[논문]Acetaminophen과 Acetaldehyde로 유발된 간세포독성에 대한 애엽 물추출물의 영향

박완수

[국내논문] Acetaminophen과 Acetaldehyde로 유발된 간세포독성에 대한 애엽 물추출물의 영향
Effect of Water Extract from Artemisiae Argi Folium on Hepatotoxicity Caused by Acetaminophen and Acetaldehyde 원문보기

동의생리병리학회지 = Journal of physiology & pathology in Korean Medicine, v.22 no.5, 2008년, pp.1210 - 1214

박완수 (경원대학교 한의과대학 병리학교실)

Abstract ▼ AI-Helper

The purpose of this study is to investigate the effect of water extract from Artemisiae Argi Folium (WAAF) on hepatotoxicity caused by acetaminophen (AAP) and acetaldehyde which are regarded as hepatotoxin. Artemisiae Argi Folium was known to have the antibacterial, immune-enhancing, and anticoagulative properties. In Korean Medicine, Artemisiae Argi Folium is supposed to be related with 'liver meridian' according to traditional medical theory. AAP and acetaldehyde reduce the intracellular production of hydrogen peroxide ($H_2O_2$) and nitric oxide (NO) production of human hepatocyte HepG2. The intracellular production of hydrogen peroxide ($H_2O_2$) was measured by dihydrorhodamine 123 (DHR) assay. NO production was measured with Griess test. WAAF increased the production of $H_2O_2$ and NO reduced by AAP and acetaldehyde in HepG2 cells. Therefore, It could be suggested that WAAF has the hepatoprotective activity against AAP and acetaldehyde.

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문제 정의

본 연구에서는 간경(肝經)으로 귀경(歸經)하는 약물 중의 하나인 애엽(艾葉)이 대표적 간독성물질로 알려진 Acetaminophen (AAP) 과 Acetaldehyde 에 의해서 유발되는 간조직세포의 병리적현상에 미치는 영향에 대해 조사한 결과 독성완화의 유의한 결과를 얻었기에 이에 보고하는 바이다.
그러므로 여러가지 산화적 반응을 일으키는 물질들로 인해 인간 간조직세포인 HepG2 에서 발생하는 hydrogen peroxide 의 수준을 dihydrorhodamine 123 assay 을 이용하여 측정할 수 있다. 본 실험에서는 AAP, acetaldehiyde 등이유발하는 세포 내 H₂O₂ 생성억제에 대한 시료의 영향을 측정하였다. 96 well plate 에 1x104 cells/well 의 농도로 분주되도록 1x105 cells/mL 의 cell 을 100 um씩 넣고 37C, 5% CO₂ incubator 에서 24 시간동안 배양한 후 배지를 버리고 배양세포 표면을 phosphate buffered saline (PBS) 용액으로 씻어주었다.
본 연구에서는 간독성을 유발하는 것으로 알려져 있는 AAP 와 acetaldehyde 에 의한 인간 간조직세포 HepG2 cell 의 세포 내 hydrogen peroxide 생성억제와 NO 생성감소에 대한 애엽 열수추출물 WAAF 가 미치는 영향에 대해서 알아보았다.

제안 방법

세포내의 hydrogen peroxide(H₂O₂) 생성은 Roesler 등13-171의방법을 응용, dihydrorhodamine 123 (DHR) assay를 실시하여측정하였다. DHR 은 비형광이지만 세포 내에서 세포 내 H₂O₂ 에의하여 산화되어 녹색의 형광을 발현하는 물질인 rhodamine 123(R123) 로 바뀌게 된다.
시료를 처리하기 전에 우선 DHR(10 uM) 이 담긴 배지를 30분간 각 well 에 처리한뒤 배지를 제거하였다. 배지를 제거한 후 AAP(2 mM)과 acetaldehyde(200 uM) 단독 혹은 시료(10, 50, 100, 200, 400 ug/mL) 와 함께 배지에 담아 각 well 에 처리하고 24시간 동안 3 7C, 5% CO₂ incubator 에서 배양한 후 microplate reader(Bio-Rad, CA, USA)를 이용하여 490 nm 에서 흡광도를 측정, 비교하였다.
96 well plate 에 1x104 cells/well 의 농도로 분주되도록 1x105 cells/mL의 cell을 100 um씩 넣고 37C, 5% CO₂ incubator 에서 24시간동안 배양한 후 배지를 버리고 배양세포 표면을 phosphate buffered saline (PBS) 용액으로 씻어주었다. 배지를 제거한 후 AAP(2 mM) 과 acetaldehyde(200 uM) 단독 혹은 시료(10, 50, 100, 200, 400 ug/mL) 와 함께 배지에 담아 각 well 에 처리하고 24시간 동안 37C, 5% CO₂ incubator 에서배양하였다. 배양이 끝난 후 상충액 100 um을 채취하여 griess 시약 100 um을 혼합하고 15분 동안 반응시킨 후 540 nm에서 흡광도를 측정, 비교하였다.
배지를 제거한 후 AAP(2 mM) 과 acetaldehyde(200 uM) 단독 혹은 시료(10, 50, 100, 200, 400 ug/mL) 와 함께 배지에 담아 각 well 에 처리하고 24시간 동안 37C, 5% CO₂ incubator 에서배양하였다. 배양이 끝난 후 상충액 100 um을 채취하여 griess 시약 100 um을 혼합하고 15분 동안 반응시킨 후 540 nm에서 흡광도를 측정, 비교하였다.

대상 데이터

본 실험에 사용된 시약 중 Acetaminophen(AAP) 과 Acetaldehyde, Dimethyl Sulfoxide (DMSO), dihydrorhodamine 123 (DHR), Griess reagent 등은 Sigma사(ST. Louis, MO, USA) 로부터 구입하여 사용하였다. 각 시약의 품질은 분석용 등급 이상의 것으로 하여 사용하였다.
각 시약의 품질은 분석용 등급 이상의 것으로 하여 사용하였다. 본 실험에 사용된 기기는 rotary vacuum evaporator (Eyela, Tokyo, Japan), freeze dryer (Eyela, Tokyo, Japan), deep freezer (Revco, NC, USA), microplate reader (Bio-Rad, CA, USA) 등이다.
본 실험에 사용된 약재 애엽(A也湖血仑 Argi Foliumi)은 한국서해안에서 채취하여 검정한 후 사용하였으며 검정된 약재들은경원대학교 한의과 대학 병리학교실에 보관되었다.
추출액을 filter paper로 감압 여과한 뒤, 여과액을 rotary vacuum evaporator를 이용하여 농축하였다. 이 농축액을 동결건조기를이용, 건조하여 6 g(수득률 12%)의 애엽 물추출물 (Water Extract of Artemisiae Argi Folium; WAAF)을 얻어 시료로 사용하였다.
실험에 사용된 간조직세포는 human hepatocyte(HepG2 cell line) 로서 한국세포주은행 (KCLB, Korea) 에서 구입하였다.

데이터처리

실험성적은 평균치 士 표준편차 (Mean ± S.D.)로 나타내었으며, 대조군과 각 실험군과의 평균 차이는 Student t-test와 ANOVA test 로 분석하여 P<0.05 일 때 통계적으로 유의한 것으로 판정하였다.

성능/효과

Acetaminophen(AAP; 2 mM) 으로 HepG2 cell 내 hydrogen peroxide 생성억제를 유발하고 WAAF(10, 50, 100, 200, 400 μ g/mL) 를 함께 처리하여 24시간동안 배양한 결과 AAP 에 의한세포내 hydrogen peroxide 생성억제를 각각 107.11±1.50, 110.36±2.27, 127.51±1.99, 150.04±1.99, 203.63±4.03%로 10 ug/mL 이상의 농도에서 모두 유의하게(p<0.05) 회복시켰다 (Fig. 1).
Acetaldehiyde(200 uM) 으로 HepG2 cell 내 hydrogen peroxide 생성억제를 유발하고 WAAF(10, 50, 100, 200, 400 μ g/mL) 를 함께 처리하여 24시간동안 배양한 결과 Acetaldehyde 에 의한 세포 내 hydrogen peroxide 생성억제를 각각 107.16±2.71, 113.51±2.11, 129.49±2.32, 153.57±3.40, 211.05±6.08% 로 10 ug/mL 이상의 농도에서 모두 유의하게(p<0.05) 회복시켰다 (Fig. 2).
Acetaminophen(AAP; 2 mM)으로 HepG2 cell 내 NO 생성억제를 유발하고 WAAF(10, 50, 100, 200, 400 μ g/mL) 를 함께 처리하여 24시간동안 배양한 결과 AAP에 의한 NO 생성억제를 10, 100, 400 ug/mL의 농도에서 각각 146.79±31.71, 124.31 ± 23.33, 233.03±26.71%로 유의하게 (p<0.05) 회복시켰다(Fig. 3).
Acetaldehyde(200 uM) 로 HepG2 cell 내 NO 생성억제를 유발하고 WAAF(10, 50, 100, 200, 400 μ g/mL) 를 함께 처리하여 24 시간동안 배양한 결과 Acetaldehyde 에 의한 NO 생성억제를 10, 100, 200, 400 ug/mL 의 농도에서 각각 144.98±22.13, 117.47±17.45, 137.99±20.90, 236.24±18.20%로 유의하게(p<0.05) 회복시켰다 (Fig. 4).
Acetaminophen(2 mM) 으로 HepG2 cell 내 hydrogen peroxide 생성억제를 유발하고 WAAF(10, 50, 100, 200, 400 μ g/mL) 를 함께 처리하여 24시간동안 배양한 결과 AAP 에 의한세포내 hydrogen peroxide 생성감소를 각각 107.11±1.50, 110.36±2.27, 127.51±1.99, 150.04±1.99, 203.63 ±4.03%로 10 ug/mL 이상의 농도에서 모두 유의하게(p<0.05) 회복시켰다(Fig. 1). Acetald난iyde(200 uM) 으로 HepG2 cell 내 hydrogen peroxide 생성감소를 유발하고 WAAF(10, 50, 100, 200, 400 μ g/mL)를 함께 처리하여 24시간동안 배양한 경우에도 각각 107.
1). Acetald난iyde(200 uM) 으로 HepG2 cell 내 hydrogen peroxide 생성감소를 유발하고 WAAF(10, 50, 100, 200, 400 μ g/mL)를 함께 처리하여 24시간동안 배양한 경우에도 각각 107.16±2.71, 113.51±2.11, 129.49±2.32, 153.57±3.40, 211.05±6.08% 로 acetald난iyde에 의한 세포 내 hydrogen peroxide 생성억제를 10 ug/mL 이상의 농도에서 모두 유의하게(p<0.05) 회복시켰다 (Fig. 2).
AAP(2 mM)로 HepG2 cell 내 NO 생성억제를 유발하고 WAAF(10, 50, 100, 200, 400 μ g/mL) 를 함께 처리하여 24시간동안 배양한 결과 AAP 에 의한 NO 생성감소를 10, 100, 400 ug/mL 의 농도에서 각각 146.79±31.71, 124.31 ±23.33, 233.03±26.71%로유의하게(p<0.05) 회복시켰다(Fig. 3). Acetaldehyde (200 uM)로 HepG2 cell 의 NO 생성감소를 유발하고 WAAF(10, 50, 100, 200, 400 μg/mL)를 함께 처리하여 24시간동안 배양한 경우에는 Acetaldehiyde에 의한 NO 생성억제를 WAAF가 10, 100, 200, 400 ug/mL 의 농도에서 각각 144.
3). Acetaldehyde (200 uM)로 HepG2 cell 의 NO 생성감소를 유발하고 WAAF(10, 50, 100, 200, 400 μg/mL)를 함께 처리하여 24시간동안 배양한 경우에는 Acetaldehiyde에 의한 NO 생성억제를 WAAF가 10, 100, 200, 400 ug/mL 의 농도에서 각각 144.98±22.13, 117.47±17.45, 137.99±20.90, 236.24±18.20%로 유의하게 (p<0.05) 회복시켰다 (Fig. 4). 이러한 결과는 간독성을 유발하는 것으로 알려진 AAP와 acetaldehiyde 에 의해서 유발되는 간조직세포의 세포 내 hydrogen peroxide 생성감소, 세포의 NO 생성감소 등의 병리적변화를 애엽 물추출물이 회복시킬 수 있음을 의미하며 애엽 물추출물이 독성물질에 의한 간손상을 완화하는 효과를 나타내는것이라 할 수 있다.
4). 이러한 결과는 간독성을 유발하는 것으로 알려진 AAP와 acetaldehiyde 에 의해서 유발되는 간조직세포의 세포 내 hydrogen peroxide 생성감소, 세포의 NO 생성감소 등의 병리적변화를 애엽 물추출물이 회복시킬 수 있음을 의미하며 애엽 물추출물이 독성물질에 의한 간손상을 완화하는 효과를 나타내는것이라 할 수 있다.
또한 WAAF 는 AAP 에 의해서 유발되는 인간 간조직세포 HepG2 cell의 nitric oxide 생성감소를 10, 100, 400 ug/mL 의 농도에서 각각 146.79±31.71, 124.31 ±23.33, 233.03±26.71%로 유의하게(p<0.05) 회복시켰으며 acetaldehiyde 에 의해서 유발된 경우에도 10, 100, 200, 400 ug/mL 의 농도에서각각 144.98±22.13, 117.47±17.45, 137.99±20.90, 236.24±18.20%로유의하게 HepG2 cell 의 nitric oxide 생성감소를 회복시켰다. 이러한 결과는 애엽 물추출물이 간독성을 유발하는 물질에 의한간조직세포의 병리적 현상을 완화하는 효과를 가지고 있음을 알려준다.
20%로유의하게 HepG2 cell 의 nitric oxide 생성감소를 회복시켰다. 이러한 결과는 애엽 물추출물이 간독성을 유발하는 물질에 의한간조직세포의 병리적 현상을 완화하는 효과를 가지고 있음을 알려준다. 앞으로 간조직세포의 손상회복제로서 애엽의 효과에 대한 보다 면밀한 연구가 필요한 것으로 사료되는 바이다.

후속연구

이러한 결과는 애엽 물추출물이 간독성을 유발하는 물질에 의한간조직세포의 병리적 현상을 완화하는 효과를 가지고 있음을 알려준다. 앞으로 간조직세포의 손상회복제로서 애엽의 효과에 대한 보다 면밀한 연구가 필요한 것으로 사료되는 바이다.

참고문헌 (23)

전국한의과대학 공동교재편찬위원회. 본초학. 서울, 영림사, pp 405-407, 1991
김호철. 한약약리학. 서울, 집문당, pp 309-311, 2001
Chitturi, S., Farrell, G.C. Hepatotoxic slimming aids and other herbal hepatotoxins. J Gastroenterol Hepatol. 23(3):366-373, 2008

상세보기
Zhou, S.F., Xue, C.C., Yu, X.Q., Wang, G. Metabolic activation of herbal and dietary constituents and its clinical and toxicological implications: an update. Curr Drug Metab. 8(6):526-553, 2007

상세보기
Savvidou, S., Goulis, J., Giavazis, I., Patsiaoura, K., Hytiroglou, P., Arvanitakis, C. Herb-induced hepatitis by Teucrium polium L. report of two cases and review of the literature. Eur J Gastroenterol Hepatol. 19(6):507-511, 2007

상세보기
Saad, B., Azaizeh, H., Abu-Hijleh, G., Said, O. Safety of traditional arab herbal medicine. Evid Based Complement Alternat Med. 3(4):433-439, 2006

상세보기
Yuan, L.P., Chen, F.H., Ling, L., Dou, P.F., Bo, H., Zhong, M.M., Xia, L.J. Protective effects of total flavonoids of Bidens pilosa L. (TFB) on animal liver injury and liver fibrosis. J Ethnopharmacol. 116(3):539-546, 2008

상세보기
Yen, F.L., Wu, T.H., Lin, L.T., Cham, T.M., Lin, C.C. Nanoparticles formulation of Cuscuta chinensis prevents acetaminophen-induced hepatotoxicity in rats. Food Chem Toxicol. 46(5):1771-1777, 2008

상세보기
Lin, H,M., Tseng, H.C., Wang, C.J., Lin, J.J., Lo, C.W., Chou, F.P. Hepatoprotective effects of Solanum nigrum Linn extract against CCl(4)-induced oxidative damage in rats. Chem Biol Interact. 171(3):283-293, 2008

상세보기
Balderas-Renteria, I., Camacho-Corona, Mdel. R., Carranza-Rosales, P., Lozano-Garza, H.G., Castillo-Nava, D., Alvarez-Mendoza, F.J., Tamez-Cantu, E.M. Hepatoprotective effect of Leucophyllum frutescens on Wistar albino rats intoxicated with carbon tetrachloride. Ann Hepatol. 6(4):251-254, 2007

상세보기
Kim, E.Y., Kim, E.K., Lee, H.S., Sohn, Y., Soh, Y., Jung, H.S., Sohn, N.W. Protective effects of Cuscutae semen against dimethylnitrosamine-induced acute liver injury in Sprague-Dawley rats. Biol Pharm Bull. 30(8):1427-1431, 2007

상세보기
Zhong, M.M., Chen, F.H., Yuan, L.P., Wang, X.H., Wu, F.R., Yuan, F.L., Cheng, W.M. Protective effect of total flavonoids from Bidens bipinnata L. against carbon tetrachloride-induced liver injury in mice. J Pharm Pharmacol. 59(7):1017-1025, 2007

상세보기
Jirapongsananuruk, O., Malech, H.L., Kuhns, D.B., Niemela, J.E., Brown, M.R., Anderson-Cohen, M., Fleisher, T.A. Diagnostic paradigm for evaluation of male patients with chronic granulomatous disease, based on the dihydrorhodamine 123 assay. J Allergy Clin Immunol. 111(2):374-379, 2003

상세보기
Richardson, M.P., Ayliffe, M.J., Helbert, M., Davies, E.G. A simple flow cytometry assay using dihydrorhodamine for the measurement of the neutrophil respiratory burst in whole blood: comparison with the quantitative nitrobluetetrazolium test. J Immunol Methods. 219(1-2):187-193, 1998

상세보기
Crow, J.P. Dichlorodihydrofluorescein and dihydrorhodamine 123 are sensitive indicators of peroxynitrite in vitro: implications for intracellular measurement of reactive nitrogen and oxygen species. Nitric Oxide. 1(2):145-157, 1997

상세보기
van Pelt, L.J., van Zwieten, R., Weening, R.S., Roos, D., Verhoeven, A.J., Bolscher, B.G. Limitations on the use of dihydrorhodamine 123 for flow cytometric analysis of the neutrophil respiratory burst. J Immunol Methods. 191(2):187-196, 1996

상세보기
Roesler, J., Hecht, M., Freihorst, J., Lohmann-Matthes, M.L., Emmendorffer, A. Diagnosis of chronic granulomatous disease and of its mode of inheritance by dihydrorhodamine 123 and flow microcytofluorometry. Eur J Pediatr. 150(3):161-165, 1991

상세보기
Kim, M.J., Kim, D.H., Lee, K.W., Yoon, D.Y., Surh, Y.J. Jaceosidin induces apoptosis in ras-transformed human breast epithelial cells through generation of reactive oxygen species. Ann N Y Acad Sci. 1095: 483-495, 2007

상세보기
Jeong, M.A., Lee, K.W., Yoon, D.Y., Lee, H.J. Jaceosidin, a pharmacologically active flavone derived from Artemisia argyi, inhibits phorbol-ester-induced upregulation of COX-2 and MMP-9 by blocking phosphorylation of ERK-1 and -2 in cultured human mammary epithelial cells. Ann N Y Acad Sci. 1095: 458-466, 2007

상세보기
Lee, H.G., Yu, K.A., Oh, W.K., Baeg, T.W., Oh, H.C., Ahn, J.S., Jang, W.C., Kim, J.W., Lim, J.S., Choe, Y.K., Yoon, D.Y. Inhibitory effect of jaceosidin isolated from Artemisiaargyi on the function of E6 and E7 oncoproteins of HPV 16. J Ethnopharmacol. 98(3):339-343, 2005

상세보기
Adams, M., Efferth, T., Bauer, R. Activity-guided isolation of scopoletin and isoscopoletin, the inhibitory active principles towards CCRF-CEM leukaemia cells and multi-drug resistant CEM/ADR5000 cells, from Artemisia argyi. Planta Med. 72(9):862-864, 2006

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정대영, 박시원. 황해쑥 물분획물의 L1210 세포에 대한 세포독성과 항산화효소 활성변화. 약학회지 46(1):39-46, 2002

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김경하, 정대영, 민태진, 박시원. 황해쑥(Artemisia argyi)의 열수 및 메탄올 추출액은 H9(ATCC HTB176)세포에 대한 세포독성 및 항산화효소 활성. 약학회지 43(5):598-605, 1999

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용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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