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문제 정의
- 이렇게 생성된 NO와 PGE2와 같은 염증촉진 매개물은 DSS 유도 대장염 마우스 모델에서도 더욱더 염증을 악화시키는 것으로 알려졌다30-32). DSS 유도 대장염 모델 마우스에서 NO와 PGE2의 생성에 SF-Ex, MF-Ex 또는 SMF-Ex의 투여가 어떠한 영향을 미치는지 알아보았다. DSS만 투여한 양성대조군은 혈청 내 대량의 NO와 PGE2가 생성되었지만, SMF-Ex를 투여할 경우 NO와 PGE2 생성이 SF-Ex 또는 MF-Ex 투여보다 현저히 억제되는 결과를 얻었다(Fig.
- 따라서 우리는 이 연구에서 오미자와 매실을 메탄올로 추출하고 혼합하여 DSS 유도 대장염 모델 마우스에서 임상적 증후에 대한 개선 효과와 항산화 효과를 조사한 결과 오미자와 매실을 단독 투여한 경우에 비해 오미자와 매실 추출물을 혼합하여 투여할 때, 그 효과가 상승적으로 나타나는 흥미로운 결과를 얻어 보고하는 바이다.
- 그러나 오미자와 매실 추출물을 혼합한 DSS 유도 대장염의 개선에 대한 연구는 전혀 없는 실정이다. 우리는 이 연구에서 오미자와 매실을 동량을 혼합한 SMF-Ex를 대상으로 SF-Ex와 MF-Ex와 비교 조사하여 DSS 유도 대장염 모델 마우스의 임상적 증상을 개선하는 우수한 효과를 처음으로 증명했다.
- 그러나 오미자와 매실을 혼합한 추출물(Schizandrae Fructus and Mume Fructus extracts (SMF-Ex))을 대상으로 하여 dextran-sulfate sodium (DSS) 유도 대장염 마우스에 적용된 연구사례는 전혀 없는 실정이다. 이 연구에서 우리는 DSS 유도 모델 마우스를 대상으로 SMF-Ex의 대장염 개선 효과를 조사하였다. 대장염 모델은 5% DSS을 음용수로 투여하여 유도하였다.
제안 방법
- 추출물은 인산완충액(H, 7. 0 8잘 부유시켜 존데(feeding needle, Sonde)를 이용하여 마우스에 경구 투여하였다.
- DSS 유도 대장염 모델 마우스의 결장 길이와 질병활성지수(disease activity index, DAI)에 미치는 SF-Ex, MF-Ex 및 SMF-Ex의 효과를 조사하였다. Fig.
- 대장염 모델은 5% DSS을 음용수로 투여하여 유도하였다. SMF-Ex은 DSS투여와 동시에 80 mg/kg의 농도로 하루에 1회씩 7일간 경구투여 하였다 .그 결과 SMF-Ex는 DSS 유도 체중의 감소, 결장길이의 감소, 증가된 질병활성지수(disease activity index, DAI) 및 결장조직의 손상을 개선하는데 우수한 효과가 있었다.
- 그 후 Calbiochem사가 제공하는 방법대로 수행하여 Multiple spectrophotomer (Molecular Devise, CA USA)을 활용하여 SOD (450nm), catalase (540nm) 및 Gpx (340nm)의 활성을 측정하였다. SOD의 활성은 ml당 Unit로, catalase는 ml/min 당 nM로, Gpx는 ml/min 당 nM로 각각 계산하였다.
- 앞서 준비된 조직 용출 시료를 대상으로 Biorad사(CA, USA)가 제공하는 단백질 assay kit를 활용하여 단백질을 정량 하였다. 그 후 Calbiochem사가 제공하는 방법대로 수행하여 Multiple spectrophotomer (Molecular Devise, CA USA)을 활용하여 SOD (450nm), catalase (540nm) 및 Gpx (340nm)의 활성을 측정하였다. SOD의 활성은 ml당 Unit로, catalase는 ml/min 당 nM로, Gpx는 ml/min 당 nM로 각각 계산하였다.
- 그 결과 다른 전 연구자들의 결과와 같이 심각한 체중의 감소, 설사, 결장의 길이 감소, DIA, histological score 및 염증침윤지수 등 전형적인 급성 UC의 특징을 보였다. 그러므로 우리는 UC에 오미자와 매실의 효과를 알아보기 위해서 DSS 투여와 동시에 각각의 약물 20-80 mg/kg을 하루에 1회 씩 경구투여하면서 7일 동안 병리적 현상을 조사하였다. 오미자 추출물인 SF-Ex 또는 매실 추출물인 MF-Ex을 투여한 결과 저 농도에서는 효과가 없었으나, 40 mg/kg과 80 mg/kg 투여군에서는 개선의 효과가 있었다.
- 급성 대장염의 유도는 무균 정제수에 DSS을 5%되게 적정하여 7일간 투여했다22,23). 대조군은 모든 실험 기간 동안 정제수와 식염수를 투여했다.
- 이 연구에서 우리는 DSS 유도 모델 마우스를 대상으로 SMF-Ex의 대장염 개선 효과를 조사하였다. 대장염 모델은 5% DSS을 음용수로 투여하여 유도하였다. SMF-Ex은 DSS투여와 동시에 80 mg/kg의 농도로 하루에 1회씩 7일간 경구투여 하였다 .
- 적출된 결장의 설사 및 출혈 상태를 조사하고, 디지털 켈리퍼(Mitutoyo, Japan)로 결장의 길이를 측정하였다. 대조군과 실험군의 결장 길이를 비교하기 위해 모눈종이 위에 결장과 측정자를 올려놓고, 카메라(Canon, Japan)로 촬영하여 계측하였다. 적출된 결장의 일정 부위를 선정하고 약 30mm을 떼어낸 후, 결장 내 잔여 분뇨를 인산완충액으로 잘 세척하고, 물기를 제거한 다음 Invitrongen사(CA, USA)제공하는 tissue lysis완충액을 소량 주입하고 안과용 가위를 사용하여 세절하였다.
- . 대조군은 모든 실험 기간 동안 정제수와 식염수를 투여했다. 양성 대조군은 5% DSS을 자연스럽게 공급하였고, 5% DSS와 오미자(Schizandrae Fructus extract, SF-Ex),매실(Mume Fructus extract, MF-Ex)은 마우스 체중 kg 당 25-75 mg를 각각 경구투여 하였고, 오미자와 매실(Schizandrae Fructus plus Mume Fructus extracts, SMF-Ex)은 마우스 체중 kg 당 100 mg를 투여 했다.
- 이러한 결과는 DSS 유도 대장염 모델 마우스에서 오미자와 매실을 단독으로 투여하는 것 보다는 혼합하여 투여하는 것이 대장염 치료에 효과가 있음을 제시해 주었다. 따라서 다음 실험부터는 SF-Ex, MF-Ex 및 SMF-Ex 투여 농도는 모두 80 mg/kg으로 정하여 약물의 효과를 비교하였다.
- 그러나 이들 약물을 단독 투여할 경우 DSS 단독 투여 양성대조군에 비해 개선되었지만, 정상 대조군에 비해 큰 호전의 효과는 없었다. 따라서 우리는 Fig. 1C과 SF-Ex(40 mg/kg)와 MF-Ex(40 mg/kg)을 두 약물을 혼합한 80 mg/kg 단일 농도 SMF-Ex 실험군을 선택하고 SF-Ex(80 mg/kg) 또는 MF-Ex(80 mg/kg) 투여군과 DSS 유도 대장염 모델 마우스에서 그 효과를 비교하였다. 그 결과 Fig.
- 마지막으로 우리는 SF-Ex, MF-Ex 또는 SMF-Ex 투여가 DSS 유도 대장염 모델 마우스에서 생체 내 항산화 효소로 잘 알려진 superoxide dismutase (SOD), catalase 및 glutathione peroxidase (Gpx) 등의 활성에 미치는 영향을 알아보기 위해서, 실험이 종료된 마우스의 결장 조직을 적출하여, 조직을 tissue lysis완충액과 초음파분쇄기를 활용하여 조직 용출액을 제조한 후 단백질을 정량하고 효소 활성을 측정 하였다.
- 실험이 종료된 마우스를 대상으로 혈액을 얻은 후 장을 정리하고 결장을 적출하였다. 적출된 결장의 설사 및 출혈 상태를 조사하고, 디지털 켈리퍼(Mitutoyo, Japan)로 결장의 길이를 측정하였다.
- SOD, catalase 및 Gpx의 활성의 측정은 Calbiochem사(CA, USA)가 제공하는 assay kit를 사용하여 회사가 제공하는 방법에 준하여 수행했다. 앞서 준비된 조직 용출 시료를 대상으로 Biorad사(CA, USA)가 제공하는 단백질 assay kit를 활용하여 단백질을 정량 하였다. 그 후 Calbiochem사가 제공하는 방법대로 수행하여 Multiple spectrophotomer (Molecular Devise, CA USA)을 활용하여 SOD (450nm), catalase (540nm) 및 Gpx (340nm)의 활성을 측정하였다.
- 대조군은 모든 실험 기간 동안 정제수와 식염수를 투여했다. 양성 대조군은 5% DSS을 자연스럽게 공급하였고, 5% DSS와 오미자(Schizandrae Fructus extract, SF-Ex),매실(Mume Fructus extract, MF-Ex)은 마우스 체중 kg 당 25-75 mg를 각각 경구투여 하였고, 오미자와 매실(Schizandrae Fructus plus Mume Fructus extracts, SMF-Ex)은 마우스 체중 kg 당 100 mg를 투여 했다.투여할 때 약물의 양은 마리 당 200 μl를 하루에 1회씩 7일간 존데(feeding needle, Sonde)를 이용하였다.
- 요약하면, 혈청을 10배 또는 25배 희석하여 각 well에 주입하고 R&D System사가 제공하는 표준시료를 주입하여 제조회사에서 제시하는 방법에 준하여 측정하였다.
- 우리는 SF-Ex, MF-Ex 또는 SMF-Ex 투여가 DSS 유도 대장염 모델 마우스의 결장 조직 손상에 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위해서, 각 실험군의 결장 형태와 조직을 hematoxylin과 eosin으로 염색하여 조사하였다. Fig.
- 우리는 오미자(SF-Ex)와 매실(MF-Ex) 투여가 DSS 유도 대장염 모델 마우스에서 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위해서, 오미자와 매실의 농도를 각각 20-80 mg/kg의 농도로 DSS와 동시에 7일간 투여하였다. 그 결과 Fig.
- 우리는 이 연구에서 급성 UC 모델을 만들기 위해서 5% DSS을 정제수 대신 드링크제로 7일 동안 투여했다. 그 결과 다른 전 연구자들의 결과와 같이 심각한 체중의 감소, 설사, 결장의 길이 감소, DIA, histological score 및 염증침윤지수 등 전형적인 급성 UC의 특징을 보였다.
- 이러한 SF-Ex와 MF-Ex의 체중감소 억제비율에 유의한 효과가 있는 약물 농도인 80 mg/kg을 선택하여 오미자와 매실 추출물을 동량 혼합하여 SMF-Ex를 제조하고, 마우스 kg 당 80 mg을 DSS와 동시에 7일간 투여했다. 그 결과 Fig.
- 그러므로 IBD와 같은 UC의 치료에 있어서 항산화 작용을 하는 생체 효소의 역할이 주목을 받게 되었다35,36). 이러한 UC의 특징을 고려하여 DSS 유도 대장염 모델 마우스에서 항산화 효과로 잘 알려진 오미자와 매실을 대상으로 각각의 추출물인 SF-Ex와 MF-Ex을 투여하였다. 그 결과 SOD와 catalase의 경우 SF-Ex와 MF-Ex 모두 SOD의 활성을 유도하였지만 매실이 더 효과가 있는 것으로 확인되었다.
- 잘 건조된 오미자(200g)와 매실(200 g)을 유리 용기에 넣고, 메탄올을 충분히 넣어 1주일 동안 방치한 후, 0.45 μm 필터를 이용하여 여과하였다.
- 잘 세절된 시료에 Invitrongen사가 제공하는 방법에 준하여 tissue lysis완충액과 단백질분해 억제물을 주입한 후 Vibra cell초음파분쇄기(Sonics & Materials, CA USA)를 사용하여 조직을 용출시키고, 지방을 제거하기 위해서 거즈를 통과시킨 후 10,000 rpm으로10분간 원심하여 상등액을 얻고, -20℃에 보관하면서 실험에 사용하였다.
- 적출된 결장 내 잔여 분뇨를 인산완충액을 사용하여 깨끗이 제거하고 4% paraformaldehyde를 주입하여 4℃ 냉장 상태에서 24시간 고정 후 전북대학교 임상연구센터에 의뢰하여 파라핀 조직표본을 제작하여 5 μm로 각 조직표본을 절편하였다.
- 실험이 종료된 마우스를 대상으로 혈액을 얻은 후 장을 정리하고 결장을 적출하였다. 적출된 결장의 설사 및 출혈 상태를 조사하고, 디지털 켈리퍼(Mitutoyo, Japan)로 결장의 길이를 측정하였다. 대조군과 실험군의 결장 길이를 비교하기 위해 모눈종이 위에 결장과 측정자를 올려놓고, 카메라(Canon, Japan)로 촬영하여 계측하였다.
- 대조군과 실험군의 결장 길이를 비교하기 위해 모눈종이 위에 결장과 측정자를 올려놓고, 카메라(Canon, Japan)로 촬영하여 계측하였다. 적출된 결장의 일정 부위를 선정하고 약 30mm을 떼어낸 후, 결장 내 잔여 분뇨를 인산완충액으로 잘 세척하고, 물기를 제거한 다음 Invitrongen사(CA, USA)제공하는 tissue lysis완충액을 소량 주입하고 안과용 가위를 사용하여 세절하였다. 잘 세절된 시료에 Invitrongen사가 제공하는 방법에 준하여 tissue lysis완충액과 단백질분해 억제물을 주입한 후 Vibra cell초음파분쇄기(Sonics & Materials, CA USA)를 사용하여 조직을 용출시키고, 지방을 제거하기 위해서 거즈를 통과시킨 후 10,000 rpm으로10분간 원심하여 상등액을 얻고, -20℃에 보관하면서 실험에 사용하였다.
- 조직학적 검사와 백혈구 침윤을 검사하기 위해서 hematoxylin & eosin으로 염색하여 저배율(X40)에서 관찰하고 확대하면서 X200 현미경 시야에서 사진을 찍어 제시하였고, 백혈구의 침윤을 확인하기 위해서 X400현미경 시야에서 검경하였다(Olympus, 일본).
- 조직학적 검사와 백혈구 침윤을 검사하기 위해서 hematoxylin & eosin으로 염색하여 저배율(X40)에서 관찰하고 확대하면서 X200 현미경 시야에서 사진을 찍어 제시하였고, 백혈구의 침윤을 확인하기 위해서 X400현미경 시야에서 검경하였다(Olympus, 일본). 조직학적 소견은 2명의 블라인드 병리학자에게 의뢰하여 판명하였으며, 조직학적 스코어(histopathological score)는 crypt distortion의 수, muco-secretive capability의 감소, severe ulcers의 비율 및 inflammatory infiltrate량 등을 합산하여 0-15로 계산하였다. Inflammatory score는 과립백혈구(granulocytes)/괴양 두께(ulcer thickness)의 비율을 적용하여 0-5로 계산하였다.
- DAI는 체중감소, 설사, 직장출혈 등 3가지 주요 변화를 중심으로 평가했다. 체중감소 평가는 실험시작 직전부터 1일 간격으로 7일 동안 측정하였고, 설사는 결장에 형성된 연속적인 용액상태의 배설물의 상태를 조사하였으며, 설사에 의한 배설물의 출혈흔과 직장의 출혈 등을 조사하여 이들의 지수를 종합하여 계산하였다.
- 투여할 때 약물의 양은 마리 당 200 μl를 하루에 1회씩 7일간 존데(feeding needle, Sonde)를 이용하였다.
- 한편 SF-Ex, MF-Ex 또는 SMF-Ex 투여가 DSS 유도 대장염 모델 마우스에서 염증 매개물질로 잘 알려진 NO와 PGE2 생성에 미치는 영향을 알아보기 위해서, 우리는 실험이 종료된 마우스의 간문맥으로부터 혈액을 얻어 혈청을 분리하여 NO와 PGE2의 생성을 조사하였다. 그 결과 Fig.
대상 데이터
- 10주령의 수컷 NC/Nga 마우스는 중앙실험동물 (주)(서울)로부터 구입하여 1주간 낮과 밤의 주기를 12시간씩 고정하여 사료(중앙실험동물(주))와 멸균 물을 공급하면서 사육한 후 실험에 사용하였다. 실험은 전주대학교 동물윤리위원회의 규정에 따라 수행하였다.
- DSS (mol wt, 36,000-50,000)은 MP biomedicals사(LLC, France)로부터 구입했다. Prostaglandin (PG) E2 assay kit는 R&D System사(MN, USA)로부터 구입했으며, nitric oxide (NO) colorimetric assay kit는 Biovision사(CA, USA)로부터 구입했다.
- Superoxide dismutase (SOD), catalase 및 glutathione peroxidase (Gpx) 등의 assay kit는 Calbiochem사(CA, USA)로부터 구입했다. Paraformaldehyde, hematoxylin, eosin과 기타 reagent급 시약은 Sigma - Aldrich Chemical사(Louis, MO. USA)로부터 구입했다.
- Prostaglandin (PG) E2 assay kit는 R&D System사(MN, USA)로부터 구입했으며, nitric oxide (NO) colorimetric assay kit는 Biovision사(CA, USA)로부터 구입했다.
- 실험이 종료된 마우스는 에테르로 마취하여 복강을 절개하고 간 문맥(hepatic portal vein)에서 약 600 μl을 채혈하여 4℃에서 12시간 방치한 후 3,000 rpm으로 원심하여 상층액의 혈청을 얻어 NO와 PGE2 측정에 사용하였다.
- 오미자 열매(S. chinensis)와 매실(Prunus mume)은 전라북도 장수군의 농가 제품을 구입하였고, 표본(2009-Jansu-SC와 2009-Jansoo-PM)은 원광대학교 한의과대학 방제학교실 약재 보관실에 보관하였다.
데이터처리
- 모든 실험값은 평균±표준오차(mean±SE)로 표시했으며, 통계분석은 ANOVA와 Student’s t-test로 처리했으며, 유의성 한계는 P<0.05로 정하였다.
이론/모형
- DSS을 투여하면서 질병의 진행 상태는 질병활성지수(disease activity index, DAI)로 평가했으며 범위는 0-10으로 구분하였다23,24). DAI는 체중감소, 설사, 직장출혈 등 3가지 주요 변화를 중심으로 평가했다.
- PGE2는 R&D System사가 제공하는 ELISA assay kit와 방법에 따라 각각 측정하였다.
- SOD, catalase 및 Gpx의 활성의 측정은 Calbiochem사(CA, USA)가 제공하는 assay kit를 사용하여 회사가 제공하는 방법에 준하여 수행했다. 앞서 준비된 조직 용출 시료를 대상으로 Biorad사(CA, USA)가 제공하는 단백질 assay kit를 활용하여 단백질을 정량 하였다.
- 혈청 내 염증 매개물인 NO와 PGE2 함량을 측정하기 위해서 NO는 Biovision사가 제공하는 assay kit와 측정 방법에 따라 수행하였다. PGE2는 R&D System사가 제공하는 ELISA assay kit와 방법에 따라 각각 측정하였다.
성능/효과
- DSS 유도 대장염 모델 마우스의 조직학적 스코어(histological score)와 염증반응침윤 지수(inflammatory infiltrate)를 조사한 결과 Fig. 4A와 B에서 보여준 바와 같이 DSS 단독 투여 양성대조군은 심각한 상태로 조직이 손상되었을 뿐만 아니라 염증반응을 야기하는 과립백혈구와 림프구의 침윤이 현저히 높았다. 그러나 SF-Ex와 MF-Ex 투여군의 경우 양성 대조군에 비해 조직손상의 개선과 염증반응침윤 지수가 낮아짐을 확인할 수 있었고((p<0.
- DSS만 투여한 양성 대조군의 경우 설사, 출혈, 혈흔분뇨 등 심각하고 전형적인 대장염 질환 증세를 보인 반면, MF-Ex과 SF-Ex 투여군은 양성 대조군에 비해 개선되는 효과를 보였으며(p<0.05), SMF-Ex 투여군은 대장염 질환 증세가 매우 호전되었다(p<0.01).
- DSS 유도 대장염 모델 마우스에서 NO와 PGE2의 생성에 SF-Ex, MF-Ex 또는 SMF-Ex의 투여가 어떠한 영향을 미치는지 알아보았다. DSS만 투여한 양성대조군은 혈청 내 대량의 NO와 PGE2가 생성되었지만, SMF-Ex를 투여할 경우 NO와 PGE2 생성이 SF-Ex 또는 MF-Ex 투여보다 현저히 억제되는 결과를 얻었다(Fig.5)였다.
- Fig. 2A와 같이 음성대조군의 결장 길이에 비해 DSS만 투여한 양성대조군의 결장 길이는 현저히 줄어든 반면, MF-Ex과 SF-Ex 투여군은 결장 길이의 감소가 억제되었으며(p<0.05), SMF-Ex 투여군에서는 아무런 약물이 투여되지 않은 대조군과 유사하게 결장 길이가 줄어들지 않았다(p<0.01).
- DSS만 투여한 양성대조군의 경우 조직의 손상이 crypt distortion의 수, muco-secretive capability의 감소, 궤양 등 심각한 수준이었다. MF-Ex 투여군은 조직손상이 약간 개선되는 효과를 보였고, SF-Ex 투여군은 MF-Ex 투여군보다 개선효과가 좋았다. SMF-Ex 투여군은 아무런 약물이 투여되지 않은 대조군과 유사하게 현저한 개선 효과가 있었다.
- 그 결과 Fig. 1A와 B와 같이 20 mg/kg의 저농도의 SF-Ex와 MF-Ex 투여군에서는 체중의 감소율이 DSS만 투여한 양성 대조군에 비해 차이가 없었으나, 40 mg/kg과 80 mg/kg 투여군에서는 유의하게 체중의 감소가 억제되었다(p<0.05).
- 그 결과 Fig. 1C와 같이 SMF-Ex 투여군은 DSS만 투여한 양성대조군에 비해서 현저히 체중감소를 억제하였을 뿐만 아니라 SF-Ex와 MF-Ex 단독 투여군에 비해 그 효과가 좋았으며(p<0.01), 음성대조군의 체중과 유사한 결과를 얻었다.
- 1C과 SF-Ex(40 mg/kg)와 MF-Ex(40 mg/kg)을 두 약물을 혼합한 80 mg/kg 단일 농도 SMF-Ex 실험군을 선택하고 SF-Ex(80 mg/kg) 또는 MF-Ex(80 mg/kg) 투여군과 DSS 유도 대장염 모델 마우스에서 그 효과를 비교하였다. 그 결과 Fig.1C와 같이 SF-Ex 또는 MF-Ex을 단독 투여할 때보다 SMF-Ex을 투여할 때 UC의 체중의 감소는 물론 병리적 특징이 크게 개선됨을 알 수 있었다(Fig.1-4). 이러한 결과는 UC 치료에 있어서 오미자와 매실을 단독으로 투여하는 것보다는 이들 약물을 혼합하여 투여할 때 그 치료 효과가 극대화 될 수 있음을 제시해 주었다.
- 그 결과 Fig.5A와 B에서 보여준 바와 같이 DSS만 투여한 양성대조군에서는 NO와 PGE2 생성이 매우 높았지만, SF-Ex와 MF-Ex 투여군에서는 NO와 PGE2 생성이 유의하게 억제되었고(p<0.05), SMF-Ex 투여군의 경우 아무런 약물이 투여되지 않은 대조군과 유사하게 NO와 PGE2 생성이 현저히 억제 되었다(p<0.01).
- SMF-Ex은 DSS투여와 동시에 80 mg/kg의 농도로 하루에 1회씩 7일간 경구투여 하였다 .그 결과 SMF-Ex는 DSS 유도 체중의 감소, 결장길이의 감소, 증가된 질병활성지수(disease activity index, DAI) 및 결장조직의 손상을 개선하는데 우수한 효과가 있었다. 더욱이 SMF-Ex는 DSS 유도에 의한 감소된 결장조직의 superoxide anion (SOD), catalase 및 glutathione peroxidase (Gpx) 등 효소활성을 증가시키는 우수한 효과가 있었다.
- 이러한 UC의 특징을 고려하여 DSS 유도 대장염 모델 마우스에서 항산화 효과로 잘 알려진 오미자와 매실을 대상으로 각각의 추출물인 SF-Ex와 MF-Ex을 투여하였다. 그 결과 SOD와 catalase의 경우 SF-Ex와 MF-Ex 모두 SOD의 활성을 유도하였지만 매실이 더 효과가 있는 것으로 확인되었다. 그러므로 같은 양의 매실과 오미자를 혼합한 추출물인 SMF-Ex를 투여한 결과 각각을 투여한 실험군에서 보다 현저히 그 활성이 증가되었다.
- 그 결과 SOD와 catalase의 활성은 Fig. 6A-B와 같이 DSS단독 투여군인 양성대조군의 경우 아무런 약물이 투여되지 않은 대조군에 비해 그 활성이 현저히 줄어들었으나, SF-Ex 또는 MF-Ex을 투여한 결과 효소 활성이 증가하는 효과가 있었다(p<0.05).
- 우리는 이 연구에서 급성 UC 모델을 만들기 위해서 5% DSS을 정제수 대신 드링크제로 7일 동안 투여했다. 그 결과 다른 전 연구자들의 결과와 같이 심각한 체중의 감소, 설사, 결장의 길이 감소, DIA, histological score 및 염증침윤지수 등 전형적인 급성 UC의 특징을 보였다. 그러므로 우리는 UC에 오미자와 매실의 효과를 알아보기 위해서 DSS 투여와 동시에 각각의 약물 20-80 mg/kg을 하루에 1회 씩 경구투여하면서 7일 동안 병리적 현상을 조사하였다.
- 그러나 SF-Ex와 MF-Ex 투여군의 경우 양성 대조군에 비해 조직손상의 개선과 염증반응침윤 지수가 낮아짐을 확인할 수 있었고((p<0.05), SMF-Ex 투여군의 경우 아무런 약물이 투여되지 않은 대조군과 유사하게 조직손상과 염증반응이 현저히 개선되는 효과를 보였다(p<0.01).
- 그 결과 SOD와 catalase의 경우 SF-Ex와 MF-Ex 모두 SOD의 활성을 유도하였지만 매실이 더 효과가 있는 것으로 확인되었다. 그러므로 같은 양의 매실과 오미자를 혼합한 추출물인 SMF-Ex를 투여한 결과 각각을 투여한 실험군에서 보다 현저히 그 활성이 증가되었다. 더욱이 SCMF-Ex의 투여는 DSS에 의해 고갈된 Gpx의 활성을 유도하는데 우수한 효과가 있었음을 확인하였다(Fig.
- 그러므로 같은 양의 매실과 오미자를 혼합한 추출물인 SMF-Ex를 투여한 결과 각각을 투여한 실험군에서 보다 현저히 그 활성이 증가되었다. 더욱이 SCMF-Ex의 투여는 DSS에 의해 고갈된 Gpx의 활성을 유도하는데 우수한 효과가 있었음을 확인하였다(Fig.6).
- 그 결과 SMF-Ex는 DSS 유도 체중의 감소, 결장길이의 감소, 증가된 질병활성지수(disease activity index, DAI) 및 결장조직의 손상을 개선하는데 우수한 효과가 있었다. 더욱이 SMF-Ex는 DSS 유도에 의한 감소된 결장조직의 superoxide anion (SOD), catalase 및 glutathione peroxidase (Gpx) 등 효소활성을 증가시키는 우수한 효과가 있었다. 이러한 결과는 DSS 유도 대장염 모델 마우스에서 SMF-Ex 투여가 대장염의 임상적 증상의 개선과 항염증 효과 및 항산화 효소 활성을 유도하는데 우수한 효과가 있음을 보여주었다 따라서 오미자와 매실 혼합추출물인 SXPM-Ex는 항궤양 치료에 활용될 수 있는 효과적인 기능성 식품이라 사료된다.
- 05). 두 약물의 체중감소 억제 비율은 MF-Ex에 비해 SF-Ex의 효과가 더 좋았다.
- 또한 Fig. 6C와 같이 Gpx의 활성의 경우는 DSS에 의해 억제되었던 효소의 활성이 SF-Ex 또는 MF-Ex을 투여함으로써 그 활성이 증가하는 효과가 있었다(p<0.05).
- 그러므로 우리는 UC에 오미자와 매실의 효과를 알아보기 위해서 DSS 투여와 동시에 각각의 약물 20-80 mg/kg을 하루에 1회 씩 경구투여하면서 7일 동안 병리적 현상을 조사하였다. 오미자 추출물인 SF-Ex 또는 매실 추출물인 MF-Ex을 투여한 결과 저 농도에서는 효과가 없었으나, 40 mg/kg과 80 mg/kg 투여군에서는 개선의 효과가 있었다. 그러나 이들 약물을 단독 투여할 경우 DSS 단독 투여 양성대조군에 비해 개선되었지만, 정상 대조군에 비해 큰 호전의 효과는 없었다.
- 더욱이 SMF-Ex는 DSS 유도에 의한 감소된 결장조직의 superoxide anion (SOD), catalase 및 glutathione peroxidase (Gpx) 등 효소활성을 증가시키는 우수한 효과가 있었다. 이러한 결과는 DSS 유도 대장염 모델 마우스에서 SMF-Ex 투여가 대장염의 임상적 증상의 개선과 항염증 효과 및 항산화 효소 활성을 유도하는데 우수한 효과가 있음을 보여주었다 따라서 오미자와 매실 혼합추출물인 SXPM-Ex는 항궤양 치료에 활용될 수 있는 효과적인 기능성 식품이라 사료된다.
- 01), 음성대조군의 체중과 유사한 결과를 얻었다. 이러한 결과는 DSS 유도 대장염 모델 마우스에서 오미자와 매실을 단독으로 투여하는 것 보다는 혼합하여 투여하는 것이 대장염 치료에 효과가 있음을 제시해 주었다. 따라서 다음 실험부터는 SF-Ex, MF-Ex 및 SMF-Ex 투여 농도는 모두 80 mg/kg으로 정하여 약물의 효과를 비교하였다.
- 01).이러한 결과는 SF-Ex와 MF-Ex 투여군보다 SMF-Ex 투여군이 염증 매개물을 현저히 줄여줄 수 있는 효과가 있음을 제시해주었다.
- 1-4). 이러한 결과는 UC 치료에 있어서 오미자와 매실을 단독으로 투여하는 것보다는 이들 약물을 혼합하여 투여할 때 그 치료 효과가 극대화 될 수 있음을 제시해 주었다.
- 이상의 결과를 종합하면, 오미자와 매실은 DSS 유도 대장염 모델 마우스에서 체중의 감소, 조직 병리학적 악화, 염증반응 및 산화적 스트레스를 개선하는 효과가 있었다. 특히 오미자와 매실을 혼합한 추출물인 SMF-Ex의 효과는 오미자 또는 매실을 단독으로 투여하는 것보다 DSS 유도 대장염의 병리학적 임상 증후를 개선시키는데 우수한 효과를 증명하였다.
- 특히 catalase의 경우 MF-Ex을 투여했을 때 SF-Ex보다 우수한 효소 활성 효과가 있었고, SMF-Ex 투여군과 함께 대조군과 유사하게 그 활성이 현저히 증가했다(p<0.01).
- 이상의 결과를 종합하면, 오미자와 매실은 DSS 유도 대장염 모델 마우스에서 체중의 감소, 조직 병리학적 악화, 염증반응 및 산화적 스트레스를 개선하는 효과가 있었다. 특히 오미자와 매실을 혼합한 추출물인 SMF-Ex의 효과는 오미자 또는 매실을 단독으로 투여하는 것보다 DSS 유도 대장염의 병리학적 임상 증후를 개선시키는데 우수한 효과를 증명하였다. 따라서 오미자와 매실을 혼합하여 복용한다면 UC와 같은 염증성 내장질환 치료에 우수한 효과를 줄 수 있는 기능성 식품으로 활용될 수 있을 것이라 사료된다.
후속연구
- 특히 오미자와 매실을 혼합한 추출물인 SMF-Ex의 효과는 오미자 또는 매실을 단독으로 투여하는 것보다 DSS 유도 대장염의 병리학적 임상 증후를 개선시키는데 우수한 효과를 증명하였다. 따라서 오미자와 매실을 혼합하여 복용한다면 UC와 같은 염증성 내장질환 치료에 우수한 효과를 줄 수 있는 기능성 식품으로 활용될 수 있을 것이라 사료된다.
- 01). 이러한 결과는 DSS 유도 대장염 증후에 SMF-Ex가 가장 좋은 효과를 보여 대장염 치료에 좋은 후보로 활용될 수 있을 것이라 사료된다.
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