과 관련하여 그 위치가 각각 C-1과 C-5에 위치하는 것을 알 수 있었다. 또한 170.
- 분배하여, 각각의 fraction을 얻었다. 이들에 대한 cell proliferation assay를 실시하여, Fig. 2의 A에서와 같이 이들 중 활성이 가장 우수한 hexane 血出011에 대하여 상세한 분리 및 정제를 수행한 결과, dehydrocostuslactone(l) 및 costunolide(2) 를 얻었다.
- 이상의 결과에서 얻어진 화합물 1과 2는 목향의 대표적인 sesquiterpene인 guaiane(azulene(C5-C7)골격과 a-methylene ylactone으.로 구성)과 germacrane(C10의 macrocycle과 y-lactone 으로 구성)골격의 화합물로서, 이들이 나타낸 암세포주 생육 저해 활성은 항암제로서의 가능성이 기대된다고 할 수 있으며, 이들 계통 화합물의 항암 활성 유도의 기전연구에 대한 기본정보를 제공하는데 의의가 있다고 사료된다.
- IR에 의하여 1776 cm』의 흡수 밴드를 관측하였다. 화합물 2의 13C NMR 및 DEPT의 결과에 의하여, 2개의 methyl carbon(5c 16.0, 17.3) 과 4개의 tertiary carbon(8c 50.3, 81.8, 127.0, 1, 27.2) 5개의 secondary carbon(6c 26.1, 27.9, 39.4, 40.9, 119.6) 그리고 4개의 quaternary carbon(8c 136.9, 140.0, 141.4, 170.4)이 관측되었다. tH NMR로부터는 1.
후속연구
- 로 구성)과 germacrane(C10의 macrocycle과 y-lactone 으로 구성)골격의 화합물로서, 이들이 나타낸 암세포주 생육 저해 활성은 항암제로서의 가능성이 기대된다고 할 수 있으며, 이들 계통 화합물의 항암 활성 유도의 기전연구에 대한 기본정보를 제공하는데 의의가 있다고 사료된다. 또한, 금번 실험의 결과에서 hexane ftaction에는 화합물 1과 2 이외에도 다른 활성 물질의 함유가 예상되는 바, 활성 본체에 대한 계속적인 규명이 필요하다고 생각된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.