Objectives : The aim of the present study is to evaluate the effects Rehmannia glutinosa, Radix puerariae, Semen coicis, Fructus hordei, Cortex acanthopanacis, Fructus chaenomelis, or Radix glycyrrhizae extracton 3T3-L1 preadipocytes differentiation. Methods : We adopted Oil Red O staining methods t...
Objectives : The aim of the present study is to evaluate the effects Rehmannia glutinosa, Radix puerariae, Semen coicis, Fructus hordei, Cortex acanthopanacis, Fructus chaenomelis, or Radix glycyrrhizae extracton 3T3-L1 preadipocytes differentiation. Methods : We adopted Oil Red O staining methods to observe the formed lipid droplets. And the amount of lipids in adipocytes was measured using absorptiometric analysis. Results : The extracts of Rehmannia glutinosa, Radix puerariae, Semen coicis, Fructus hordei, Cortex acanthopanacis, Fructus chaenomelis, or Radix glycyrrhizae stimulated the preadipocytes differentiation and lipid droplet formation. And the complex extract of the traditional herbal medicines stimulated there actions more than single extracts. Conclusions : The extract of Rehmannia glutinosa, Radix puerariae, Semen coicis, Fructus hordei, Cortex acanthopanacis, Fructus chaenomelis, or Radix glycyrrhizae has stimulatory effects. on adipogenesis. Moreover, the complex extract of the traditional herbal medicines has more effect than single extracts.
Objectives : The aim of the present study is to evaluate the effects Rehmannia glutinosa, Radix puerariae, Semen coicis, Fructus hordei, Cortex acanthopanacis, Fructus chaenomelis, or Radix glycyrrhizae extracton 3T3-L1 preadipocytes differentiation. Methods : We adopted Oil Red O staining methods to observe the formed lipid droplets. And the amount of lipids in adipocytes was measured using absorptiometric analysis. Results : The extracts of Rehmannia glutinosa, Radix puerariae, Semen coicis, Fructus hordei, Cortex acanthopanacis, Fructus chaenomelis, or Radix glycyrrhizae stimulated the preadipocytes differentiation and lipid droplet formation. And the complex extract of the traditional herbal medicines stimulated there actions more than single extracts. Conclusions : The extract of Rehmannia glutinosa, Radix puerariae, Semen coicis, Fructus hordei, Cortex acanthopanacis, Fructus chaenomelis, or Radix glycyrrhizae has stimulatory effects. on adipogenesis. Moreover, the complex extract of the traditional herbal medicines has more effect than single extracts.
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문제 정의
또한 문헌을 통해 피하지방과 관련된 한의학적 개념을 설정하고, 이에 영향을 주는 한약재로부터 지방 분화인자 촉진 효능을 확인함으로써 오랜 역사와 임상 경험을 바탕으로 한 전통의학의 기술과 가치에 대한 재평가 작업의 의의를가진다고 하겠다.
제안 방법
건조한 지황, 갈근, 의이인, 맥아, 오가피, 모과 및 감초 각각 1kg에 80% 에탄올 수용액 5/을 넣고, 3회 환류 추출한 다음, ⑸C 에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 각각의 한약재에 대한 생약 추출물을 얻었다.
그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 각각의 한약재에 대한 생약 추출물을 얻었다.
복합 추출물의 총 중량을 기초로 25 중량%의지황 추출물, 25 중량%의 갈근 추출물 24 중량 % 의 의이인 추출물 , 12 중량%의 맥아 추출물 , 10 중량%의 오가피 추출물, 5 중량%의 모과 추출물 및 5 중량%의 감초 추출물을 포함하도록 하여 한약재 생품 제조 방법과 동일하게 제조하였다. 한약재의 비율과 용량은 기육, 소갈 등의 효능을 가진 기존 처방 내에서의 비율。과한 의사의 의견을 참조하여 결정하였다.
1, 한국세포주은행)를 12웰 플레이트에 각각 5 xl°4세포/ml씩 분주하고, 10% 우아혈청 (calf serum, GibcoBRL 16170-078)을 포함한 DMEM 배지 (Mbeccos irodified Eagles Medium, GibcoBRL 11965-0闾를 가한 다음, 37G 5%(v/v) CO2조건하에 2일간 배양하였다. 상기 배양된 세포의 배지를 분화 유도제(10%(v/v) 송아지혈청, 1011M 덱사메타손(DEX), 0.5mM의 1-메틸-3-이소부틸잔틴 (IBMX) 및 lug/ml 인슐린)를 포함하는 DMEM 배지(분화 유도 배지)로 교체하고, 동일 조건으로 다시 2일간 배양하였다. 그 후 10%(v/v) 송아지혈청이 포함된 DMEM 배지 (Sigma Chem.
트리 글리타존(Triglitazone) 2“M을 분화 촉진 양성 대조군으로 사용하였다. 분화된 각 지방세포를 3.7% 포름알데히드(formaldehyde solutiorO으로 1시간 동안 고정시킨 후 오일 레드(Oil red) 0 염색 시약으로 30분간 염색하여 지방구 형성 정도를 확인하였다.
2) 결과물들에게서 플로필렌 글리콜(Propylene glycol) (Amresco)로 다시 오일 레드 0 염료를 추출하였다. 이후 500nm에서 이들 각각의 흡광도를 측정하여, 분화된 각 세포에 함유된 지방의 양을 측정하고, 추출물을 처리하지 않은 대조군에서 측정된 지방의 양에 대한 상대적인 비율을 산출하여, 각 세포의 분화 정도를 확인하였다.
이후 500nm에서 이들 각각의 흡광도를 측정하여, 분화된 각 세포에 함유된 지방의 양을 측정하고, 추출물을 처리하지 않은 대조군에서 측정된 지방의 양에 대한 상대적인 비율을 산출하여, 각 세포의 분화 정도를 확인하였다.
증식 (expansion) 배지에서 배양 용기 바닥에 단일 층으로 가득 찰(confluent) 때까지 배양 한지 방전 구세 포에 지황, 갈근, 의이인, 맥아, 오가피, 모과, 감초의 각 추출물 및 복합 추출물을 lOppm의 농도 농도로 분화 유도 배지에 첨가하여 2일간 배양한다. 이를 다시 각 추출물을 동일 농도로 처리한 지방세포 배지로 5일간 배양한 후 Oil Red 0 염색시약으로 염색하여 지방구 형성 정도를 확인하였다.
2일간 배양한다. 이를 다시 각 추출물을 동일 농도로 처리한 지방세포 배지로 5일간 배양한 후 Oil Red 0 염색시약으로 염색하여 지방구 형성 정도를 확인하였다.(Figure 2)
플로필렌 글리콜(Propylene glycol)(Amresco) 로 오일 레드 0 염료를 재추출 한 뒤 500nm에서 이들 각각의 흡광도를 측정하여, 분화된 각 세포에 함유된 지방의 양을 측정하고, 추출물을 처리하지 않은 대조군에서 측정된 지방의 양에 대한 상대적인 비율을 산출하여, 각 세포의 분화 정도를 확인하였다. (Figure 3)
지방구 형성 정도를 확인하였다. 또한, 한약재 복합 처방에 의한 변화를 확인하기 위해지황, 갈근, 의이인, 맥아, 오가피, 모과, 감초 추출물을 순서대로 25 : 25 : 24 : 12 : 10 : 5 : 5 로 혼합하여 추출한 혼합추출물을 준비하였으며, 단일추출물과 동일한 농도(lOppm)로 처리하여지방구 형성 정도를 확인하였다.
기재되어 있다2). 이들은 에너지 대사 및 지방 분화와 관련되어 있음을 유추할 수 있고, 따라서 지황, 갈근, 의이인, 맥아, 오가피, 모과, 감초의 추출물이 지방세포의 분화 및지방구 형성에 미치는 영향 및 이들의 복합처방이 미치는 영향을 관찰하여 고서에 나타나 있는 한약재의 효능을 검증하였다.
지황, 갈근, 의이인, 맥아, 오가피, 모과 또는 감초의 생약 추출물과 이들을 각각 25 : 25 : 24 : 12 : 10 : 5 : 5 의 비율로 혼합하여 추출한 복합 추출물을 지방전구세포에 처리하여 지방세포로의 분화 및 지방구 생성을 확인하여 지방분화촉진 능을 확인하였다.
지황, 갈근, 의이인, 맥아, 오가피, 모과 및 감초의 각 추출물 및 복합 추출물을 lOppm의 농도로 분화 유도 배지에 첨가하여 각각의 추출물이 포함된 분화 유도 배지를 수득한 후, 1)의 방법을 사용하여, 분화 유도를 수행함으로써 지방세포로 분화시키고, 5일간 배양하였다. 트리 글리타존(Triglitazone) 2“M을 분화 촉진 양성 대조군으로 사용하였다.
대상 데이터
u) 또한 사전적 해석에 의하면 肌는 肌肉과 같은 뜻으로 쓰이고 12) 또한 肌膚라 함은 1)살과 피부. 2) 피부, 피하지방, 근육 조직을 합해서 이른 말(3) 임에 근거하여 肌와 肌肉, 肌膚 등과 관련된 효능을 가진 지황, 갈근, 의이인, 맥아' 오가피, 모과, 감초 총 7종의 한약재를 선별하였다.
지방전구세포 3T3TJe 한국 세포주은행에서구입하여 사용하였으며, 실험에 사용된 한약재 추출물은 다음과 같은 방법에 의해 제조되었다. 지황, 갈근, 의이인, 맥아, 오가피, 모과 및 감초 등의 약재는 서울특별시 동대문구 제기동 경동약령시장에서 구입한 후 감별하여 선정하였다.
제조되었다. 지황, 갈근, 의이인, 맥아, 오가피, 모과 및 감초 등의 약재는 서울특별시 동대문구 제기동 경동약령시장에서 구입한 후 감별하여 선정하였다. 1) 한약재 생품(生品)
5mM의 1-메틸-3-이소부틸잔틴 (IBMX) 및 lug/ml 인슐린)를 포함하는 DMEM 배지(분화 유도 배지)로 교체하고, 동일 조건으로 다시 2일간 배양하였다. 그 후 10%(v/v) 송아지혈청이 포함된 DMEM 배지 (Sigma Chem. Co., 미국)를 첨가하고 배양하여 이를 대조군으로 하였다2A22).
트리 글리타존(Triglitazone) 2“M을 분화 촉진 양성 대조군으로 사용하였다. 분화된 각 지방세포를 3.
성능/효과
이 약재들의 대부분이 비만 및 당뇨 관련 연구를 비롯한 여러 효능 연구가 선행되어 있으며 14~20), 본 실험에서는 지황, 갈근, 의이인, 맥아, 오가피, 모과 및 감초의 생약 추출물 및 복합추출물이, 지방전구세포가 지방세포로 분화하는 과정과 지방세포 내 지방구 생성과정을 촉진하여, 조직의 치밀도를 증가시키는 효능을 가짐을 확인하였다.
대조군의 경우에는 지방세포로의 분화가 거의 일어나지 않았으며, 지방세포 내에 생성된 지방 구의 수도 적었으나, 양성 대조군인 Triglitazone 을 처리한 세포는 대부분 분화되었으며, 지방 구도 많이 생성되어 전체가 붉게 염색되었다. 한약재 생약 추출물을 처리한 세포 또한, 지방 세포로의 분화 정도나 지방구 생성 정도가 대조군에 비해 모두 우수하였으며, 특히 감초, 맥아 단일추출물의 효과가 우수하였다.
한약재 생약 추출물을 처리한 세포 또한, 지방 세포로의 분화 정도나 지방구 생성 정도가 대조군에 비해 모두 우수하였으며, 특히 감초, 맥아 단일추출물의 효과가 우수하였다. 뿐만 아니라, 복합처방한 한약재 추출물을 사용한 경우 1종의 추출물을 사용한 경우보다 지방 분화 및 지방구생성 속도가 훨씬 우수하여 복합처방에 따른 상승효과가 있으며, 추출물을 소량 사용하여도 우수한 효과를 얻을 수 있음을 확인하였다.
한약재 생약 추출물을 처리한 세포 또한, 지방 세포로의 분화 정도나 지방구 생성 정도가 대조군에 비해 모두 우수하였으며, 특히 감초, 맥아 단일추출물의 효과가 우수하였다. 뿐만 아니라, 복합처방한 한약재 추출물을 사용한 경우 1종의 추출물을 사용한 경우보다 지방 분화 및 지방구생성 속도가 훨씬 우수하여 복합처방에 따른 상승효과가 있으며, 추출물을 소량 사용하여도 우수한 효과를 얻을 수 있음을 확인하였다.
대조군을 100%로 보았을 때 양성대조군인 Tiiglitazone을 처리한 경우 119%로 지방 구가 많이 생성되었음을 확인할 수 있다. 지황 101%, 갈근 116%, 의이인 111%, 맥아 117%, 오가피 111%, 모과 108%, 감초 119%로 대부분이 대조군보다 지방구 형성 정도가 뛰어났으며, 특히 복합 추출물의 경우 124%로서 분화 촉진 양성 대조군인 트리글리타존보다 우수한 효과를 나타내었다
생성되었음을 확인할 수 있다. 지황 101%, 갈근 116%, 의이인 111%, 맥아 117%, 오가피 111%, 모과 108%, 감초 119%로 대부분이 대조군보다 지방구 형성 정도가 뛰어났으며, 특히 복합 추출물의 경우 124%로서 분화 촉진 양성 대조군인 트리글리타존보다 우수한 효과를 나타내었다
실험결과, 각 한약재 추출물은 아무것도 처리하지 않은 대조군에 비해 Oil Red 0 염색 시약으로 염색된 지방구를 많이 관찰할 수 있었으며, 염색시약을 지방구로부터 다시 분리하여 발색 정도를 측정한 결과, 혼합추출물이 단일추출물뿐만 아니라 양성대조군인 triglitazone을 처리했을 때보다 더 높은 효능을 갖는 것을 확인하였다 종합해볼 때, 본 실험에서 유효성분으로 사용하는 한약재 추출물은 지방분화관련인자들을 촉진하여 지방 분화 및 지방구 생성을 촉진시킴으로써 조직의 치밀도 및 탄력 증진시 지방조직의 생장 및 성숙을 도와주는 것으로 관찰된다.
실험결과, 각 한약재 추출물은 처리하지 않은 대조군에 비해 분화된 지방세포 내 지방구 생성을 촉진하였으며, 혼합물을 처리하였을 때 생약 추출물보다 효능이 증가함을 관찰하였다. 따라서 이들 추출물이 화장료 조성물 또는 약학 조성물에 함유됨으로써, 조직 치밀도를 증가시키고 탄력을 증진시키는 효과를 제공하는 성분으로 사용될 수 있다는 가능성을 확인하였다.
따라서 이들 추출물이 화장료 조성물 또는 약학 조성물에 함유됨으로써, 조직 치밀도를 증가시키고 탄력을 증진시키는 효과를 제공하는 성분으로 사용될 수 있다는 가능성을 확인하였다. 또한 기록상으로 남아있는 생기육 장기육 등의 한의 학적효능을 피하지방과 관련된 세포 실험 수준에서 검증 할 수 있다는 가능성을 확인하였다.
따라서 이들 추출물이 화장료 조성물 또는 약학 조성물에 함유됨으로써, 조직 치밀도를 증가시키고 탄력을 증진시키는 효과를 제공하는 성분으로 사용될 수 있다는 가능성을 확인하였다. 또한 기록상으로 남아있는 생기육 장기육 등의 한의 학적효능을 피하지방과 관련된 세포 실험 수준에서 검증 할 수 있다는 가능성을 확인하였다.
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