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문제 정의
- 따라서 연구에서는 고부가가치의 생리기능을 갖는 구기 자제품을 개발하고 시판 제품들의 품질을 개선하기 위하여 구기자 열매와 잎을 이용하여 제조된 시판 구기자 가공품들 추출물과 메탄올 추출물을 제조하여 생리기능성을 정하여 비교하였고, 항고혈압 활성이 우수한 구기자 가공품 대하여 in vivo 실험을 실시하여 효능을 구기자 열매의 능과 비교하였다.
제안 방법
- 구기자 가공품과 구기자 열매들을 동결건조하여 분말화한 후 다음과 같이 추출물을 제조하였다. 즉, 각각의 분말에 10 배의 증류수를 가한 후 50C에서 150 rpm으로 24시간 동안 진탕한 후 이 추출액을 원심분리(15,00010 min)하여 싱징 액을 얻고 Whatman No.
- 이와 같이 추출한 시료를 HMG-CoA reductase 저해활성 측정 에는 100 μg을 사용하였고, 여타의 생리 기능성 측정에는 1 mg을 사용하였다. 구기자 액상차와 엑기스 및 구기자 술은 농축시켜 그대로 시료로 사용하였다.
- 5 mg을 EtOH 100 에 용해) 800 를 가한 후 10분간 반응시키고 525 nm에서 흡광도를 측정하여 시료 무첨가 대조구와 활성을 비교하였다. 또한 SCD유사활성은 Markland와 Marklui서의 방법을 이용하여 먼저 농축 시료액 20 에 55 mM Tris-cacodylic acid 완충용액(TCB, pH 8.2)를 가하여 균질화하고 원심분리하여 얻은 상징 액을 pH 8.2로 조정 한 후 TCB를 사용하여 50 로 조정하여 시료액으로 사용하였다. 시료액 950 에 50 24 mM pyrogallol's 첨가하여 420 ran에서 초기 2분간의 흡광도 증가율을 측정하여 시료액 무첨가 대조구와 비교하여 활성을 계산하였다.
- 또한 분말시료에 100%의 메탄올을 10배의 비율로 첨가하여 50℃에서 150 rpm으로 24시간 동안 진탕한 후 원심 분리 (15, 000xg/10 min)하여 상징액을 얻고, 이를 Whatman No. 2 로 여과한 후 rotary vacuum evaporator(EYELzA, Rotary vacuum evaporator N-N series, Tokyo, Japan)로 유기용매를 제거한 다음 동결 건조(Operon, Gimpo, Korea)하여 메탄올 주줄 시료로 하였다(Fig. 1). 이와 같이 추출한 시료를 HMG-CoA reductase 저해활성 측정 에는 100 μg을 사용하였고, 여타의 생리 기능성 측정에는 1 mg을 사용하였다.
- 이 값을 이용하여 다음과 같이 억제활성을 계산하였다. 또한, HMG-CoA 대신 증류수를 가한 blank 실험도 동시에 수행하였다.
- 본태성 고혈압 쥐(6 weeks, male) kg 당 500 mg의 시료를 21 일간 경구투여하고, 7일 간격으로 3회 IWX/114 혈압기(Harvard Co. USA)로 협압을 5회 반복 측정한 후 평균하여 혈압의 변화를 조사하여 시료대신 생리식염수 500 #를 투여한대 조 군과 비교하였다152?
- 새로운 고부가가치의 구기자 가공품을 개발하기 위하여 구기자 가공품들의 물 추출물과 메탄올 추출물을 제조한 후 생리 기능성을 조사하여 구기자 열매와 비교하고 항고혈압 활성이 우수한 것으로 나타난 구기자 가공품들에 대하여 본태성고혈압 쥐 (SHR)를 이용하여 이들의 항고혈압 활성을 검증하였다. 구기자 가공품들의 생리기능성 중, 항산화 활성은 구기자 나물의 메탄올 추출물이 977%로 가장 높았고, 항고혈압성안지오텐신 전환효소 저해활성은 구기자 된장의 물 추출물에서 80.
- 2로 조정 한 후 TCB를 사용하여 50 로 조정하여 시료액으로 사용하였다. 시료액 950 에 50 24 mM pyrogallol's 첨가하여 420 ran에서 초기 2분간의 흡광도 증가율을 측정하여 시료액 무첨가 대조구와 비교하여 활성을 계산하였다.
- 5에 300 mM NaCl과 25 mg HipHs-Leu을 용해) 50 와 섞은 후 37℃에서 30분간 반응시킨 다음 1 N HC1 로 반웅을정지시켰다. 이 반응액에 유리되어 나오는 hippuric acid의 양을 228 nm에서 흡광도를 측정하여 산출하였고, 시료 무 첨가 구를 대조구로 하여 저해율을 구하였다⑸
- 다음과 같이 추출물을 제조하였다. 즉, 각각의 분말에 10 배의 증류수를 가한 후 50C에서 150 rpm으로 24시간 동안 진탕한 후 이 추출액을 원심분리(15,00010 min)하여 싱징 액을 얻고 Whatman No. 2로 여과한 다음 동결 건조(Operon, Ginpo, Korea)하여 물 추출 시료로 하였다.
- 즉, 시료 200 에 DPPH 용액 (DPPH 12.5 mg을 EtOH 100 에 용해) 800 를 가한 후 10분간 반응시키고 525 nm에서 흡광도를 측정하여 시료 무첨가 대조구와 활성을 비교하였다. 또한 SCD유사활성은 Markland와 Marklui서의 방법을 이용하여 먼저 농축 시료액 20 에 55 mM Tris-cacodylic acid 완충용액(TCB, pH 8.
대상 데이터
- 구기자 가공품들은 2007년 충남 청 양군내 소재하고 있는 구기자 가공공장에서 2007년도에 생산하여 시판되고 있는 P 농원의 칠갑산 구기자나물, Y고을의 구기자 엿, C한과의 구기자 한과, H떡집의 구기자 가래떡, G보양원의 구기자 된장, G랜드의 고추장과 청국장 가루분, C식품의 구기자 액상차, C 농협의 다림차와 엑기스와 C구기주의 전통구기주 등을 구입하여 시료로 사용하였다. 대조구로 구기자 열매는 2007년 3월에 청양 구기자 시험장에서 재배하여 보관중인 명안을 사용하였다.
- 시료로 사용하였다. 대조구로 구기자 열매는 2007년 3월에 청양 구기자 시험장에서 재배하여 보관중인 명안을 사용하였다.
- 생리기능성 즉정용 시약과 효소로는 Hip-His-Leu과 angiotensin- I converting enzyme(ACE: rabbit lung acetone powder), fibrin, 1, 1-diphenyl- 2-picryhydrazyl(DPPH) 등은 Sigma(Sigma, MO, US A)사 제품을 사용하였고, HMG-CoA reductase 는 Purue 대학으로부터 분양받은 pKFT7-21 plasmid를 E coli BL 21(DE3)에 형질전환시킨 후 배양하여 사용하였으며, 그 밖의 시약은 분석용 특급을 사용하였다.
이론/모형
- 또한, 고지혈증 예방에 연관된 HMG-CoA reductase 저해 활성은 Kleinsek 등의 방법°)을 사용하여 다음과 같이 측정하였다. 증류수에 10 #로 녹인 각 시료 추출물 10 # (controle 시료 대신 D.
- 전자 공여력은 1, 1 -diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)^| 환원력을 이용하는 Blois⑺와 Lee 등의 방법으로 측정하였다. 즉, 시료 200 에 DPPH 용액 (DPPH 12.
성능/효과
- SOD-유사활성은 구기자 나물의 메탄올 추출물이 33.6% 을 보였을 뿐 대체로 낮은 활성을 보였으나, 항산화 활성은 구기자 엑기스가 87.7%로 제일 높았고 다림차도 66.4%로 높았다.
- 구기자 가공품들의 생리기능성 중, 항산화 활성은 구기자 나물의 메탄올 추출물이 977%로 가장 높았고, 항고혈압성안지오텐신 전환효소 저해활성은 구기자 된장의 물 추출물에서 80.4%로 높았다. 항고지 혈성 HMG-CoA reductase 저해 활성은 구기자 잎 가래떡의 메탄올 추출물에서 66.
- 4%로 제일 높았는데, 이는 구기자와 이미 항고혈압 활성이 알려진 콩”)과의 복합효과로 보인다. 대조구인 구기자 열매의 물 추출물도 78.5%로 매우 높았고 구기자 청국장 가루분말과 구기자 액상차, 구기자 술 등에서도 65% 이상의 비교적 높은 항고혈압 활성을 보였다.
- 먼저 고혈압 쥐 (SHR)의 사육기간에 따른 체중변화를 조사한 결과 구기자 가공품들을 식이했을 때 사육일수가 진행됨에 따라 특별한 생리적 이상없이 정상적으로 사육되었다 (Table 2). 한편, 구기자 가공품들의 항고혈압 활성을 검증한 결과 Table 3과 같이 대체로 구기자 열매와 가공품 추출물들의 경구투여 시 고혈압 쥐의 혈압이 낮아졌고, 특히 구기자 열매 추출물은 183.
- 시판 구기자 가공품들의 각종 추출물들에 대한 생리 기능성을 측정하여 구기자 열매와 비교한 결과, Table 1과 같이 항 고혈압성 ACE저해활성은 구기자 된장의 물 추출물에서 80.4%로 제일 높았는데, 이는 구기자와 이미 항고혈압 활성이 알려진 콩”)과의 복합효과로 보인다. 대조구인 구기자 열매의 물 추출물도 78.
- 2). 한편, 구기자 가공품들의 항고혈압 활성을 검증한 결과 Table 3과 같이 대체로 구기자 열매와 가공품 추출물들의 경구투여 시 고혈압 쥐의 혈압이 낮아졌고, 특히 구기자 열매 추출물은 183.9 niinHg에서 경구투여 9일 후 145.4 mmH晅로낮아져서 혈압 강하 효과가 우수하였다.
- 4%로 높았다. 항고지 혈성 HMG-CoA reductase 저해 활성은 구기자 잎 가래떡의 메탄올 추출물에서 66.1%로 높았다 그러나 SOD-유사활성은 대체로 30% 미만으로 미약하였고 혈전 용해 활성도 없거나 매우 미약하였다. 항고혈압성 ACE 저해활성이 우수했던 구기자 액상차와 구기자 술의 항고혈압 활성을 SHR을 이용하여 검증한 후 구기자 열매의 결과와 비교하였을 때 구기자 가공품들 모두 혈압 강하 효과가 있었지만 구기자 열매가 더 우수한 혈압 강하 효과를 나타내었다.
- 항고지혈성 HMG-CoA 환원효소 저해활성은 구기자 잎 가래떡의 메탄올 추출물이 66.1%로 제일 높은 활성을 보였으나, 여타의 시료에서도 없거나 30% 미만의 낮은 활성을 보였다.
- 1%로 높았다 그러나 SOD-유사활성은 대체로 30% 미만으로 미약하였고 혈전 용해 활성도 없거나 매우 미약하였다. 항고혈압성 ACE 저해활성이 우수했던 구기자 액상차와 구기자 술의 항고혈압 활성을 SHR을 이용하여 검증한 후 구기자 열매의 결과와 비교하였을 때 구기자 가공품들 모두 혈압 강하 효과가 있었지만 구기자 열매가 더 우수한 혈압 강하 효과를 나타내었다.
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