[논문]HPLC-DAD를 이용한 평위산 중의 Hesperidin 및 Glycyrrhizin의 동시분석법 확립

이미경; 최옥경; 박진호; 조정희; 김도훈; 백주현; 김효진; 이기용; 김상두; 김영중; 성상현

[국내논문] HPLC-DAD를 이용한 평위산 중의 Hesperidin 및 Glycyrrhizin의 동시분석법 확립
Simultaneous Determination of Hesperidin and Glycyrrhizin in Pyungwi-san by HPLC/DAD 원문보기

생약학회지, v.39 no.3 = no.154, 2008년, pp.199 - 202

이미경 ((주)엘컴사이언스 생명과학연구소) , 최옥경 ((주)엘컴사이언스 생명과학연구소) , 박진호 ((주)엘컴사이언스 생명과학연구소) , 조정희 (식품의약품안전청 생약제제과) , 김도훈 (식품의약품안전청 생약제제과) , 백주현 (식품의약품안전청 생약제제과) , 김효진 (동덕여자대학교 약학대학) , 이기용 (서울대학교 약학대학) , 김상두 (서울대학교 약학대학) , 김영중 (서울대학교 약학대학) , 성상현 (서울대학교 약학대학)

Abstract ▼ AI-Helper

A high performance liquid chromatographic (HPLC) method for the simultaneous determination of hesperidin and glycyrrhizin was established for the quality control of traditional herbal medicinal preparation, Pyungwi-san (PWS). Separation and quantification were successfully achieved with a Waters XTerra RP18 column ($5{\mu}m$, 4.6 mm I.D. ${\times}$ 150 mm) by gradient elution of a mixture of acetonitrile and water containing 0.03% phosphoric acid (pH 2.03) at a flow rate of 1.0 ml/min. The diode-array UV/vis detector (DAD) was used for the detection and the wavelength for quantification was set at 230 nm. The presence of hesperidin and glycyrrhizin in this extract was ascertained by retention time, spiking with each authentic standard and UV spectrum. All four compounds showed good linearity $(r^2>0.995)$ in a relatively wide concentration ranges. The R.S.D. for intra-day and inter-day precision was less than 7.0% and the limits of detection (LOD) were less than 60 ng. The mean recovery of each compound was 99.0-105.6% with R.S.D. values less than 4.0%. This method was successfully applied to the determination of contents of hesperidin and glycyrrhizin in three commercial products of PWS. These results suggest that the developed HPLC method is simple, effective and could be readily utilized as a quality control method for commercial PWS products.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

문제 정의

본 연구에서는 HPLC-DAD 방법을 이용하여 평위산의 지표성분인 hesperidin 및 glycyrrhizin에 대한 동시분석법을 확립하였으며, 확립된 방법의 타당성을 검토하였다. 또한 획, 립된 분석법을 이용하여 시중에 유통되는 평위산 제제의 함량을 분석하여 본 분석방법의 응용가능성을 검토하였다.
본 연구를 통하여 유통 소화기계 한약제제인 평위산의 hesperidin 및 임ycyrrhizin 대한 동시 분석 정 량법을 확립하고 이를 검증하였다. 본 분석법은 탕제에 함유되어 있는 여러가지 생약을 고려하여 hesperidin 및 glycyrrhizin의 분석이 다른 성분에 간섭받지 않도록 확립되었다. 또한 평위산에 들어있는 hesperidin 및 glycyrrhizin 2가지 성분을 동시에 분석할 수 있도록 그 조건을 확립함으로써 경제적, 시간적 및 인력에 대한 효율을 증대시킬 수 있었다.
본 연구를 통하여 유통 소화기계 한약제제인 평위산의 hesperidin 및 임ycyrrhizin 대한 동시 분석 정 량법을 확립하고 이를 검증하였다. 본 분석법은 탕제에 함유되어 있는 여러가지 생약을 고려하여 hesperidin 및 glycyrrhizin의 분석이 다른 성분에 간섭받지 않도록 확립되었다.
평위산은 창출, 후박, 진피, 대추, 감초, 건강으로 구성되어있으며, 대한약전에 진피의 hesperidin 및 감초의 glycyrrhizin이 지표성분으로 실정되어 이들의 개별 분석법이 확립되어있다. 본 연구에서는 HPLC-DAD 방법을 이용하여 평위산의 지표성분인 hesperidin 및 glycyrrhizin에 대한 동시분석법을 확립하였으며, 확립된 방법의 타당성을 검토하였다. 또한 획, 립된 분석법을 이용하여 시중에 유통되는 평위산 제제의 함량을 분석하여 본 분석방법의 응용가능성을 검토하였다.
이에 본 연-1, 에서는 식욕부진, 북부팽반 등 소화기계 질환에 시용되는 평위산의 동시분석법을 획, 립하고자 하였다. 평위산은 창출, 후박, 진피, 대추, 감초, 건강으로 구성되어있으며, 대한약전에 진피의 hesperidin 및 감초의 glycyrrhizin이 지표성분으로 실정되어 이들의 개별 분석법이 확립되어있다.

제안 방법

5회 반복 측정하여 상대표준편차로써 기준에 적합한지 평가하였다. Inter-day variability는 직선성이 확인된 농도 구간 중 3가지 농도를 기준으로 하여 시험일자를 변경하여 1 일, 3일, 5일째 되는 날 5회 실험하여 상대표준편차를 구하여 평가하였다.
기기 HWLC는 Dionex사의 ChromelonTM Chromatography Data System을 사'용하였으며, Dionex P680 pump, AST-100 Automated Sample Injector 및 Dionex UVD340U(DAD)검출기를 사용하여 분석하였다.
8) 또한 용매 조성을 isocratic 및 gradients. 달리하여 분석시간 및 분리능을 고려한 최적의 분석조건을 위한 이동상을 확립하였다.
본 연구를 통하여 확립된 분석법의 효율성을 검토하기 위하여 시판되는 평위산 3종에 대하여 지표성분의 함량평가를 수행하였다.
녹인 후 표준용액으로 사용하였다. 유의성있는 검량선을얻기 위해 적어도 5가지 이상의 농도에서 시험을 실시하였으며 regression equation을 y = ax+b (y와 x는 각각 peak 면적과 시료 함량)의 형태로 구하여 검량선을 작성하였다.
이동상의 최적화 — 이동상으로 Table I에서 보는 베와 같이 AcCN, MeOH 및 water를 그 조성 및 비율을 달리하여최적의 분리조건을 확립하였으며 최적 농도의 산 (acetic acid 또는 phosphoric acid)을 첨가하여 분리능을 증가시켰다, 8) 또한 용매 조성을 isocratic 및 gradients. 달리하여 분석시간 및 분리능을 고려한 최적의 분석조건을 위한 이동상을 확립하였다.
이와 같이 확립된 분석법을 이용하여 유통 평위산에 대하여 hesperidin 및 glycyrrhizin의 분석을 수행하였다. 3개의 제조사로부터 생산된 평위산에 대하여 본 분석법을 이용하여 분석한 결과 3종의 평위산 모두 hesperidin 및 이y- cyrrhizin의 피크가 다른 성분에 의하여 간섭받지 않고 분석이 가능하였다 (Fig.
정밀성(Precision) 평가 — Intra-day variability는 직선성이 확인된 농도 구간 중 3가지 농도를 기준으로 하여 시료를 5회 반복 측정하여 상대표준편차로써 기준에 적합한지 평가하였다. Inter-day variability는 직선성이 확인된 농도 구간 중 3가지 농도를 기준으로 하여 시험일자를 변경하여 1 일, 3일, 5일째 되는 날 5회 실험하여 상대표준편차를 구하여 평가하였다.
정확성 (Accuracy) 평가 - 함량이 확인된 탕제 추출물과 농도를 알고 있는 확정 유효성분 용액을 비율을 달리 하여 혼합한 후 직선성이 확인된 농도구간에서 3회 측정하여 판단하였다.
즉, 각각의 피크에 대하여 여러 점에서 UV 흡수스펙트럼을 판단하고 이것이 모두 일치하는 경우 피크의 특이성을 인정하였다.
특이성(Specificity) 검토 - 확립된 분석법을 통하여 분리된 지표성분의 피크가 추출물내의 다른 화합물과 분리가 되었는지 PDA 검출기를 이용하여 피크의 순도를 검토하여 판단하였다. 즉, 각각의 피크에 대하여 여러 점에서 UV 흡수스펙트럼을 판단하고 이것이 모두 일치하는 경우 피크의 특이성을 인정하였다.
평위산의 조제 - 평위산 [창출 (37.5g), 후박 (22.5g), 진피 (22.5g), 대추 (3.75g), 감초 (10.0g), 건강 (3.75g)]의 조성 대로 총 100g의 생약을 칭량한 후 총 생약양의 10배수에 해당하는 물 1000ml을 추출기에 넣고 표준탕제 공정으로 2시간 추출하였다. 추출 후 여액에 물을 가하여 500ml 로 맞춘 후 500 ml의 MeOH를 가하고 membrane filter 후 HPLC 검액으로 사용하였.

성능/효과

이와 같이 확립된 분석법을 이용하여 유통 평위산에 대하여 hesperidin 및 glycyrrhizin의 분석을 수행하였다. 3개의 제조사로부터 생산된 평위산에 대하여 본 분석법을 이용하여 분석한 결과 3종의 평위산 모두 hesperidin 및 이y- cyrrhizin의 피크가 다른 성분에 의하여 간섭받지 않고 분석이 가능하였다 (Fig. 3).
검출파장의 최적화 검출파장에 따른 분석능을 검토하여 지표 성분에 대한 민감한 분석법을 확립하였다.
0% 이하의 상대표준편차를 나타내었다. 또한 직선성이 확인된 농도 구간 중 3가지 농도를 기준으로 하여 시험일자를 변경하여 1일, 3일, 5일째 되는 날 5회 반복 측정한 결과 7.0% 이하의 상대표준편차를 나타내었다 (Table 3).
본 분석법은 탕제에 함유되어 있는 여러가지 생약을 고려하여 hesperidin 및 glycyrrhizin의 분석이 다른 성분에 간섭받지 않도록 확립되었다. 또한 평위산에 들어있는 hesperidin 및 glycyrrhizin 2가지 성분을 동시에 분석할 수 있도록 그 조건을 확립함으로써 경제적, 시간적 및 인력에 대한 효율을 증대시킬 수 있었다. 이와 같이확립된 분석법을 이용하여 시중에 유통되는 평위산 제제의함량을 분석한 결과 특별한 전처리 없이 분석이 가능하였으며, 따라서 본 분석법의 평위산의 품질관리에 신속하고효율적으로 사용될 수 있을 것이다.
분석법의 검량선 측정 및 검출한계 (LOD) - 설정 평 위산의 지표성분인 glycyrrhizin 및 hesperidin 모두 넓은 범위에서 좋은 직선성 (bo.995)을 보였으며, 검출한계는 각각 56 ng 및 4 ng으로 미량의 성분까지 검출 가능하였다 (Table 2).
분석법의 정밀성 (precision) 검토 - 확립한 동시분석법의 정밀성을 검토하기 위하여 직선성이 확인된 농도 구간중 3가지 농도를 기준으로 하여 시료를 5회 반복 측정하여정 밀성을 확인한 결과 3농도 모두에서 7.0% 이하의 상대표준편차를 나타내었다. 또한 직선성이 확인된 농도 구간 중 3가지 농도를 기준으로 하여 시험일자를 변경하여 1일, 3일, 5일째 되는 날 5회 반복 측정한 결과 7.
분석법의 정확성 (Accuracy/Recovery) 검토 - 함량이확인된 평위산 시료에 지표성분인 hesperidin (0.7 mg/ml) 및 glycyrrhizin (0.3 mg/ml)을 가한 후 함량을 평가하여 정확성을 측정한 결과 99.0-105.6 %의 정확성을 나타내었으며 또한 4.0%이하의 상대표준편차를 나타내었다 (Table 4).
x 150 mm) 컬 럼을 이용하여 Table Ⅰ의 용매조건으로 UV 230 nm^ 검출파장을 확립하였다. 이 방법을 이용하여 평위산을 분석한 결과 hesperidin 및 glycyrrhizin의 분석이 가능하였다 (Fig. 2). Lee 등(1995)도 Wuu-Ji-San 중의 glycyrrhizin, hesperidin을 0.
지표성분 피크의 순도 (Purity) 평가 - 평위산의 지표성분인 glycyrrhizin 및 hesperidin에 해당하는 피크의 순도는 DAD 검출기에 의해 확인하였으며, 순도는 98% 이상이었다 (Fig. 2).

후속연구

또한 평위산에 들어있는 hesperidin 및 glycyrrhizin 2가지 성분을 동시에 분석할 수 있도록 그 조건을 확립함으로써 경제적, 시간적 및 인력에 대한 효율을 증대시킬 수 있었다. 이와 같이확립된 분석법을 이용하여 시중에 유통되는 평위산 제제의함량을 분석한 결과 특별한 전처리 없이 분석이 가능하였으며, 따라서 본 분석법의 평위산의 품질관리에 신속하고효율적으로 사용될 수 있을 것이다.

참고문헌 (9)

Jiang, W.Y. (2005) Therapeutic wisdom in traditional Chinese medicine: a perspective from modern science. Trends Pharmacol. Sci. 26: 558-563

상세보기
Normile, D. (2003) Asian medicine. The new face of traditional Chinese medicine. Science 299: 188-190

상세보기
Xue, T.H. and Roy, R. (2003) Studying Traditional Chinese Medicine. Science 300: 740-741

상세보기
Wang, S.Y., Zheng, W. and Galletta, G.J. (2002) Cultural system affects fruit quality and antioxidant capacity in strawberries. J. Agric. Food Chem. 50: 6534-6542

상세보기
Bennett, J.O., Yu, O., Heatherly, L.G. and Krishnan, H.B.(2004) Accumulation of genistein and daidzein, soybean isoflavones implicated in promoting human health, is significantly elevated by irrigation. J. Agric. Food Chem. 52: 7574-7579

상세보기
Lund, S.T. and Bohlmann, J. (2006) The molecular basis for wine grape quality-a volatile subject. Science 311: 804-805

상세보기
Anttonen, M.J., Hoppula, K.I., Nestby, R., Verheul, M.J. and Karjalainen, R.O. (2006) Influence of fertilization, mulch color, early forcing, fruit order, planting date, shading, growing Environment, and genotype on the contents of selected phenolics in strawberry (Fragaria x ananassa Duch.) fruits. J. Agric. Food Chem. 54: 2614-2620

상세보기
Escarpa, A. and Gonzalez, M.C. (1999) Fast separation of (poly)phenolic compounds from apples and pears by high-performance liquid chromatography with diode-array detection. J. Chromatogr. A. 830: 301-309

상세보기
Lee, Y.-C., Huang, C.-Y., Wen, K.-C. and Suen, T.-T. (1995) Determination of liquiritin, glycyrrhizin, hesperidin, cinnamic acid, cinnamaldehyde, honokiol and magnolol in the traditional Chinese medicinal preparation Wuu-Ji-San by high-performance liquid chromatography. J. Chromatogr. A. 692: 137-145

상세보기

저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증