[논문]LPS로 활성화된 대식세포에서 황련해독탕(黃連解毒湯) 물추출물의 염증매개물질 억제효과

김대희; 박숙자; 정지윤; 김상찬; 변성희

doi:10.6116/kjh.2009.24.4.039

LPS로 활성화된 대식세포에서 황련해독탕(黃連解毒湯) 물추출물의 염증매개물질 억제효과
Anti-inflammatory Effects of the Aqueous Extract of Hwangnyeonhaedok-tang in LPS-activated Macrophage Cells 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.24 no.4, 2009년, pp.39 - 47

김대희 (대구한의대학교 한의과대학) , 박숙자 (대구한의대학교 한방신약개발팀(BK21 Team)) , 정지윤 (대구한의대학교 한방신약개발팀(BK21 Team)) , 김상찬 (대구한의대학교 한방신약개발팀(BK21 Team)) , 변성희 (대구한의대학교 한의과대학)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : Hwangnyeonhaedok-tang (Huanglian Jiedu Tang; HHT) has been widely used for purging' 'fire' and lessening virulence of any pathogenic organism. However it has been rarely conducted to evaluate the immuno-biological activity. In this study, we evaluated anti-inflammatory effects of HHT in LPS-activated Raw264.7 cells. Methods : Cells were treated with $1\;{\mu}g/ml$ of LPS 1 h prior to the addition of HHT. Cell viability was measured by MTT assay. The production of NO was determined by reacting cultured medium with Griess reagent. PGE2 and proinflammatory cytokines were detected by ELISA. Expression of iNOS, COX-2, $I{\kappa}B{\alpha}$ and NF-${\kappa}B$ were analyzed by immunoblot analysis. Results : All three doses of HHT (0.03, 0.10 and 0.30 mg/ml) had no significant cytotoxicity during the entire experimental period. The levels of NO and PGE2 were dramatically augmented by LPS compared to control. However, HHT extract dose-dependently reduced these increases. Expression of iNOS and COX-2 protein were also decreased by treatment with HHT extract. Furthermore, HHT extract significantly reduced the nuclear translocation of NF-${\kappa}B$ which is critical in regulating inflammation through transcription of iNOS and COX-2. In addition, HHT extract reduced the elevated production of inflammatory cytokines including TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$ and IL-6. Conclusions : The results in this study demonstrate that HHT extract exerts anti-inflammatory activities through the inhibition of NO, PGE2 and proinflammatory cytokines production via the suppression of NF-${\kappa}B$.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

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문제 정의

HHT가 COX-2의 발현 및 활성을 억제한 본 연구의 결과에 따라, HHT가 LPS로 활성화된 Raw cell에서 PGE2에 미치는 영향을 평가하였다. PGE2는 염증반응에서 통증과 발열을 주로 매개하는 물질로서, 세포막에 존재하는 인지질로부터 유래된 대사산물이며, phospholipase A2, COX 및 hydroperoxidase가 관여하여 생성된다.
NO는 L-arginine으로부터 NOS를 경유하여 생성되는 것이므로³²⁾, HHT의 NO 생성의 억제에 iNOS단백질이 관여하는지 알아보기 위하여 세포질내에서의 iNOS단백질의 발현량을 조사하였다. LPS처치시에는 iNOS 단백질이 6배 이상 유의하게 발현되었으나, LPS에 HHT 0.
은 黃連解毒湯이 IL-6와 TNF-α 등의 cytokine을 유의하게 감소시킴을 보고하였다. 그러나, 黃連解毒湯의 항염증효과의 기전에 관한 연구는 매우 제한적인 실정으로, 본 연구에서는 黃連解毒湯물추출물의 염증억제 기전 및 염증관련 cytokine의 발현에 대한 연구를 수행하기 위하여 열수추출된 黃連解毒湯 (HHT)이 LPS로 활성화된 Raw 264.7 cell에서 나타나는 염증매개물질들에 미치는 영향을 평가하였다.
그러므로 본 연구에서는 세포 내에서의 I-κB α, 핵분획에서의 NF-κB 단백질 발현을 평가하였다.
본 연구는 淸熱解毒劑으로 사용되는 黃連解毒湯의 항염증효과를 평가하고 기전연구를 수행하기 위하여 실시하였다. 즉 LPS로 유도된 macrophage cell (Raw 264.
그런 까닭에 NO 생성 저해제는 염증반응 조절제로서의 가능성 때문에 NO 억제에 대한 연구가 활발하게 이루어지고 있다. 본 연구에서 HHT는 LPS에 의해 과도하게 생성된 NO의 함량을 농도의존적으로 저해하여 유의성 있는 염증반응 조절 효과를 보였다. 또한 HHT는 LPS 처치에 의해 유발된 세포독성을 유의하게 회복시켰다.
이에 저자는 黃連解毒湯 추출물이 LPS로 활성된 Raw 264.7 cell에서의 cytokine에 미치는 영향 및 이러한 염증매개물질의 발현에 핵심적 역할을 하는 NF-κB의 변화를 살펴보고자 본 연구를 실시하였다.

제안 방법

COX-2 activity는 Cayman chemical사(MI, USA)로부터 구입한 assay kit를 사용하여 분석하였다. 이 assay kit는 cyclooxygenase의 peroxidase activity를 측정하는 것으로 먼저, 1 mM EDTA를 함유하는 0.
HHT가 0.03, 0.10, 0.30 mg/ml의 농도에서 LPS로 유 도된 NO의 생성을 감소시킨 것이, HHT의 세포독성으로 Raw cell의 수적 감소에서 기인한 것인지를 관찰하기 위하여, HHT를 0.03, 0.10, 0.30 mg/ml로 처리하고 NO가 감소된 결과와 동일한 시간인 24시간 후 MTT assay를 실시하여 세포생존율을 측정하였다.
HHT가 LPS로 발현이 증가된 iNOS 및 COX-2 protein을 유의하게 억제하였으므로, iNOS 및 COX-2의 발현에 핵심적 역할을 하는 NF-κB의 발현을 평가하였다.
/ml)을 분주하고 HHT를 농도별로 처치한 다음, 1시간 후에 LPS를 처치하였다. LPS 처치 후 각 cytokine마다 특정 시간에 배지를 수거하여 cytokine을 측정하였다. 수거된 배지는 바로 측정하거나, 측정전까지 -70℃에서 보관하였다.
Raw 264.7 cell에서 HHT의 nitric oxide 생성억제 정도를 관찰하기 위하여 HHT를 0.03, 0.10, 0.30 mg/ml의 농도로 세포에 처리하여 생성되는 NO량을 측정하였다. LPS 군에서는 control군에 비교하여 NO의 생성량이 LPS처치후 유의하게 4.
iNOS, COX-2, I-κBα, NF-κB 의 발현은 각각의 antibodies를 사용하여 면역화학적 방법으로 분석하였으며, 2차 antibody는 alkaline phosphatase conjugated anti-rabbit을 사용하였다.
iNOS와 I-κBα protein의 band는 ECL western blotting detection reagents (Amersham)를 사용하여 manufacturer’s instruction에 따라 발색하였다.
黃連解毒湯 물추출물(HHT)의 항염증효능을 평가하기 위하여, 설치류 대식세포주인 Raw 264.7 cell을 LPS로 활성화시킨 후 nitric oxide의 생성량, inducible nitric oxide synthase (iNOS), COX-2의 발현 및 interleukin-1β (IL-1β), IL-6, tumor necrosis factor-α (TNF-α), PGE2 등에 미치는 HHT의 영향을 살펴본바 다음과 같은 결론을 얻었다.
그러므로, 본 연구에서 세포질에서 I-κBα, 핵분획에서 NF-κB 단백질의 발현을 평가하였다.
iNOS와 I-κBα protein의 band는 ECL western blotting detection reagents (Amersham)를 사용하여 manufacturer’s instruction에 따라 발색하였다. 발색 후 각 단백질의 발현량을 평가하기 위하여 image analyzing system (Ultra-Violet Products Ltd., Upland, CA, USA)을 이용하여 Densitometric analysis를 실시하였다.
배양 후 생존세포에 MTT (0.1 mg/ml)를 50 μl넣고 4시간 배양한 후 배지를 조심스럽게 제거하고 생성된 formazan crystals을 DMSO에 녹여 Titertek Multiskan Automatic ELISA microplate reader (Model MCC/340, Huntsville, AL)를 사용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다.
7 cell을 96 well plate에 5×10⁴ cells/well로 분주한 다음 黃連解毒湯물추출물(HHT)을 농도별로 처치하여 세포의 생존율을 구하였다. 세포에 0.03, 0.10, 0.30 mg/ml의 농도로 HHT를 처치한 후에 37℃, 5% CO₂의 환경이 유지되는 배양기에서 배양하였다. 배양 후 생존세포에 MTT (0.
즉 LPS로 유도된 macrophage cell (Raw 264.7) 에서 주요 염증인자인 NO와 PGE2의 생성에 열수추출된黃連解毒湯(HHT)이 미치는 영향을 조사하여 항염증효과를 평가하였고, NF-κB signaling을 살펴봄으로써 HHT 의 항염 기전을 규명하였다.

대상 데이터

Antibody는 BD Bioscience (San Jose, CA, USA), Cayman (Ann Arbor, MI, USA), Zymed (San Francisco, CA, USA)에서 구입하였고, NC paper는 Schleicher & Schuell (Dassel, Germany)에서 구입하였다.
LPS (Difco, Detroit, MI, USA)와 MTT는 Sigma (St Louis MO USA)에서 구입하였고, fetal bovine serum (FBS)과 antibiotics는 Gibco/BRL (Eggenstein, Germany) 로부터 구입하였다. Antibody는 BD Bioscience (San Jose, CA, USA), Cayman (Ann Arbor, MI, USA), Zymed (San Francisco, CA, USA)에서 구입하였고, NC paper는 Schleicher & Schuell (Dassel, Germany)에서 구입하였다.
Murine macrophage cell line인 Raw 264.7 cells은 한국세포주연구재단(Seoul, Korea)에서 구입하였으며, Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM)에 10% fetal bovine serum (FBS), 100 U/ml penicillin 및 100 μg/ml streptomycin 을 혼합한 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 incubator에서 배양하였다.
TNF-α, IL-1β와 IL-6의 ELISA Kit는 Pierce endogen (Rockford, IL, USA)에서 구입하였다.
黃連解毒湯(HHT)의 재료는 대원약업사(대구, 한국)에서 구입하여 관능평가를 한 후, ≪방약합편≫의 용량을 근거로 黃連解毒湯 1첩을 黃連, 黃芩, 黃柏, 梔子 각 5 g씩을 1첩으로 제조하였다. 黃連解毒湯 8첩 분량 160 g을 물 2,000 ml에 넣고 3시간 전탕한 후 추출물을 거어즈로 1차 여과하고 3,000×g에서 3분간 원심분리하였다.
7 cells은 한국세포주연구재단(Seoul, Korea)에서 구입하였으며, Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM)에 10% fetal bovine serum (FBS), 100 U/ml penicillin 및 100 μg/ml streptomycin 을 혼합한 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ incubator에서 배양하였다. 실험과정의 모든 cells은 80～90%의 confluence에서 실험하였고, 20 passages를 넘기지 않은 cell만 사용하였다.

데이터처리

with three separate experiments. One-way ANOVA was used for comparisons of multiple group means followed by Newman - Keuls test. (* : significant as compared to control.
실험 결과는 mean±SD로 나타내었으며, 처치군간의 유의성은 one way analysis of variance (ANOVA)로 검 정한 후 Newman-Kleuls test로 검정하였다.

이론/모형

TNF-α, IL-1β와 IL-6는 ELISA Kit (Pierce endogen, Rockford, IL, USA)를 사용하여 측정하였으며, 실험의 방법은 manufacturer’s instruction에 따랐다.
산화질소(nitric oxide; NO)는 L-arginine으로부터 nitric oxide synthase (NOSs)를 경유하여 생성되므로, HHT의 NO 생성 억제에 iNOS 단백질의 관련성을 조사하기 위하여 western blot analysis를 이용하여 세포질 내에서의 iNOS 단백질의 발현량을 조사하였다. LPS 처치 시에는 iNOS 단백질의 발현이 유의하게 증가되었으나, LPS에 HHT 0.

성능/효과

1. LPS는 NO의 생성량을 유의성 있게 증가시켰으며, HHT 0.03, 0.10, 0.30 mg/ml을 전처치한 실험군에서는 증가된 NO를 농도의존적으로 유의하게 억제하였다. 또한 HHT처치군은 LPS단독처리군과 비교하여 유의한 세포독성을 나타내지 않았다.
2. HHT는 LPS로 증가된 COX-2의 발현 및 활성을 유의하게 억제하였으며, PGE2 역시 유의하게 감소시켰다.
3. LPS에 의해 감소된 I-κBα는 HHT에 의해 발현이 증가되었으며, 핵분획에서의 NF-κB발현은 HHT의 전처치에 의하여 유의하게 감소하였다.
4. TNF-α, IL-6, IL-1β는 LPS에 의해 유의성있게 증가되었으며, HHT의 전처치에 의해 유의성 있게 감소시켰다.
IL-1β는 T-cell의 활성화, B-cell의 성숙, NK cell의 activity를 활성화하는26) cytokine으로, 본 연구에서도 LPS 의 자극에 의하여 IL-1β의 분비가 유의성 있게 증가하였으며, HHT는 0.03, 0.10, 0.30 mg/ml의 농도에서 모두 유의하게 IL-1β의 생성량을 줄였다(Fig. 6B).
30 mg/ml의 농도로 세포에 처리하여 생성되는 NO량을 측정하였다. LPS 군에서는 control군에 비교하여 NO의 생성량이 LPS처치후 유의하게 4.7배 정도 증가하였으며, HHT를 처치한 실험군에서는 전농도에서 유의한 NO억제를 나타내었으며, 특히 0.30 mg/ml의 농도에서는 정상수준으로 NO의 생성을 감소시켰다(Fig. 1).
산화질소(nitric oxide; NO)는 L-arginine으로부터 nitric oxide synthase (NOSs)를 경유하여 생성되므로, HHT의 NO 생성 억제에 iNOS 단백질의 관련성을 조사하기 위하여 western blot analysis를 이용하여 세포질 내에서의 iNOS 단백질의 발현량을 조사하였다. LPS 처치 시에는 iNOS 단백질의 발현이 유의하게 증가되었으나, LPS에 HHT 0.03, 0.10, 0.30 mg/ml를 처치한 실험군에서는 iNOS의 발현량이 농도의존적으로 유의하게 감소하였다(Fig. 4A, B).
30 mg/ml로 처리하고 NO가 감소된 결과와 동일한 시간인 24시간 후 MTT assay를 실시하여 세포생존율을 측정하였다. LPS단독 처리에서는 control에 비교하여 약 65% 정도의 세포독성을 나타내었으나, LPS와 HHT (0.03, 0.10, 0.30 mg/ml)를 처리한 군에서는 LPS 단독처치군에 비교하여 유의한 세포독성을 나타내지 않았으며, 오히려 HHT 전농도에서 유의한 세포독성의 억제가 관찰되었다(Fig. 2).
, HHT의 NO 생성의 억제에 iNOS단백질이 관여하는지 알아보기 위하여 세포질내에서의 iNOS단백질의 발현량을 조사하였다. LPS처치시에는 iNOS 단백질이 6배 이상 유의하게 발현되었으나, LPS에 HHT 0.03, 0.10, 0.30 mg/ml을 처치한 실험군에서는 iNOS의 양이 농도의존적으로 유의하게 감소하였다. 이러한 결과는 HHT 가 iNOS의 발현을 억제함으로써 NO의 생성을 억제함을 의미한다.
30 mg/ml의 농도에서 COX-2의 발현을 유의하게 감소시켰다. 또한 HHT는 COX-2의 발현을 감소시킨 농도에서 LPS유도로 증가된 COX-2 단백질의 activity를 농도의존적으로 유의하게 감소하였으며, 특히 0.30 mg/ml의 농도에서는 정상수준으로 COX-2의 활성도를 억제하였다(Fig. 4A, C, D).
또한 염증반응 또는 발암과정에서 중요한 역할을 하는 COX-2 역시, LPS 처리 시에는 COX-2 단백질의 발현이 4배 정도로 유의하게 증가되었으나, LPS에 HHT를 전처리한 실험군에서는 0.10과 0.30 mg/ml의 농도에서 COX-2의 발현을 유의하게 감소시켰다. 또한 HHT는 COX-2의 발현을 감소시킨 농도에서 LPS유도로 증가된 COX-2 단백질의 activity를 농도의존적으로 유의하게 감소하였으며, 특히 0.
. 본 실험에서 LPS는 IL-6의 분비를 유의성 있게 증가시켰으며, HHT 0.10, 0.30 mg/ml은 LPS로 유도된 IL-6를 농도의존적으로 유의성 있게 감소시켰다. 일반적으로 LPS는 macrophage에 작용하여, TNF-α, IL-1β, IL-6의 분비를 촉진시켜 염증반응을 유도하지만, HHT는 이 세가지의 cytokine을 유의성 있게 억제하였으므로 염증성 질환의 치료에 유의할 것으로 생각된다.
또한 IL-6는 염증 부위에서 항상 높은 수치를 나타내는 것으로 알려져 있다²⁸⁾. 본 실험에서 LPS는 IL-6의 생성을 24배 정도로 유의성 있게 증가시켰으며, HHT 0.10, 0.30 mg/ml은 LPS로 유도된 IL-6를 HHT 농도 의존적으로 유의성 있게 감소시켰다(Fig. 6C).
. 본 실험에서 LPS는 PGE₂의 생성을 유의성 있게 증가시켰으며, HHT 0.03, 0.10, 0.30 mg/ml은 LPS로 유도된 PGE₂를 유의성 있게 농도의존적으로 감소시켰다(Fig. 3)
본 실험에서 세포질에서 I-κBα는 LPS처치 시 I-κBα단백질이 세포내에서 감소하였으나, LPS에 HHT를 처치한 실험군에서는 I-κBα의 양이 증가하였다.
본 연구에서 LPS는 TNF-α의 분비를 유의성있게 증가시켰으며, HHT 는 0.10 및 0.30 mg/ml의 농도에서 TNF-α의 생성량을 유의하게 감소시켰다(Fig. 6A).
본 연구에서는 LPS의 자극에 의하여 IL-1β의 분비가 4배 이상 유의성있게 증가하였으며, HHT는 0.03, 0.10, 0.30 mg/ml의 농도에서 모두 유의하게 IL-1β의 생성량을 줄였다.
COX-2는 유도형 효소로서 염증반응, 성장촉진인자, cytokine 등에 의해 유도되어 PGE2의 생성에 관여하며, 염증성 장질환, 자가면역성질환 등에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다³⁴⁾. 본 연구에서도 COX-2는 LPS 처리 시에는 단백질의 발현이 유의하게 증가되었으며, HHT는 농도의존적으로 COX-2의 발현과 activity를 억제하였다. 이러한 HHT가 COX-2 발현 및 활성도를 억제하는 결과는 arachidonic acid로부터 PGE₂ 생성을 억제하고 이로 말미암아 발생하는 2차적 염증반응을 억제할수 있는 가능성을 시사하고 있다.
PGE2는 염증 및 세포사멸, 혈관신생, 관절질환에서 나타나는 구조적 변화에도 관여한다^22,23). 본 연구에서도 LPS는 PGE2의 생성을 유의성 있게 증가시켰으며, HHT 0.03, 0.10, 0.30 mg/ml은 LPS로 유도된 PGE2를 유의성 있게 농도의존적으로 감소시켰다. 이러한 결과는 HHT가 LPS에 의한 COX-2의 발현 및 활성을 억제함으로 인하여 PGE2의 생성을 유의성 있게 감소시킴을 의미한다.
본 연구에서도 LPS는 Raw cell에서 TNF-α의 분비를 유의하게 촉진시켰으며, HHT는 0.10 및 0.30 mg/ml의 농도에서TNF-α의 생성량을 유의하게 감소시켰다.
30 mg/ml의 농도에서 TNF-α의 생성량을 유의하게 감소시켰다. 이러한 결과는 HHT가 여러 종류의 면역게재 염증성 질환을 유의하게 개선시킬 수 있음을 의미한다.
이러한 결과는 I-κBα와의 결과와 같이 고려해 볼 때, 이차적으로 NF-κB가 핵으로 전위되는 과정을 HHT가 유의하게 억제하고 있음을 나타내고 있다.
이상의 결과를 요약하면, HHT가 NF-κB의 억제단백질 중의 하나인 I-κBα의 phophorylation을 억제하여 NFκB가 핵으로 전위되는 기전을 억제하며, 그러한 결과로 iNOS 및 COX-2의 발현 또는 활성이 억제되며, 이러한 결과로 NO 및 TNF-α, IL-1β, IL-6 등의 cytokine이 감소되며, 또한 PGE2의 생성을 억제함을 나타낸다

후속연구

黃芩은 비장 임파구에서 IgA와 IgE 생성을 조절함으로써 T helper cell에 의해 유발된 면역반응을 조절하고 dextran sodium sulfate (DSS)로 유발된 대장염의 과민반응을 완화시킬 수 있다고 보고되었으며³⁸⁾, 黃連은 LPS로 유도된 뇌신경소교세포에서 염증매개물질의 생성을 억제함이 보고되었다³⁹⁾. 따라서 黃連解毒湯의 항염증 효능에 이들 약재가 관여한 것으로 사료되나 개별 약재의 효능에 의한 것인지 약재간의 상호작용에 기인한 것인지를 설명하기 위해서는 후속연구가 더 진행되어야할 것이다. 이상의 결과를 요약하면, HHT가 NF-κB의 억제단백질 중의 하나인 I-κBα의 phophorylation을 억제하여 NFκB가 핵으로 전위되는 기전을 억제하며, 그러한 결과로 iNOS 및 COX-2의 발현 또는 활성이 억제되며, 이러한 결과로 NO 및 TNF-α, IL-1β, IL-6 등의 cytokine이 감소되며, 또한 PGE2의 생성을 억제함을 나타낸다
Sharifi 등은 PC-12 cell에서의 납에 의한 NO의 과다 생성으로 인해 세포독성이 유발됨을 보고하였으며³⁰⁾, 저자 등도 감초성분 중의 하나인 liquiritigenin이 납에 의해 생성되는 NO의 생성을 저해함으로써 세포독성을 억제함을 보고한 바 있다³¹⁾. 따라서 본 연구에서 관찰된 세포독성도 과도한 NO에 의한 것일 수 있으며 HHT는 NO의 독성을 억제하여 macrophage cell의 세포독성을 억제한것으로 사료되나, 정확한 결론을 내기 위해서는 좀더 연구가 진행되어야 할 것으로 생각된다.
이러한 결과로 보아, HHT는 염증성 질환의 치료에 적극 활용될 수 있을 것으로 판단된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	黃連解毒湯의 약리작용으로 보고된 것은 무엇인가?	약리작용으로는 血壓降下作用3), 抗酸化作用4), 胃腸管疾患과 급성 肝疾患에 대한 보호효과5), 消炎作用6), 鎭靜作用, 혈관이완작용 및 심혈관계 질환에 대한 보호효과3) 등이 보고되어 있다. 黃連解毒湯을 구성하는 약재 중, 黃芩 은 항산화작용, 혈압강하작용, 고지혈증 개선 작용, 진경작용 등의 약리작용이 연구되어 있고, 黃連은 강심, 항부정맥 작용, 혈압강하 작용, 혈소판응집 억제, 혈당강하 작용 등의 약리작용이 알려져 있으며, 黃柏은 혈압강하 작용, 항부정맥 작용 등이 연구되어 있다.
	黃連解毒湯은 무엇으로 구성되어 있는가?	黃連解毒湯은 葛洪의 ≪肘後備急方≫에 처음 제시된 방제로 黃芩, 黃連, 黃柏, 梔子로 구성되어 있다1). 黃連解毒湯은 瀉火解毒의 효능이 있어, 일체의 實熱火毒이 三焦 에 가득 차서 나타나는 大熱煩躁, 口燥咽乾, 言語錯亂, 不眠 등 증상과, 혹은 熱病으로 인한 吐血, 衄血 및 심한熱로 인한 發斑 또는 身熱下痢, 濕熱黃疸, 癰疽疔毒 등 질환에서 小便이 黃赤하고, 舌紅苔黃하며, 脈이 數하고有力한 증상을 치료한다2)
	黃連解毒湯은 어떠한 증상과 질환을 치료하는가?	黃連解毒湯은 葛洪의 ≪肘後備急方≫에 처음 제시된 방제로 黃芩, 黃連, 黃柏, 梔子로 구성되어 있다1). 黃連解毒湯은 瀉火解毒의 효능이 있어, 일체의 實熱火毒이 三焦 에 가득 차서 나타나는 大熱煩躁, 口燥咽乾, 言語錯亂, 不眠 등 증상과, 혹은 熱病으로 인한 吐血, 衄血 및 심한熱로 인한 發斑 또는 身熱下痢, 濕熱黃疸, 癰疽疔毒 등 질환에서 小便이 黃赤하고, 舌紅苔黃하며, 脈이 數하고有力한 증상을 치료한다2)

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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