자연산 산삼, 산양삼 및 인삼의 항산화능 비교연구 A study on the comparison of antioxidant effects among wild ginseng, cultivated wild ginseng, and cultivated ginseng extracts원문보기
Objective: The objective of this study was to compare the antioxidant effects among wild ginseng, cultivated wild ginseng, and ginseng extracts. Methods: In vitro antioxidant activities were examined by total antioxidant capacity (TAC), oxygen radical scavenging capacity(ORAC), total phenolic conten...
Objective: The objective of this study was to compare the antioxidant effects among wild ginseng, cultivated wild ginseng, and ginseng extracts. Methods: In vitro antioxidant activities were examined by total antioxidant capacity (TAC), oxygen radical scavenging capacity(ORAC), total phenolic content, 1, 1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity, inhibition of induced lipid peroxidation using liver mitochondria, reactive oxygen species(ROS) scavenging effect using 2', 7'-dichlorofluorescein(DCF) fluorescence. Results: 1. TAC of 1.5 and 3.75 mg extracts was highest in cultivated wild ginseng, followed by wild ginseng and lowest in ginseng. 2. ORAC of 2, 10, and $20{\mu}g$ extracts was highest in cultivated wild ginseng, followed by wild ginseng and lowest in ginseng. 3. Total phenolic content of 0.375, 0.938, and 1.875 mg extracts was highest in cultivated wild ginseng, followed by wild ginseng and lowest in ginseng. 4. DPPH(1, 1 -Diphenyl-2-picrylhydrazyl) scavenging activity between wild ginseng and cultivated wild ginseng did not differ significantly (p>0.05). 5. Induced lipid peroxidation, measured by TBARS concentration in solution containing rat liver mitochondria incubated in the presence of $FeSO_4$/ascorbic acid was inhibited as amounts of wild ginseng, cultivated wild ginseng, and ginseng extracts increased. TBARS concentration of ginseng extracts were significantly (p<0.05) higher than wild ginseng or cultivated wild ginseng extracts. 6. DCF fluorescence intensity was decreased as concentrations of wild ginseng, cultivated wild ginseng, and ginseng extracts increased, demonstrating that ROS generation was inhibited in a concentrationdependent manner. Conclusions: In summary, the results of this study demonstrate that cultivated wild ginseng extracts had similar antioxidant activities to wild ginseng extracts and greater that of cultivated ginseng extracts.
Objective: The objective of this study was to compare the antioxidant effects among wild ginseng, cultivated wild ginseng, and ginseng extracts. Methods: In vitro antioxidant activities were examined by total antioxidant capacity (TAC), oxygen radical scavenging capacity(ORAC), total phenolic content, 1, 1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity, inhibition of induced lipid peroxidation using liver mitochondria, reactive oxygen species(ROS) scavenging effect using 2', 7'-dichlorofluorescein(DCF) fluorescence. Results: 1. TAC of 1.5 and 3.75 mg extracts was highest in cultivated wild ginseng, followed by wild ginseng and lowest in ginseng. 2. ORAC of 2, 10, and $20{\mu}g$ extracts was highest in cultivated wild ginseng, followed by wild ginseng and lowest in ginseng. 3. Total phenolic content of 0.375, 0.938, and 1.875 mg extracts was highest in cultivated wild ginseng, followed by wild ginseng and lowest in ginseng. 4. DPPH(1, 1 -Diphenyl-2-picrylhydrazyl) scavenging activity between wild ginseng and cultivated wild ginseng did not differ significantly (p>0.05). 5. Induced lipid peroxidation, measured by TBARS concentration in solution containing rat liver mitochondria incubated in the presence of $FeSO_4$/ascorbic acid was inhibited as amounts of wild ginseng, cultivated wild ginseng, and ginseng extracts increased. TBARS concentration of ginseng extracts were significantly (p<0.05) higher than wild ginseng or cultivated wild ginseng extracts. 6. DCF fluorescence intensity was decreased as concentrations of wild ginseng, cultivated wild ginseng, and ginseng extracts increased, demonstrating that ROS generation was inhibited in a concentrationdependent manner. Conclusions: In summary, the results of this study demonstrate that cultivated wild ginseng extracts had similar antioxidant activities to wild ginseng extracts and greater that of cultivated ginseng extracts.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
문제 정의
이에 자연산 산삼(이하 산삼)과 산양삼, 그리고 인삼의 항산화 효능을 비교˙평가하고자 총 항산화능을 측정할 수 있는 Total antioxidant capacity(TAC), Oxygen radical absorbance capacity(ORAC)와 항산화 측정에 다용되는 Total phenolic content, 1, 1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH) 소거 활성, 지질과산화 그리고 Reactive oxygen species(ROS) 등을 측정하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
이에 저자는 자연산 산삼과 산양삼이 인삼과 어떠한 차별화된 항산화능을 나타내는지를 확인하고자 본 연구를 시도하였다.
제안 방법
DPPH 용액(45 μg/mL methanol)을 추출물과 혼합한 다음 515 nm에서 흡광도의 감소를 30초 간격으로 5분간 측정하였다.
Rat liver mitochondria were incubated with FeSO4/ascorbic acid in the absence or presence of various concentrations of the extract. Lipid peroxidation was determined by measuring the release of TBARS. Each bar represents the mean±SEM of triplicate determinations.
TBARS 농도측정을위해0, 0.063, 0.127, 0.253, 0.506, 1.013 및 2.025 nmol의 1, 1, 3, 3,-tetraethoxypropane을 표준시약으로 사용하여 표준곡선을 작성하였다.
고전의 의서에서 제시하고 있는 인삼의“補五臟, 安精神, 定魂魄, 止驚悸, 除邪氣, 明目, 開心, 益智, 久服輕身延年”등39)의 효능이 현재의 항산화능과 관련이 있을 것으로 추정하고 산삼과 산양삼, 그리고 인삼의 항산화능을 비교 분석하였다.
산성 pH에서 무색의 환원형 2, 2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate, 이하 ABTS)는 H2O2에 의해 청록색의 ABTS+로 산화되게 된다. 만일 추출물 내 항산화물질이 존재하게 되면 이들 농도에 비례하여 ABTS+는 탈색되며, 이러한 색 변화반응의 결과를 660 nm에서의 흡광도로 조사하였다.
산삼, 산양삼 및 인삼의 항산화 효능을 비교 연구하고자 TAC와 ORAC 방법을 이용한 총항산화능, 총 phenol 함량, DPPH free radical 소거활성, 간 미토콘드리아를 이용한 지질과산화 억제 및 ROS 생성 억제 실험 등을 수행 하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
시료 추출물의 TAC 측정을 위해 0, 2.25, 4.5, 9.0, 22.5, 33.75 및 45 nmol의 Trolox를 표준시약으로 사용 하여 표준곡선을 작성하였다. Trolox는 총 항산화능 측정에 광범위하게 사용되는 전형적인 표준시약으로 TAC 활성은 nmol Trolox equivalent로 표기하였다.
의 방법에 따라 760 nm에서 흡광도를 측정함으로써 결정하였다. 시료 추출물의 총 phenolic 함량 측정을 위해 0, 4.69, 9.38, 18.75, 37.5, 62.51 및 93.75 nmol의 gallic acid를 표준시약으로 사용하여 표준곡선을 작성하였다. Gallic acid는 총 phenolic 함량 측정에 가장 많이 사용되는 전형적인 표준시약으로 총 phenolic 함량은 nmol gallic acid equivalent로 표기하였다.
따라서 추출물 내 항산화물질이 존재하는 경우 추출물 첨가에 의해 항산화물질에 의한 ROS 생성이 억제되어 DCF 형광도가 감소하게 된다. 이를 이용하여 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 ROS를 측정하였다. 그 결과 농도가 증가함에 따라 ROS 생성이 농도 의존적으로 감소하였음을 알 수 있었다.
추출물의 지질과산화 억제 효과는 간 미토콘드리아 배양액의 thiobarbituric acid reactive substances(이하 TBARS) 농도를 측정함으로써 결정하였다. 간 미토콘드리아(0.
표준시약으로 0, 0.02, 0.2, 1 및 2 nmol의 gallic acid를 사용하였고, 표준시약과 추출물의 area under the curve(AUC)를 측정하였다. ORAC는 표준시약 농도와 AUC 간의 회귀곡선을 이용하여 nmol gallic acid equivalent로 표기하였다.
대상 데이터
(주)대한바이오링크로부터 구입한 6주령 수컷 Sprague-Dawley rat를 실험동물로 사용하였다. 본 실험실에서 사료와 물은 무제한 공급하였고, 1주일의 적응 기간을 거친 다음 간을 절제한 후 Hovius 등16)의 방법에 따라 미토콘드리아를 분리하였다.
본 연구에 사용된 자연산 산삼은 중국 조선족 연변 자치 주의 安圖市에서 발견된 수령 20-30년으로 추정되는 것을 중국 길림성 연길시에 있는 國家蔘茸 품질감독 기관에서 전문가의 감정을 통하여 자연산으로 확인한 후 시료로 사용하였고(Fig. 1), 산양삼은 수령 10년생으로 충남 서천시에 소재한 천방농산에서 재배한 것을 사용하였으며 (Fig. 2) 인삼은 홍천에서 재배 생산된 5년생을 본 연구의 시료로 사용하였다(Fig. 3).
본 연구에서는 1 μM H2O2와 10 μM FeSO4를 사용하여 ROS를 생성하였다.
데이터처리
통계 프로그램은 SPSS Version 10.0(for Windows, U.S.A.)을 이용하였고, 농도별 추출물간의 항산화 효과는 일원분산분석을 사용하여 조사하였으며, 사후 분석으로 농도별 평균값의 차이는 Duncan’s multiple range test를 사용하여 p<0.05에서 유의성을 조사하였다.
이론/모형
1, 1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl(이하 DPPH) free radical 소거활성은 Malterud 등21)의 방법에 따라 측정하였다. DPPH 용액(45 μg/mL methanol)을 추출물과 혼합한 다음 515 nm에서 흡광도의 감소를 30초 간격으로 5분간 측정하였다.
따라서 DCFH의 DCF 산화를 이용한 반응은 ROS, 특히 H2O2 radical 측정에 널리 이용되고 있다. DCF 형성에 따른 형광도 증가는 LeBel 등23)의 방법에 따라 SPECTRAmax GEMINI XS Microplate Spectrofluorometer(Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)를 사용하여 측정하였다. 형광도 감소는 추출물 내 항산화물질에 의한 ROS 생성 억제를 나타내게 된다.
TEAC와더불어총항산화능측정에널리사용되고있는 ORAC assay는 Huang 등19)의 방법에 따라 37℃에서 excitation 파장 485 nm와 emiss-ion 파장 530 nm에서 2분 간격으로 36분간 측정하였다. ORAC assay는 형광 표지물질에 대한 free radical의 손상 정도를 측정하는 일종의 inhibition method로써형광물질로는 fluorescein 을 사용하였으며, peroxyl radical을 생성하는 2, 2’- azobis(2-amidinopropane) dihydrochloride (이하 AAPH)를 사용하였다.
Total antioxidant status(총 항산화능)는 Trolox equivalent antioxidant capacity(TEAC)방법17)을수정한 Erel18)의 방법에 따라 TAC를 측정하였다. 산성 pH에서 무색의 환원형 2, 2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate, 이하 ABTS)는 H2O2에 의해 청록색의 ABTS+로 산화되게 된다.
단백질 함량은 bovine serum albumin(BSA)을 표준 시약으로사용하여Lowry 등24)의방법에 따라 측정하였다.
5 mg/mL)를 10 μmol FeSO4와 100 μmol ascorbic acid와 함께 추출물 농도별로 37℃에서 60분간 배양하였다. 미토콘드리아 배양액의 지질과산화는 Stacey와 Klaassen22)의 방법에 따라 excitation 파장 530 nm와 emission 파장 590 nm에서 형광도를 측정함으로써 결정하였다.
(주)대한바이오링크로부터 구입한 6주령 수컷 Sprague-Dawley rat를 실험동물로 사용하였다. 본 실험실에서 사료와 물은 무제한 공급하였고, 1주일의 적응 기간을 거친 다음 간을 절제한 후 Hovius 등16)의 방법에 따라 미토콘드리아를 분리하였다.
추출물 내 총 phenolic 함량은 gallic acid를 표준시약으로 사용하여 Singleton과 Orthofer20) 의 방법에 따라 760 nm에서 흡광도를 측정함으로써 결정하였다. 시료 추출물의 총 phenolic 함량 측정을 위해 0, 4.
성능/효과
1. 함량별 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 TAC를 비교한 결과 산양삼 >산삼 >인삼의 순서를 나타내었다.
2. 함량별 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 ORAC를 비교한 결과 산양삼 >산삼 >인삼의 순서를 나타내었다.
3. 함량별 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 총 phenol 함량을 비교한 결과 산양삼>산삼>인삼의 순서를 나타내었다.
4. 농도별 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 DPPH free radical 소거활성을 비교한 결과 산삼과 산양삼은 유의한 차이를 나타내지 않았고, 인삼은 유의하게 낮은 활성을 나타내었다.
5. 지질과산화 억제 효과를 관찰한 결과 산삼과 산양삼은 유사한 효과를 나타내었고, 인삼은 산삼과 산양삼에 비해 유의하게 낮은 효과를 나타내었다.
6. ROS 생성 억제 효과는 자연산산삼>산양삼>인삼의순서를나타내었다.
이상의 내용을 종합해보면, 산삼과 산양삼의 항산화능 비교에서는 총 항산화능을 평가하는 Total antioxidant capacity와 ORAC assay에서 산양삼이 산삼에 비하여 항산화능이 더 우수하였고, 이러한 원인은 산양삼의 총 phenol 함량이 산삼에 비해 다소 높은 것에 기인하는 것으로 추정되었다. DPPH free radical 소거활성에서는 산삼과 산양삼이 유의한 차이를 나타내지 않았고, 지질과산화 억제효과와 Reactive oxygen species(ROS)는 산삼이 산양삼에 비하여 다소 우수한 항산화능이 있는 것으로 밝혀졌다. 인삼은 산삼이나 산양삼에 비하여 전반적으로 낮은 항산화능을 나타내었다.
Erel 18)의 방법에 따라 수종의 시료에 대한 Total antioxidant capacity(TAC)를 측정한 결과 산삼, 산양삼 및 인삼추출물 함량이 증가함에 따라 TAC도 비례적으로 증가하여 함량 의존적으로 ABTS radical 소거활성을 나타내고 있음을 알 수 있었다. 각 함량별 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 TAC를 비교해 보면 1.
. Total phenolic content를 측정한 결과 산삼, 산양삼 및 인삼추출물 함량이 증가함에 따라 총 phenol 함량도 농도 의존적으로 증가하고 있음을 알 수 있었다. 각 함량별 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 총 phenol 함량을 비교한 결과 산양삼>산삼>인삼의 순서를 나타내었다.
각 농도별 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 0분에서의 DCF 흡광도를 비교해 보면 2.5 mg/mL 농도에서는 산삼, 산양삼 및 인삼 간에 차이가 발견되지 않았고, 5 mg/mL 농도에서도 산삼과 산양삼 간의 차이는 관찰되지 않았지만 산삼이 인삼에 비해 유의하게 낮은 DCF 형광도를 나타내었다(p<0.05).
각 농도별 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 DCF 흡광도를 비교한 결과 2.5 mg/mL 농도에서는 산삼, 산양삼 및 인삼 간에 차이가 발견되지 않았고, 5 mg/mL 농도에서도 산삼과 산양삼 간의 차이는 관찰되지 않았지만 산삼이 인삼에 비해 유의하게 낮은 DCF 형광도를 나타내었다. 반면 12.
각 함량별 산삼, 산양삼 및 인삼 추출물의 DPPH free radical 소거활성을 비교해 보면 3.3, 6.7 및 16.7 mg/mL 농도 모두에서 인삼이 낮게 나타났고(p<0.05), 산삼과 산양삼간의 유의한 차이는 관찰되지 않았다(p>0.05).
Malterud 등21)의 방법에 따라 DPPH를 측정한 결과 산삼, 산양삼 및 인삼 추출물의 농도가 증가함에 따라 DPPH free radical 소거활성도 농도 의존적으로 증가하고 있음을 알 수 있었다. 각 함량별 산삼, 산양삼 및 인삼 추출물의 DPPH free radical 소거활성을 측정한 결과 인삼의 소거활성이 낮은 것으로 나타났고, 산삼과 산양삼 간의 유의적인 차이는 관찰되지 않았다.
각 함량별 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 ORAC를 비교해 보면 2, 10 및 20 μg 함량 모두에서 산양삼의 총 항산화능이 가장 높게, 그리고 인삼에서 가장 낮게 나타났다(p<0.05).
각 함량별 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 TAC를 비교해 보면, 1.5와 3.75 mg 함량 모두에서 산양삼의 총항산화능이 가장 높게, 그리고 인삼에서 가장 낮게 나타났다(p<0.05).
산삼, 산양삼 및 인삼 추출물의 지질과산화 억제효과를 측정한 결과 모든 시료에서 함량이 증가함에 따라 지질과산화는 함량 의존적으로 억제되고 있음을 알 수 있었다. 각 함량별 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 TBARS 농도를 비교한 결과 6.25, 12.5 및 31.25 mg 함량 모두에서 인삼의 TBARS 농도는 산삼과 산양삼에 비해 유의적으로 높게 관찰되었다. 산삼과 산양삼 간의 TBARS 농도 차이는 6.
각 함량별 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 TBARS 농도를 비교해 보면, 6.25, 12.5 및 31.25 mg 함량 모두에서 인삼의 TBARS 농도는 산삼과 산양삼에 비해 유의한 증가를 나타내었다(p<0.05).
각 함량별 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 총 phenol 함량을 비교해 보면, 0.375, 0.938 및 1.875 mg 함량 모두에서 산양삼의 총 phenol 함량이 가장 높게, 그리고 인삼에서 가장 낮게 나타났다(p<0.05).
각 함량별 산삼, 산양삼및 인삼추출물의 ORAC를 측정한 결과 2, 10 및 20 μg 함량 모두에서 산양삼>산삼>인삼의 순서를 나타내었다.
이를 이용하여 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 ROS를 측정하였다. 그 결과 농도가 증가함에 따라 ROS 생성이 농도 의존적으로 감소하였음을 알 수 있었다.
각 함량별 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 총 phenol 함량을 비교한 결과 산양삼>산삼>인삼의 순서를 나타내었다. 따라서 산양삼 추출물이 인삼에 비해 TAC와 ORAC 등의 총 항산화능이 유의하게 높은 이유는 추출물 내에 존재하는 총 phenol의 함량이 높기 때문이었고, 산양삼 추출물이 산삼에 비해 총 항산화능이 다소 높게 관찰된 것도 산양삼 추출물 내 총 phenol 함량이 산삼에 비해 다소 높은 것에 기인하는 것으로 사료되었다.
5 mg 함량에서는 산삼이 산양삼에 비해 유의적으로 낮게 관찰되었다. 따라서 전반적으로 산삼과 산양삼의 지질과산화 억제 효과는 유사하였으나 인삼의 지질과산화 억제 효과는 산삼과 산양삼에 비해 유의하게 낮음을 알 수 있었다.
5 mg/mL 농도에서는 산삼, 산양삼 및 인삼 간에 차이가 발견되지 않았고, 5 mg/mL 농도에서도 산삼과 산양삼 간의 차이는 관찰되지 않았지만 산삼이 인삼에 비해 유의하게 낮은 DCF 형광도를 나타내었다. 반면 12.5 및 25 mg/mL 농도에서는 산삼의 DCF 형광도가 산양삼에 비해 유의적으로 낮게 관찰되어 농도가 증가함에 따라 산삼의 ROS 생성 억제가 산양삼에 비해 우수한 것을 알 수 있었다.
반면에 12.5및 25 mg/mL 농도에서는 산삼의 DCF 형광도가 산양삼에 비해 낮게 관찰되어(p<0.05), 농도가 증가함에 따라 산삼의 ROS 생성 억제가 산양삼에 비해 우수한 것을 알 수 있었다.
산삼 추출물 2.5, 5, 12.5 및 25 mg/mL 농도의 첨가에 따른 DCF 형광도는 10분에 각각 510, 471, 398 및 336으로 관찰되었고, 2.5 mg/mL 농도의 산삼추출물은 무첨가에 비해 DCF 형광도를 유의하게 감소시켰다(p<0.05).
되고 있다. 산삼, 산양삼 및 인삼 추출물의 지질과산화 억제효과를 측정한 결과 모든 시료에서 함량이 증가함에 따라 지질과산화는 함량 의존적으로 억제되고 있음을 알 수 있었다. 각 함량별 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 TBARS 농도를 비교한 결과 6.
산삼추출물 0.375, 0.938 및 1.875 mg 함량은 12.68, 27.58 및 52.53 nmol gallic acid equivalent의 총 phenol 함량을 나타내었고, 산삼 추출물과 총 phenol 함량 간의 회귀분석(Y=2.708+26.565X) 결과 산삼 추출물 1 mg은 29.27 nmol gallic acid와 동등한 총 phenol 함량을 나타내었다.
산삼추출물 2, 10 및 20 μg 함량은 0.31, 0.91 및 1.01 nmol gallic acid equivalent의ORAC를나타내었고, 산삼추출물과 ORAC간의 회귀분석(Y=0.342+0.0375X) 결과 산삼추출물 5 μg은 0.53 nmol gallic acid와 동등한 항산화능을 보였다.
산삼추출물 2.5, 5, 12.5 및 25 mg/mL 농도의 첨가에 따른 DCF 형광도는 0분에 각각 450, 424, 360 및 324로 관찰되었고, 5 mg/mL 농도의 산삼추출물은 무첨가에 비해 DCF 형광도를 유의하게 감소시켰다(p<0.05).
7에 나타내었다. 산삼추출물 3.3, 6.7 및 16.7 mg/mL 농도의 radical 소거활성은 45.7, 65.3 및 87.3%로 측정되었다. 추출물 농도와 free radical 소거활성 간의 회귀분석(Y=38.
산삼추출물 6.25 mg 첨가는 TBARS를 유의적으로(p<0.05) 감소시켰고, 추출물 농도가 증가함에 따라 TBARS도 감소하여 산삼 추출물 31.25 mg 첨가는 유도된 지질과산화를 97% 억제시켰음을 알 수 있었다.
산양삼 추출물 0.375, 0.938 및 1.875 mg 함량은 16.39, 29.32 및 63.51 nmol gallic acid equivalent의 총 phenol 함량을 나타내었고, 산양삼 추출물과 총 phenol 함량 간의 회귀분석(Y=3.001+31.804X) 결과 산양삼 추출물 1 mg은 34.80 nmol gallic acid와 동등한 총 phenol 함량을 나타내었다.
산양삼 추출물 0.75, 1.5 및 3.75 mg 함량은 22.0, 33.5 및 48.5 nmol Trolox equivalent의 TAC를 나타내었고, 산양삼 추출물과 TAC간의 회귀분석(Y=18.059+8.312X)결과 산양삼추출물 1 mg은 26.4 nmol Trolox와 동등한 항산화능을 보였다.
산양삼 추출물 2.5, 5, 12.5 및 25 mg/mL 농도의 첨가에 따른 DCF 형광도는 0분에 각각 460, 437, 408 및 359로 관찰되었고, 12.5 mg/mL 농도의 산양삼추출물은 무첨가에 비해 DCF 형광도를 유의하게 감소시켰다 (p<0.05).
산양삼 추출물 6.25 mg 첨가는 TBARS를 유의적으로(p<0.05) 감소시켰고, 추출물 농도가 증가함에 따라 TBARS도 감소하여 산양삼추출물 31.25 mg 첨가는 유도된 지질과산화를 96% 억제시켰음을 알 수 있었다.
산양삼추출물 2, 10 및 20 μg 함량은 0.44, 1.02 및 1.06 nmol gallic acid equivalent의ORAC를나타내었고, 산양삼 추출물과 ORAC간의 회귀분석(Y=0.487+0.0333X) 결과 산양삼추출물 5 μg은 0.65 nmol gallic acid와 동등한 항산화능을 보였다.
산양삼추출물 2.5, 5, 12.5 및 25 mg/mL 농도의 첨가에 따른 DCF 형광도는 10분에 각각 542, 501, 461 및 372로 관찰되었고, 5 mg/mL 농도의 산양삼추출물은 무첨가에 비해 DCF 형광도를 유의 하게 감소시켰다(p<0.05).
이상의 내용을 종합해보면, 산삼과 산양삼의 항산화능 비교에서는 총 항산화능을 평가하는 Total antioxidant capacity와 ORAC assay에서 산양삼이 산삼에 비하여 항산화능이 더 우수하였고, 이러한 원인은 산양삼의 총 phenol 함량이 산삼에 비해 다소 높은 것에 기인하는 것으로 추정되었다. DPPH free radical 소거활성에서는 산삼과 산양삼이 유의한 차이를 나타내지 않았고, 지질과산화 억제효과와 Reactive oxygen species(ROS)는 산삼이 산양삼에 비하여 다소 우수한 항산화능이 있는 것으로 밝혀졌다.
이와 같이 산삼, 산양삼 및 인삼추출물의 함량이 증가함에 따라 비례적으로 ORAC도 증가하여 함량 의존적인 peroxyl radical 소거활성을 나타내고 있으며, 20 μg의 추출물은 AAPH에 의해 생성된 radical을 거의 100% 억제시켰다.
인삼 추출물 0.375, 0.938, 1.875, 3.75 및 7.5 mg 함량은 4.65, 11.13, 21.88, 38.34 및 71.74 nmol gallic acid equivalent의 총 phenol 함량을 나타내었고, 인삼 추출물과총 phenol 함량간의회귀분석(Y=2.632+9.331X) 결과 인삼 추출물 1 mg은 11.96 nmol gallic acid와 동등한 총 phenol 함량을 나타내었다.
인삼 추출물 3.3, 6.7 및 16.7 mg/mL 농도의 radical 소거 활성은 20.5, 30.5 및 55.2%로 측정되었다. 추출물 농도와 free radical 소거활성 간의 회귀분석(Y=12.
인삼추출물 0.75, 1.5, 3.75 및 7.5 mg 함량은 11.5, 16.3, 29.0 및 40.6 nmol Trolox equivalent의 TAC를 나타내었으며, 인삼추출물과 TAC간의 회귀분석(Y=9.904+4.275X)결과 인삼추출물 1 mg은 14.2 nmol Trolox와 동등한 항산화능을 보였다.
인삼추출물 12.5 mg 첨가는 TBARS를 유의적으로 감소시켰고(p<0.05), 인삼추출물 31.25 mg 첨가는 유도된 지질과산화를 54% 억제시켰음을 알 수 있었다.
인삼추출물 2, 10 및 20 μg 함량은 0.15, 0.68 및 0.94 nmol gallic acid equivalent의 ORAC를 나타내었고, 인삼추출물과 ORAC간의회귀분석(Y=0.133+0.0431X) 결과 인삼추출물 5 μg은 0.35 nmol gallic acid와 동등한 항산화능을 보였다.
인삼추출물 2.5, 5, 12.5 및 25 mg/mL 농도의 첨가에 따른 DCF 형광도는 0분에 각각 467, 465, 442 및 414로 관찰되었고, 25 mg/mL 농도의 인삼추출물은 무첨가에 비해 DCF 형광도를 16% 억제시켰다(p<0.05).
인삼추출물 2.5, 5, 12.5 및 25 mg/mL 농도의 첨가에 따른 DCF 형광도는 10분에 각각 558, 538, 515 및 465로 관찰되었고, 12.5 mg/mL 농도의 인삼추출물은 무첨가에비해 DCF 형광도를 유의하게 감소시켰다(p<0.05).
4와 같다. 자연산 산삼추출물 0.75, 1.5 및 3.75 mg 함량은 19.6, 29.1 및 35.8 nmol Trolox equivalent의 TAC를 나 타 내었고 , 산삼추출물과 TAC간의 회귀분석(Y=18.484+4.843X) 결과 산삼추출물 1 mg은 23.3 nmol Trolox와 동등한 항산화능을 보였다.
05). 전반적으로 지질과산화 억제 효과는 유사하였으나 인삼의 지질과산화 억제 효과는 산삼과 산양삼에 비해 낮았다.
2%로 측정되었다. 추출물 농도와 free radical 소거활성 간의 회귀분석(Y=12.274+2.592X) 결과 50%의 radical 소거활성에 필요한 인삼추출물의 농도는 14.55 mg/mL으로 나타났다.
3%로 측정되었다. 추출물 농도와 free radical 소거활성 간의 회귀분석(Y=38.921+3.001X) 결과 50%의 radical 소거활성에 필요한 산삼추출물의 농도는 3.69 mg/mL으로 나타났다.
7%로 측정되었다. 추출물 농도와 free radical소거활성간의회귀분석(Y=34.449+3.202X) 결과 50%의 radical 소거활성에 필요한 산양삼추출물의 농도는 4.86 mg/mL으로 나타났다.
05). 추출물 첨가 농도가 증가함에 따라 DCF 형광도는 더욱 감소하여 25 mg/mL 농도의 산삼추출물첨가는10분 후 DCF 형광도를 61% 억제하였다.
추출물 첨가 농도가 증가함에 따라 DCF 형광도는 더욱 감소하여 25 mg/mL 농도의 산양삼추출물 첨가는 10분 후 DCF 형광도를 51% 억제하였다(p<0.05).
25 mg 첨가는 유도된 지질과산화를 96% 억제시켰음을 알 수 있었다. 추출물 함량과 TBARS 간의 회귀분석(Y=1.194-0.036X) 결과 50%의 지질과산화 억제에 필요한 산양삼 추출물의 함량은 16.58 mg으로 나타났다. 인삼추출물 1.
25 mg 첨가는 유도된 지질과산화를 54% 억제시켰음을 알 수 있었다. 추출물 함량과 TBARS 간의 회귀분석(Y=1.217-0.020X) 결과 50%의 지질과산화 억제에 필요한 인삼추출물의 함량은 30.43 mg으로 나타났다.
25 mg 첨가는 유도된 지질과산화를 97% 억제시켰음을 알 수 있었다. 추출물 함량과 TBARS 간의회귀분석(Y=1.182-0.037X) 결과 50%의 지질과산화 억제에 필요한 산삼추출물의 함량은 15.97 mg으로 나타났다.
후속연구
따라서 본 연구 결과 산양삼은 산삼과 유사한 항산화 효능을 나타내었고, 인삼에 비해 우수한 것으로 나타나 산화 관련 질병 예방과 치료에 산양삼이 더욱 활용될 수 있을 것으로 사료 되는 바이다.
따라서 수령 10년의 산양삼은 산삼에 비하여 항산화능이 유사하거나 우수한 것으로 밝혀져 산화기전으로 인한 질병의 예방을 목적으로 사용할 때에는 산양삼이 자연산 산삼의 대체 한약재로 손색이 없을 것으로 판단되며 향후 다양한 실험모델을 바탕으로 더욱더 체계적인 연구가 진행되길 바란다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
인삼의 효능은?
A.Meyer:Ginseng radix)은 한의학에서 대표적인 보기제로 신경 기능 조절, 체액 및 신진대사기능의 조절7), 강심, 항이뇨, 성기능 증강효과8), Stress에 대한 저항력 증강9-10), 소화흡수 및 면역항체생산 촉진 등11-12) 많은 효과가 있음이 보고되고 있다.
노화와 질병의 원인으로 알려진 것은?
노화와 질병의 원인 중의 하나로 알려지게 된 free radical은 1954년 R. Gerschman이 산소의 유해성을 최초로 제기하고, 이후 D.
free radical이 생체에 끼칠 수 있는 문제점은?
이들은 생체에 치명적인 산소독성을 일으키며, 세포막 분해, 단백질 분해, 지질 산화, DNA 변성 등을 초래하여 세포의 기능 장애를 유발하고 암을 비롯한 뇌졸중, 파킨슨병 등의 뇌질환과 심장질환, 동맥경화, 염증, 노화, 자가면역질환 등의 각종 질병을 일으키는 것으로 알려져 있다2-4).
참고문헌 (41)
M. Valko, D. Leibfritz, J. Moncol, Mark T.D. Cronin, M. Mazur, J. Telser. Free radicals and antioxidant in normal physiological funtions and human disease. The International J. & Cell Biology. 2007;39:44-84
Kandawami, C., Middleton, EJ. Free radical scavenging and anti-oxident activity of plant flavonoids. Free Radicals in Diagnostic Medicine. Armstrong D. Plenum Press, New York and London. 1994;351-376
하대유. 인삼에 대한 세포학 및 면역학적 연구. 대한면역학회지. 1979;1(1):45-52
Takagi, K, Proceedings International Ginseng Symposium, The Central Research Institute, Office of Monopoly, Seoul, Korea, 1974;119
김승환, 장명제, 이성규, 장완성, 최현희, 성종환. 인삼복용시 과산화지질과 총항산화능에 미치는 영향. 한국체육학회지. 2003;42(3):661-668
Choi, KJ., Kim, MW., Hong, SK., Kim, DH. Effect of solvents on the yield, brown color intensity, UV absorbance, reducing and antioxident activities of extracts from white and red ginseng. J. Korean Agric. Chem. Soc. 1983;26:8-18
이승은, 이성우, 방진기, 유영주, 성낙술. 인삼의 부위별항산화활성. Korean J. Medicinal Crop. Sci. 2004;12(3): 237-242
Hovius, R., H. Lambrechts, K. Nocolay and B. de Kruijff. Improved methods to isolate and subfractionate rat liver mitochondria. Lipid composition of the inner and outer membrane. Biochim. Biophys. Acta. 1990;1021:217-226
Re, R., N. Pellegrini, A. Proteggente, A. Pannala, M. Yang and C. Rice-Evans. Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation decolorization assay. Free Radic. Biol. Med. 1999;26 :1231-1237
Erel, O. A novel automated direct measurement method for total antioxidant capacity using a new generation, more stable ABTS radical cation. Clin. Biochem. 2004;37:277-285
Huang, D., B. Ou, M. Hampsch-Woodill, J. A. Flanagan and R. L. Prior. High-throughput assay of oxygen radical absorbance capacity(ORAC) using a multichannel liquid handling system coupled with a microplate fluorescence reader in 96-well format. J. Agric. Food Chem. 2002;50:4437-4444
Singleton, V.L. and R. Orthofer. Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagent. Methods Enzymol. 1999;299:152-178
Malterud, K.E., T.L. Farbrot, A.E. Huse and R.B. Sund. Antioxidant and radical scavenging effects of anthraquinones and anthrones. Pharmacology 1993;47:77-85
Stacey, N.H. and C.D. Klaassen. Inhibition of lipid peroxidation without prevention of cellular injury in isolated rat hepatocytes. Toxicol. Appl. Pharm. 1981;58:8-18
LeBel, C.P., H. Ischiropoulos and S.C. Bondy. Evaluation of the probe 2',7'-dichlorofluorescin as an indicator of reative oxyten species formation and oxidative stress. Chem. Res. Toxicol. 1992;5:227-231
Lowry, O.H., N.J. Rosebrough, A.L. Farr and R.J. Randall. Protein measurements with the Folin phenol reagent. J. Biol. Chem. 1951;193:265-275
Devy, C. and Gautier, R. New perspectives on the biochemistry of superoxide anion and the efficiency of superoxide dismutase. Biochem. Pharmacol. 1990;39:399-405
Jeon, HK., Kim, SC., Jung, NP. Effects of ginseng sponin fraction and cyclophosphamide on the tumoricidal activity of mouse macrophage and antitumor effect. Korean J. Ginseng Sci. 1991;15:99-105
Kim, MJ., Jung, NP. The effects of ginseng saponin on the mouse immune system. Korean J. Ginseng Sci. 1987;11:130-135
Kang, SY., Kim, ND. The anti-hypersensitive effect of red ginseng saponinand the endotheliumderived vascular relaxation. Korean J. Ginseng Sci. 1992;16:175-182
Joo, CN., Kim, JH. Study on the hypoglycemic action of ginseng saponin on streptozotocin induced diabetic rats. Korean J. Ginseng Sci. 1991;16:190-197
Oliveira, ACC., Perez, AC., Merino G., Prietp, JG., Alvarez, AI. Protective effects of Panax ginseng on muscle injury and inflammation after eccentric exercise. Comparative Biochemistry and Physiology Part C. 2001;130:369-377
Kim, JS., Kim, KW., Choi, KJ., Kwak, YK., Im, KS., Lee, KM., Chung, HY. Screening of anti-oxidative components from red ginseng saponin. Korean J. Ginseng Sci. 1996;20:173-178
Ryu, GH. Present status of red ginseng products and its manufacturing process. Food Industry and Nutrition. 2003;8:38-42
Kitagawa, I. Chemical studies on crude drug processing. I. On constituents of ginseng radix rubra(1). Yakugaku Zasshi 1983;103:612-622
Kim, KH., Lee, YS., Jung, IS., Park, SY., Chung, HY., Lee, IR., Yun, YS. Acidic polysaccharide from Panax ginseng, ginsan, induces Th1 cell and macrophage cytokines and generates LAK cells in synergy withr II-2. Planta media. 1998;64:110-115
Lee, JW., Sohn, HO., Do, JH. Function of the water soluble browning reaction products isolated from Korean red ginseng 2. Linoleic acid, Oxbrain autoxidant and $Fe^{2+}$ ADP/NAD system. Korean J. Ginseng Res. 2000;24:35-40
Yoshizawa, S., Horiuchi, T., Yoshida, T., Okuda, T. Antitumor promoting activity of (-)-epigallocatechin gallate, the main constitutent of tannin in green tea. Phytother. Res. 1987;1:44-47
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.