선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 현재 다양한 제법과 형태의 발효 한약이 개발되어 시장에서 새로운 수요를 창출 할 것으로 기대되나 아직 그 효능 및 안전성에 대한 검증은 미비한 상태이다. 이에 본 연구에서는 한방처방의 효능을 강화하기 위하여 오적산을 대표적인 장내미생물로서, 전통적으로 발효한 유제품에서 분리16)되는 lactobacillus fermentum을 이용하여 발효하였으며, 발효 오적산의 효능 규명 이전에 그 안전성에 대한 자료를 확보하고자 급성독성 실험을 실시하였다.
- 최근 한의학계에서는 체내 흡수율과 생체 이용률이 높은 발효한약에 대한 관심이 증가하고 있으며 다양한 제법과 형태의 개발이 기대되고 있다. 본 연구에서는 오적산의 효능을 강화하기 위하여 lactobacillus fermentum을 이용하여 발효 오적산을 제조하였으며, 효능규명 이전에 안전성에 대한 자료를 확보하기 위하여 실험동물에 대한 급성독성실험을 실시하였다. 투여경로는 한방에서 가장 널리 이용되고 있는 경구투여법을 사용하였으며, 투여용량은 단회경구투여 최고용량인 5000 ㎎/㎏18)을 고농도로 설정하였다.
제안 방법
- 오적산의 한약재 구성은 당귀, 천궁, 작약, 창출, 후박, 진피, 복령, 반하, 백지, 지실, 길경, 건강, 계지, 마황, 감초로 생산자 및 재배지역이 명확한 한약재를 구입하여 사용하였다(Table 1). 본 연구에서는 전탕 추출법(한국, 경서추출기 Cosmos-660)에 의한 오적산 추출을 실시하였으며 처방구성(Table 2)에 따른 각 한약재들을 무게의 10배에 해당하는 생수(화이트, 경남 산청군 삼장면 덕교리 800)에 넣어 1시간 침적한 다음 180분간 열탕 추출 하였다. 오적산의 발효는 1M NaOH로 시험물질의 pH를 8.
- 투여 경로는 한방 임상에서 가장 널리 이용되고 있는 경구 투여법을 이용하였으며, 본 연구에서 설정된 투여 용량은 “의약품 등의 독성시험기준(식품의약품안전청고시 제 2005-60호, 2005.10.21)”에 따른 급성독성 한계용량인 2000 ㎎/㎏을 초과하는 5000 ㎎/㎏을 고농도로 설정하였으며, 고농도를 기준으로 하여 공비 0.5로 3개 군 및 대조군을 포함하여 모두 4개의 군으로 정하였다.
- 5주령 마우스에 대한 급성 경구독성을 평가하기 위하여 각 주령의 마우스를 각각 4개의 용량군으로 나누었다(Table 3). 투여 경로는 한방 임상에서 가장 널리 이용되고 있는 경구 투여법을 이용하였으며, 본 연구에서 설정된 투여 용량은 “의약품 등의 독성시험기준(식품의약품안전청고시 제 2005-60호, 2005.
- 5로 3개 군 및 대조군을 포함하여 모두 4개의 군으로 정하였다. 각 용량군의 한약재 추출물은 투여 직전에 3차 증류수에 희석하여 실험에 공시하였으며 동물을 하룻밤 절식시킨 후 배부 피부 고정법으로 고정하고 경구투여용 금속제 존 데와 주사관을 이용하여 위내에 강제 경구 투여 하였다.
- 임상 증상은 투여 직후부터 6시간 동안 매시간 관찰하였으며, 그 후 14일(1일 1회) 동안 일반증상 관찰법에 의하여 관찰하였다17). 모든 동물에 대하여 투여 전 그리고 투여 후 1, 3, 7, 14일에 체중 변화를 측정하였으며 실험 종료 후, CO2로 마취하여 후대정맥을 통한 방혈을 실시한 후, 모든 장기에 대한 육안적 병변을 관찰하였다.
- . 모든 동물에 대하여 투여 전 그리고 투여 후 1, 3, 7, 14일에 체중 변화를 측정하였으며 실험 종료 후, CO2로 마취하여 후대정맥을 통한 방혈을 실시한 후, 모든 장기에 대한 육안적 병변을 관찰하였다.
- 본 연구에서는 오적산의 효능을 강화하기 위하여 lactobacillus fermentum을 이용하여 발효 오적산을 제조하였으며, 효능규명 이전에 안전성에 대한 자료를 확보하기 위하여 실험동물에 대한 급성독성실험을 실시하였다. 투여경로는 한방에서 가장 널리 이용되고 있는 경구투여법을 사용하였으며, 투여용량은 단회경구투여 최고용량인 5000 ㎎/㎏18)을 고농도로 설정하였다. 발효 오적산은 전탕 추출한 오적산을 48시간 동안 유산균 발효 후 동결건조하여 0(control), 1250, 2500, 5000㎎/㎏ 용량으로 암․수 ICR 마우스에 단회 경구투여 하였고, 이후 14일 간 치사율, 체중, 임상증상 및 부검 후 내부 장기의 이상 병변 유무에 대한 육안적 소견을 관찰하였다.
- 투여경로는 한방에서 가장 널리 이용되고 있는 경구투여법을 사용하였으며, 투여용량은 단회경구투여 최고용량인 5000 ㎎/㎏18)을 고농도로 설정하였다. 발효 오적산은 전탕 추출한 오적산을 48시간 동안 유산균 발효 후 동결건조하여 0(control), 1250, 2500, 5000㎎/㎏ 용량으로 암․수 ICR 마우스에 단회 경구투여 하였고, 이후 14일 간 치사율, 체중, 임상증상 및 부검 후 내부 장기의 이상 병변 유무에 대한 육안적 소견을 관찰하였다. 발효 오적산 추출물에 대한 급성독성 시험을 실시한 결과, 0, 1250, 2500, 5000 ㎎/㎏ 용량으로 발효 오적산 추출물을 투여한 모든 암․수 ICR 마우스에 대하여 사망례가 관찰되지 않았고, 이로 인하여 LD50은 산출 할수 없었다.
- 한방처방으로 널리 사용되고 있는 발효 오적산에 대한 급성독성을 실험적으로 평가하고자 ICR 마우스에 투여한 후 임상증상 및 부검소견, 그리고 치사율과 체중변화 등을 관찰한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다.
대상 데이터
- 오적산의 한약재 구성은 당귀, 천궁, 작약, 창출, 후박, 진피, 복령, 반하, 백지, 지실, 길경, 건강, 계지, 마황, 감초로 생산자 및 재배지역이 명확한 한약재를 구입하여 사용하였다(Table 1). 본 연구에서는 전탕 추출법(한국, 경서추출기 Cosmos-660)에 의한 오적산 추출을 실시하였으며 처방구성(Table 2)에 따른 각 한약재들을 무게의 10배에 해당하는 생수(화이트, 경남 산청군 삼장면 덕교리 800)에 넣어 1시간 침적한 다음 180분간 열탕 추출 하였다.
- 5 기압에서 15분간 가압멸균 후, 상온까지 냉각시켜 유산균을 1%(v/v)로 접종하였고, 37℃의 항온실에서 48시간 동안 통기배양하여 액체 발효하였다. 유산균은 한국식품연구원(Korea Food Research Institute: KFRI) 식품미생물 유전자은행에서 lactobacillus fermentum(KFRI 145, ATCC 14931, Fermented beets)을 분양 받았으며, 발효 된 시험물질은 동결건조기(한국, 일신 FD5512)를 사용하여 분말 형태로 조제하여 실험에 사용하였다(수율 : 28.56%).
- 실험은 한국한의학연구원 동물실험실에서 실시하였으며, ICR(Mouse) 암⋅수컷(오리엔트 바이오, 경기도 성남시 중원구 상대원동 143-1) 4주령을 사용하였다.
- 순화 기간 중, 일반 임상증상을 관찰하여 건강한 동물을 암⋅수 20마리씩 선정하여 체중범위에 따른 무작위법에 의하여 군 분리를 실시한 후, 본 실험에 사용하였다.
- 실험은 한국한의학연구원 동물실험실에서 실시하였으며, ICR(Mouse) 암⋅수컷(오리엔트 바이오, 경기도 성남시 중원구 상대원동 143-1) 4주령을 사용하였다. 동물입수 시, 외관을 육안으로 검사한 후, 1주일간 시험을 실시하는 동물실에서 순화시키고 그 중 건강한 동물을 골라 실험에 사용하였다. 순화 기간 중, 일반 임상증상을 관찰하여 건강한 동물을 암⋅수 20마리씩 선정하여 체중범위에 따른 무작위법에 의하여 군 분리를 실시한 후, 본 실험에 사용하였다.
데이터처리
- 통계분석법은 SPSS Package program(Ver 12.0)을 이용하여 일원배치분산분석(one-way analysis of variance, ANOVA)을 실시하였으며 대조군과 투여군 사이의 통계학적 유의차는 Duncan test에 의하여 평균과 표준편차를 구하고 통계처리 하였다.
성능/효과
- 실험은 실험동물윤리위원회의 승인을 거쳐 이루어졌으며, 순화 및 실험기간 동안의 사육환경은 온도 23±3℃, 상대습도 50±10%, 환기횟수는 시간당 12～16회, 조명은 12시간 명암주기(점등 7:00, 소등 19:00), 조도는 150～300 Lx로 조정하여 일정한 사육환경 조건을 유지하였다.
- Table 4와 같이 0, 1250, 2500, 5000 ㎎/㎏ 용량의 발효 오적산 추출물을 경구로 단회 투여 후 14일 동안 실험동물을 관찰한 결과, 모든 암․수 ICR 마우스에서 사망례가 관찰되지 않았다. 따라서 본 실험의 경우 한계용량(5000 ㎎/㎏/day)까지 경구 투여하여도 사망례를 관찰할 수 없어 LD50 값은 산출되지 않았다.
- Table 5와 같이 0, 1250, 2500, 5000 ㎎/㎏ 용량의 발효 오적산 추출물을 경구로 단회 투여 후 14일 동안 실험동물을 관찰한 결과 실험에 사용된 모든 암․수 ICR 마우스에서 보행장애, 행동이상, 웅크림, 설사, 부종, 호흡촉박, 몸단장, 뛰어오름, 유루, 무기력증, 구토, 비루, 마비, 유연 등 시험 물질 투여와 관련된 어떠한 임상증상의 이상소견도 관찰되지 않았다.
- 1, 2와 같다. 경구 투여 후 시험물질 투여군과 대조군 모두 개시체중에 비하여 체중이 증가하였으나, 대조군의 체중과 비교하여 투여 전, 투여 후 1, 3, 7, 14일 모두 각 용량별의 발효 오적산 추출물을 투여한 군에서 유의한 체중의 증가나 감소는 관찰되지 않았다.
- 실험 종료 시, 모든 실험동물을 부검하여 주요 내부 장기의 육안적 소견을 관찰한 결과 Table 6과 같이 0, 1250, 2500, 5000 ㎎/㎏ 용량의 발효 오적산 추출물을 투여한 모든 암․수 ICR 마우스에서 심장, 폐, 흉선, 간, 신장, 부신, 비장, 위, 대장 맹장 등 주요 내부 장기에 대한 외관상의 어떠한 이상 병변도 발견되지 않았다.
- 발효 오적산은 전탕 추출한 오적산을 48시간 동안 유산균 발효 후 동결건조하여 0(control), 1250, 2500, 5000㎎/㎏ 용량으로 암․수 ICR 마우스에 단회 경구투여 하였고, 이후 14일 간 치사율, 체중, 임상증상 및 부검 후 내부 장기의 이상 병변 유무에 대한 육안적 소견을 관찰하였다. 발효 오적산 추출물에 대한 급성독성 시험을 실시한 결과, 0, 1250, 2500, 5000 ㎎/㎏ 용량으로 발효 오적산 추출물을 투여한 모든 암․수 ICR 마우스에 대하여 사망례가 관찰되지 않았고, 이로 인하여 LD50은 산출 할수 없었다. 또한 시험기간 동안 각 용량의 발효 오적산 추출물을 투여한 시험물질 투여군과 대조군이 경구 투여 후 1, 3, 7, 14일의 체중에서 유의한 차이가 나타나지 않았고, 전 시험기간 동안 특이한 임상증상이 나타나지 않았으며, 부검 소견에서도 내부 장기에 대한 어떠한 육안적 이상병변도 관찰되지 않았다.
- 발효 오적산 추출물에 대한 급성독성 시험을 실시한 결과, 0, 1250, 2500, 5000 ㎎/㎏ 용량으로 발효 오적산 추출물을 투여한 모든 암․수 ICR 마우스에 대하여 사망례가 관찰되지 않았고, 이로 인하여 LD50은 산출 할수 없었다. 또한 시험기간 동안 각 용량의 발효 오적산 추출물을 투여한 시험물질 투여군과 대조군이 경구 투여 후 1, 3, 7, 14일의 체중에서 유의한 차이가 나타나지 않았고, 전 시험기간 동안 특이한 임상증상이 나타나지 않았으며, 부검 소견에서도 내부 장기에 대한 어떠한 육안적 이상병변도 관찰되지 않았다. 본 실험에서는 단회투여 독성시험의 경우, 육안적 이상소견이 관찰된 장기 및 조직에 대하여 병리조직학적 검사가 포함되어야 한다는 “의약품등의 독성시험기준(식품의약품안전청고시 제 2005-60호, 2005.
- 1. 시험기간 중 발효 오적산 추출물 투여군 및 대조군에서 사망동물이 관찰되지 않아, LD50 값은 산출되지 않았다.
- 2. 시험물질 발효 오적산 추출물 투여에 의한 어떠한 독성증상도 관찰되지 않았다.
- 3. 발효 오적산 추출물 투여로 인한 체중 변화 역시 관찰되지 않았다.
- 4. 실험 종료 시, 모든 동물의 장기에 대하여 육안적 병변을 관찰하였으나 이상 병변은 관찰되지 않았다.
후속연구
- 이와 같은 결과는 이전에 실시된 오적산의 급성독성 실험결과14)와 같이 암·수 ICR 마우스에 있어 LD50은 5000 ㎎/㎏을 상회할 것으로 생각되어 발효로 인한 급성독성이 발생하지 않는 것으로 사료되나, 추후 실험적 연구를 통하여 포괄적인 연구가 필요할 것이다.
- 이상의 결과로 보아 발효 오적산은 실험동물에 대하여 급성 독성이 없는 한의 약물로서 그 효능규명을 통한 활용이 기대된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.