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문제 정의
- 본 실험은 2008년 도입된 동물보호법 제13조에 따른 3Rs 원칙을(replacement, reduction, refinement) 따르며, 윤리적인 실험을 수행하기 위하여 노력하였다. 동물 실험의 윤리적 진행을 수행하기 위하여 동물을 사용하기 전 실험계획과 수행요령 및 주의사항을 사전에 교육받았다.
- 이에 저자는 갈근 약침이 흰쥐의 고지혈증에 미치는 영향을 살펴보기 위하여 고콜레스테롤 식이로 흰쥐에 고지혈증을 유발하고 양릉천 상응부위에 갈근 약침을 시술한 후 체중, 간무게, 혈청 성분, 간내 효소, 간 및 대동맥의 조직학적 변화 등 고지혈증과 관련된 지표들을 분석하여 유의성 있는 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
제안 방법
- 85g(수득율 7%)이었다. 1N NaOH를 이용하여 농축액을 pH 6.8이 되도록 조절하고, 4℃에서 12시간 방치한 후, 침전물을 제거하기 위해 syringe filtering을 실시하였다. 여과된 농축액에 PBS를 첨가하고 1%로 희석하여 약침액으로 사용하였다.
- 1㎖ cuvette에 0.5mM phosphate buffer(pH 7.0)와 20mM DTT 100㎕를 분주하고, 3mM NADPH 100㎕, 효소원 100㎕를 첨가하였다. 37℃에서 10분간 preincubation을 실시하였다.
- 37℃에서 10분간 preincubation을 실시하였다. 3mM HMG-CoA 100㎕를 가하여 효소 반응 시작과 동시에 340nm에서 5분간 흡광도 변화를 확인하였다. HMG-CoA reductase의 억제 활성은 다음 식에 의하여 계산하였다.
- Atherosclerosis index는 혈청에서 측정한 total cholesterol과 HDL cholesterol의 값을 이용하여 계산하였다.
- Catalase assay kit(Oxford Biomedical Research, USA)를 이용하여 측정하였으며, 520nm에서 흡광도를 측정하여 계산하였다.
- 상등액은 두 개로 나눠 10,000×g에서 1시간 원심분리하여 mitochondrial fraction을 얻었으며, 105,000×g에서 1시간 원심분리하여 cytosolic fraction을 얻었다. Microsomal fraction은 MDA의 함량 및 Catalase의 활성을 측정하였고, cytosolic fraction을 이용하여 SOD 생성저해 효과를 측정하였다. Microsomal fraction sample은 실험 전까지 -80℃에서 보관하였으며, cytosolic fraction은 -20℃에서 보관하였다.
- NP, saline 주입, PR 약침 처치는 모두 alloxan 투여 1주 이후부터 4주간 주 3회 시행하였다. NP, saline 주입, PR 약침 시술은 실험동물의 후지에서 양릉천(GB34) 상응부위를 매 시술시마다 좌우 교대로 취하여 시술하였다.
- 2㎖를 주입하였다. NP, saline 주입, PR 약침 처치는 모두 alloxan 투여 1주 이후부터 4주간 주 3회 시행하였다. NP, saline 주입, PR 약침 시술은 실험동물의 후지에서 양릉천(GB34) 상응부위를 매 시술시마다 좌우 교대로 취하여 시술하였다.
- 骨度分寸法에 의거하여 흰쥐의 좌우측 뒷다리에서 인체의 양릉천(Yangleungcheon ; GB34)에 상응하는 부위를 매 시술마다 좌우 교대로 취하였다.
- 고지혈증 평가를 위해 몸무게와 간무게를 측정하였다(Fig. 1-3). 실험기간 동안 매주 몸무게의 변화를 측정한 결과 고콜레스테롤 식이로 인한 체중증가가 control군에서 나타났으며 갈근 약침군에서 control군에 비하여 다소 낮아 갈근 약침군의 체중감소 효과가 관찰되었으나 실험 종료 후 살펴본 간무게와 몸무게에 대한 간무게의 비율인 liver index에서는 실험군에서 대조군에 비해 유의한 차이가 관찰되지 않았다.
- 증류수로 여러 번 세척한 후, Nuclear fast red 용액으로 1분간 핵 염색을 실시한 다음 증류수로 여러 번 세척한 후 수용성 봉입제로 봉입 한다. 봉입을 끝낸 조직사진은 형광현미경(ECLIPSE E600, Nikon, Japan)을 이용하여 관찰한 후, digital camera(DXM 1200F, Nickon, Japan)를 이용하여 사진을 촬영하고, ACT-1 program(Nickon, Japan)을 이용하여 분석하였다.
- 분획한 간조직으로부터 간 내 효소인 HMG-CoA reductase activity 및 catalase 농도를 측정하였다. HMG-CoA reductase는 생체 내에서 콜레스테롤의 합성을 조절하는데 중요한 역할을 하는 효소로 콜레스테롤을 합성하는 과정에서 HMG-CoA를 mevalonate 로 변환하는 역할을 하여 혈액 내에서 콜레스테롤 수치를 높게 만들어서 HMG-CoA reductase 활성의 억제는 고콜레스테롤혈증과 동맥경화를 예방 치료하는데 유용한 것으로 보고된 바 있다.
- 실험 종료 시까지 1주일 간격으로 각 실험군의 실험동물 몸무게를 측정하여 기록하였다. liver index는 실험 종료 시, 실험동물의 몸무게와 간무게를 측정하여 몸무게에 대한 간무게의 백분율로 계산하였다.
- 실험 종료 후, ethyl ether를 이용하여 실험동물을 마취하고, 심장 채혈 법으로 혈액을 채취하였다. 채혈한 혈액에서 혈장을 분리하여, (주)Reference laboratory(DaeJeon, Korea)에 의뢰하여 혈청 중의 total cholesterol, free cholesterol, LDL-cholesterol, HDL-cholesterol, phospholipid, AST, LDH, ALP를 측정하였다.
- 실험동물에 alloxan을 복강투여하고 고콜레스테롤식을 4주간 섭취하게 하면서 매주 몸무게를 측정하였다. Normal군에 비하여 control군에서 약간 높은 몸무게를 나타내었으며, PB-HA군에서 control군에 비하여 다소 낮은 몸무게를 나타내었다(Fig.
- 실험이 끝난 후, HMG-CoA가 가장 높은 시간인 밤 12시에 각 실험군의 흰쥐의 간을 HBSS를 이용하여 적출한 뒤, 무게를 측정하였다. 적출한 간은 rat liver 1g당 ice cold buffer A(50mM phosphate buffer, pH 7.
- 실험종료 후 실험동물의 몸무게에 대한 간 무게의 비율을 계산하였다. Normal군에 비하여 control군에서 liver index가 유의하게 증가하였다.
- 실험종료 후, 실험동물의 간을 적출하여 무게를 측정하였다. Normal군에 비하여 control군에서 간 무게가 유의하게 증가하였다.
- 양릉천에 시술한 갈근 약침이 고콜레스테롤 식이로 유발된 흰쥐의 고지혈증에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 몸무게, 간무게, 혈청, 간 내 효소 분석 및 조직학적 분석을 통해 다음과 같은 결론을 얻었다.
- 이후 실험기간 동안에는 실험군에 따라 일반 고형사료 혹은 고콜레스테롤 식이 사료로 조제된 사료 modified atherogenic diet No. 100353(Dyets INC. PA, USA)을 매일 일정한 시간에 물과 함께 공급하였으며, 실험실 환경은 실온(22±2℃)과 습도 20－60%를 유지하였다.
- 실험 종료 후, ethyl ether를 이용하여 실험동물을 마취하고, 심장 채혈 법으로 혈액을 채취하였다. 채혈한 혈액에서 혈장을 분리하여, (주)Reference laboratory(DaeJeon, Korea)에 의뢰하여 혈청 중의 total cholesterol, free cholesterol, LDL-cholesterol, HDL-cholesterol, phospholipid, AST, LDH, ALP를 측정하였다.
- 흰쥐 8마리씩을 한 군으로 하여 정상군(normal), 대조군(control), HG군(hand grasping; data not shown), NP(needle prick)군, saline(saline injection)군, 갈근 약침군(PR-HA)의 6군으로 나누었다.
- 흰쥐에 alloxan(150㎎/㎏)을 복강투여하고 일주일 뒤 혈액 내에 총콜레스테롤 수치가 180－220㎎/dl로 증가된 것을 확인한 후, 고콜레스테롤 식이 사료로 조제된 사료 modified Atherogenic diet No. 100353 (Dyets INC. PA, USA)를 4주간 매일 일정시간에 공급하여, 자유식으로 섭취하게 하여, 고콜레스테롤증을 유발하였다. 실험기간 중 사료는 4℃에서 보관하였다.
대상 데이터
- HG군은 약침처치시와 같이 흰쥐를 잡았다 놓는 동작만 하고, 이외의 처치는 하지 않았다. NP군은 양릉천(GB34) 상응부위에 26gauge 주사기를 0.5cm 정도 깊이로 자입하고 즉시 제거하였다. saline군은 양릉천(GB34) 상응부위에 saline 0.
- 2㎖를 주입하였다. PRHA군은 양릉천(GB34) 상응부위에 1%의 PR 약침액 0.2㎖를 주입하였다. NP, saline 주입, PR 약침 처치는 모두 alloxan 투여 1주 이후부터 4주간 주 3회 시행하였다.
- 5cm 정도 깊이로 자입하고 즉시 제거하였다. saline군은 양릉천(GB34) 상응부위에 saline 0.2㎖를 주입하였다. PRHA군은 양릉천(GB34) 상응부위에 1%의 PR 약침액 0.
- 동물은 6주령의 수컷 흰쥐(200±20)g을 (주)중앙실험동물로부터 공급받아, 실험 적응기간 동안에는 일반 고형사료(항생제 무첨가, 삼양사료)를 공급하며 1주일간 적응시킨 후 실험에 사용하였다.
- 본 실험에 사용된 갈근(Puerariae Radix, PR)은 대전대학교 부속대전한방병원에서 구입하여 이용하였다.
데이터처리
- 본 실험의 결과는 각 실험군에서 얻은 데이터의 평균과 표준편차로 나타내었다. 통계분석은 SPSS(14.
- 정상군과 대조군 평균비교는 paired t-test를 사용하였으며, 대조군, NP군, saline군, 갈근 약침군 간의 평균비교는 ANOVA test를 사용하였고, 사후검정은 Scheffe’s test를 이용하였다.
- 본 실험의 결과는 각 실험군에서 얻은 데이터의 평균과 표준편차로 나타내었다. 통계분석은 SPSS(14.0 KO) 통계프로그램을 사용하여 군간 평균 비교를 하였다. 데이터 분석결과, HG(hand grasping)는 Control군과 유의한 차이를 나타내지 않아, HG군의 데이터는 본 논문의 실험성적에 나타내지 않았다.
이론/모형
- 이에 저자는 갈근 약침이 흰쥐의 고지혈증에 미치는 영향을 살펴보기 위하여 Nishina 등17)의 방법으로 고콜레스테롤 식이로 흰쥐에 고지혈증을 유발하고 양 릉천에 갈근 약침을 시술한 후 체중, 간무게, 혈청 성분, 간 내 효소, 간 및 대동맥의 조직학적 변화 등 고지혈증과 유관한 지표들을 분석하였다.
- 적출한 간 조직의 일부를 취하여 여지로 혈액 및 이물질을 제거하고 Bansal 등의 방법19)에 의해 간조직 1g에 4배의 150mM의 KCl을 가하여 homogeniger를 이용하여 균질화 하였다. 균질화한 조직을 600×g에서 10분간 원심분리하여 균질화되지 않은 조직 등을 제거한 후, 상등액을 1,000×g에서 30분간 원심분리하여 상등액을 취하였다.
성능/효과
- 1. 갈근 약침군에서 대조군에 비해 혈청내 total cholesterol, HDL-cholesterol, 동맥경화지수(AI) 및 phospholipid가 유의하게 개선되었으나 NP 군 및 saline군에 비해 유의한 차이는 없었다.
- 2. 갈근 약침군에서 대조군 및 NP군, saline군에 비해 간 내 HMG-CoA reductase activity 및 catalase가 유의하게 개선되었다.
- 3. 갈근 약침군에서 조직학적 검사상 대조군에 비해 간과 대동맥조직의 병리적 변화가 억제되었다.
- 10). Catalase 농도 측정결과도 갈근 약침군이 대조군 및 saline군에 비해 유의하게 증가하여 갈근 약침이 흰쥐에서 항산화 작용을 하는 catalase를 증가시키는 작용이 관찰되었다 (Fig. 11).
- 이상의 결과를 종합해 볼 때 양릉천 갈근 약침이 고콜레스테롤 식이로 유발된 흰쥐의 고지혈증 관련 지표들을 유의하게 회복시켰는데, 이중 total cholesterol 및 HDL-cholesterol과 같은 혈청지질성분 호전의 경우는 NP군이나 saline군과 유의한 차이가 없어서 갈근 약침의 온전한 역할보다는 양릉천 경혈 자극이 일정부분 효과를 나타낸 것으로 생각된다. HMG-CoA reductase activity 억제에 있어서는 대조군 및 NP군이나 saline군에 비해서도 유의한 효과를 내는 것으로 보아 갈근 약침액 자체 작용으로 인한 것으로 생각되며, 이는 갈근 약침액이 HMG-CoA reductase 억제를 통하여 콜레스테롤 합성을 저하시켜 항고지혈증 작용을 나타낸 것으로 판단된다. 이로써 고지혈증에 갈근 약침이 유효한 치료법이 될 수 있을 것으로 사료되며 추후 갈근 약침의 임상 응용에 관한 추가적인 연구가 필요하리라 생각된다.
- HMG-CoA reductase activity의 측정결과 정상군에 비해 대조군에서 유의하게 증가되었고 갈근 약침 군에서 대조군에 비해 유의하게 감소되었으며 NP군, saline군에 비해서도 유의하게 감소하여 갈근 약침이 흰쥐에서 고콜레스테롤 식이로 증가된 HMG-CoA reductase 활성을 억제하여 콜레스테롤 합성을 저하 시키는 작용이 관찰되었다(Fig. 10). Catalase 농도 측정결과도 갈근 약침군이 대조군 및 saline군에 비해 유의하게 증가하여 갈근 약침이 흰쥐에서 항산화 작용을 하는 catalase를 증가시키는 작용이 관찰되었다 (Fig.
- 혈청 total cholesterol과 HDL cholesterol의 수치를 이용하여 동맥경화지수를 계산한 결과, normal군에 비하여 control군에서 동맥경화지수가 유의하게 증가하였다. NP군, saline군 및 PR-HA군에서는 control군에 비하여 동맥경화지수가 유의하게 감소하였다(Fig. 6).
- 실험동물의 혈중 LDL-cholesterol level을 측정한 결과, normal군에 비하여 control군에서 혈중 LDL-cholesterol이 유의하게 증가하였다. NP군에서는 control군에 비하여 혈중 LDL-cholesterol이 유의하게 감소하였고, saline군 및 PR-HA군에서는 NP군에 비하여 혈중 LDL-cholesterol이 유의하게 증가하였다(Fig. 7).
- 실험동물의 간에서 catalase level을 측정한 결과, normal군에 비하여 control군에서 catalase 농도가 유의하게 감소하였다. PR-HA군에서 control군, saline군에 비하여 catalase 농도가 유의하게 증가하였다(Fig. 11).
- 실험동물의 간에서 HMG-CoA reductase activity를 측정한 결과, normal군에 비하여 control군에서 유의하게 증가하였다. PR-HA군에서는 control군, NP군 및 saline군에 비하여 간 내 HMG-CoA reductase activity가 유의하게 감소하였다(Fig. 10).
- 각 실험군의 결과값을 비교하여 신뢰도 95% 이상(p<0.05)일 때 유의성이 있는 것으로 판정하였다.
- 12). 대동맥 절편을 관찰한 결과 정상군에 비하여 대조군에서 맥관 주변에 붉은색 착색이 현저히 증가하였으나 갈근 약침군에서는 붉은색의 착색이 대조군에 비하여 감소하여(Fig. 13), 갈근 약침이 고지혈증이 유발된 흰쥐에서 간조직 손상 억제 효과와 동맥경화 억제 효과가 있음을 확인 할 수있었다.
- 0 KO) 통계프로그램을 사용하여 군간 평균 비교를 하였다. 데이터 분석결과, HG(hand grasping)는 Control군과 유의한 차이를 나타내지 않아, HG군의 데이터는 본 논문의 실험성적에 나타내지 않았다. 정상군과 대조군 평균비교는 paired t-test를 사용하였으며, 대조군, NP군, saline군, 갈근 약침군 간의 평균비교는 ANOVA test를 사용하였고, 사후검정은 Scheffe’s test를 이용하였다.
- 6). 또한 혈중 total cholesterol에 대한 phospholipid의 비도 갈근 약침군 및 NP군, saline군에서 모두 control군에 비하여 유의하게 증가하였다(Fig. 8). 혈중 total cholesterol은 체내 지질 대사 이상의 지표로서 남녀노소 인종에 관계없이 혈중 콜레스테롤 수치가 높으면 죽상경화증에 의한 허혈성 심질환의 발병이 증가한다고 알려져 있고30), 혈관 내의 콜레스테롤을 제거하는 기능을 가진 HDL은 동맥경화를 예방하는 유익한 콜레스테롤로 혈관에 부착된 콜레스테롤을 간장으로 운반하여 소화시키게 되는데 혈액 중의 HDL-cholesterol수치가 높을수록 동맥경화나 심장질환이 될 위험성이 낮은 것으로 보고되고 있다31,32).
- 또한 혈청 phospholipid는 각종의 지질대사이상에 의해 증감하지만 cholesterol과 평행해서 변동하는 경우가 많고 동맥경화증에 있어서의 phospholipid의 역할은 cholesterol 등의 용해도를 높여서 동맥벽에 지질침착을 억제시키는 항동맥경화인자의 하나이므로 total phospholipid/total cholesterol 비율의 감소는 동맥경화 촉진의 지표로 이용된다35). 실험결과 갈근 약침에서 유의하게 혈중 콜레스테롤 수치를 저하시키고, HDL-cholesterol을 증가시키며, phospholipid를 감소시키는 작용이 관찰되었으나, NP군 및 saline군과는 유의한 차이를 보이지 않아 갈근 약침액만의 작용으로 이해하기는 어렵고 活血通脈하고 淸肝濕熱하는 양릉천 혈의 경혈자극이 주로 영향을 미친 것으로 사료되었다.
- 혈중 LDLcholesterol의 증가는 고지혈증과 깊은 관계가 있는데 LDL-cholesterol이 동맥벽의 내피에서 산화되어 순환 중의 monocytes를 동맥벽으로 유도함으로써 동맥경화를 일으키고 산화된 LDL-cholesterol은 macrophages 를 foam cell화 하여 혈관에 경화를 가져오며 smooth muscle cell을 분화시켜 세포의 이상 증식을 통해 동맥경화의 원인이 되기도 한다32). 실험결과 양릉천 단순 자침시에 LDL-cholesterol과 free cholesterol을 유의하게 감소시키는 것으로 나타났으며, 갈근 약침은 LDL-cholesterol과 free cholesterol 감소에 별다른 영향을 주지 못하는 것으로 나타났다. 이상의 고지혈증과 관련된 혈청 지질 성분 분석을 통하여 갈근 약침의 고지혈증 관련 지표의 개선 작용이 일부 관찰되었으나 NP군 및 saline군과 비교해 유의성이 없었고 LDL- cholesterol의 경우 양릉천 단순 자침시에만 유의하게 감소되어 갈근 약침액의 작용보다는 양릉천 경혈의 자극으로 인한 작용으로 판단된다.
- 1-3). 실험기간 동안 매주 몸무게의 변화를 측정한 결과 고콜레스테롤 식이로 인한 체중증가가 control군에서 나타났으며 갈근 약침군에서 control군에 비하여 다소 낮아 갈근 약침군의 체중감소 효과가 관찰되었으나 실험 종료 후 살펴본 간무게와 몸무게에 대한 간무게의 비율인 liver index에서는 실험군에서 대조군에 비해 유의한 차이가 관찰되지 않았다.
- 실험동물의 간과 대동맥의 조직학적 분석 결과 간 조직에서 정상군에 비하여 대조군에서 흑갈색으로 착색된 부분이 조직절편 전체에서 나타났으나 갈근 약침군의 간조직에서는 흑갈색의 착색이 control군에 비하여 감소하였다(Fig. 12). 대동맥 절편을 관찰한 결과 정상군에 비하여 대조군에서 맥관 주변에 붉은색 착색이 현저히 증가하였으나 갈근 약침군에서는 붉은색의 착색이 대조군에 비하여 감소하여(Fig.
- 실험동물의 간에서 HMG-CoA reductase activity를 측정한 결과, normal군에 비하여 control군에서 유의하게 증가하였다. PR-HA군에서는 control군, NP군 및 saline군에 비하여 간 내 HMG-CoA reductase activity가 유의하게 감소하였다(Fig.
- 실험동물의 간에서 catalase level을 측정한 결과, normal군에 비하여 control군에서 catalase 농도가 유의하게 감소하였다. PR-HA군에서 control군, saline군에 비하여 catalase 농도가 유의하게 증가하였다(Fig.
- 실험동물의 간조직을 Sudan black B(SBB) 염색으로 염색하여 관찰한 결과, normal군에 비하여 control 군에서 흑갈색으로 착색된 부분이 조직절편 전체에서 나타났다. PR-HA군의 간조직에서는 흑갈색의 착색이 control군에 비하여 감소하였다(Fig.
- 실험동물의 대동맥 절편을 oil red O 염색으로 염색하여 관찰한 결과, normal군에 비하여 control군에서 맥관 주변에 붉은색 착색이 현저히 증가하였다. PR-HA군에서는 붉은색의 착색이 control군에 비하여 감소하였다(Fig.
- 실험동물의 혈중 LDL-cholesterol level을 측정한 결과, normal군에 비하여 control군에서 혈중 LDL-cholesterol이 유의하게 증가하였다. NP군에서는 control군에 비하여 혈중 LDL-cholesterol이 유의하게 감소하였고, saline군 및 PR-HA군에서는 NP군에 비하여 혈중 LDL-cholesterol이 유의하게 증가하였다(Fig.
- 실험동물의 혈중 free cholesterol level을 측정한 결과, normal군에 비하여 control군에서 혈중 free cholesterol이 유의하게 증가하였으며, NP군에서 control군에 비하여 혈중 free cholesterol이 유의하게 감소하였다(Fig. 9).
- 실험동물의 혈중 total cholesterol level을 측정한 결과, normal군에 비하여 control군에서 혈중 total cholesterol이 유의하게 증가하였으며, NP군, saline군, 및 PR-HA군에서 control군에 비하여 혈중 total cholesterol이 유의하게 감소하였다(Fig. 4).
- 실험동물의 혈중 total cholesterol에 대한 phospholipid의 비를 측정한 결과, normal군에 비하여 control군에서 유의하게 감소하였으며, NP군, saline군, PRHA군에서는 control군에 비하여 유의하게 증가하였다(Fig. 8).
- 실험동물의 혈청에서 total cholesterol에 대한 HDL-cholesterol의 비를 측정한 결과, normal군에 비하여 control군에서 혈중 HDL-cholesterol/total cholesterol이 유의하게 감소하였으며, NP군, saline군 및 PR-HA군에서 control군에 비하여 혈중 HDL-cholesterol/ total cholesterol이 유의하게 증가하였다(Fig. 5).
- 이상의 결과를 종합해 볼 때 양릉천 갈근 약침이 고콜레스테롤 식이로 유발된 흰쥐의 고지혈증 관련 지표들을 유의하게 회복시켰는데, 이중 total cholesterol 및 HDL-cholesterol과 같은 혈청지질성분 호전의 경우는 NP군이나 saline군과 유의한 차이가 없어서 갈근 약침의 온전한 역할보다는 양릉천 경혈 자극이 일정부분 효과를 나타낸 것으로 생각된다. HMG-CoA reductase activity 억제에 있어서는 대조군 및 NP군이나 saline군에 비해서도 유의한 효과를 내는 것으로 보아 갈근 약침액 자체 작용으로 인한 것으로 생각되며, 이는 갈근 약침액이 HMG-CoA reductase 억제를 통하여 콜레스테롤 합성을 저하시켜 항고지혈증 작용을 나타낸 것으로 판단된다.
- 실험결과 양릉천 단순 자침시에 LDL-cholesterol과 free cholesterol을 유의하게 감소시키는 것으로 나타났으며, 갈근 약침은 LDL-cholesterol과 free cholesterol 감소에 별다른 영향을 주지 못하는 것으로 나타났다. 이상의 고지혈증과 관련된 혈청 지질 성분 분석을 통하여 갈근 약침의 고지혈증 관련 지표의 개선 작용이 일부 관찰되었으나 NP군 및 saline군과 비교해 유의성이 없었고 LDL- cholesterol의 경우 양릉천 단순 자침시에만 유의하게 감소되어 갈근 약침액의 작용보다는 양릉천 경혈의 자극으로 인한 작용으로 판단된다.
- 혈중 LDL-cholesterol level의 경우는 NP군만이 control군 및 saline군, 갈근 약침군에 비해 유의하게 감소하였고 갈근 약침군에서는 유의한 변화가 없었다 (Fig. 7). 혈중 free cholesterol level도 NP군에서 control군에 비해 유의하게 감소하였고 갈근 약침군에서는 유의한 변화가 없었다(Fig.
- 7). 혈중 free cholesterol level도 NP군에서 control군에 비해 유의하게 감소하였고 갈근 약침군에서는 유의한 변화가 없었다(Fig. 9). 혈중 LDLcholesterol의 증가는 고지혈증과 깊은 관계가 있는데 LDL-cholesterol이 동맥벽의 내피에서 산화되어 순환 중의 monocytes를 동맥벽으로 유도함으로써 동맥경화를 일으키고 산화된 LDL-cholesterol은 macrophages 를 foam cell화 하여 혈관에 경화를 가져오며 smooth muscle cell을 분화시켜 세포의 이상 증식을 통해 동맥경화의 원인이 되기도 한다32).
- 혈청 total cholesterol과 HDL cholesterol의 수치를 이용하여 동맥경화지수를 계산한 결과, normal군에 비하여 control군에서 동맥경화지수가 유의하게 증가하였다. NP군, saline군 및 PR-HA군에서는 control군에 비하여 동맥경화지수가 유의하게 감소하였다(Fig.
- 혈청분석을 통하여 고지혈증에 관계되는 지질성분과 효소들을 측정하였는데 혈중 total cholesterol level 측정결과 갈근 약침군 및 NP군, saline군에서 모두 control군에 비하여 유의하게 감소하였고(Fig. 4), total cholesterol에 대한 HDL-cholesterol의 비율도 갈근 약침군 및 NP군, saline군에서 control군에 비하여 유의하게 증가하였으며(Fig. 5), 혈중 total cholesterol과 HDL-cholesterol 수치를 이용한 동맥경화지수(AI)에서도 갈근 약침군 및 NP군, saline군에서 control군에 비해 유의하게 감소하였다(Fig. 6). 또한 혈중 total cholesterol에 대한 phospholipid의 비도 갈근 약침군 및 NP군, saline군에서 모두 control군에 비하여 유의하게 증가하였다(Fig.
후속연구
- HMG-CoA reductase activity 억제에 있어서는 대조군 및 NP군이나 saline군에 비해서도 유의한 효과를 내는 것으로 보아 갈근 약침액 자체 작용으로 인한 것으로 생각되며, 이는 갈근 약침액이 HMG-CoA reductase 억제를 통하여 콜레스테롤 합성을 저하시켜 항고지혈증 작용을 나타낸 것으로 판단된다. 이로써 고지혈증에 갈근 약침이 유효한 치료법이 될 수 있을 것으로 사료되며 추후 갈근 약침의 임상 응용에 관한 추가적인 연구가 필요하리라 생각된다.
- 이상의 결과들을 종합해 볼 때 갈근 약침이 HMGCoA reductase 억제를 통하여 콜레스테롤 합성을 저하시켜 고지혈증에 유효한 치료법이 될 수 있을 것으로 사료되며 추후 임상적인 연구가 필요하리라 생각된다.
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