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Vipera lebetina turanica 사독이 인간 유방암 세포에 미치는 영향
Effect of Snake Venom Toxin from Vipera lebetina turanica on Breast Cancer Cells 원문보기

大韓鍼灸學會誌= The journal of Korean Acupuncture & Moxibustion Society, v.26 no.3, 2009년, pp.27 - 38  

양가람 (경원대학교 한의과대학 침구학교실) ,  송호섭 (경원대학교 한의과대학 침구학교실)

초록
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목적 : 이 연구는 Vipera lebetinat turanica의 사독약침액(蛇毒藥鍼液)(Snake venom toxin, SVT)이 인간 유방암 세포주인 MCF-7과 MDA-MB-231 세포에서 암세포성장의 억제 및 그 기전에 대하여 살펴보고자 하였다. 방법 : SVT를 처리한 후 MCF-7과 MDA-MB-231의 성장억제를 관찰하기 위해 CCK-8 assay를 시행하였고, apoptosis 평가에는 TUNEL assay를 시행하였다. 세포자멸사 관련 세포기전을 보기 위하여 세포내 활성산소량 및 미토콘드리아의 세포막전위 변화를 측정하였고, 세포자멸사 조절 단백인 Bax, Bcl-2 발현 변화 관찰에는 westem blot analysis를 시행하였다. 결과 : MCF-7과 MDA-MB-231 세포에 SVT를 처리한 후, 유방암 세포의 성장, Apoptosis의 유발 및 기전에 미치는 영향을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. MCF-7 세포와 MDA-MB-231 세포에서 SVT를 처리한 후 유방암 세포 성장이 억제되었다. 2. TUNEL assay를 통한 세포자멸사 평가에서 SVT를 처리한 MCF-7세포와 MDA-MB-231 세포 모두 세포자멸사 활성세포의 유의한 증가를 나타내었다. 3. 세포자멸사 관련 세포기전연구에서 SVT를 처리한 MCF-7 세포와 MDA-MB-231 세포에서 세포내 활성산소의 유의한 증가와 미토콘드리아 세포막 전위의 유의한 변동이 관찰되었다. 4. SVT를 처리한 MCF-7세포와 MDA-MB-231세포는 세포자멸사 관련 단백 발현에서 Bax의 유의한 증가와 Bcl-2의 유의한 감소를 나타내었다. 결론 : 이상의 결과는 SVT가 세포내 활성산소를 증가시킴으로써 미토콘드리아의 세포막전위에 변화를 일으켜 유방암 세포주인 MCF-7과 MDA-MB-231 세포에 세포자멸사를 유발하여 증식억제 효과가 있음을 입증한 것이다.

주제어

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제안 방법

  • And then to delineate whether the inhibition of cell growth by the SVT was due to the induction of apoptosis, I evaluated apoptosis of MCF-7 or MDA-MB-231 cells by TUNEL assay and quanti­ fication using FACS. TUNEL-positive MCF-7 or MDA-MB-231 cells were increased dose depend­ ently.
  • 14) reported that SVT induced apoptosis through significant increase of ROS generation and mitochondrial membrane potential in neuroblastoma cells. In this study, to investigate the effect of SVT from Vipera lebetina turanica on two highly invasive MCF-7(Estrogen dependent) and MDA-MB-231 (Estrogen independent) breast cancer cell growth and to contribute to make SVT available as a novel agent for human breast cancer prevention and intervention, I therefor conducted a mechanism study involving ROS generation, mito­ chondrial membrane potential and proapoptotic Bcl-2 family, determining whether SVT exerts inhibitory effect on MCF-7(Estrogen dependent) and MDA-MB-231 (Estrogen independent) cells proliferation, and how it works on the their apoptotic cell death.

대상 데이터

  • The Estrogen Receptor(ER) positive MCF-7 or ER negative MDA-MB-231 human breast cancer cell was obtained from ATCC (American Type Culture Collection, Rockville, MD). Breast cancer cells were cultured in RPMI-1640 medium(Life Technologies Inc.

데이터처리

  • Data were analyzed using one-way analysis of variance followed by Tuckey test as a post hoc test. Differences were considered significant at p<0.

이론/모형

  • 1% Triton X-100 in 1% sodium citrate for 5min, 4°C. Apoptosis was determined by detecting DNA strand breaks with a TUNEL assay, using the In Situ Death Detection Kit(Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). Ninety seven percent of cells initially plated were recovered for analysis.
  • Cell viability was determined by CCK-8 assay as described under Method.
  • Cell viability was determined by CCK-8 assay as described under Method.
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