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문제 정의
- 7 세포의 염증유도를얼마나 효과적으로 저해할 수 있는지를 관찰한 결과, 세포가 방출하는 NO, PGE2 생성량과 iNOS, COX-2 발현정도 뿐만 아니라 염증성 사이토카인인 Ⅱ.-1β, IL-6의 생성량 등에서 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
- 7에 각각의 약재를 1시간 동안 전처리한 후 LPS를 처리하여 염증반응을 유도하였다. 그 다음 각각의 약재가 세포의 염증 유도를 얼마나효과적으로 저해할 수 있는지 관찰하였다.
- 동맥경화 질환은 대표적인 만성 염증성 질환인데, 이러한 질환의 예방효과를 알아보기 위하여 이묘산의메탄올 추출물을 전 처리하여 항염증 기전을 통한 동맥경화의 예방효과가 있는지를 알아보는데 관심을 두었다 본 연구에서는 RAW 264.7 세포의 염증유도를얼마나 효과적으로 저해할 수 있는지를 관찰한 결과, 세포가 방출하는 NO, PGE2 생성량과 iNOS, COX-2 발현정도 뿐만 아니라 염증성 사이토카인인 Ⅱ.-1β, IL-6의 생성량 등에서 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
- 이와 같이 이묘산의 효능에대한 연구는 거의 없을 뿐만 아니라, 특히 대식세포에서 이묘산 메탄올 추출물의 항염증효과는 알려진바가 없다. 따라서 본 연구에서는 약재의 메탄올 추출물의 항염증 활성을 조사하기 위하여 마우스 대.식세포인 RAW 264.
- 염증성 질환의 예방효과를 알아보기 위하여 약재의 메탄올 주줄물을 전 처리하여 본 연구에서 선택한약재인 이묘산과 그 구성약재인 황백, 창출이 항염증활성이 있는지 알아보았다.
- 염증에 관여하는 NO는 보통 iNOS에 의해서, PGEy는 COX-2에 의해서 만들어진다, 그래서 RAW 264.7 세포에서 이묘산 및 황백, 창출이 LPS로 유도된 iNOS 와 COX-2의 발현에 미치는 영향을 알아보기로 하였다. 우선 염증 유발 물질로 주로 사용되는 LPS를 농도별(0, 1, 10, 100 ng/ml)로 처리하여 iNOS 와 COX-2의 발현 양상을 조사하여 본 결과, 농도 의존적으로 발현량이 증가하였고 100 nj/ml의 농도에서 각각 증가함으로써 가장 효과적인 것으로 확인되었다(Fig.
- 이묘산 및 그 구성약재인 황백, 창출이 LPS로 유도된 염증성 사이토카인의 생성량에 미치는 영향을알아보기로 하였다. 우선, RAW 264.
가설 설정
-
2. 이묘산 및 구성 약재가 LPS에 의한 NO 와 PGE?의 생성량에 미치는 영향
제안 방법
- 1. 마우스 대식세포인 RAW 264.7에 대한 이묘산, 황백, 창출의 독성 효과를 조사하여 생존율에 영향을미치지 않는 농도(500 ug/W)에서 실험을 진행하였다. 이는 이묘산과 그 구성약재들이 보여주는 항염증효과가 세포 생존율의 감소에 의한 것이 아니라 각각약재들의 고유한 특성임을 말한다.
- 2. RAW 264.7 세포에 약재를 1시간 전 처리한후, 100 ng/ml 의 LPS를 처리하여 염증을 유발하였다. 그 결과 이묘산과 그 구성약재들이 LPS로 유도되어야 할 NO, PGE2의 생성량과 iNOS, COX-2의발현을 크게 저해하였고, 염증성 사이토카인인 Ⅱ.
- 이는 mitochondrial dehydrogenases 에 의하여 MTS가 formazan으로 전환되는 것을 즉정하는 것이다. 96 well plate에 Ixle/well의 RAW 264.7 세포를 분주하고 약재를 농도별(0, 100, 300, 500, 700, 1000 ug/ml)로 18 시간 동안 처리하였다또한 같은 방법을 이용하여 농도 5W ug/ml을 고정하고 0, 9, 18, 24, 48시간 동안 배양하였다. Well당 20 成의 MTS solution을 첨가하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 4시간 동안 반응시킨 후, microplate reader (DYNEX, Opsys MR USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도의 변화를 측정하여 대조군에 대한 세포생존율을 백분율로 표시하였다.
- 각 시료의 단백질 정량은 Bradford protein assay kit를 사용하여 595 nm에서흡광도를 측정하여 실시하였다. Band의 density 분석은 GelDoc-It BioImaging System (UVP, USA)을사용하여 측정하였다.
- RAW 264.7 세포에 1, 10, 100 ng/ml의 LPS를 처리하여 18 시간 배양한 후 세포배양액을 수거하였다. 이후 RAW 264.
- RAW 264.7 세포에 1, 10, 100 ng/ml의 LPS를 처리하여 18 시간 배양한 후 세포배양액을 수거하였다. 이후 RAW 264.
- 조사하였다. RAW 264.7 세포에 LPS를 농도별(0, 1, 10, 100 ng/ml)로 18시간 동안 처리한 후 Griess Reagent를사용하여 조사한 결과 NO의 생성량이 농도 의존적 .으로 증가되었으며 100 ng/ml의 농도에서 가장 효과가 있었는데 약 10배 증가되었다 (Fig.
- RAW 264.7에 이묘산과 황백, 창출을 처리하여 1 시간이 지난 후에 LPS를 처리하여 염증을 유발하였다 그 다음으로 염증인자인 NO, PGE2의 생성량 iNOS, COX-2 발현양상, IL-1β, IL-6의 생성량의 미치는 영향을 측정하였다. 그 결과 이묘산과 그 구성약재가 모두 LPS로 유도된 염증 인자들을 효과적으로 감소시키는 것으로 나타났다.
- 7 세포에 500 ug/ml의 약재 메탄올 추출물을 1시간 전 처리한 후 100 ng/ml의 LPS를 처리하여 18시간 배양한 후 세포 배양액을 수거하여 실험에 사용하였다 배양액 50 成와 같은 양의 Griess Reagent를 넣어 10분간 상온에서 반응 시킨 후 ELISA reader로 540 nm에서 흡광도를 즉정하였다. Sodium nitrite (NaNCh) 의 농도별 표준곡선을 이용하여 배양액 내의 NO 농도를 결정하였다.
- 7 세포를 분주하고 약재를 농도별(0, 100, 300, 500, 700, 1000 ug/ml)로 18 시간 동안 처리하였다또한 같은 방법을 이용하여 농도 5W ug/ml을 고정하고 0, 9, 18, 24, 48시간 동안 배양하였다. Well당 20 成의 MTS solution을 첨가하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 4시간 동안 반응시킨 후, microplate reader (DYNEX, Opsys MR USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도의 변화를 측정하여 대조군에 대한 세포생존율을 백분율로 표시하였다. 각 농도별 약재가갖는 흡광도를 보정하기 위하여 세포를 뺀 배지를 같이 배양하여 대조군과 실험군의 흡광도를 비교 보정하여 세포 생존율을 백분율로 표시하였다.
- Well당 20 成의 MTS solution을 첨가하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 4시간 동안 반응시킨 후, microplate reader (DYNEX, Opsys MR USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도의 변화를 측정하여 대조군에 대한 세포생존율을 백분율로 표시하였다. 각 농도별 약재가갖는 흡광도를 보정하기 위하여 세포를 뺀 배지를 같이 배양하여 대조군과 실험군의 흡광도를 비교 보정하여 세포 생존율을 백분율로 표시하였다.
- 이어서 ECL system으로 반응 시킨 후 X-ray film상에서 단백질을 확인하였다. 각 시료의 단백질 정량은 Bradford protein assay kit를 사용하여 595 nm에서흡광도를 측정하여 실시하였다. Band의 density 분석은 GelDoc-It BioImaging System (UVP, USA)을사용하여 측정하였다.
- 2C). 그래서 이묘산, 황백, 창출이 RAW 264.7의 세포 생존율에 영향을 주지 않는 500 Ug/皿의 농도로 18시간 처리하여 다음 실험을 진행 하였다.
- 창출은 농도별, 시간별로 처리 시 세포생존율에 거의 영향을 주지 않았다. 그래서 이묘산, 황백, 창출이 RAW 264.7의 세포 생존율에 영향을주지 않는 500 ug/ni/의 농도로 18시간 처리하여 다음 실험을 진행하였다. 이는 이묘산과 그 구성약재들이 보여주는 항염증 효과가 세포 생존율의 감소에 의한 것이 아니라 각각 약재들의 고유한 특성에 의한것임을 말한다.
- 마우스 대식세포인 RAW 264.7에 대한 세포독성을 알아보기 위하여 이묘산, 황백, 창출을 농도별(0-1000 ug/nie), 시간별(0-48 hr)로 처리한 후, MTS assay를 수행하였다. 이묘산과 황백을 농도별로 18시간 동안 처리한 경우 500 lig/mC의 농도까지 세포독성이 거의 없었고 700 ug/W의 농도에서 각각 69.
- 먼저 RAW 264.7 세포에 대한 약재의 독성을 알아보기 위하여 이묘산과 그 구성약재인 황백, 창출을농도별, 시간별로 처리한 후 MTS assay를 수행하였다. 이묘산과 황백을 농도별로 18시간 동안 처리한경우 500 Ug/mC의 농도까지 세포독성이 거의 없었고 700 ug/m£ 이상의 농도에서 독성을 가지는 것으로 나타났다.
- 따라서 본 연구에서는 약재의 메탄올 추출물의 항염증 활성을 조사하기 위하여 마우스 대.식세포인 RAW 264.7에 각각의 약재를 1시간 동안 전처리한 후 LPS를 처리하여 염증반응을 유도하였다. 그 다음 각각의 약재가 세포의 염증 유도를 얼마나효과적으로 저해할 수 있는지 관찰하였다.
- 7 세포에 1, 10, 100 ng/ml 의 LPS를 처리하여 18시간 배양한 후 세포 배양액을수거하였다. 실험 결과, LPS 100 ng/ml이 가장 효과적이므로 다음 실험에 적용하였다 RAW 264.7 세포에 500 Ug/ml의 약재 메탄올 추출물을 1시간 전 처리한 후 100 ng/ml의 LPS를 처리하여 18시간 배양한 후 세포 배양액을 얻어 cytokine 측정에 이용하였다 배양액을 적절한 농도로 희석한 후 cytokine으로 coating된 96 well plate에 50 (씩 첨가하여 4℃ 에서 overnight시켰다. Washing buffer로 3회 세척하고 100 就의 biotinylated antibody reagent를 각각의 well에 처리하여 1시간 동안 상온에서 반응시킨 후 3 회 세척한 다음, 100 砒의 streptavicline-HRP solution 을 각각의 well에 처리하여 1시간 동안 상온에서 반응시킨 후 다시 washing buffer로 3회 세척하였다.
- 염증 유발 물질로 주로 사용되는 LPS를 사용하여염증 유발에 필요한 적절한 농도를 조사하였다. RAW 264.
- 세포에 약재 500 ug/ni。의 농도를 1시간 동안전 처리한 후 100 ng/ml LPS를 18시간 동안 처리하여 LPS에 의해 유도되는 염증성 사이토카인의 생성량에 미치는 영향을 조사하였다.
- 1% Tween 20을 함유한 TBST 용액으로 40분찬 세적한 다음, secondary antibody로 반응시켰다. 이어서 ECL system으로 반응 시킨 후 X-ray film상에서 단백질을 확인하였다. 각 시료의 단백질 정량은 Bradford protein assay kit를 사용하여 595 nm에서흡광도를 측정하여 실시하였다.
- 7 세포에 1, 10, 100 ng/ml의 LPS를 처리하여 18시간 배양한 후 세포배양액을 수거하였다. 이후 RAW 264.7 세포에 500 ug/ml의 약재메탄올 추출물을 1시간 전 처리한 후 100 ng/ml의 LPS를 처리하여 18시간 배양한 후 세포 배양액을 수거하여 PGE2 측정에 사용하였다. 배양액을 goat anti-mouse로 coating된 96 well plate에 각각의 배양액읗 100 成씩 loading한다.
대상 데이터
- 실험에 사용된 시약 중 Sodium Dodesyl Sulfate (SDS), Acrylamide, Bis는 Bio-Rad사(CA, USA)에서 구입하였고, NP-40, CAPS, tween 20, protease inhibitors 등은 Sigma사(CA, USA)에서 구입하였다 실험에 사용된 1차 항체인 iNOS monoclonal antibody (mAb) 는 Santa Cruz Biotechnology 사 (CA USA)에서, COX-2 polyclonal antibody와 actin mAb 는 Cell Signaling TttlinolQgyeKMA, USA)에서 구입하였다 2차항체 인 anti-rabbit IgG horseradisli peroxidase ( HRP)-conjugated antibody는 Santa Cruz Botechnology시{CA, USA) 에서 구입하였다. Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS) kit와 Griess Reagent Systeme Promega사(WI, USA)에서 구입하였고, 각종 cytokine 즉정을 위한 EUSA kit는 Pierce Bioteclmology 사 (IL, USA)에서 구입하였으며, PGE2 assay kit는 R&D사 (MN, USA)에서 구입하였다. Protein assay re昭ent는 Bio-Rad사(CA, USA)에서 구입하였다 실험에사용된 모든 시약은 분석용 등급 이상으로 사용하였다
- Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS) kit와 Griess Reagent Systeme Promega사(WI, USA)에서 구입하였고, 각종 cytokine 즉정을 위한 EUSA kit는 Pierce Bioteclmology 사 (IL, USA)에서 구입하였으며, PGE2 assay kit는 R&D사 (MN, USA)에서 구입하였다. Protein assay re昭ent는 Bio-Rad사(CA, USA)에서 구입하였다 실험에사용된 모든 시약은 분석용 등급 이상으로 사용하였다
- 8). 따라서 RAW 264.7 세포에서 염증 유발 물질로서 100 ng/ml 농도의 LPS를 사용하기로 하였다
- 마우스의 대식세포주인 RAW 264.7 세포는 한국세포주은행(KCLB)에서 분양 받았으며, 세포배양을위해 10% FBS 과 1% penicillin-streptomycin을 포함하는 DMEM 배지를 사용하였다. 세포는 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다.
- 본 실험에 사용한 약재는 동국대학교 한의과대학방제학교실에서 선별된 것을 정선하여 사용하였으며, 이묘산의 구성 및 총량은 Table 1과 같다 약재 3배량의 80% methanol을 가한 다음 48시간 동안 추출하고, 이 과정을 2회 반복하여 여과한 후 농축하고동결 건조하여 76.2 g (수율 : 15.2%)의 이묘산 분말을 얻었다 또한 황백과 창출은 각각 97.8 g (수율 : 32.6%), 43.2 g (수율 : 14.4%) 얻었다(Fig. 1). 이 분말은 세포배양액인 Dulbecco's Modifide Eagle Medium (DMEM)°11 녹여 실험에 사용하였다
- 세포 배양액 내의 PGEz의 양을 측정하기 위해 commercial competitive enzyme immunoassay kit를 R&D systems (Minneapolis, USA) 에서 구입하여 실험하였다. RAW 264.
- 세포 배양액인 DMEM, fetal bovine serum (FBS), streptomycin-penicillin 등의 세포배양용 시약들은 Gibco BRL사(NY, USA)에서 구입하였다. 실험에 사용된 시약 중 Sodium Dodesyl Sulfate (SDS), Acrylamide, Bis는 Bio-Rad사(CA, USA)에서 구입하였고, NP-40, CAPS, tween 20, protease inhibitors 등은 Sigma사(CA, USA)에서 구입하였다 실험에 사용된 1차 항체인 iNOS monoclonal antibody (mAb) 는 Santa Cruz Biotechnology 사 (CA USA)에서, COX-2 polyclonal antibody와 actin mAb 는 Cell Signaling TttlinolQgyeKMA, USA)에서 구입하였다 2차항체 인 anti-rabbit IgG horseradisli peroxidase ( HRP)-conjugated antibody는 Santa Cruz Botechnology시{CA, USA) 에서 구입하였다.
- BRL사(NY, USA)에서 구입하였다. 실험에 사용된 시약 중 Sodium Dodesyl Sulfate (SDS), Acrylamide, Bis는 Bio-Rad사(CA, USA)에서 구입하였고, NP-40, CAPS, tween 20, protease inhibitors 등은 Sigma사(CA, USA)에서 구입하였다 실험에 사용된 1차 항체인 iNOS monoclonal antibody (mAb) 는 Santa Cruz Biotechnology 사 (CA USA)에서, COX-2 polyclonal antibody와 actin mAb 는 Cell Signaling TttlinolQgyeKMA, USA)에서 구입하였다 2차항체 인 anti-rabbit IgG horseradisli peroxidase ( HRP)-conjugated antibody는 Santa Cruz Botechnology시{CA, USA) 에서 구입하였다. Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS) kit와 Griess Reagent Systeme Promega사(WI, USA)에서 구입하였고, 각종 cytokine 즉정을 위한 EUSA kit는 Pierce Bioteclmology 사 (IL, USA)에서 구입하였으며, PGE2 assay kit는 R&D사 (MN, USA)에서 구입하였다.
- 1). 이 분말은 세포배양액인 Dulbecco's Modifide Eagle Medium (DMEM)°11 녹여 실험에 사용하였다
데이터처리
- 실험결과는 means士SEM으로 표시하고, 유의성 검증은 Prism 4.00을 이용하여 one-way ANOVA를실시하였다.
이론/모형
- 독성 즉.'졍은 5-(3-caroboxymeth-oxyphenyl)-2H-tetra-zolium inner salt (MTS) assay 방법"으로 분석하였다. 이는 mitochondrial dehydrogenases 에 의하여 MTS가 formazan으로 전환되는 것을 즉정하는 것이다.
- 세포 배양액 내의 cytokines의 양을 측정하기 위해 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) 를 수행하였다. RAW 264.
성능/효과
- 4). LPS에 의해 유도되는 PGE2의 생성에 미치는 영향을 조사한 결과, 이묘산의 경우에는 78.9% 감소시켰고, 황백은 31.8%, 창출은 62.3% 감소시켰다(Fig. 5). 이묘산과 그 구성약재인 황백, 창출 모두 LPS로 유도된 NO와 PGEz을 효과적으로 감소시키는 것으로 확인되었다.
- 7에 이묘산과 황백, 창출을 처리하여 1 시간이 지난 후에 LPS를 처리하여 염증을 유발하였다 그 다음으로 염증인자인 NO, PGE2의 생성량 iNOS, COX-2 발현양상, IL-1β, IL-6의 생성량의 미치는 영향을 측정하였다. 그 결과 이묘산과 그 구성약재가 모두 LPS로 유도된 염증 인자들을 효과적으로 감소시키는 것으로 나타났다.
- 7 세포에 약재를 1시간 전 처리한후, 100 ng/ml 의 LPS를 처리하여 염증을 유발하였다. 그 결과 이묘산과 그 구성약재들이 LPS로 유도되어야 할 NO, PGE2의 생성량과 iNOS, COX-2의발현을 크게 저해하였고, 염증성 사이토카인인 Ⅱ.-1 巨 IL-6의 생성량도 크게 감소시 ■
- 이묘산과 황백을 농도별로 18시간 동안 처리한경우 500 Ug/mC의 농도까지 세포독성이 거의 없었고 700 ug/m£ 이상의 농도에서 독성을 가지는 것으로 나타났다. 따라서 독성이 나타나지 않는 농도인 500 lig/rnC의 이묘산과 황백을 처리한 후 시간별로 MTS assay를 수행한 결과 18시간까지 세포독성이 없는것으로 확인되었고, 24시간부터 세포생존율의 감소가관찰되었다. 창출은 농도별, 시간별로 처리 시 세포생존율에 거의 영향을 주지 않았다.
- 4%의 세포생존율을 보임으로써 독성을 가지는 것으로 나타났다. 따라서 독성이 나타나지 않는 농도인 500 ug/mC의 이묘산과 황백을 처리한 후 시간별로 MTS assay를 수행한 결과 18 시간까지 각각 96.1%, 94.0%의 세포생존율을 보임으로써 세포독성이 없는 것으로 확인되었고, 24 시간부터 세포생존율의 감소가 관찰되었다(Fig. 2A, B). 창출은 농도별, 시간별로 처리 시 세포 생존율에 거의 영향을주지 않았다(Fig.
- 7A). 또한, LPS에 의해 유豪되는 COX-2 발현에 미치는 영향을 조사한 결과, 이묘산의 경우에는 92.6%, 황백은 14.2%, 창출은 65.4%까지 감소시켰다 (Fig. 7B). 이묘산 및 그 구성약재들은 LPS로 유도된 iNOS와 COX-2의 발현을 효과적으로 감소시키는 것으로 관찰되었다.
- 약재 500 iig/mC의 농도를 1시간 동안 전 처리한후 100 ng/ml LPS를 18시간 동안 처리하여 LPS에의해 유도되는 IL-6의 생성에 미치는 영향을 조사한결과, 이묘산은 78.8%까지 감소시켰고, 황백은 57.0% 까지, 창출은 62.1%까지 감소시켰다(Fig. 9).
- 약재 500 ug/W의 농도를 1시간 동안 전 처리한 후 100 ng/ml LPS를 18시간 동안 처리하여 LPS에 의해유도되는 IL-1B의 생성에 미치는 영향을 조사한 결과, 이묘산의 경우에는 57.8%까기 감소시켰고, 황백은 39.5%까지, 창출은 47.3%까지 감소시켰다(Fig. 9).
- 약재 의 항염증활성을 알아보기 위하여 RAW 264.7 세포에 약재 500 ug/mC의 농도를 1시간 동안전 처리한 후 100 ng/ml LPS를 18시간 동안 처리하여 LPS에 의해 유도되는 NO의 생성량에 미치는 영향을 같은 방법으로 조사한 결과, 이묘산의 경우에는 89.1% 감소시켰고, 황백은 91.5%, 창출은 78.1% 감소시켰다(Fig. 4). LPS에 의해 유도되는 PGE2의 생성에 미치는 영향을 조사한 결과, 이묘산의 경우에는 78.
- 약재의 항염증활성을 알아보기 위하여 RAW 264.7 세포에 약재 500 ug/mC의 농도를 1시간 동안 전 처리한 후 100 ng/ml LPS를 18시간 동안 처리하여 LPS에 의해 유도되는 iNOS의 발현에 미치는 영향을같은 방법으로 조사한 결과, 이묘산의 경우에는 99.6% 감소시켰고, 황백은 99.8%, 창출은 97.6% 감소시켰다(Fig. 7A). 또한, LPS에 의해 유豪되는 COX-2 발현에 미치는 영향을 조사한 결과, 이묘산의 경우에는 92.
- 7 세포에서 이묘산 및 황백, 창출이 LPS로 유도된 iNOS 와 COX-2의 발현에 미치는 영향을 알아보기로 하였다. 우선 염증 유발 물질로 주로 사용되는 LPS를 농도별(0, 1, 10, 100 ng/ml)로 처리하여 iNOS 와 COX-2의 발현 양상을 조사하여 본 결과, 농도 의존적으로 발현량이 증가하였고 100 nj/ml의 농도에서 각각 증가함으로써 가장 효과적인 것으로 확인되었다(Fig. 6).
- 하였다. 우선, RAW 264.7 세포에 LPS를농도별(0, 1, 10, 100 ng/ml)로 18시간 동안 처리한후 염증성 사이토카인의 생성하는 적절한 농도를 조사하였다 그 결과 LPS의 농도에 의존적으로 생성량이 증가하였고, 그 중 100 ng/ml의 농도에서 가장 효과적으로 염증성 사이토카인들이 유도되었다. LPS 100 ng/ml의 농도에서 ILTB는 6.
- 3A). 또한, PGE?의 생성량을 ELISA 방법을 이용하여 조사한결콰 LPS 의 농도별로 증가하였고 100 ng/ml의 농도에서 20배 증가되었다(Fig. 3B).
- 이러한 실험 결과들로 보아 이묘산 및 그 구성약재는 강력한 항염증 활성을 가지고 있음을 알 수 있었고, 쩐체적으로 이묘산의 효과가 탁월함을 확인 할 舉, 있었다 따라서 황백과 창출의 복방인 이建산이가장 이상적인 항염증 활성을 가지는 것으로 보인다. 따라서 염증기작으로 인하여 생기는 많은 질환의 예방과 치료에 효과적으로 적용할 수 있을 것으로 생각된다.
- 이러한 실험 결과들로 보아, 이묘산 및 그 구성약재는 항염증 효과를 가지고 있으며, 그 중 이묘산은전체적으로 가장 효과적인 것으로 나타났다. 따라서염증기작으로 인하여 생기는 많은 질환의 예방과 치료에 효耳적으로 적용할 牛.
- 7B). 이묘산 및 그 구성약재들은 LPS로 유도된 iNOS와 COX-2의 발현을 효과적으로 감소시키는 것으로 관찰되었다.
- 이묘산, 황백, 창출 모두 LPS로 유도된 염증성 사이토카인인 IL-1β, IL-6를 감소시켰고, 그 중 복합방인 이묘산이 가장 효과적으로 감소시키는 것으로 나타났다
- 5). 이묘산과 그 구성약재인 황백, 창출 모두 LPS로 유도된 NO와 PGEz을 효과적으로 감소시키는 것으로 확인되었다.
- 7에 대한 세포독성을 알아보기 위하여 이묘산, 황백, 창출을 농도별(0-1000 ug/nie), 시간별(0-48 hr)로 처리한 후, MTS assay를 수행하였다. 이묘산과 황백을 농도별로 18시간 동안 처리한 경우 500 lig/mC의 농도까지 세포독성이 거의 없었고 700 ug/W의 농도에서 각각 69.1%, 72.4%의 세포생존율을 보임으로써 독성을 가지는 것으로 나타났다. 따라서 독성이 나타나지 않는 농도인 500 ug/mC의 이묘산과 황백을 처리한 후 시간별로 MTS assay를 수행한 결과 18 시간까지 각각 96.
- 7 세포에 대한 약재의 독성을 알아보기 위하여 이묘산과 그 구성약재인 황백, 창출을농도별, 시간별로 처리한 후 MTS assay를 수행하였다. 이묘산과 황백을 농도별로 18시간 동안 처리한경우 500 Ug/mC의 농도까지 세포독성이 거의 없었고 700 ug/m£ 이상의 농도에서 독성을 가지는 것으로 나타났다. 따라서 독성이 나타나지 않는 농도인 500 lig/rnC의 이묘산과 황백을 처리한 후 시간별로 MTS assay를 수행한 결과 18시간까지 세포독성이 없는것으로 확인되었고, 24시간부터 세포생존율의 감소가관찰되었다.
후속연구
- 보인다. 따라서 염증기작으로 인하여 생기는 많은 질환의 예방과 치료에 효과적으로 적용할 수 있을 것으로 생각된다.
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