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문제 정의
- 따라서 본 연구는 무 발정기의 개를 대상으로 발정 유도에이용할 수 있는 FSH, GnRH, PMSG와 bromocriptine 의 투여량과 병용 투여 방법에 따른 암캐의 발정 주기 변화와 발정 유도 효율을 임상적, 세포조직학적, 호르몬 분석 등 다양한 방법으로 판정하여 효율적인 발정 유도 방법을 비교 개발하고자 하였다.
- 이는 계절, 환경, 영양 상태 그리고 호르몬을 투여 하는 방법 등에 따라 호르몬 처리 효율에 차이가 발생할 수 있으며, 특히 동일한 조건의 무 발정이기와 발정 유도율을 검증하는 방법의 정확도에 따라 효율성 판정에 차이가 발생할 수 있다. 본 연구에서는 인공수정이나 자연 교배 등의 효율을 향상시킬 수 있는 발정 유도 동기화를 위하여 FSH, GnRH, PMSG 그리고 bromocriptine을 여러 방식으로 투여하여 효율성을 비교하였다.
제안 방법
- GnRH 처리 군은 GnRH 5 ug/kg을 정맥으로 실험 첫날에만 주사하였다. Bromocriptine 처리 군은 bromocriptine 0.3 ㎎/㎏을 경 구로 1 일1회 투여하였으며, 이 약제의 부작용인 구토가 발생할 것을 예방하고자 항 구토제 인 metochopramide(맥페란, 동아약품, 한국)를 bromocriptine을 투여하기 30분전에 경구 투여하였다. 실험 10일째 대조군을 제외한 모든 실험군에서 배란을 유도하기 위해 hCG 500 IU/dog을 근육주사하였다(Fig.
- 1과 같다. FSH (L) 처리군은 FSH를 1일 2회 1.5 ㎎/㎏을 피하 주사하였고 FSH(H) 처리군은 FSH를 2배인 3 ㎎/㎏을 1일 2회 피하로 투여 하였다. GnRH + FSH 처리군은 첫째 날 GnRH 5 ug/kg을 정맥 투여하고 FSH 3 ㎎/㎏을 1일 1회 피하로 주사하였다.
- 5 ㎎/㎏을 피하 주사하였고 FSH(H) 처리군은 FSH를 2배인 3 ㎎/㎏을 1일 2회 피하로 투여 하였다. GnRH + FSH 처리군은 첫째 날 GnRH 5 ug/kg을 정맥 투여하고 FSH 3 ㎎/㎏을 1일 1회 피하로 주사하였다. PMSG 처리군은 PMSG 50 IU/kg을 3일 간격으로 총 3회 투여하였으며, GnRH + PMSG 처리군은 GnRH + FSH 처리군과 같이 첫째 날 GnRH 5 ug/kg을 정맥투여하고 PMSG는 PMSG처리군과 같이 50 IU/kg을 3일에 한번 피하로 투여하였다.
- Low standard 의 progesterone 농도는 3 ng/ml, High standard의 progesterone 농도는 10 ng/ml로 샘플의 발색 정도와 비교하여 3 ng/ml일 경우 1, 3~10 ng/ml일 때는 2, 그리고 10 ng/ml 이상일 때는 3으로 표시하여 분석하였다. 호르몬 투여 첫째 날, 여섯째 날, 아홉째 날 그리고 실험의 마지막 날인 열한째 날 채취한 혈액으로 호르몬 농도를 측정한 결과 모든 처리 군에서 첫째 날에 3 ng/ml보다 낮게 나타나 무 발정기로 판정하였다.
- 혈중 progesterone 농도 측정은 상용화되어 OVUCHECK® Premate로 시행하였다. OVUCHECK® Premate kit 내 연결된 3개의 well 중 2개의 well에 각각 Low(3 ng/ml) 와 High(10 ng/ml) standard progesterone을 넣고 남은 한 개의 well에 채취한 혈장 샘플 넣어 Low와 High standard progesterone well의 색깔과 비교하여 progesterone 농도를 즉정하였다. 먼저 첫 번째와 두 번째 well에 Low와 High standard progesterone을 세 번째 well에 혈장 샘플을 kit 내의 피펫으로 한 방울 첨가하였다.
- OVUCHECK® Premate를 이용하여 실험견의 혈중 progesterone 농도를 3단계로 측정하여 발정 유도를 판정하였다. Low standard 의 progesterone 농도는 3 ng/ml, High standard의 progesterone 농도는 10 ng/ml로 샘플의 발색 정도와 비교하여 3 ng/ml일 경우 1, 3~10 ng/ml일 때는 2, 그리고 10 ng/ml 이상일 때는 3으로 표시하여 분석하였다.
- GnRH + FSH 처리군은 첫째 날 GnRH 5 ug/kg을 정맥 투여하고 FSH 3 ㎎/㎏을 1일 1회 피하로 주사하였다. PMSG 처리군은 PMSG 50 IU/kg을 3일 간격으로 총 3회 투여하였으며, GnRH + PMSG 처리군은 GnRH + FSH 처리군과 같이 첫째 날 GnRH 5 ug/kg을 정맥투여하고 PMSG는 PMSG처리군과 같이 50 IU/kg을 3일에 한번 피하로 투여하였다. GnRH 처리 군은 GnRH 5 ug/kg을 정맥으로 실험 첫날에만 주사하였다.
- 각기 다른 약물 투여 방법을 적용한 암캐의 발정 주기와 정확한 발정 유도 판정을 위해서 질 점막 상피세포의 변화 분석방법(Fay 등, 2003; Post, 1985)과 혈중 progesterone 농도를 간편하게 측정할 수 있는 OVUCHECK® Premate(BIOVET, USA) 진단법으로 비교 분석하였다.
- 각기 다른 호르몬 투여 방법에 따른 혈중 progesterone 농도 분석을 위해서 장액성 혈액 삼출물이 관찰되는 시기를 발정전기로 정하고, Fig. 1 에 표시된 것처럼 호르몬 투여 첫째 날, 여섯째 날, 아홉째 날 그리고 실험의 마지막 날인 열한째 날에 각각 요골측 피정맥이나 경정맥에서 혈액을 0.5~1 ml 을 채취하여 총 5번 혈액을 항응고제가 처리된 튜브에 채취하였다. 채취된 혈액은 500 xg로 5 분간 원심분리하여 상층의 혈장만을 분리하였다.
- 그 위에 progesterone에 대한 1차 항체를 4방울을 첨가하고 15분 동안 반응시킨 후 증류수에 3 번 수세하였다. 다음으로 발색 부분이 결합되어 있는 1차 항체에 대한 2차 항체를 4방울 첨가하고 다시 15분 정도 반응 시켜 증류수로 3번 수세 후 10분 정도 관찰하며 색의 변화를 관찰하였다. Progesterone의 농도가 높을수록 붉은색 이 연하고 progesterone 농도가 낮을수록 붉은색이 진하게 발색되어 샘플의 색깔이 Low standard의 색과 유사하게 발색되면 progesterone 농도가 3 ng/ml인 발정전기, Low와 High 의 중간 색으로 발색 되면 3~10 ng/ml 배란기, High에 가까우면 10 ng/ml로 하루 이틀 후를 교배 적기로 High 보다 연하게 발색되면 10 ng/ml 이상인 즉시 교배나 다음 발정기를 기다려야 함을 나타내는 progesterone0] 존재함을 판정하였다(Fig.
- 매우 중요하다. 따라서 본 연구에서는 여러 호르몬 투여 방법에 의해 발정이 유도된 암캐의 교배 적기를 일반적으로 이용되고 있는 질 점막 상피세포 도말 검사법과 혈중 progesterone 농도 변화로 진단하였다. 질 점막 상피세포 도말 검사법으로 진단하였을 때 FSH 투여군에 비해 GnRH + FSH 처리 군과 GnRH 처리군이 유의적으로 높았으나 PMSG 처리군, GnRH + PMSG 처리군 그리고 bromocriptine 처리군이 유의적으로 높은 발정 유도율을 보였다.
- OVUCHECK® Premate kit 내 연결된 3개의 well 중 2개의 well에 각각 Low(3 ng/ml) 와 High(10 ng/ml) standard progesterone을 넣고 남은 한 개의 well에 채취한 혈장 샘플 넣어 Low와 High standard progesterone well의 색깔과 비교하여 progesterone 농도를 즉정하였다. 먼저 첫 번째와 두 번째 well에 Low와 High standard progesterone을 세 번째 well에 혈장 샘플을 kit 내의 피펫으로 한 방울 첨가하였다. 그 위에 progesterone에 대한 1차 항체를 4방울을 첨가하고 15분 동안 반응시킨 후 증류수에 3 번 수세하였다.
- 실험에 공시한 암캐는 모두 성 성숙이 완료되었으며 독립된 케이지에서 물과 사료를 자유 급식하였으며 정기적인 운동을 실시하였다. 발정 유도 실험을 위해서 발정 유도 약물 투여 전 자연 발정이 유도된 대조군을 제외하고 각 실험군에 공시된 암캐는 질 점막 상피세포 도말검사와 호르몬 검사를 통하여 무 발정기인 것만을 실험에 공시하였다.
- 본 연구에서 FSH의 경우 호르몬 투여 기간인 9일 동안 투여군에 따라 총 9회(GnRH + FSH 처리군)에서 17회(저농도 및 고농도의 FSH 처리군)에 걸쳐 투여를 하였는데, 이는 실험 견에 스트레스를 유발할 수 있을 뿐 아니라 시술자에게도 번거로운 방법이다. 또한 FSH 처리군의 경우 호르몬 투여 6일째와 9일째에는 3~10 ng/ml에 도달하였다가 호르몬 투여 11 일째는 대조군과 FSH(L), FSH(H) 그리고 GnRH + FSH 처 리 군에서 progesterone 농도가 3 ng/ml로 모든 FSH 처 리군은 무 발정으로 판정되었다.
- 3 ㎎/㎏을 경 구로 1 일1회 투여하였으며, 이 약제의 부작용인 구토가 발생할 것을 예방하고자 항 구토제 인 metochopramide(맥페란, 동아약품, 한국)를 bromocriptine을 투여하기 30분전에 경구 투여하였다. 실험 10일째 대조군을 제외한 모든 실험군에서 배란을 유도하기 위해 hCG 500 IU/dog을 근육주사하였다(Fig. 1). 각 약물의 투여 용량과 방법은 예비 연구 결과와 기존 보고를 바탕으로 하였다(Kutzler, 2005; Kugler, 2007).
- 시작되는 시기까지 2회/주 실시하였다. 암캐의 질 점막상피세포를 생리식염수를 묻힌 면봉으로 채취하고 슬라이드에 도말 후 메탄올로 고정하고 Diff-Quick 염색하였다. 염색된 질 점막 상피세포 핵의 응축 정도와 세포질의 각화 및 적혈구와 백혈구 줄현 등을 광학현미경(Nikon, Japan)으로 관찰하였다.
- 여러 호르몬 투여 방법에 의한 발정 유도를 질 점막 상피세포 도말 검사와 혈중 progesterone 농도 측정 결과와 비교하였다. 호르몬 투여 한 실험견의 혈중 progesterone 농도가 OVU- CHECK® Premate로 측정 결과 10 ng/ml로 나타난 경우 무핵 각화 상피세포의 발현 비율을 비교한 결과 대조군과 FSH를 투여한 실험군들은 유의적(F<0.
- 암캐의 질 점막상피세포를 생리식염수를 묻힌 면봉으로 채취하고 슬라이드에 도말 후 메탄올로 고정하고 Diff-Quick 염색하였다. 염색된 질 점막 상피세포 핵의 응축 정도와 세포질의 각화 및 적혈구와 백혈구 줄현 등을 광학현미경(Nikon, Japan)으로 관찰하였다. 상피 세포는 parabasal cell(small, medium, large) intermediate cell, superficial cell, anuclear cell로 구분하여 무 발정 기,발정휴지기, 발정전기, 발정기 그리고 발정후기로 분류를 하였다(Post, 1985).
- 실험에 공시한 암캐들은 2~4년령의 체중 3~10 kg의 잡종견으로 자연 발정이 유도된 5 마리의 실험견을 실험 대조 군으로 공시하였다. 일곱 개의 실험군에는 각 8마리씩의 무 발 정기의 암캐를 저농도 또는 고농도 FSH 단독 투여, FSH와 GnRH 병용 투여, PMSG 단독 투여, PMSG와 GnM의 병용 투여, GnRH 단독 투여군에 공시하였으며 bromocriptine 단독 투여군에는 9마리의 암캐를 공시하였다. 실험에 공시한 암캐는 모두 성 성숙이 완료되었으며 독립된 케이지에서 물과 사료를 자유 급식하였으며 정기적인 운동을 실시하였다.
- 질 점막 상피세포 도말 검사는 발정전기 시작부터 발정 후기가 시작되는 시기까지 2회/주 실시하였다. 암캐의 질 점막상피세포를 생리식염수를 묻힌 면봉으로 채취하고 슬라이드에 도말 후 메탄올로 고정하고 Diff-Quick 염색하였다.
- 채취된 혈액은 500 xg로 5 분간 원심분리하여 상층의 혈장만을 분리하였다. 혈중 progesterone 농도 측정은 상용화되어 OVUCHECK® Premate로 시행하였다. OVUCHECK® Premate kit 내 연결된 3개의 well 중 2개의 well에 각각 Low(3 ng/ml) 와 High(10 ng/ml) standard progesterone을 넣고 남은 한 개의 well에 채취한 혈장 샘플 넣어 Low와 High standard progesterone well의 색깔과 비교하여 progesterone 농도를 즉정하였다.
- 혈중 progesterone 농도의 변화로 발정기를 진단하기 위해서 Ovulation timing test kit 인 OVUCHECK® Premate를 병행하여 교배 적기를 확인하였다. 이 배란 진단 키트의 원리는 발정기가 되면 혈중 estrogen 농도가 감소하고 LH peak가 일어나고 2일 후 progesterone 농도가 상승(Jeffcoate와 England, 1997)하고 배란기 농도가 5 ng/ml 이상으로 상승(Jeffcoate와 Lindsay, 1989)하는 것을 응용한 것이다.
대상 데이터
- 본 실험에 공시한 암캐는 총 54 마리로 백신과 구충을 실시하고 신체 검사를 통해 임상적으로 건강하다고 판정된 실험 견을 각 대조군과 7개의 서로 다른 실험군에 공시하였다. 실험에 공시한 암캐들은 2~4년령의 체중 3~10 kg의 잡종견으로 자연 발정이 유도된 5 마리의 실험견을 실험 대조 군으로 공시하였다.
- 실험에 공시된 암캐에 투여한 모든 호르몬 및 약물은 수의 임상에서 상용되는 것으로 Table 1에 구체적으로 소개하였으며 항prolactin제인 bromocriptinee 인의용을 실험에 공시하였다. 자연 발정 유도된 실험 대조군(Control)을 제외한 7개의 실험군의 호르몬 투여 간격과 질 점막 상피세포 도말 검사 및 호르몬 분석을 위한 혈액 채취 스케줄은 Fig.
- 공시하였다. 실험에 공시한 암캐들은 2~4년령의 체중 3~10 kg의 잡종견으로 자연 발정이 유도된 5 마리의 실험견을 실험 대조 군으로 공시하였다. 일곱 개의 실험군에는 각 8마리씩의 무 발 정기의 암캐를 저농도 또는 고농도 FSH 단독 투여, FSH와 GnRH 병용 투여, PMSG 단독 투여, PMSG와 GnM의 병용 투여, GnRH 단독 투여군에 공시하였으며 bromocriptine 단독 투여군에는 9마리의 암캐를 공시하였다.
데이터처리
- 본 실험의 대조군과 실험군간의 데이터는 SPSS의 Analysis of Variance(ANOVA)로 분석 하였으며, F<0.05 일 때 유의 적 인 차이를 인정하였다.
이론/모형
- 실험견의 발정 유도 판정은 무핵 각화된 질 점막 상피세포의 출현 비율을 'Cornification Index'(van der Holst와 Best, 1976)를 기준으로 해서 판정하였다(Hg. 3). 자연 발정 유도견인 대조군의 경우 20%의 암캐에서 발정이 진단되었다.
성능/효과
- 0%)의 경우 모든 실험견에서 질 점막 상피세포의 무핵각화 변화로 발정 유도를 판정하였다. Bromocriptine 단독 투여군(77.8%)은 PMSG 단독 투여(87.5%)나 GnRH와 병용 투여군(100.0%)보다 낮은 경향을 보였으나 그 외의 다른 처리 군보다 유의적(F<0.05)으로 높게 나타났다.
- 05)인 차이가 없었다. GnRH와 FSH 병용 투여군(62.5%) 과 GnRH 단독 투여군(62.5%)의 경우 FSH 단독 투여군(50.0%) 보다 다소 높은 경향을 보였으며, GnRH와 PMSG 병용 투여군(100.0%)의 경우 모든 실험견에서 질 점막 상피세포의 무핵각화 변화로 발정 유도를 판정하였다. Bromocriptine 단독 투여군(77.
- OVUCHECK Premate를 통하여 발정 적 기 라고 판정된 실험 견 중 질 점막 상피세포 도말검사로 무핵 각화상피세포의 비율을 확인해 본 결과 대조군 FSH를 사용한 군들에서는 유의적 (F<0.05)으로 낮은 상관관계를 보였다. England와 Allen(1991)은 질 점막 상피세포 도말 검사로 교배 적기를 판정하였을 때 기준이 명확하지 않다고 보고하고 있으나, 본 연구에서 자 연발 정견인 대조군에 비해 호르몬 투여군의 경우 질 점막 상피세포 도말 검사법을 이용한 진단의 정확도가 유의적(F<0.
- 다음으로 발색 부분이 결합되어 있는 1차 항체에 대한 2차 항체를 4방울 첨가하고 다시 15분 정도 반응 시켜 증류수로 3번 수세 후 10분 정도 관찰하며 색의 변화를 관찰하였다. Progesterone의 농도가 높을수록 붉은색 이 연하고 progesterone 농도가 낮을수록 붉은색이 진하게 발색되어 샘플의 색깔이 Low standard의 색과 유사하게 발색되면 progesterone 농도가 3 ng/ml인 발정전기, Low와 High 의 중간 색으로 발색 되면 3~10 ng/ml 배란기, High에 가까우면 10 ng/ml로 하루 이틀 후를 교배 적기로 High 보다 연하게 발색되면 10 ng/ml 이상인 즉시 교배나 다음 발정기를 기다려야 함을 나타내는 progesterone0] 존재함을 판정하였다(Fig. 2).
- PMSG 처리군의 경우 가장 효율적 이었으나, 개의 경우 산업 동물과 달리 지속적인 발정 유도와 산자 생산이 필요하다. 따라서 FSH 투여로 발생하는 비용 부담과 많은 노동력 소모를 줄이고 PMSG 투여로 발생할 수 있는 부작용을 최소화 할 수 있으면서 효율성도 높은 편인 anti-prolactin계 약물인 bromo- criptine을 이용하는 것이 효과적일 것으로 사료된다. 교배 적기진단은 질 점 막 상피세포 도말 검사와 OVUCHECK® Premate 로 progesterone 농도 측정 방법을 병행해서 비교적 간편하게 정확도를 높일 수 있다.
- 또한 OVUCHECK® Premate를 이용한 발정 진단의 경우 PMSG를 처리시 progesterone 농도 상승이 다른 군에 비하여 지속적으로 일어남을 알 수 있으며, 반면 bromo- criptine는 PMSG 처리군에 비해 다소 천천히 상승함을 알 수 있다. 따라서 anti-prolactine계 약물을 적용하였을 때 발정 유도율이 FSH과 GnRH 투여에 비해 발정 유도 효율도 높은 경향을 보이고 PMSG 투여에 비해 부작용 발생도 적으며 경구 투여로 투여 방법도 간편하며 투여량과 횟수도 소모적이지 않아 경제적인 측면에서도 가장 효과적인 방법으로 보인다. 또한 번식효율을 높이기 위하여 교배 적기의 검사는 질 점막 상피세포 도말 검사와 더불어 호르몬 검사를 병행하여 정확도를 높일 수 있을 것이다.
- 그러나 OVUCHECK® Prematee 진단 방법 이간 편하고 단시간에 결과를 진단할 수 있어서 임상에서 적용하기에 많은 장점을 가지고 있다. 따라서 본 연구에서는 질점 막 상피세포 검사 결과와 배란 진단 키트 검사 결과를 비교하여 정확도를 비교해 본 결과 자연 발정견인 대조군, FSH 처리 구 GnRH + FSH 처 리군, 그리고 bromocriptine 처 리군의 경우 일치성이 각각 60, 50, 75, 그리고 77.8%였으나 PMSG 처리 군과 GnRH + PMSG 처리 군의 경우 87.5%와 100%로 높은 일 치성을 보였다. 또한 OVUCHECK® Premate를 이용한 발정 진단의 경우 PMSG를 처리시 progesterone 농도 상승이 다른 군에 비하여 지속적으로 일어남을 알 수 있으며, 반면 bromo- criptine는 PMSG 처리군에 비해 다소 천천히 상승함을 알 수 있다.
- 0 ㎎/㎏ FSH를 투여한 FSH(L)과 FSH(H)의 경우 모두 50%, GnRH 처리군과 GnRH + FSH 처리 군의 경우 75%의 일치성을 보였다. 반면 PMSG 처리군의 경우 87.5%로 GnRH + PMSG 처리군의 경우 질 점막 상피세포의 무핵 각화 상피세포 발현과 progesterone 농도 진단 결과가 100% 일치하여 두 진단 방법 간의 일치성이 높은 것으로 나타났다. Bromocriptine 처리군의 경우 두 진단 방법 간의 일치성이 77.
- 78 kg/ml의 FSH 농도에서 유사하게 발정 이 유도되어 개에 있어서 FSH 농도에 대한 약물 감수성이 크지 않음을 보여주고 있다(Shille 등, 1984). 본 실험에서도 저농도(1.5 mg/ kg)와 고농도(3 ㎎/㎏)의 FSH 투여군, GnRH와 병용 투여한 처리 군에서 모두 50% 이상의 발정 유도율이 나타나지 만, FSH 농도에 따른 차이와 GnRH의 병용 투여에 따른 유의적인(P< 0.05) 차이는 보이지 않았다. 또한 FSH 투여 방법을 첫째날 10 ㎎/㎏, 둘째날 7.
- 본 연구에서 개의 번식 효율을 높이기 위해 적용된 호르몬투여 방법들은 효율성의 차이는 있지만 발정을 유도할 수 있다. PMSG 처리군의 경우 가장 효율적 이었으나, 개의 경우 산업 동물과 달리 지속적인 발정 유도와 산자 생산이 필요하다.
- 그러나 부작용으로 구토 증세(Mizokawa 등, 1993; Janssens, 1986)를 일으키기도 하지만 구토 방지제를 병용 투여함으로써 예방할 수 있다. 본 연구에서는 0.3 ㎎/㎏의 bromocriptine을 경구로 1일 1회 경구투여하였을 경우 질 점막상피세포 도말 검사법과 progesterone 농도 검사를 병용 진단하여 77.8%의 발정 유도 효율을 보였다. Zoldag 등(2001)은 0.
- 일곱 개의 실험군에는 각 8마리씩의 무 발 정기의 암캐를 저농도 또는 고농도 FSH 단독 투여, FSH와 GnRH 병용 투여, PMSG 단독 투여, PMSG와 GnM의 병용 투여, GnRH 단독 투여군에 공시하였으며 bromocriptine 단독 투여군에는 9마리의 암캐를 공시하였다. 실험에 공시한 암캐는 모두 성 성숙이 완료되었으며 독립된 케이지에서 물과 사료를 자유 급식하였으며 정기적인 운동을 실시하였다. 발정 유도 실험을 위해서 발정 유도 약물 투여 전 자연 발정이 유도된 대조군을 제외하고 각 실험군에 공시된 암캐는 질 점막 상피세포 도말검사와 호르몬 검사를 통하여 무 발정기인 것만을 실험에 공시하였다.
- 5). 자연 발정견인 대조군의 경우 질점 막 상피세포가 무핵각화로 관찰되면서 동시에 progesterone 농도가 10 ng/ml로 측정되어 발정기로 판정이 일치하는 경우가 60%, 1.5 ㎎/㎏와 3.0 ㎎/㎏ FSH를 투여한 FSH(L)과 FSH(H)의 경우 모두 50%, GnRH 처리군과 GnRH + FSH 처리 군의 경우 75%의 일치성을 보였다. 반면 PMSG 처리군의 경우 87.
- 따라서 본 연구에서는 여러 호르몬 투여 방법에 의해 발정이 유도된 암캐의 교배 적기를 일반적으로 이용되고 있는 질 점막 상피세포 도말 검사법과 혈중 progesterone 농도 변화로 진단하였다. 질 점막 상피세포 도말 검사법으로 진단하였을 때 FSH 투여군에 비해 GnRH + FSH 처리 군과 GnRH 처리군이 유의적으로 높았으나 PMSG 처리군, GnRH + PMSG 처리군 그리고 bromocriptine 처리군이 유의적으로 높은 발정 유도율을 보였다. 질 점막 상피세포 도말 검사법은 가장 일반적인 진단 방법(Fay 등, 2003; Post, 1985)으로 암캐의 외음부 출혈 시기와 종창 정도를 동반 확인하여 정확도를 높일 수 있지만 발정기의 질 점막 상피세포가 무핵 각화되는 변화를 관찰하고 진단하는 방법은 정확도가 비교적낮은 편이다(Bell 등, 1973).
- 발정 유도 동기화 방법은 정확한 배란기에 자연교배 및 인공수정을 적용함으로써 상업적으로 연간 여러 배의 산자를 생산해야 하는 경우 번식 효율을 높일 수 있다. 특히 실험 동물로 개를 이용하는 다양한 연구에서 신뢰성 있는 결과를 얻기 위하여 동일한 시기에 태어난 산자를 대조군과 실험군으로 공시하고자 하는데 효율적으로 적용할 수 있다. 따라서 개의 발정 유도기술의 확립은 여러 분야에 매우 유용하게 적용할 수 있는 기술이다.
- 호르몬 투여 첫째 날, 여섯째 날, 아홉째 날 그리고 실험의 마지막 날인 열한째 날 채취한 혈액으로 호르몬 농도를 측정한 결과 모든 처리 군에서 첫째 날에 3 ng/ml보다 낮게 나타나 무 발정기로 판정하였다. 호르몬 투여 6일 후 대조군을 제외한 모든 처리군에서 progesterone 농도 3 — 10 ng/ml로 발정전기에 도달했음을 판정하였다. 호르몬 투여 9일째는 PMSG와 GnRH + PMSG 투여군에서 progesterone 농도가 10 ng/ml 이상으로 다른 처리 군에 비해 조기에 상승하였다.
- Low standard 의 progesterone 농도는 3 ng/ml, High standard의 progesterone 농도는 10 ng/ml로 샘플의 발색 정도와 비교하여 3 ng/ml일 경우 1, 3~10 ng/ml일 때는 2, 그리고 10 ng/ml 이상일 때는 3으로 표시하여 분석하였다. 호르몬 투여 첫째 날, 여섯째 날, 아홉째 날 그리고 실험의 마지막 날인 열한째 날 채취한 혈액으로 호르몬 농도를 측정한 결과 모든 처리 군에서 첫째 날에 3 ng/ml보다 낮게 나타나 무 발정기로 판정하였다. 호르몬 투여 6일 후 대조군을 제외한 모든 처리군에서 progesterone 농도 3 — 10 ng/ml로 발정전기에 도달했음을 판정하였다.
- 호르몬 투여 한 실험견의 혈중 progesterone 농도가 OVU- CHECK® Premate로 측정 결과 10 ng/ml로 나타난 경우 무핵 각화 상피세포의 발현 비율을 비교한 결과 대조군과 FSH를 투여한 실험군들은 유의적(F<0.05)으로 낮은 일치성을 보였으나, PMSG가 투여된 실험군들에서는 유의적 (F<0.05)으로 높은 일치성이 나타났다(Fig. 5). 자연 발정견인 대조군의 경우 질점 막 상피세포가 무핵각화로 관찰되면서 동시에 progesterone 농도가 10 ng/ml로 측정되어 발정기로 판정이 일치하는 경우가 60%, 1.
후속연구
- 따라서 anti-prolactine계 약물을 적용하였을 때 발정 유도율이 FSH과 GnRH 투여에 비해 발정 유도 효율도 높은 경향을 보이고 PMSG 투여에 비해 부작용 발생도 적으며 경구 투여로 투여 방법도 간편하며 투여량과 횟수도 소모적이지 않아 경제적인 측면에서도 가장 효과적인 방법으로 보인다. 또한 번식효율을 높이기 위하여 교배 적기의 검사는 질 점막 상피세포 도말 검사와 더불어 호르몬 검사를 병행하여 정확도를 높일 수 있을 것이다.
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