선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구에서는 홍삼을 이용하여 주름 예방 기능이 있는건강기능식품을 개발하기 위한 기초 자료를 얻기 위하여 몇가지 홍삼추출물을 대상으로 세포수준에서의 주름예방 효과를 조사하였다.
제안 방법
- 2005년도에 한국인삼공사에서 제조한 6년근 홍삼의 잡삼과중미삼에 대하여 각각 55% 주정을 6배량 가하여 65℃에서 8시간 추출한 다음 상징액과 침전물을 분리하여 6회 반복 추출하였다. 상징액을 혼합하여 60℃ 이하에서 감압농축한 잡삼엑기스와 중미삼 엑기스를 4:1의 비율로 혼합 한 다음 동결건조하여 시료로 사용하였다.
- 이렇게 실험한 세포의 배양액을 수거하여 실험에 사용하였다. 세포 배양액 내 콜라겐 생합성 정도는 Procollagen type-I C peptide (PIP) EIA kit (TakaraX 사용하여 프로펩타이드의 양을 측정하였다.
- 세포를 2x1(/ cells/well 농도로 96-well plate에 접종한 후, 각 well에 시료를 l-lOpig/ml의 농도로첨가하여 CO2 배양기에서 24시간 배양하였다. 이렇게 배양된세포에 MTT 용액 첨가 후 4시간 반응시킨 후, formazan을형성하여 흡광도를 측정하였다.
- 생성한다. 죽은 세포에서는 반응이 일어나지 않으므로 이 Formazan의생성량은 생 세포 측정에 이용된다IQ 홍삼 시료의 Human normal fibroblast 세포에 대한 독성여부를 조사하여 실험에사용할 농도 범위를 결정하기 위하여 세포에 홍삼 시료를 처리한 후 serum free 상태로 세포를 배양하여 세포의 viability와 proliferation을 측정하였으며 그 결과는 그림 3과 같다. 사용된홍삼 시료는 1-10 ug/ml 농도에서 대조군에 비하여 84%-96% 의 세포 생존율을 나타내어 세포 증식에 독성을 나타내지 않는것으로 나타났다.
- 즉, 시료 1g을 정제수 100 ㎖로 용해하여 원심분리 (3000 rpm, 20분)한 후 ODS Sep-pak 카트리지를 통과시 킨 후 메탄올로 용출하여 5 ml로 정용하고 이를 HPLC (Waters, Model 2890)로 분석하였다. UV 203 nm에서 검출하였으며, 칼럼은 ODS 250x4.
대상 데이터
- 2005년도에 한국인삼공사에서 제조한 6년근 정관장 홍삼엑기스를 사용하였다.
- Ginsenoside-Rb]과 Ginsenoside-Rg】은 KT&G 중앙연구원 인삼 과학연구소에서 정관장 홍삼으로부터 제조한 것을 공급받아 사용하였다.
- (Korea)로부터 구입하여 사용하였다. 구입한 세포를 DMEM: F12(3 :1) 배지에 10% Fetal bovine serum (FBS), 1% penicillin-streptomycin을 첨가하여 37℃, 5% CO2 조건하에서 배양하고 계대 후 6-10세대 세포를 실험에 이용하였다.
- 대조군은 1.86 ㎍/㎖의 콜라겐을 생성하였으며 주름예방 효과가 있는 것으로 알려져 있어서 기능성 화장품 소재로 사용되 는 Retinoic acid는 0.03 jig/ml의 농도로 처리 했을 때 2.846 ㎍/㎖의 콜라겐을 생성하였다. 홍삼 시료는 l(ig/ml, 5 10 |ig/ml 의 농도로 첨가하여 fibroblast를 배양하였다.
- 상징액을 혼합하여 60℃ 이하에서 감압농축한 잡삼엑기스와 중미삼 엑기스를 4:1의 비율로 혼합 한 다음 동결건조하여 시료로 사용하였다.
- 세포는 Human dermal Sbroblast를 modem tissue technology (Korea)로부터 구입하여 사용하였다. 구입한 세포를 DMEM: F12(3 :1) 배지에 10% Fetal bovine serum (FBS), 1% penicillin-streptomycin을 첨가하여 37℃, 5% CO2 조건하에서 배양하고 계대 후 6-10세대 세포를 실험에 이용하였다.
- 846 ㎍/㎖의 콜라겐을 생성하였다. 홍삼 시료는 l(ig/ml, 5 10 |ig/ml 의 농도로 첨가하여 fibroblast를 배양하였다. 물 추출 엑기스는 콜라겐 생성에 영향을 미치지 못했으나 10 ㎍/㎖의 농도를 기준으로 할 때 주정추출엑기스는 2.
이론/모형
- 이렇게 처리된 세포의 배양액을 수거하여 실험에 사용하였다. Gross B. E. 등의 방법에 따라 MMP-1 Biotrack activity Assay Kit (Amersham Bioscience)을 이용하여 plate reader로 흡광도를 측정하고 표준곡선을 통해 계산식을 구하여 세포 배양액 내 콜라게네이즈 활성을 수치화 하였다.
- Hiroki 등16)의 방법에 따라 SOD assay kit (Dojindo Molecular Technologies, Inc)를 사용하여 시료의 SOD활성을 측정하였다.
- 세포 독성은 Loosdrecht의 방법 ⑸ 을 사용하여 3-(4, 5- dimethylthiazol-2-yl)-2-5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay를 수행하였다. 세포를 2x1(/ cells/well 농도로 96-well plate에 접종한 후, 각 well에 시료를 l-lOpig/ml의 농도로첨가하여 CO2 배양기에서 24시간 배양하였다.
- 시료의 홍삼 성분 함량은 유럽약전12)의 방법에 따라 측정하였다. 즉, 시료 1g을 정제수 100 ㎖로 용해하여 원심분리 (3000 rpm, 20분)한 후 ODS Sep-pak 카트리지를 통과시 킨 후 메탄올로 용출하여 5 ml로 정용하고 이를 HPLC (Waters, Model 2890)로 분석하였다.
성능/효과
- lOng/ml 농도를 기준으로 할 때 항산화제로 알려져있는 Vit. C는 99%의 활성을 나타내었으며 홍삼 시료는 28~79%의 활성을 나타내는 것으로 조사되어 홍삼은 항산화활성이 높은 수준은 아니었으며 조사포닌 함량이 높은 주정추출물에서 보다 물추출물에서 활성이 다소 높은 것으로 나타났다. 박 등22)은 인삼엑기스가 피부결체조직의 콜라겐이 활성산소에 의해 파괴되는 작용을 억제한다고 보고하였고, 그효과는 비사포닌 분획의 제거작용에 의한 것이라 구명하였다.
- 89ng/m/수준으로 대조군에 비하여 6-8%의 저해활성을 나타내었다. Ginsenoside-Rbr과 Ginsenoside-Rgee 각각 91%와 78%의 활성을 나타내어 Ginsenoside 중에서는 Triol 계인 R&에 비하여 diol계인 Rb]의 경우에 저해활성이 높은 것으로 나타났다. 자외선 등의 유해요인은 활성산소종을 발생시켜 다수의 신호 전달체 계 를 활성 화시 킴 으로써 activator protein-1 (AP-1) 과 nuclear factor kB (NF-kBX 활성화시켜 염증반응과 함께 교원질을 분해하는 matrix metalloproteinase 효소들의 작용을 증가시키는 것으로 알려져 있다'% Human fibroblast 에서 UV에 의해 유도된 MMP-1의 발현을 감소시키는 물질로 EPA가 알려져 있으며20), 이 등id 은 홍삼이 자외선B를 조사시킨 마우스에서 피부손상을 억제하는 효과가 있었고 피부에 도포했을 때 보다 복강 내 투여했을 때 그 효과가 뚜렷하였다고 보고하여 식품의 섭취에 의한 피부노화 예방 효과를 기대할 수 있을 것으로 예상되며 홍삼에서 MMP-1 의 활성을 억제하는 성분에 관한 연구는 앞으로 진행되어야 할 과제라 생각된다.
- 홍삼 시료들을 1μg/ml, 5pig/ml, 10 의 농도로 첨가하여 MMP-1 저해 활성을 측정한 결과는 그림 2와 같다. 대조군으로 사용된 TNF-a의 경우 13.75ng/m/이었고 홍삼 물엑기스는 MMP-1의 작용에 대한 억제효과가 미약했으며, 10 μg/ml의 농도에서 홍삼 주정추출 엑기스는 12.61 ng/m/, 주정정제엑기스는 12.89ng/m/수준으로 대조군에 비하여 6-8%의 저해활성을 나타내었다. Ginsenoside-Rbr과 Ginsenoside-Rgee 각각 91%와 78%의 활성을 나타내어 Ginsenoside 중에서는 Triol 계인 R&에 비하여 diol계인 Rb]의 경우에 저해활성이 높은 것으로 나타났다.
- 홍삼 시료는 l(ig/ml, 5 10 |ig/ml 의 농도로 첨가하여 fibroblast를 배양하였다. 물 추출 엑기스는 콜라겐 생성에 영향을 미치지 못했으나 10 ㎍/㎖의 농도를 기준으로 할 때 주정추출엑기스는 2.05 ㎍/㎖, 주정정제엑기스는 2.58 ㎍/㎖로 대조군의 110%, 138 %의 증가율을 나타내었다. Ginsenoside-Rg]은 2.
- 이 등I。은 홍삼Ext가 자외선 조사에 의한 마우스의 피부손상을 감소시켰으며 이는 항산화 작용에 의한 것이라 보고하였으며, 김 등21)은 홍삼의 사포닌류를 대상으로 간조직에 대한 항산화 활성을 조사하였을 때 Compound K가 가장 높았고 PT 보다 PD가 높았다고 보고하였다. 본 실험에서는 물추출물에서 더 높은 것으로 나타나 사포닌보다는 수용성 갈변물질 등에 의하여 항산화 효과가 나타난 것으로 생각된다.
- 죽은 세포에서는 반응이 일어나지 않으므로 이 Formazan의생성량은 생 세포 측정에 이용된다IQ 홍삼 시료의 Human normal fibroblast 세포에 대한 독성여부를 조사하여 실험에사용할 농도 범위를 결정하기 위하여 세포에 홍삼 시료를 처리한 후 serum free 상태로 세포를 배양하여 세포의 viability와 proliferation을 측정하였으며 그 결과는 그림 3과 같다. 사용된홍삼 시료는 1-10 ug/ml 농도에서 대조군에 비하여 84%-96% 의 세포 생존율을 나타내어 세포 증식에 독성을 나타내지 않는것으로 나타났다. 이 등$은 홍삼이 세포자기사멸에 영향을 주는 Bcl-2를 일정하게 유지함으로써 자외선으로 유발되는 피부각질 세포의 자기사멸로 부터 보호해주는 역할을 한다고 보고하였으며, 본 실험의 결과에서도 세포 증식 억제율이 매우 낮아서 홍삼추출물이 Human normal fibroblast 세포증식에 대한독성을 나타내지 않는다는 것을 확인할 수 있었다.
- 07㎍/㎖/로서 대조군의 112%, 165%의 증가율을 나타내었으며 R0의 경우 retinoic acid 보다 더 높았다. 이상의 결과에서 홍삼은 사포닌 함량이높을 때 콜라겐 생성량이 증가하며 사포닌 중에서는 triol계사포닌인 R/에 비하여 diol계 사포닌인 Rbi에서 증가율이높았으므로 홍삼 성분 중 Ginsenoside-Rb]이 섬유아세포의콜라겐 생합성에 더 많은 영향을 주는 것으로 판단된다.
- 조사포닌 함량은 물엑기스의 경우 70mg/g이었으며, 주정추출 엑기스가 107mg/g이었고, 주정추출 엑기스를 88%주정으로 정제하였을 때 220 mg/g로 증가하였다.
후속연구
- Ginsenoside-Rbr과 Ginsenoside-Rgee 각각 91%와 78%의 활성을 나타내어 Ginsenoside 중에서는 Triol 계인 R&에 비하여 diol계인 Rb]의 경우에 저해활성이 높은 것으로 나타났다. 자외선 등의 유해요인은 활성산소종을 발생시켜 다수의 신호 전달체 계 를 활성 화시 킴 으로써 activator protein-1 (AP-1) 과 nuclear factor kB (NF-kBX 활성화시켜 염증반응과 함께 교원질을 분해하는 matrix metalloproteinase 효소들의 작용을 증가시키는 것으로 알려져 있다'% Human fibroblast 에서 UV에 의해 유도된 MMP-1의 발현을 감소시키는 물질로 EPA가 알려져 있으며20), 이 등id 은 홍삼이 자외선B를 조사시킨 마우스에서 피부손상을 억제하는 효과가 있었고 피부에 도포했을 때 보다 복강 내 투여했을 때 그 효과가 뚜렷하였다고 보고하여 식품의 섭취에 의한 피부노화 예방 효과를 기대할 수 있을 것으로 예상되며 홍삼에서 MMP-1 의 활성을 억제하는 성분에 관한 연구는 앞으로 진행되어야 할 과제라 생각된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.