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문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 기능성 식품소재 혹은 의약품으로서 인진쑥 Methanol (MeOH) 추출물을 이용하고자 우리나라에서 가장 빈번히 발생하고 있는 위암 그리고 결장암 세포인 NCI-N87 및 HF29 cell line을 각각 이용하여 항암 활성을 측정하였다. 또한 항산화 활성을 l, l-diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH), hydroxyl radical (.
- 측정하였다. 또한 항산화 활성을 l, l-diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH), hydroxyl radical (.OH), 환원력 , 총 페놀 함량 및 총플라보노이드 함량 실험으로 측정을 하여보다 구체적으로 인진쑥의 식의약품으로의 이용 가능성을 제시하고자 하였다.
제안 방법
- .OH 소거활성 측정 -OHe 수용액에서 강산 반응성을 나타내어 지질산화를 개시하고 DNA에 손상을 주거나 돌연변이를 유발하는 물질로 알려져 있고 생체의 대사과정에서 생성되는 기질의 과산화물이나 과산화수소가 Fe+나 Ci+ 이온의 존재 하에서 생성되며 가장 독성이 강한 자유라디칼로서 소거하는 정도를 측정하였다.2" 대조군으로는 항산화제로 알려져 있는 Vit E를 사용하였다.
- 측정하였다. NCI-N89 및 HT-29 cellse RPMI-1640 배지에 10% FBS(10% heat inactivated fetal bovine serum) 와 1 % 항생제(penicillin G/streptomycin)을 첨가하여 배양하였다. 293 celle DMEM(dulbecco's modified eable medium) 배지에 10% FBS와 1% 항생제를 첨가하여 배양하였다.
- 세포주 및 배양 - 실험에 사용한 세포주는 암세포로 사람의 위암세포 NCI-N89(stomach cancer cell, human)와 결장 암세포 HT-29(colon carcinoma cell, human)를 사용하였으며, 또한 정상세포에서의 세포 독성을 확인하고자 사람의 신장세포 293(kidney normal cell, human)를 이용하여 세포독성을 측정하였다. NCI-N89 및 HT-29 cellse RPMI-1640 배지에 10% FBS(10% heat inactivated fetal bovine serum) 와 1 % 항생제(penicillin G/streptomycin)을 첨가하여 배양하였다.
- 이 반응 혼합액을 실온에서 30분간 방치한 후, multiplater spectrophotometer ELx800TM (BioTek, USA)로 515 nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료를 첨가하지 않은 음성 대조군과 비교하여 자유라디칼 소거활성은 백분율로 나타내고, 50% 저해 농도(IC50)를 계산하였다. 측정치는 3회 반복 실험의 평균값으로 나타내었다.
- 지표라고 할 수 있다. 인진쑥의 식품 또는 의약품으로의 연구 가치를 측정하는 가장 기초적인 단계로서, 본 실험에서는 인진쑥의 메탄올 추출물의 환원력을 Fe+를 Fe2+로 환원시키는 활성을 지표로 측정하였다.33)Fig.
- 경우 300 (ig/mE. 조절하였으며 정상세포에 대한 성장 억제력과 각 암세포에 대한 성장 효과를 검토하였다. 인간의 정상 신장 세포인 293에 대한 성장 억제력은 샘플에서는 나타나지 않았으며 , 10% DMSO 에서는 71.
- 정량하였다. 즉, 시료 1 ml에 Folin-reagent 1 rrd를 가하여 3분간 정치한후 10% NA2 CO3 1ml을 혼합하고 1시간 실온에서 방치한후 700 nmOW 흡광도를 측정하였다. 표준곡선은 gallic acid (sigma Co.
대상 데이터
- OH 소거활성 측정 -OHe 수용액에서 강산 반응성을 나타내어 지질산화를 개시하고 DNA에 손상을 주거나 돌연변이를 유발하는 물질로 알려져 있고 생체의 대사과정에서 생성되는 기질의 과산화물이나 과산화수소가 Fe+나 Ci+ 이온의 존재 하에서 생성되며 가장 독성이 강한 자유라디칼로서 소거하는 정도를 측정하였다.2" 대조군으로는 항산화제로 알려져 있는 Vit E를 사용하였다. Fig 2에서 보여주는 바와 같이 인진쑥은 20의 저농도에서도 70% 이상의 라디칼 억제능을 보였다.
- 재료 및 시료의 추출 - 본 실험에서 사용한 인진쑥은 2008년 1월에 강원도 정선군에서 구입하여 불순물을 제거하고 건조시킨 후, 5-10 mm의 크기로 분쇄하여 이 중 인진쑥 38 g을 MeOH로 48시간 동안 추출, 여과하여 감압농축기를 사용하여 주출용매를 제거한 후 동결, 건조한 시료를 사용하였다.
이론/모형
- MTT assay - 사철쑥 추출물의 암세포 및 정상 신장 세포의 증식 억제 효과는 Green 등2의 방법에 따라 MTT assay를 이용하여 시행하였다. MTT 분석은 세포 단백질 염색을 이용하여 세포 증식이나 독성을 즉정하는 방법으로 10% fetal bovine serum 및 각각의 NCI-N87와 HF29를 함유하는 RPMI 1640배지와 293을 함유하는 DMEM배지를 5xl05cells/ml 농도로 200 μ1 씩 각 well에 첨가하여 72시간동안 배양 (37℃, 5% CQ)시킨 후 0.
- Fenton 반응으로 QH을 생성시키고, 생성된 .OH에 의해 핵산의 구성당인 deoxyribose가 분해하는 정도를 TBA발색법을 이용해 측정한다.27) 10 mM FeSO4-7H2O, 10 mM EDTA, 10 mM 2-D-deoxyribose 용액을 각각 200 ml 와 시료용액 200L 0.
- 총페놀성 및 총플라보노이드 화합물 함량측정 - 총페놀성 화합물 함량은 Folin-Denis법 24 에 의해 비색 정량하였다. 즉, 시료 1 ml에 Folin-reagent 1 rrd를 가하여 3분간 정치한후 10% NA2 CO3 1ml을 혼합하고 1시간 실온에서 방치한후 700 nmOW 흡광도를 측정하였다.
- 총플라보노이드 함량은 Davis변*)을 법 이용하였다. 시료용액 1 ml에 diethylene glycol 10 ml 및 IN NaOH 1 ml을 가하고 잘 혼합한 후 30℃에서 1시간 반응시킨 후 420 nm 에서 흡광도를 측정하였다.
- 환원력의 측정 - Elmastas 등의2© 방법에 의거하여 시료의 환원력을 측정하였다. 즉, 각각의 농도별로 조제한 시료 0.
성능/효과
- 33)Fig. 1에서 나타나는 바와 같이 인진쑥의 환원력은 50-500 μg/ml의 농도에서는 0.058, 0.136, 그리고 0.627의 흡광도를 보여 농도 의존적으로 환원력을 보임을 확인할 수 있었다. 그러나 동일 농도(50-500 pig/ml) 에서 항산화제로 널리 쓰이는 Vit E(0.
- 627의 흡광도를 보여 농도 의존적으로 환원력을 보임을 확인할 수 있었다. 그러나 동일 농도(50-500 pig/ml) 에서 항산화제로 널리 쓰이는 Vit E(0.129, 0.297, 1.096)보다는 약한 환원력을 나타냄을 알 수 있었다.
- 91%의 세포 성장 억제력을 나타내었다. 또한 인간의 위암 세포인 NCI-N87와 결장암 세포인 HF29 세포에서의 샘플은 각각 67.15±2.26% 및 48.72±5.37%의 성장 억제력을 보였다. 이와 같은 결과는 Kwon 등 발표한 결과와 비교해 보았을 때 인진쑥이 상당히 뛰어난 항암 활성을 가지고 있음을 확인할 수 있었다.
- Fig 2에서 보여주는 바와 같이 인진쑥은 20의 저농도에서도 70% 이상의 라디칼 억제능을 보였다. 오히려 100 (ig/ml 이상의 고농도에서는 활성이 감소함을 확인할 수 있었다.
- 14 μg/ml로 매우 높은 항산화 활성을 나타내었다. 이러한 결과는 인진쑥 MeOH 추출물이 항산화 활성이 뛰어날 뿐만 아니라 추출물의 회수율도 높아 항산화 제로의 이용가능성 측면에서도 매우 좋을 것으로 사료된다. 일종의 염료인 DPPH는 자신이 가지는 홀수 전자 때문에 520nm에서 특징적 인 강한 흡수 패턴을 보인다.
- Heo 등에 따르면 한국에 자생하는 약용 식물의 경우 총 페놀 함량이 30mg/g이상이면 뛰어난 항산화 활성을 나타낸다고 하였다. 이러한 결과를 토대로 사철쑥의 경우 60mg/g의 총 페놀 함량을 보이므로 상당한 항산화 활성을 나타냄을 확인할 수 있었으며, 총페놀 중 플라보노이드가 상당수 존재함을 확인할 수 있었다.
- 14 μg/ml의 결과 값을 얻어 상황버섯추출물이 뛰어난 항산화제임을 제시하였다. 이와 같은 결과를 미루어 인진쑥은 상황버섯보다 더 뛰어난 항산화제로 이용가능성을 확인할 수 있었다.
- 나타내었다. 인진쑥 MeOH 추출 수율은 건시료 38 g을 MeOH 추출한 후 추출 용매를 제거하여 무게를 잰 결과 7.27 g을 얻어 총 수율 19.13%로 좋은 추출효율을 보였다. 항산화 활성 중 DPPH radical 에 대한 인진쑥의 소거활성은 IC50 11.
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