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문제 정의
- 본 연구에서는 웨이브제 성분인 티오글리콜산염(1제)과 과산화수소를 주성분으로 하는 중화제(2제)를 실험동물로 선정된 Rat를 이용, 피부 흡수정도를 측정하였고, 티오글리콜산염 웨이브 제의 피부에 미치는 영향에 관하여 연구하였다.
제안 방법
- 4.웨이브제제의 처리 시간과 방법대로 실시하여 피부에서 의 미세 주름과 홍반 등의 변화를 관찰.측정한 경우, 정상 피부일 때보다 웨이브 제제로 처리한 경우들이 roughness parameter에 상당히 큰 변화를 나타내었으며, 또한 거시적으로도 웨이브 제제를 처리하면 일부 홍반과 발진이 나타남을 확인할 수 있었다.
- In 庆fro에서의 랫드에 대한 피부 투과 실험은 Franz 확산 셀 형태의 수평막셀을 사용하여 실험을 하였으며 막으로 서 랫드의 피부를 적출하여 사용하였다 [12]. 랫드의 피부 적출은 고압 증기 멸균 처리한 수술 도구를 사용하였으며 에테르를 사용하여 질식사 즉시 표피를 1.
- 실험에서의 검량선은 각 약물의 일정량을 정밀히 측정한 후 PBS에 용해시키고, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225 및 250 mg/1 의 농도로 희석하여 각 티오글리콜산의최대 흡수파장에서 흡광도 값을 측정하여 투과된 약물의 농도를 계산하였다. 또한 각 티오글리콜산염의 가수 분해 반응을 측정하기 위하여, 티오글리콜산염의 농도를 변화시켜 항온 조에서 교반시켜 UV 분광기를 이용하여 측정하였다.
- 또한 실험에 사용한 동물은 평균 체중에 대한차이를 최소화하여 군 분리를 시행하여 실험하였으며 건강한 피부인 대조군 (young skin) 30마리, 14주령 이상의 늙은 피부군(old skin) 30 마리와 등쪽 피부에 인위적인 상처를 유발시킨 상처군(wound skin) 30마리로 구분하여 실험하였다.
- 또한 티오글리콜산염의 접촉 전후의 랫드 피부에 대한 영향을 확인하기 위하여 GF Messtechnik사의 미세주름 측정기(Optical Measurement Coding Analysation)를 이용하여랫드 피부의 roughness parameter 및 홍반과 미세 주름을 측정하였다.
- 사용하였다 [12]. 랫드의 피부 적출은 고압 증기 멸균 처리한 수술 도구를 사용하였으며 에테르를 사용하여 질식사 즉시 표피를 1.5xl.5cm 로 피부를 적출하여 피하지방 및 혈관 등을 상하지 않게 조심스럽게 제거하였다. 적출한 랫드의 피부를 즉시 수평막셀의 중앙에 고정시킨 후투과 실험을 실시하였다.
- 0%의 에틸알코올로 피부를 소독하고 24시간이 지나고 육안상으로 피부에 이상이 없는 건강한 랫드를 이용하여 실험하였으며, 실험에 사용한 랫드는 15마리에 대한 평균값을 나타내었다. 미세 주름 측정 방법으로 제모한 랫드를 에테르가 들어있는 유리상자에 넣어서 일시적으로 마취를 시키고 미세 주름 측정기에 넣고 제모한 피부의 상태를 관찰하였다. 같은 방법으로 모발용 웨이브제의 처치 순서와 시간에 따라 실험을 실시하였다.
- 실험에 사용한 티오글리콜산염의 농도는 완충용액인 PBS] 용해하여 항온 조(37±0.5℃)에서 교반시키고 이용액을 UV 분광기를 이용하여 각 약물의 최대 흡수파장 (Mnax) 에서 흡광도를 측정하였다. 실험에서의 검량선은 각 약물의 일정량을 정밀히 측정한 후 PBS에 용해시키고, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225 및 250 mg/1 의 농도로 희석하여 각 티오글리콜산의최대 흡수파장에서 흡광도 값을 측정하여 투과된 약물의 농도를 계산하였다.
- 5℃)에서 교반시키고 이용액을 UV 분광기를 이용하여 각 약물의 최대 흡수파장 (Mnax) 에서 흡광도를 측정하였다. 실험에서의 검량선은 각 약물의 일정량을 정밀히 측정한 후 PBS에 용해시키고, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225 및 250 mg/1 의 농도로 희석하여 각 티오글리콜산의최대 흡수파장에서 흡광도 값을 측정하여 투과된 약물의 농도를 계산하였다. 또한 각 티오글리콜산염의 가수 분해 반응을 측정하기 위하여, 티오글리콜산염의 농도를 변화시켜 항온 조에서 교반시켜 UV 분광기를 이용하여 측정하였다.
- 웨이브제제에 대하여 약제의 함량과 조건 즉 웨이브 제제(환원제)와 중 화제를 혼합한 경우와 피부 조건에 따른 변화 등에 대한 실험을 진행하였다. 모발 웨이브의 원리는 환원제인 웨이브 제제를 바르면 S-S 다리 결합 사이에 수소가 들어가서 S-S 다리 결합을 끊고 처음의 시스테인 분자로 돌아가게 한다.
- 1에 나타내었다. 작성한 검량선을 사용하여 in vitro 실험에서 티오글리콜산염의 투과량을 계산하였다.
- 5cm 로 피부를 적출하여 피하지방 및 혈관 등을 상하지 않게 조심스럽게 제거하였다. 적출한 랫드의 피부를 즉시 수평막셀의 중앙에 고정시킨 후투과 실험을 실시하였다. 투과 셀의 상층부에는 퍼머 제 30.
- 0皿로 고정하였다. 투과가 진행되는 동안 분광기를 사용하여 투과된 농도를 측정하였으며 측정을 위해 시료를 채취한 후에는 즉시 동량의 PBS를 넣어 용해도가 더 이상 변하지 않는 상태 (sink condition)를 유지하였다. 이상의 실험은 시중 웨이브약제 처리 방법에 준하여 실험하였으며 투과실험에서 측정된 시험 군별 측정 데이터를 시험물질별, 시험 군별 산술 평균과 표준편차를 구하고, 시험물질의 시간 별투과량으로부터 실험동물인 랫드에서의피부 투과속도를 산출하였다 [13].
- 티오글리콜산염 의 최대 흡수파장( 용매인 PBS 에서 측정하였다. 측정한 웨이브 제의 최대 흡수파장은 285nm이었고 이때 최대 흡수 파장에서 농도를 달리하여 흡광도 값을 측정하고, 그 측정값으로부터 검량선을 작성하여 Fig.
- 티오글리콜산염을 주성분으로 하는 웨이브용 제품을 사용하여 랫드에 적용시켜 피부 투과 정도를 측정하였고, 웨이브제가 피부에 미치는 영향에 관하여 연구한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다.
- 티오글리콜산염의 경피투과 실험은 HP사의 UV-1601 분광기를 사용하여 분광 광도법으로 200~400nm에서 최대 흡수파장에서의 농도를 측정하였다. 또한 티오글리콜산염의 접촉 전후의 랫드 피부에 대한 영향을 확인하기 위하여 GF Messtechnik사의 미세주름 측정기(Optical Measurement Coding Analysation)를 이용하여랫드 피부의 roughness parameter 및 홍반과 미세 주름을 측정하였다.
대상 데이터
- 또한 실험에 사용한 동물은 (주)대한바이오링크에서 4주령된 특정 병원체 부재(Specific Pathogen Free, SPF) 암컷 SD(Sprague-Dawley)계 랫드를 분양받아 온도 23±3℃, 습도 50±5%, 환기 15분/10~15회/ 일 및 12시간 주기 명암교대의 환경하에서 2 주일간의 적응 기간이 지난 6주령의 건강한 동물을 사용하여 사육상자 당 4마리씩 군 분리를 하여 실험하였으며, 사용한 깔짚은 펄프 재질을 사용하였다[11] 동물 사료와 음용수 섭취는 배합사료와 1차 정수된 정수기물을 음용수로 사용하였다. 또한 실험에 사용한 동물은 평균 체중에 대한차이를 최소화하여 군 분리를 시행하여 실험하였으며 건강한 피부인 대조군 (young skin) 30마리, 14주령 이상의 늙은 피부군(old skin) 30 마리와 등쪽 피부에 인위적인 상처를 유발시킨 상처군(wound skin) 30마리로 구분하여 실험하였다.
- 실험에 이용한 약제로는 시중에서 웨이브 제로 이용되는 상용 제품인 일본 시세이도사 제품의 티오글리콜산염(1제)과 과산화수소류의 중화제(2제)을 사용하였으며, 실험에서의 대체 혈장 용액은 Merck 사의 phosphate buffered saline(PBS)을 이용하여 pH 7.4로 제조하였으며, 실험에 사용된 에테르 등의 용매는 덕산화학 제품을 사용하였다.
- 우선랫드 등 쪽 부위를 전기면도기(Thrive, model 9000)를 이용하여 피부에 상처가 나지 않도록 조심스럽게 2.5x2.5 cm로 제모하였으며, 1회용 면도기를 이용하여 잔털을 제거하여 70.0%의 에틸알코올로 피부를 소독하고 24시간이 지나고 육안상으로 피부에 이상이 없는 건강한 랫드를 이용하여 실험하였으며, 실험에 사용한 랫드는 15마리에 대한 평균값을 나타내었다. 미세 주름 측정 방법으로 제모한 랫드를 에테르가 들어있는 유리상자에 넣어서 일시적으로 마취를 시키고 미세 주름 측정기에 넣고 제모한 피부의 상태를 관찰하였다.
데이터처리
- 투과가 진행되는 동안 분광기를 사용하여 투과된 농도를 측정하였으며 측정을 위해 시료를 채취한 후에는 즉시 동량의 PBS를 넣어 용해도가 더 이상 변하지 않는 상태 (sink condition)를 유지하였다. 이상의 실험은 시중 웨이브약제 처리 방법에 준하여 실험하였으며 투과실험에서 측정된 시험 군별 측정 데이터를 시험물질별, 시험 군별 산술 평균과 표준편차를 구하고, 시험물질의 시간 별투과량으로부터 실험동물인 랫드에서의피부 투과속도를 산출하였다 [13].
성능/효과
- 1.전체적인 투과 양상이 3.01 ~3.85시간 전후에서 정상 상태에 도달하였고, 계속적으로 20시간 동안 투과량 관찰에서도 함량의 변화에는 큰 차이를 나타내지 않았다.
- 2.티오글리콜산염인 환원제만 사용했을 때보다 환원제와 중화제를 함께 사용하였을 때 lag time과 투과속도가 빠르게 나타냈으며 각질층의 정체시간(lag time)이 짧아 투과속도가 크다고 할 수 있다.
- 3.피부조건에 따른 변화 등에 대한 실험을 진행한 결과 상처가 있는 피부 또는 늙은 피부가 건강한 피부보다 lag time과 투과속도가 빠르게 나타냈으며, 특히 상처가 있는 피부는 가장 빠른 투과 속도를 나타내었다. 피부의 물리적 상처나 피부질환에 의하여 각질층이 손상되었다면, 피부를 통한 물질의 흡수는 증가한다고 알려져 있다
- 건강한 피부와 모발은 pH가 약산성인데 반하여 제 1제를 사용함으로서 일시적으로 pH가 약염기성으로 변화함으로 인해 이것 또한 랫드피부에 자극을 주었다고 생각되며, 또한 거시적으로도 웨이브 제제를 처치하면 일부 홍반과 발진을 관찰할 수 있었다. 이러한 피부 투과 실험과 미세주름 실험 결과들로부터 웨이브 제제 사용에 따른 경피 특성과 흡수량을 확인할 수 있었다.
- 실험 결과에서와 같이 상처가 있는 피부 또는 늙은 피부가 건강한 피부보다 lag time과 투과속도가 빠르게 나타났다. 특히 상처가 있는 피부의 경우 가장 빠른 투과속도를 나타내었다.
- 건강한 피부와 모발은 pH가 약산성인데 반하여 제 1제를 사용함으로서 일시적으로 pH가 약염기성으로 변화함으로 인해 이것 또한 랫드피부에 자극을 주었다고 생각되며, 또한 거시적으로도 웨이브 제제를 처치하면 일부 홍반과 발진을 관찰할 수 있었다. 이러한 피부 투과 실험과 미세주름 실험 결과들로부터 웨이브 제제 사용에 따른 경피 특성과 흡수량을 확인할 수 있었다.
- 정상 피부일 때보다 웨이브제제로 처리한 경우들이 roughness parameter에 정상 피부와 비교해 보았을 때 상당히 큰 변화를 나타내었으며, 일정pH의 조건 하에서 진행하도록 도와주는 과산화수소수를 주성분으로 하는 중화제보다 티오글리콜산염을 주성분으로 하는 환원제를 사용할 때 피부에 커다란 영향을 나타내었다. 건강한 피부와 모발은 pH가 약산성인데 반하여 제 1제를 사용함으로서 일시적으로 pH가 약염기성으로 변화함으로 인해 이것 또한 랫드피부에 자극을 주었다고 생각되며, 또한 거시적으로도 웨이브 제제를 처치하면 일부 홍반과 발진을 관찰할 수 있었다.
- 웨이브제제의 처리 시간과 방법대로 실시하여 피부에서 의 미세 주름과 홍반 등의 변화를 관찰.측정한 경우, 정상 피부일 때보다 웨이브 제제로 처리한 경우들이 roughness parameter에 상당히 큰 변화를 나타내었으며, 또한 거시적으로도 웨이브 제제를 처리하면 일부 홍반과 발진이 나타남을 확인할 수 있었다.
- 0wt%와 그의 2배의 조건(ii)으로 구분하여 투과 실험을 하였으며 티오글리콜산염의 함량변화에 따른 투과 결과를 Table 1에 나타내었다. 티오글리콜산염을 사용하여 in vitro 실험에서 진행한 전체적인 투과 양상을 보면 3시간 후에서 정상 상태에 이르렀으며, 20시간의 투과량은 함량의 변화에는 큰 차이를 나타내지 않았다. 일반 처치 방법 (i)의 경우의 lag time(약물 정체 시간)과 투과 속도(JJ는 3.
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