선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 따라서, 본 연구에서는 파고지 추출물의 안전성을 평가하기 위해 렛트에 대한 단회 경구 투여 독성 평가 및 복귀돌연변이 시험을 '식품의약품 등의 독성시험기준' (식품의약품안전청고시 제 2005-60호)에 따라 수행함으로써 기능성식품소재로서 파고지 추출물의 안전성 여 부를 평가하고자 수행하였다.
- 따라서본 실험에서는 파고지 종자로부터의 유효성분이 과량 함유된 에탄올 추출물의 안전성 평가를 수행하였다.
제안 방법
- 균의 생육저해 및 시험물질의 침전, 분출의 관찰은 육안 및 실체현미경으로 실시하였다. Colony는 colony counter 위 에서 background lawn보다큰 colony를 계산하였으며, 복귀돌연변이 시험 결과의 판정은 복귀돌연변이 colony수가 음성대조군의 2배 이상이며, 용량 의존적으로 증가하고 재현성을 관찰하여 모든 만족할때 복귀변이 유발능 양성으로 판정하였다.
- 본실험전 개시용량을 결정하기 위해 non-GLP 시험을 실시하였다. SIM] 6주령 렛트 암, 수 각각 2마리를 약 16시간 동안음수를 자유섭취시키면서 시험계를 절식시킨 후 2, 000 mg/5 mL/kg을 위내에 단회 강제 경구투여하여 약 4시간 후 사료를 급여한 결과, 사망례가 발생하지 않았고 정상적 체중 증가와 특이한 일반 증상이 관찰되지 않아 본 시험 에서 개시용량을 2, 000 mg/5 mL/kg으로 설정하였다. 모든 시험계는투여 전에 약 16시간 동안 음수는 자유섭취시키면서 절식시킨 후, 개체별 2, 000 mg厉 mL/kg 용량의 시료를 위내에 단회강제 경구투여하였고, 투여 후 약 4시간 후에 사료를 급여하였으며 이 때 대조군은 부형제인 옥수수유를 투여하였다.
- Salmonella Typhimurium을 이용한 복귀돌연변이 시험은 in I戒m에서 돌연변이 물질 검색법으로 가장 널리 사용호卜 고 있는 방법으로 본 실험에서는 S. Typhimurium TA98, 100, 1535, 1537 균주와 E. coll WP2uvrA(pKM101) 균주에대한 파고지 분말의 돌연변이 원성을 실험 하였다(Table 4). 시험물질의 석출은 S9 mix 첨가 여부에 관계없이 사용한모든 시 험균주의 1, 250, 2, 500 및 5, 000 ug/plate에서 관찰되었지만 콜로니 계수에는 영향이 없었다.
- 파고지 종자 건조 시료 15 g을 정확히칭량하여 추출용기 에 옮기고 80% 에탄올 150 mL를 첨가한후 환류 냉각장치를 이용하여 95°C에서 4시간 추출하였다. 각 시료의 에탄올 추출물은 여과지 (Whatman No. 2, UK) 상에서 여과한 후 감압농축하여 에탄올을 제거하고 동결건조하여 제조하였다.
- 각각 조제하였다. 각각의 시험물질액 500 虬에 S9 mix 미첨가군은 0.1 M/L 인산완충액 (pH 7.4) 500 卩1僱■, S9 mix 첨가군은 S9 mix 500 虬를, 이미 건열 멸균된시험관에 넣고, 균현탁액 100 11L를 첨가하여, 37°C 진탕배양기에서 20분간 배양한 다음, 45°C에서 용해한 top agar 2 mL를 첨가하여 잘 혼합한 후 변이원성 검색용 배지 위에중층하여 고정된 후 37°C, 48시간 동안 배양하여 복귀변이성콜로니 수를 계측하였다. 균의 생육저해 및 시험물질의 침전, 분출의 관찰은 육안 및 실체현미경으로 실시하였다.
- 4) 500 卩1僱■, S9 mix 첨가군은 S9 mix 500 虬를, 이미 건열 멸균된시험관에 넣고, 균현탁액 100 11L를 첨가하여, 37°C 진탕배양기에서 20분간 배양한 다음, 45°C에서 용해한 top agar 2 mL를 첨가하여 잘 혼합한 후 변이원성 검색용 배지 위에중층하여 고정된 후 37°C, 48시간 동안 배양하여 복귀변이성콜로니 수를 계측하였다. 균의 생육저해 및 시험물질의 침전, 분출의 관찰은 육안 및 실체현미경으로 실시하였다. Colony는 colony counter 위 에서 background lawn보다큰 colony를 계산하였으며, 복귀돌연변이 시험 결과의 판정은 복귀돌연변이 colony수가 음성대조군의 2배 이상이며, 용량 의존적으로 증가하고 재현성을 관찰하여 모든 만족할때 복귀변이 유발능 양성으로 판정하였다.
- 시험물질의 석출은 S9 mix 첨가 여부에 관계없이 사용한모든 시 험균주의 1, 250, 2, 500 및 5, 000 ug/plate에서 관찰되었지만 콜로니 계수에는 영향이 없었다. 따라서 본 시험의용량은 S9 mix 미첨가 TA100, TA1537 균주 및 S9 mix 첨가 TA1535 균주의 경우에는 생육저해가 관찰된 625 pg/plate 를, S9 mix 첨가 여부에 관계없이 TA98 균주 및 S9 mix 첨가군 TA100, TA1537, WP2uurA(pKM101) 균주의 경우에는 생육저해가 관찰된 1, 250 卩g/plate를, S9 mix 미첨가군의 TA1535 및 WP2uvrA(pKM101) 균주의 경우에는 2, 500 lig/plate를 최고용량으로 하여, 그 이하 공비 2로 최고용량을 포함한 용량의 시험물질군과 음성대조군 및 양성대조군으로 실시하였다. 그 결과, 모든 시험균주에서 시험물질에의한 복귀변이 콜로니수는 S9 mix 첨가 여부에 관계없이용량의 존적으로 증가되지 않았으며 , 음성 대조군과 비교하여 2배 이상의 증가를 보이지 않았다(Table 5).
- 시험물질의 석출은 S9 mix 첨가 여부와 상관없이 사용한모든 시험균주의 1, 250, 2, 500 및 5, 000 卩g/plate에서 관찰되었지만 콜로니 계수에는 영향이 없었다. 따라서, 본 시험의용량은 S9 mix 미첨가 TA100, TA1537 균주 및 S9 mix 첨가 RA1535 균주의 경우에는 생육저해가 관찰된 625 yg/plate 를, S9 mix 첨가 여부에 관계없이 TA98 균주 및 S9 mix 첨가 TA100, TA1537, WP2uurA(pKM101) 균주의 경우에는 생육저해가 관찰된 1, 250 pg/plate를, S9 mix 미첨가의 TA1535 및 WP2urrA(pKM101) 균주의 경우에는 2, 500 pg/ plate를 최고용량으로 하였고, 그 이하 공비 2로 최고용량을포함한 5용량의 시험물질군과 음성대조군 및 양성대조군으로 하여 실험을 실시하였다. 그 결과, 모든 시험균주에서 시험물질에 의한 복귀변이 콜로니수는 S9 mix의 첨가 여부에관계 없 이 용량의 존적 으로 증가되 지 않았으며 , 음성 대 조군과 비교하여 2배 이상의 증가를 보이지 않았다.
- SIM] 6주령 렛트 암, 수 각각 2마리를 약 16시간 동안음수를 자유섭취시키면서 시험계를 절식시킨 후 2, 000 mg/5 mL/kg을 위내에 단회 강제 경구투여하여 약 4시간 후 사료를 급여한 결과, 사망례가 발생하지 않았고 정상적 체중 증가와 특이한 일반 증상이 관찰되지 않아 본 시험 에서 개시용량을 2, 000 mg/5 mL/kg으로 설정하였다. 모든 시험계는투여 전에 약 16시간 동안 음수는 자유섭취시키면서 절식시킨 후, 개체별 2, 000 mg厉 mL/kg 용량의 시료를 위내에 단회강제 경구투여하였고, 투여 후 약 4시간 후에 사료를 급여하였으며 이 때 대조군은 부형제인 옥수수유를 투여하였다. 투여 량에 따른 실험군의 구성은 Table 1과 같다.
- 실험동물용 고형 사료와 음수는 자유섭취토록 하였다. 본실험전 개시용량을 결정하기 위해 non-GLP 시험을 실시하였다. SIM] 6주령 렛트 암, 수 각각 2마리를 약 16시간 동안음수를 자유섭취시키면서 시험계를 절식시킨 후 2, 000 mg/5 mL/kg을 위내에 단회 강제 경구투여하여 약 4시간 후 사료를 급여한 결과, 사망례가 발생하지 않았고 정상적 체중 증가와 특이한 일반 증상이 관찰되지 않아 본 시험 에서 개시용량을 2, 000 mg/5 mL/kg으로 설정하였다.
- 투여 량에 따른 실험군의 구성은 Table 1과 같다. 시료 투여당일은 투여 후 30분, 1, 2, 4, 6시간째에 일반상태, 운동성및 배설물 등 일반증상을 관찰하였고, 그 다음날부터 매일 1회 이상 일반증상 및 동물의 사망 유 . 무를 관찰하였다.
- 시험물질의 조제는 시험물질용액, 음성대조물질용액, 양성대조물질용액을 각각 조제하였다. 각각의 시험물질액 500 虬에 S9 mix 미첨가군은 0.
- 용량설정시험은 최고용량을 5, 000 ug/plate로 설정하고그 이하 공비 2로 최고용량을 포함한 5단계 용량군(312.5, 625, 1, 250, 2, 500, 5, 000 ug/plate)을 설정하였고, S9 mix의첨가 여부와 균주의 종류에 따라 시험물질군의 최고 용량을설정하였다.
- 천연생리활성물질 소재로서 파고지 추출물의 안전성을검증하기 위하여 렛트에 대한 단회 경구투여 독성 평가와복귀돌연변이 평가를 실시하였다. 파고지 에탄올 추출분말 2 g/kg, 5 mL를 암.
- 무를 관찰하였다. 체중은 투여 당일에 투여직전, 투여 후 3, 7일 및 부검일에 측정하였고 관찰기간 종료 후 생존 동물에 대하여 부검을 통한육안관찰로 부위별 장기를 검사하였다.
- 수 각각 5마리씩 경구 투여한 후 14일동안의 일반증상, 체중변화 및 부검시의 육안적 소견을 관찰한 결과, 사망례, 일반증상 및 체중변화는 관찰되지 않았고부검결과에서도 특이할 만한 육안적 이상소견은 관찰되지않아, 파고지 추출물은 LDso값이 렛트 체중 kg당 2 g 이 상이며 단회 경구 투여에 대한 독성을 가지는 않는 것으로 평가되었다. 파고지 추출분말의 복귀돌연변이 유발성 여부는, 히스티딘 요구성 Salmonella Typhimurium TA98, TA100, TA1535, TA1537 균주 및 트립 토판 요구성 Escherichia coli WP2uurA(pKM101) 균주를 이용하여 S9 mix 첨가 여부에따라 실험하였다. 용량설정시험 결과, S9 mix 첨가 여부에관계없이 사용한 모든 시험균주에서 생육저해가 관찰되었다.
대상 데이터
- Aroclor 1254를 이용해서 효소유도된 Sprague-Dawley rat 의 간균질액으로부터 유래된 S9 mix는 Molecular Toxicology, Inc.(Boone, NC, USA)로부터 구입하여 사용하였다.
- Inc.(Boone, NC, USA)에서 분양받아 각 시 험균주의유전적 특성을 확인한 후 사용하였다. 시험균주는 각각 20 mL 액체 배지 (2.
- corylifolia L.) 종자는 경기도 성남시 모란시장에 위치한 약재상에서구입하여 사용하였다. 파고지 종자 건조 시료 15 g을 정확히칭량하여 추출용기 에 옮기고 80% 에탄올 150 mL를 첨가한후 환류 냉각장치를 이용하여 95°C에서 4시간 추출하였다.
- 0 g) 각각 10마리를 ORIENTBIO INC(서울, 한국에서 분양 받아 사용하였다. 렛트는 온도 22.1±1.8°C, 상대습도 52.5±16.1%, 조도 150 -300 Lux의 사육실에서 사육하였으며 사육밀도는 각각의 스테인레스 철망사육상자 (260WX350DX210H mm, MJ Ltd.)에 1마리씩 수용하였다. 실험동물용 고형 사료와 음수는 자유섭취토록 하였다.
- 제 2005-60호)에 따라 실시하였다. 실험 rat는 Sprague-Dawley(SD)계로 5주령의 수컷(98.5±4.1 g)과 암컷 (102.6 ±10.0 g) 각각 10마리를 ORIENTBIO INC(서울, 한국에서 분양 받아 사용하였다. 렛트는 온도 22.
이론/모형
- 시 험 방법: 시 험 방법 은 Ames test를 개 량한 pre-in- cubation 방법 (12)으로 수행하였고, S9 mix 첨가, 미 첨가군으로 구분하여 실시하였다.
- 시험방법은 식품의약품 등의 독성시험기준(식품의약품안전청고시 제 2005-60호)에 따라 실시하였다. 실험 rat는 Sprague-Dawley(SD)계로 5주령의 수컷(98.
성능/효과
- 따라서, 본 시험의용량은 S9 mix 미첨가 TA100, TA1537 균주 및 S9 mix 첨가 RA1535 균주의 경우에는 생육저해가 관찰된 625 yg/plate 를, S9 mix 첨가 여부에 관계없이 TA98 균주 및 S9 mix 첨가 TA100, TA1537, WP2uurA(pKM101) 균주의 경우에는 생육저해가 관찰된 1, 250 pg/plate를, S9 mix 미첨가의 TA1535 및 WP2urrA(pKM101) 균주의 경우에는 2, 500 pg/ plate를 최고용량으로 하였고, 그 이하 공비 2로 최고용량을포함한 5용량의 시험물질군과 음성대조군 및 양성대조군으로 하여 실험을 실시하였다. 그 결과, 모든 시험균주에서 시험물질에 의한 복귀변이 콜로니수는 S9 mix의 첨가 여부에관계 없 이 용량의 존적 으로 증가되 지 않았으며 , 음성 대 조군과 비교하여 2배 이상의 증가를 보이지 않았다. 시험물질에의한 균주의 생육저해는 S9 mix 첨가 여부에 관계없이 사용한 모든 시험균주의 최고용량에서 관찰되었다.
- 따라서 본 시험의용량은 S9 mix 미첨가 TA100, TA1537 균주 및 S9 mix 첨가 TA1535 균주의 경우에는 생육저해가 관찰된 625 pg/plate 를, S9 mix 첨가 여부에 관계없이 TA98 균주 및 S9 mix 첨가군 TA100, TA1537, WP2uurA(pKM101) 균주의 경우에는 생육저해가 관찰된 1, 250 卩g/plate를, S9 mix 미첨가군의 TA1535 및 WP2uvrA(pKM101) 균주의 경우에는 2, 500 lig/plate를 최고용량으로 하여, 그 이하 공비 2로 최고용량을 포함한 용량의 시험물질군과 음성대조군 및 양성대조군으로 실시하였다. 그 결과, 모든 시험균주에서 시험물질에의한 복귀변이 콜로니수는 S9 mix 첨가 여부에 관계없이용량의 존적으로 증가되지 않았으며 , 음성 대조군과 비교하여 2배 이상의 증가를 보이지 않았다(Table 5). 시험물질에의한 균주의 생육저해는 S9 mix 첨가 여부에 관계없이 사용한 모든 시험균주의 최고용량에서 관찰되었다.
- 본 실험에서 파고지 추출물을 렛트에 경구 투여한 결과, 관찰기간 동안 암.수 대조군 및 시험 물질 투여군(투여용량 2 g/kgBW)에서 사망례는 관찰되지 않았고(Table 2), 순조로운 체중 증가가 관찰되었으며 파고지 추줄물 투여 여부에따른 유의적 인 차이가 관찰되지는 않았다(Fig.
- 독성 에서 치사량은 암 . 수 2000 mg/kg 이상이며 복귀돌연변이시험 결과, 돌연변이 유발 가능성이 없는 것으로 평가되었다. 그러나 안전성 평가는 단회경구투여독성평가와 in vitro 유전독성시험 외에도 반복투여독성시험, 생식 및 발생독성시험 , 면역독성시험 , 발암성시험, 의존성 시험, 국소독성시험 등 다양한 방법에 의해 검증되고 있으며 따라서 파고지추출물에 대한 안전성 역시 추가적인 안전성 검증이 이루어진다면 기능성 소재로서의 안전성을 명확하게 밝힐 수 있을것이다.
- 파고지 에탄올 추출분말 2 g/kg, 5 mL를 암.수 각각 5마리씩 경구 투여한 후 14일동안의 일반증상, 체중변화 및 부검시의 육안적 소견을 관찰한 결과, 사망례, 일반증상 및 체중변화는 관찰되지 않았고부검결과에서도 특이할 만한 육안적 이상소견은 관찰되지않아, 파고지 추출물은 LDso값이 렛트 체중 kg당 2 g 이 상이며 단회 경구 투여에 대한 독성을 가지는 않는 것으로 평가되었다. 파고지 추출분말의 복귀돌연변이 유발성 여부는, 히스티딘 요구성 Salmonella Typhimurium TA98, TA100, TA1535, TA1537 균주 및 트립 토판 요구성 Escherichia coli WP2uurA(pKM101) 균주를 이용하여 S9 mix 첨가 여부에따라 실험하였다.
- 그 결과, 모든 시험균주에서 시험물질에의한 복귀변이 콜로니수는 S9 mix 첨가 여부에 관계없이용량의 존적으로 증가되지 않았으며 , 음성 대조군과 비교하여 2배 이상의 증가를 보이지 않았다(Table 5). 시험물질에의한 균주의 생육저해는 S9 mix 첨가 여부에 관계없이 사용한 모든 시험균주의 최고용량에서 관찰되었다. 시험물질의석출은 S9 mix 첨가 여부에 관계없이 1, 250 및 2, 500 pg/ plate에서 관찰되었지만 콜로니 계수에는 영향이 없었다.
- 시험물질에의한 균주의 생육저해는 S9 mix 첨가 여부에 관계없이 사용한 모든 시험균주의 최고용량에서 관찰되었다. 시험물질의석출은 S9 mix 첨가 여부에 관계없이 1, 250 및 2, 500 pg/ plate에서 관찰되었지만 콜로니 계수에는 영향이 없는 것으로 나타났다.
- 1). 실험 완료후 부검하여 뇌, 신장, 심장, 폐, 간, 위, 장, 정소, 난소 등의장기를 관찰한 결과, 유의할만한 특이한 소견이 관찰되지않아 파고지 추출물은 LD50값이 렛트 체중 kg당 2 g 이상이며 단회 경구 투여에 대한 독성을 가지는 않는 것으로 평가되었다(Table 3).
- 파고지 추출분말의 복귀돌연변이 유발성 여부는, 히스티딘 요구성 Salmonella Typhimurium TA98, TA100, TA1535, TA1537 균주 및 트립 토판 요구성 Escherichia coli WP2uurA(pKM101) 균주를 이용하여 S9 mix 첨가 여부에따라 실험하였다. 용량설정시험 결과, S9 mix 첨가 여부에관계없이 사용한 모든 시험균주에서 생육저해가 관찰되었다. 시험물질의 석출은 S9 mix 첨가 여부와 상관없이 사용한모든 시험균주의 1, 250, 2, 500 및 5, 000 卩g/plate에서 관찰되었지만 콜로니 계수에는 영향이 없었다.
- 시험물질의석출은 S9 mix 첨가 여부에 관계없이 1, 250 및 2, 500 pg/ plate에서 관찰되었지만 콜로니 계수에는 영향이 없었다. 한편 양성대조 물질로 사용된 sodium azide(SA), 9-amino- acridine®-AA), 2-aminoanthracene(2-AA) 및 2-amino- fluorene(AF-2)을 투여한 균주는 파고지 추출물 처리군 및음성대조군에 비해 복귀돌연변이 콜로니수가 2배 이상 증가하여 양성으로 나타났다.
후속연구
- 수 2000 mg/kg 이상이며 복귀돌연변이시험 결과, 돌연변이 유발 가능성이 없는 것으로 평가되었다. 그러나 안전성 평가는 단회경구투여독성평가와 in vitro 유전독성시험 외에도 반복투여독성시험, 생식 및 발생독성시험 , 면역독성시험 , 발암성시험, 의존성 시험, 국소독성시험 등 다양한 방법에 의해 검증되고 있으며 따라서 파고지추출물에 대한 안전성 역시 추가적인 안전성 검증이 이루어진다면 기능성 소재로서의 안전성을 명확하게 밝힐 수 있을것이다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.