[논문]원유중 Ivermectin 구충제의 잔류실태 조사

박준조; 육지혜; 김휴경; 박혜원; 김인경; 이우성

원유중 Ivermectin 구충제의 잔류실태 조사
Examination of ivermectin residues in raw milk after skin administration 원문보기

韓國家畜衛生學會誌 = Korean journal of veterinary service, v.30 no.3, 2007년, pp.421 - 428

박준조 (경기도 축산위생연구소) , 육지혜 (경기도 축산위생연구소) , 김휴경 (경기도 축산위생연구소) , 박혜원 (경기도 축산위생연구소) , 김인경 (경기도 축산위생연구소) , 이우성 (서울우유)

Abstract ▼ AI-Helper

This study was conducted two kinds of aims: 1) to modify the analytical methods (conditions) by high performance liquid chromatography - fluorescence detector for the detection of residual ivermectin in raw milk, 2) to provide basic information for the evaluation of standard of the residual ivermectin in raw milk. It could be considerable that negative ion spectra can be better method in the LC/MS analysis for the detection of residues, Characteristic daughter ions were observed in negative ion spectra, however, linear line was not formed in positive ion one. Three Holstein cows ($500{\pm}10kg$) were applied to commercial ointment of ivermectin just one time at the first day of test, and residues in raw milk were examined for 20day after administration. The limit of detection (LOD) was 0.65ng (n=5) by HPLC/FLD, and recovery rates were $87.85%{\sim}99.47%$. The peak was observed at the 4th day, and residues lasted to the end. Thus ivermectin was prohibited when lactating.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

이에 본조사는 ivermectin 구충제의 잔류량을 정성정량 분석하기 위하여 복잡한 추출 및 정제과정을 단순화시켜 HPLC 형광검출기와 LC/MS로 쉽게 분석할 수 있도록 분석 조건을 확립하고 피부투과도를 증진시켜 차별화된 약효운반체를 개발하여 생산된 ivermectin 도포제를 착유하는 소의 등 위에도포하는 방법으로 투여하여 매일 잔류량을 측정하여 안전휴약 기간 설정에 근거를 마련하고 원유 위생관리의 지표 자료로 제시하고자 실시하였다.

제안 방법

Avermectin계의 구충제에 대하여 LC/MS 분석 조건을 확립하기 위하여 이온화 방법은 API- ES로 하였고 검출기를 positive와 negative mode에서 spectrum을 비교 실험한 결과 Fig 6과 같이 positive에서 이온화하였을 때 [M+H]+ 은 형성되지 않고 [M+Na]*반 있어 정성 실험에 어려워 negative에서 이온화하여 [M-H「 이온과 특징적인 조각이온을 형성하였다.
HPLC 형광검출기로 분석하기 위하여 tri- fluoraceticacid: acetonitrile (1: 2) (TFA sol)과 N-methylimidazole:acetonitrile (1 : 1) (MIZ sol)을 쓸 때마다 제조하여 사용하였다.
0mm id)를 사용하였다. data system은 Chemstation (Hewlett Packard USA) 을 사용하였으며 이동상은 초기에 물 100%, 35분에 70% methanol을 0.5ml/min으로 gradient를 작성하였다.
상층액에 물 4ml과 NaCl 1.5g을 넣고 혼합하여 다시 원심분리한 다음 상층액에 MgSO₄ 4.0g을 가하여 혼합한 다음 원심분리 후 5ml 를 취하여 농죽한 다음 메탄올:물(1:9) lml 에 용해 한 후 0.2㎛ nylon syringe filter로 여과하여 LC/MS 용 실험용액으로 하였고 원심분리용액 중 5M는 농축하여 실험할 때마다 제조한 trifluoracetic acid : acetonitrile (1 : 2) 300ul에 용해한 다음 N-methylimida- zole : acetonitrile (1 : 1) 200ul를 혼합하여 유도체화 시켜 0.2ul filter로 여과하여 갈색 바이알에 넣어 6시간 이내에 형광검출기로 정량 분석하였다.
Ivermectine 젖소의 내.외부 구충제로 널리 사용하고 있어 원유에 잔류될 가능성이 높아 HPLC형 광검출기와 LC/MS로 쉽게 분석할 수 있도록 분석 조건을 확립하고 ivermectin 도포제를 착유하는 소의 등 위에도포하는 방법으로 lml/10kg씩 3두에 투여하여 20일 동안 매일 착유하여 원유 중에 잔류된 량을 측정한 결과 다음과 같다.
재료의 추출은 Sheridan등¹²⁾의 방법을 응용하여 Fig 2와 같이 원유 10ml을 50ml 원 심튜브에 취한 후 acetonitrile 10ml을 가하고 약 10분간 균질화한 후 3, 000rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 취하였다. 상층액에 NaCl 1.
표준용액은 ivermectin lO.Omg을 methanol에 용해하여 lOOmC 플라스크에 표선까지 채우고 냉동 보관하면서 사용하였으며, 이용액 5ml를 취하여 이동상으로 용해하여 50ml (10 ug/ml)되게 하고 이를 다시 100ng, 200ng, 300ng이 함유되도록 희석하여(사용 직전에 제조) 검량 곡선을 작성하였다.
실험동물로 사용된 젖소는 약 24개월 이상 사육된 착유하고 있는 홀스타인으로 체중은 500± 10kg인 3두를 사용하였다. 하이멕틴 도포용(ivermectin 5.0mg/ml, 삼양 애니팜, 한국) 구충제를 체중 1ml/10kg을 등 위에도포 하여 투약하였으며 투약을 실시하면서 두 당 약 50ml씩 원유를 채취하여 공실험 재료로 사용하였고 투약 후 20일까지 매일 같은 시간에 1회 착유하여 50ml를 냉장 보관하면서 재료의 추출방법에 따라 추출하여 3회 반복 실험하였다.

대상 데이터

Ivermectin을 정성정량분석하기 위하여 고속액 체크로마토그라피 (HPLC)는 펌프, 시료 자동주입기, 형광검출기 (FLD), 질량분석기(LC/ MS) 는 1100 series (Agilent, USA)< 사용하였으며, 컬럼은 Hypersil BDS Ci8 (5.0/on, 250 x3.0mm id)를 사용하였다. data system은 Chemstation (Hewlett Packard USA) 을 사용하였으며 이동상은 초기에 물 100%, 35분에 70% methanol을 0.
Ivermectin의 표준품과 trifluoracetic acid, N-methylimidazole, NaCl, MgSCU, H₃PO₄ 는 sigma (USA) 사 제품의 시약 특급을 사용하였으며 acetonitrile, methanol, water 는 B&J ACS (SK chemical, Korea)의 HPLC용 제품을 사용하였다.
실험동물로 사용된 젖소는 약 24개월 이상 사육된 착유하고 있는 홀스타인으로 체중은 500± 10kg인 3두를 사용하였다. 하이멕틴 도포용(ivermectin 5.

성능/효과

1. Ivermectin의 검출 한계치는 HPLC/ FLD로 측정한 결과 0.65ng (n=5)이였으며 회수율은 농도별로 87.85 ~99.47%로 매우 우수한 결과로 나타냈다.
2.피부도 포용(ivermectin 5.0mg/ml) 구충제를 젖소 등에 뿌리 후 잔류량을 측정한 결과 투약 3~4일에 가장 높은 34.6-42.lng/ml으로 나타났고 6일째부터 급격히 하락하였으며 투약 후 20일째에도 8.3~9.1ng/ni0으로 잔류되는 것으로 나타났다.
3. LC/MS 분석 결과 positive 이온화에서 [M+H]+ 생성되지 않고 [M+Na]+ 생성되었으며 직선상의 검량 곡선이 작성되지 않았으나 negative 이온화에서 [M-H]-생성되였 으며 특징적인 조각이온 (daughter ion)도 형성되어 정성정량 분석에 적합하였다.
47%로 매우 우수한 결과를 나타냈다. 또 Fig 4와 같이 공실험 결과 표준용액과 회수율 검사에 영향을 미치는 방해 피크가 나타나지 않아 추출 방법과 HPLC의 분석 조건이 우수한 것으로 나타났다. Sheridan과 Desjardins 는 6종의 abamectin 계 구충제를 동시분석하였을 때 ivermectin l.
실험동물로 사용한 젖소에 약물을 투여하기 전에 미리 착유한 원유에 ivermectin을 50, 100, 200ng/ml씩 첨가하여 재료의 추출방법에 따라 추출하여 회수율을 측정한 결과 Table 1과 같이 87.85~99.47%로 매우 우수한 결과를 나타냈다. 또 Fig 4와 같이 공실험 결과 표준용액과 회수율 검사에 영향을 미치는 방해 피크가 나타나지 않아 추출 방법과 HPLC의 분석 조건이 우수한 것으로 나타났다.
피부도 포용 (ivermectin 5.0mg/ml) 구충제를 젖소 등에 뿌리고 매일 동일한 시간에 착유하여 분석한 결과 Fig 5와 같이 투약 3~4일에 가장 높은 34.6~42.lng/me으로 나타났고 6일째부터 급격히 하락하였으며 투약 후 20일 이후에도 잔류되는 것으로 나타났다. Fernanda 등은 면양의 경구와 피하에 ivermectin과 moxidectin을 투여한 후면 양유에 잔류 결과 보고에서 경구 투여하였을 때 유즙에 ivermectin의 농도가 0.

참고문헌 (13)

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