[논문]DL-HGF를 주성분으로 한 ethosome 및 liposome 제형화합물이 발모 촉진 활성에 미치는 영향

김현우; 정용준; 이동규; 한상근; 정의수; 김희택; 강세찬

[국내논문] DL-HGF를 주성분으로 한 ethosome 및 liposome 제형화합물이 발모 촉진 활성에 미치는 영향
The Effects of Ethosome and Liposome Formulation Entrapped DL-HGF to Hair Growth Activity in Animal Model 원문보기

韓方眼耳鼻咽喉皮膚科學會誌 = The journal of Korean Medicine Ophthalmology & Otolaryngology & Dermatology, v.22 no.1 = no.38, 2009년, pp.1 - 10

김현우 (세명대학교 천연자원의약연구소) , 정용준 (세명대학교 천연자원의약연구소) , 이동규 (충북대학교 공업화학과) , 한상근 ((주)한국콜마) , 정의수 ((주)더마랩) , 김희택 (세명대학교 한의과대학 안이비인후피부과학교실) , 강세찬 (세명대학교 자연약재과학과)

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Objectives : To investigate the effects of DL-HGF to hair growth activity in mouse, various kinds of ethosome and liposome formulations entrapped DL-HGF were produced and this study was carried out. Methods : The B16/BL6 mice were classified into five groups: vehicle control (Con) group, Et-1-applied group, Et-2-applied group, LP-1-applied group, LP-2-applied group. Active hair growth (anagen) was induced in the back skin by application of a waxosin mixture with subsequent depilation and the activity of hair growth was measured by macroscopic observation and histology. Results : In vehicle control group, there was no hair growth activity during experiment period. In Et-1-applied group, the rate of hair growth was about 100%, LP-1-applied group and Et-2-applied group showed 70-80% and 40-50% of hair growth rates, respectively. The rate of hair growth of LP-2-applied group was lower than other applied groups (20-30%). In H/E staining, Numerous hair folicles and hair shafts were observed in Et-1-applied group and other groups showed lower level of hair folicles and hair shafts formation than Et-1-applied group, Conclusion : Et-1 formulation showed highest hair growth activity than other ethosome and liposome formulations entrapped DL-HGF.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

DL-HGF 를 포집시킨 ethosome 및 liposome 제형 화합물들이 마우스 발모 촉진에 미치는 영향을 조사하기 위해 실시한 본 연구에서 육안적 및 조직학적 소견을 조사하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 제형화합물들인 Et-1, Et-2, LP-1 및 LP-2를 제조하여 이 제형화합물들이 마우스 발모 촉진에 미치는 영향을 비교 확인한 결과, 육안적인 소견에서는 Et-1의 발모율이 가장 높았고, LP-1, Et-2 및 LP-2의 순으로 높은 발모 활성율을 보였다.
Touitou 등25)은 ethosome이라는 명칭을 처음 사용하고 높은 포집 효율과 뛰어난 피부투과 효과를 입증하였지만 그 이전에도 Perrett 등28)은 proliposome이란 명칭으로 에탄올을 사용하여 liposome을 쉽게 제조하는 방법을 보고하였고, Kirjavainen 등13)은 인지 질이 에탄올에 용해된 상태로 liposome을 만들면 피부투과속도가 증가한다는 결과를 발표하였다. 본 연구에서는 유효 성분으로 더마랩에서 제공한 DL-HGF를 포집시킨 ethosome 및 liposome 제형 화합물인 Et-1, Et-2, LP-1 및 LP-2를 제조하여 이 제형화합물들이 마우스 발모 촉진에 미치는 영향을 비교 확인하기 위하여 발모 실험에 많이 사용되는 C₅₇/BL6 mouse를 이용하여 발모 촉진 활성 시험을 실시하였다. 육안적인 소견에서는 Et-1 의 발모율이 가장 높았고, LP-1, Et-2 및 LP-2의순으로 높은 발모 활성율을 보였다.

제안 방법

대조군은 filtered-air control 으로 하여 4개의 실험군을 설정하였다. 각 군당 수컷 각 4 마리씩을 설정하였으며, 시험 군으로는 용매 대조군, Et-1, Et-2, LP-1 및 LP-2 단독 군을 설정하였다.
고정 후 일반적인 방법에 의하여 cryostat을 제작하였으며 7 m의 절편을 제작하여 H&E 염색을 시행하여 조직의 변화를 관찰하였다.
동물의 개체식별은 피모색소표시법 및 사육상자별 tag 표시법을 이용하였다. 대조군은 filtered-air control 으로 하여 4개의 실험군을 설정하였다. 각 군당 수컷 각 4 마리씩을 설정하였으며, 시험 군으로는 용매 대조군, Et-1, Et-2, LP-1 및 LP-2 단독 군을 설정하였다.
또한, ethosome 및 liposome 제형화시 사용된 성분과 각 제형은 Table 1.에 명시하였으며, 제조 방법은 각각의 상 (유상부, 알코올부, 활성물질부, 수 상부)를 계량한 후 유상부 및 수상부를 80℃까지 가온하였다. 그 다음, 수상부에 유상부를 가하고 homogenizer(TK Robomixer, Japan) 에 1차 유화한 후 40℃ 까지 냉각하고 활성부를 투입하여 교반한 다음, 35℃까지 다시 냉각하고 알코올을 투입하였다.
마지막으로, 고압유화기(MICROFLUDICS, USA) 로 3회 처리하여 각 제형을 제조하였다.
본 시험에 사용된 처방은 국내외 한약재 및 자원 식물로부터 발모촉진 효과를 탐색하여 효과가 뚜렷하다고 판단된 국내산 한약재인 한련초, 상백피, 세신, 백지, 천궁, 측백엽, 만형자, 감국을 이용하였으며, 호두, 마편초, 조조바, 아보카도, 알로에, 카모마일을 각각 동일 중량비로 하여 열수 추출하여, 이에 대한 처방명을 DL-HGF로 하였다. 또한, ethosome 및 liposome 제형화시 사용된 성분과 각 제형은 Table 1.
사료는 고압증기멸균한 실험동물용 고형사료를, 음수는 고압증기멸균한 상수도수를 자유 섭취시켰다.
시험종료일인 18일째에 피부에서 일어나는 발모와 관련된 특징들을 관찰하기 위하여 디지털카메라를 이용해서 발모부위를 촬영하였다.
실험동물들은 털을 완전히 제거하기 전에 소동물용 clipper를 이용하여 털을 깎은 후 시중에 판매되는 제모제를 이용하여 각 군의 등쪽 피부에도포하여 털을 완전히 제거한 후 흐르는 물로 남은 제모제를 수세하였다. 피부에 도포하는 방법은 오전에 1회씩 (2 ㎖/회) 피부에 도포하였고 30초 동안 손으로 등을 마사지하여 흡수를 촉진시켰다.
최근 탈모치료에는 피부의 혈액순환을 원활하게 하고 모근에 영양을 공급해주기 위한 목적으로 만들어진 발모제나 양모제로 개발된 제품이 많이 있으나, 탈모방지와 발모촉진에 유효한 제품이나 제형에 대한 실험적인 연구는 미흡한 실정이므로 본연구에서는 (주)더마랩에서 제조한 탈모 및 발모 예방에 효과적인 육모 성분 추출물인 DL-HGF를 주성분으로 한여러 ethosome 과 liposome 과의 제형 화합물들을 제작하여 발모 촉진 효과를 비교하였다.
피부내 모낭의 수적 변화를 조직학적으로 관찰하기 위하여 시험종료 후 마우스를 경추 탈골 하여 등 쪽 피부의 발모된 부위를 척추선에 평행하게 절개하여 4% paraformaldehyde 용액으로 고정하였다. 고정 후 일반적인 방법에 의하여 cryostat을 제작하였으며 7 m의 절편을 제작하여 H&E 염색을 시행하여 조직의 변화를 관찰하였다.
제모제를 수세하였다. 피부에 도포하는 방법은 오전에 1회씩 (2 ㎖/회) 피부에 도포하였고 30초 동안 손으로 등을 마사지하여 흡수를 촉진시켰다.

대상 데이터

시험동물은 평균 체중 23 g 내외의 5주령 SPF (특정병원체 부재) C₅₇/BL6 마우스를 중앙실험동물에서 구입하여 약 1주일간 순화적응시킨후 건강한 동물을 선택하여 온도 23±3℃, 상대습도 50±10%, 배기 10-12회, 형광등 명암 12 hr cycle, 조도 150~160 Lux로 전 시험기간동안 실험동물용 케이지에 4마리씩 넣어 시험하였으며, 사육 상자에는 시험번호, 동물번호 및 투여량을 적은 tag를 붙였다. 사료는 고압증기멸균한 실험동물용 고형사료를, 음수는 고압증기멸균한 상수도수를 자유 섭취시켰다.

데이터처리

순화기간 중 건강하다고 판정된 동물에 대하여 체중을 측정하고, 평균체중에 가까운 개체를 선택하여 무작위법을 이용, 군분리를 실시하였으며 각 군의 평균체중에 대한 군간 차이는 ANOVA 검정으로 통계학적 검증을 실시하여 확인하였다. 동물의 개체식별은 피모색소표시법 및 사육상자별 tag 표시법을 이용하였다.

이론/모형

동물의 개체식별은 피모색소표시법 및 사육상자별 tag 표시법을 이용하였다. 대조군은 filtered-air control 으로 하여 4개의 실험군을 설정하였다.

성능/효과

1B). Et-1 을 피부에도포한 군에서는 대조군과 LP 군들 및 Et-2를 도포한 군과 비교했을 때 가장 많은 수의 모낭이 관찰되었으며 또한 모낭 내의 hair shaft가 가장 많이 관찰되었다 (Fig. 2B). Et-2를 피부에 도포 한 군에서는 대조군에 비해 같은 시야에서 모낭의 수가 더 많은 것을 관찰할 수 있었으며 표피층에서도 hair의 흔적을 관찰할 수 있었다 (Fig.
본 실험에서 ethosome과 liposome을 제 형으로 하여 (주)더마랩에서 제조한 DL-HGF 를 도포한 후 실험 1일째부터 18일째까지 육안적으로 관찰한 결과 대조군에서는 극히 일부분에서의 발모와 등 쪽 피부 일부에서의 회색 반점을 띄어 육안적인 발모 현상은 관찰할 수 없었다. 제모된 피부영역 전체에 완전히 발모된 경우는 1예도 관찰할 수 없었으며, 전체적으로 제모된 피부영역의 약 2-3% 정도의 발모율을 나타내었다.
본 연구에서는 유효 성분으로 더마랩에서 제공한 DL-HGF를 포집시킨 ethosome 및 liposome 제형 화합물인 Et-1, Et-2, LP-1 및 LP-2를 제조하여 이 제형화합물들이 마우스 발모 촉진에 미치는 영향을 비교 확인하기 위하여 발모 실험에 많이 사용되는 C₅₇/BL6 mouse를 이용하여 발모 촉진 활성 시험을 실시하였다. 육안적인 소견에서는 Et-1 의 발모율이 가장 높았고, LP-1, Et-2 및 LP-2의순으로 높은 발모 활성율을 보였다. 조직학적 소견에서도 Et-1, LP-1의 순서로 발모 활성율이 높았으며 Et-2와 LP-2는 비슷한 정도의 발모 활성율을나타내었다 (Table 2).
이상의 결과로 볼 때 Et-1 이 4가지 제형 화합물 중에서는 가장 효과적인 발모 촉진 작용을 가지는 것으로 생각된다.
없었다. 제모된 피부영역 전체에 완전히 발모된 경우는 1 예도 관찰할 수 없었으며, 전체적으로 제모된 피부 영역의 약 2-3% 정도의 발모율을 나타내었다 (Fig. 1A). Et-1 을 피부에 도포한 군에서는 4마리 모두가 제모된 피부영역 전체에서 약 100%의 발모 현상을 관찰하였다 (Fig.
관찰할 수 없었다. 제모된 피부영역 전체에 완전히 발모된 경우는 1예도 관찰할 수 없었으며, 전체적으로 제모된 피부영역의 약 2-3% 정도의 발모율을 나타내었다. Et-1 을 피부에 도포한 군에서는 4마리 모두가 제모된 피부영역 전체에서 약 100%의 발모현상을 관찰하였다.
제형화합물들인 Et-1, Et-2, LP-1 및 LP-2를 제조하여 이 제형화합물들이 마우스 발모 촉진에 미치는 영향을 비교 확인한 결과, 육안적인 소견에서는 Et-1의 발모율이 가장 높았고, LP-1, Et-2 및 LP-2의 순으로 높은 발모 활성율을 보였다. 조직학적 소견에서도 Et-1, LP-1의 순서로 발모 활성 율이 높았으며 Et-2와 LP-2는 비슷한 정도의 발모활성율을 나타내었다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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