[논문]진교(秦艽)가 항염 효과에 미치는 영향

조희창; 정호준; 이재근; 조미정; 지선영

진교(秦艽)가 항염 효과에 미치는 영향
Anti-inflammaory effects of the MeOH extract of Gentianae Macrophyllae Radix in vivo 원문보기

韓方眼耳鼻咽喉皮膚科學會誌 = The journal of Korean Medicine Ophthalmology & Otolaryngology & Dermatology, v.22 no.3 = no.40, 2009년, pp.63 - 70

조희창 (대구한의대학교 안이비인후피부과교실) , 정호준 (대구한의대학교 안이비인후피부과교실) , 이재근 (대구한의대학교 안이비인후피부과교실) , 조미정 (대구한의대학교 한방신약개발팀 (BK21 Team)) , 지선영 (대구한의대학교 안이비인후피부과교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : The present study was examined to evaluate the anti-inflammatory effects of the Gentianae Macrophyllae Radix MeOH extracts (GMR) in vivo. Methods : The effects of GMR on anti-inflammation were measured by production of NO, TNF-$\alpha$ (Tumor Necrosis Factor-alpha) and IL-$1{\beta}$ (Interleukin-$1{\beta}$), IL-6 in Raw 264.7 macrophage cells stimulated with LPS. Results : 1. All concentrations of GMR(0.10 mg/ml) had no significant cytotoxicity in Raw 264.7 cell during the entire experimental period. 2. The level of NO and iNOS in culture medium was dramatically increased by LPS application. However, these increases were dose-dependently(0.03 and 0.10 mg/ml) attenuated by treatment with GMR. 3. All concentrations of GMR significantly inhibited the production of IL-$1{\beta}$ in Raw 264.7 macrophage cells stimulated with LPS. Conclusions : These results provide evidences that therapeutic effect of GMR on heat syndrome, especially due to the acute inflammation, are partly due to the reduction of some of inflammatory factors by inhibiting iNOS and COX-2 through the suppression of $p-I{\kappa}B{\alpha}$. Moreover, it suggests that the mechanism of action of GMR comes from the suppression of inflammatory mediators, such as NO, PGE2 and pro-inflammatory cytokines.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

그러나 秦艽 의 항염증효과의 기전에 관한 연구는 부족한 실정으로 저자는 MeOH로 추출된 秦艽 (GMR)가 LPS 로 활성된 Raw 264.7 cells에서의 NO 생성, TNF-α (Tumor Necrosis Factor-alpha), IL-1β (Interleukin-1β), IL-6 등의 염증매개물질 발현에 어떠한 영향을 미치는지 살펴보았다.
그러나 秦艽의 항염증효과의 기전에 관한 연구는 부족한 실정으로 저자는 MeOH로 추출된 秦艽 (GMR)가 LPS로 활성된 Raw 264.7 cells에서의 NO 생성, TNF-α (Tumor Necrosis Factor-alpha), IL-1β (Interleukin-1β), IL-6 등의 염증매개물질 발현에 어떠한 영향을 미치는지 살펴보았다.
본 연구에서는 LPS로 활성화된 Raw 264.7 cells에서 GMR의 NO 생성억제를 평가하기 위하여 GMR을 0.01, 0.03 및 0.10 ㎎/㎖의 농도로 LPS 처치 전 1시간에 Raw 264.7 cells에 처리하여 생성되는 NO의 양을 측정하였다. LPS군에서는 control군에 비교하여 12, 18, 24 시간에서 NO의 생성량이 다량 증가하였으며, 0.

제안 방법

Cytokine을 측정하기 위하여 6 well plate에 cells (5×105/㎖)을 분주하고 GMR를 농도별로 처치한 다음, 1시간 후에 LPS를 처치하였다.
GMR이 0.01, 0.03 및 0.10 ㎎/㎖의 농도에서 LPS로 유도된 NO의 생성을 억제시킨 이유가 GMR의 세포독성으로 인한 것인지를 평가하기 위하여 GMR의 농도에 따라 MTT assay를 실시하여 cell viability를 측정하였다. 실험결과 실험에 사용된 GMR은 LPS 단독처치군에 비교하여 유의한 세포독성을 나타내지 않았다.
/㎖)을 분주하고 GMR를 농도별로 처치한 다음, 1시간 후에 LPS를 처치하였다. LPS 처치 후 18시간에 배지를 수거하여 cytokine을 측정하였다. 수거된 배지는 측정 전까지 -70 ℃에서 보관하였다.
秦艽 추출물 (HJE)의 항염증효능을 평가하기 위하여, 설치류 대식세포주인 Raw 264.7 cells를 LPS로 활성화시킨 후 NO의 생성량, IL-1β, IL-6, TNF-α 등에 미치는 GMR의 영향을 관찰한바 다음과 같은 결론을 얻었다.
간략하게 설명하면 세포배양 상등액 50 ㎕와 Griess 시약 (1% sulfanilamide in 5% phosphoric acid + 1% α-naphthylamide in H2O) 50 ㎕를 혼합하여 96 well plates에서 10분 동안 반응시킨 후 540 ㎚에서 Titertek Multiskan Automatic ELISA microplate reader (Model MCC/340, Huntsville, AL)로 흡광도를 측정하였다.
3 mg/ml의 농도로 GMR를 처치한 후에 37℃, 5% CO₂에서 배양하였다. 배양 후 생존세포에 MTT (0.1 ㎎/㎖)를 50㎕넣고 4시간 배양 한 후배지를 제거하고 생성된 formazan crystals을 DMSO에 녹여 Titertek Multiskan Automatic ELISA microplate reader (Model MCC/340, Huntsville, AL)로 570 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 세포생존율은 control cell에 대한 백분율로 나타 내었다.

대상 데이터

LPS (Escherichia coli 026:B6; Difco, Detroit, MI, U.S.A.)와 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoleum (MTT)은 Sigma (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였고, fetal bovine serum (FBS)과 antibiotics는 Gibco/BRL (Eggenstein, Germany)로부터 구입하였으며, TNF-α, IL-1β와 IL-6의 ELISA Kit는 Pierce endogen (Rockford, IL, USA)에서 구입하였다.
秦艽 (Gentianae Macrophyllae Radix, 대원약업사, 대구) 300 g을 MeOH 2 L에 넣고 3일 침지한 후 추출물을 거어즈로 1차 여과하고 3000×g에서 3분간 원심분리하고, 상층액만을 취하여 0.2μm filter (Nalgene, New York, USA)로 여과하였다.
설치류 대식세포주인 Raw 264.7 cells은 한국세포주연구재단 (Seoul, Korea)에서 구입하였으며, Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM)에 10% fetal bovine serum (FBS), 100 U/ml penicillin 및100 μg/ml streptomycin을 혼합한 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 incubator에서 배양하였다.
실험과정의 모든 cells은 80∼90%의 confluence에서 실험하였고, 20 passages를 넘기지 않은 cell만 사용하였다.

데이터처리

실험 결과는 mean ± S.D.로 나타내었으며, 통계학적 분석에는 SPSS program 17.0 (SPSS, Chicago)을 사용하였다.
0 (SPSS, Chicago)을 사용하였다. 실험군간의 효과 비교를 위하여 Independent t-test를 사용하였으며, p값이 0.05 二下인 경우 유의성이 있는 것으로 판단하였다.

이론/모형

TNF-α, IL-1β와 IL-6는 ELISA Kit(Pierce endogen, Rockford, IL, USA)를 사용하여 측정하였으며, 실험의 방법은 manufacture r's instruction에 따랐다.

성능/효과

1. LPS에 의해 증가된 NO는 0.10 ㎎/㎖l GMR의 전처치에 의하여 시간 및 농도 의존적으로 유의하게 억제되었다. 또한 GMR 처치군은 LPS 단독처치군에 비교하여 유의한 세포독성을 나타내지 않았다.
2. GMR은 LPS에 의해 활성화된 대식세포에서 분비되는 cytokine 중 IL-1β를 유의하게 억제하였다.
7 cells에 처리하여 생성되는 NO의 양을 측정하였다. LPS군에서는 control군에 비교하여 12, 18, 24 시간에서 NO의 생성량이 다량 증가하였으며, 0.10 ㎎/㎖ GMR을처치한 실험군에서는 시간 및 농도 의존적으로 유의성 있는 NO의 생성억제를 나타내었다(Fig. 1).
본 연구에서 LPS는 IL-6의 분비를 유의성 있게 증가시켰으며, GMR은 LPS로 유도된 IL-6를 농도 의존적으로 유의성 있게 감소시키지 못했다 (Fig. 5).
본 연구에서 LPS는 Raw 264.7 cells에서 TNFα의 분비를 유의하게 촉진시켰으며, GMR은 TNF-α의 생성량을 유의하게 감소시키지 못했다 (Fig. 3).
본 연구에서는 LPS의 자극에 의하여 IL-1β의 분비가 유의성 있게 증가하였으며, GMR은 0.03 및 0.10 ㎎/㎖의 농도에서 모두 유의하게 IL-1β의 생성량을 감소시켰다(Fig. 4).
10 ㎎/㎖의 농도에서 LPS로 유도된 NO의 생성을 억제시킨 이유가 GMR의 세포독성으로 인한 것인지를 평가하기 위하여 GMR의 농도에 따라 MTT assay를 실시하여 cell viability를 측정하였다. 실험결과 실험에 사용된 GMR은 LPS 단독처치군에 비교하여 유의한 세포독성을 나타내지 않았다. GMR은 오히려 LPS에 의한 세포독성을 억제하였다(Fig.
이상의 연구결과는 秦艽 추출물 (GMR)이 in vitro에서 유의한 항염증작용을 나타냄을 의미한다.

후속연구

이러한 결과로 보아, 風濕을 祛하고 虛熱을 淸 하며, 筋絡을 舒하는 效能을 가진 秦艽는 과도한 NO 및 염증성 cytokine에 의한 염증성 질환의 치료에 적극 활용될 수 있을 것으로 판단된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	秦艽이란?	秦艽는 용담과(Gentianaceae)에 속하는 큰잎용담 (Gentiana Macrophylla)의 뿌리를 사용하며 형태는 원추형으로 상부는 엉성하고 거칠며 하부는 가늘고 비틀어져 있으며 매끄럽다. 길이는 7-30 cm 이고 표면은 황갈색 또는 회황색으로 세로로 비틀린 주름이 있다.
	秦艽의 性은?	秦艽의 性은 微寒無毒하고, 味는 苦辛하다. 胃, 肝, 膽經으로 歸經하여 風濕을 祛하고 虛熱을 淸하며, 筋絡을 舒하는 效能을 가진다.
	秦艽 추출물 (HJE)의 항염증효능을 평가하기 위하여, 설치류 대식세포주인 Raw 264.7 cells를 LPS로 활성화시킨 후 NO의 생성량, IL-1β, IL-6, TNF-α 등에 미치는 GMR의 영향을 관찰하여 얻은 결론은?	1. LPS에 의해 증가된 NO는 0.10 ㎎/㎖l GMR의전처치에 의하여 시간 및 농도 의존적으로 유의하게 억제되었다. 또한 GMR 처치군은 LPS 단독처치군에 비교하여 유의한 세포독성을 나타 내지 않았다. 2. GMR은 LPS에 의해 활성화된 대식세포에서 분비되는 cytokine 중 IL-1β를 유의하게 억제하 였다.

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표제어: PCR

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용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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