텔로미어(telomere)는 염색체 양 말단에 위치하는 DNA와 단백질의 복합체로서 (TTAGGG)n의 단순 반복 염기 서열로 이루어져 있다. 그러나 일부 조류 및 척추동물의 경우 염색체의 양 말단 부위외 간질적 위치에도 telomeric DNA sequence가 분포한다. 본 연구는 닭 염색체에 있어 telomeric DNA의 분포 양상을 제시하고자 한국 재래닭의 초기 배아로부터 염색체 표본을 제작하고, telomeric DNA probe를 이용한 FISH를 수행하여 염색체 상 텔로미어의 분포 양상을 분석하였다. 분석 결과, 닭의 모든 염색체 양 말단부에 텔로미어가 분포하는 것으로 나타났으며, 더불어 대형 염색체 중 1번의 1q32, 1p11, 1p23 위치와 2번 염색체의 2q24 및 3번 염색체 3q32에 interstitial telomeric signal(ITS)이 존재하는 것이 확인되었다. 이러한 한국 재래닭 염색체의 텔로미어 분포 양상은 이전 Gallus domesticus에서 발표한 분포 양상과 거의 일치한 것으로 나타났다. 한국 재래닭의 각 염색체별 텔로미어 함유율은 4.6~16.3% 정도로 분석되었으며, 거의 대부분의 염색체에서 단완 말단부의 telomeric DNA의 함량이 장완 말단부보다 높은 것으로 나타났다. 닭 염색체에서 ITS의 존재와 분포 양상은 핵형학적으로 진화 과정 중 염색체 간의 융합에 의해 신생 염색체가 형성되었을 가능성을 시사한다.
텔로미어(telomere)는 염색체 양 말단에 위치하는 DNA와 단백질의 복합체로서 (TTAGGG)n의 단순 반복 염기 서열로 이루어져 있다. 그러나 일부 조류 및 척추동물의 경우 염색체의 양 말단 부위외 간질적 위치에도 telomeric DNA sequence가 분포한다. 본 연구는 닭 염색체에 있어 telomeric DNA의 분포 양상을 제시하고자 한국 재래닭의 초기 배아로부터 염색체 표본을 제작하고, telomeric DNA probe를 이용한 FISH를 수행하여 염색체 상 텔로미어의 분포 양상을 분석하였다. 분석 결과, 닭의 모든 염색체 양 말단부에 텔로미어가 분포하는 것으로 나타났으며, 더불어 대형 염색체 중 1번의 1q32, 1p11, 1p23 위치와 2번 염색체의 2q24 및 3번 염색체 3q32에 interstitial telomeric signal(ITS)이 존재하는 것이 확인되었다. 이러한 한국 재래닭 염색체의 텔로미어 분포 양상은 이전 Gallus domesticus에서 발표한 분포 양상과 거의 일치한 것으로 나타났다. 한국 재래닭의 각 염색체별 텔로미어 함유율은 4.6~16.3% 정도로 분석되었으며, 거의 대부분의 염색체에서 단완 말단부의 telomeric DNA의 함량이 장완 말단부보다 높은 것으로 나타났다. 닭 염색체에서 ITS의 존재와 분포 양상은 핵형학적으로 진화 과정 중 염색체 간의 융합에 의해 신생 염색체가 형성되었을 가능성을 시사한다.
Telomeres are nucleoprotein structures at the ends of chromosomes consisting of DNA sequences arranged in tandemly repeated units $(TTAGGG)_n$. However, this hexamers can also occur at non-telomeric sites in some avians and vertbrate. This study was carried out to present the distribution...
Telomeres are nucleoprotein structures at the ends of chromosomes consisting of DNA sequences arranged in tandemly repeated units $(TTAGGG)_n$. However, this hexamers can also occur at non-telomeric sites in some avians and vertbrate. This study was carried out to present the distribution of telomeric DNA sequences in Korean Native Chicken chromosomes. The fluorescence in situ hybridization technique using a telomeric DNA probe was performed to the metaphase spreads of chicken early embryonic cells. Telomeric DNA signals were detected at the ends of chromosomes including macrochromosomes and microchromosomes. In chicken, surprisingly, chromosome 1 showed very distinct interstitial telomeric DNA hybridization patterns which located two interstitial sites in the p-arm at 1p11 and 1p23, and one in the q-arm at 1q32. In chromosome number 2 and 3 also displayed interstitial telomeric signals (ITS) in the long arms at 2q24 and 3q32, respectively. The pattern of telomeric DNA distribution in Korean Native Chicken chromosomes was in agreement with a previously reported in Gallus domesticus. The relative amount of telomeric DNA sequences in each macrochromosomes ranged from 4.6% to 16.3%. Distribution of telomeric DNAs at the end of p-arm was much more than that of q-arm in almost chicken chromosomes. The distribution of ITS in chicken chromsomes implicate to tandem chromosome fusions that might have occurred during the process of karyotype evolution.
Telomeres are nucleoprotein structures at the ends of chromosomes consisting of DNA sequences arranged in tandemly repeated units $(TTAGGG)_n$. However, this hexamers can also occur at non-telomeric sites in some avians and vertbrate. This study was carried out to present the distribution of telomeric DNA sequences in Korean Native Chicken chromosomes. The fluorescence in situ hybridization technique using a telomeric DNA probe was performed to the metaphase spreads of chicken early embryonic cells. Telomeric DNA signals were detected at the ends of chromosomes including macrochromosomes and microchromosomes. In chicken, surprisingly, chromosome 1 showed very distinct interstitial telomeric DNA hybridization patterns which located two interstitial sites in the p-arm at 1p11 and 1p23, and one in the q-arm at 1q32. In chromosome number 2 and 3 also displayed interstitial telomeric signals (ITS) in the long arms at 2q24 and 3q32, respectively. The pattern of telomeric DNA distribution in Korean Native Chicken chromosomes was in agreement with a previously reported in Gallus domesticus. The relative amount of telomeric DNA sequences in each macrochromosomes ranged from 4.6% to 16.3%. Distribution of telomeric DNAs at the end of p-arm was much more than that of q-arm in almost chicken chromosomes. The distribution of ITS in chicken chromsomes implicate to tandem chromosome fusions that might have occurred during the process of karyotype evolution.
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문제 정의
따라서 본 연구는 닭의 분자세포유전학적 기초 자료 제공을 목적으로 한국 재래닭 염색체의 텔로미어 분포 양상을 구명하고자 한 것으로 재래닭 초기 배아세포로부터 핵형을 분석하고, 이에 telomeric DNA probe를 이용한 양적 형광 보인법(Quantitative Fluorescence in situ Hybridization; Q-FISH)으로 염색체 상 텔로미어의 분포 위치 및 분포 정도와 각 염색체별 telomeric DNA의 상대적 함유율을 제시하였다.
그러나 일부 조류 및 척추동물의 경우 염색체의 양 말단 부위외 간질적 위치에도 telomeric DNA sequence가 분포한다. 본 연구는 닭 염색체에 있어 telomeric DNA의 분포 양상을 제시하고자 한국 재래닭의 초기 배아로부터 염색체 표본을 제작하고, telomeric DNA probe를 이용한 FISH를 수행하여 염색체 상 텔로미어의 분포 양상을 분석하였다. 분석 결과, 닭의 모든 염색체 양 말단부에 텔로미어가 분포하는 것으로 나타났으며, 더불어 대형 염색체 중 1번의 1q32, 1p11, 1p23 위치와 2번 염색체의 2q24 및 3번 염색체 3q32에 interstitial telomeric signal(ITS)이 존재하는 것이 확인되었다.
제안 방법
본 연구에서 이용한 형광 보인법(Fluorescence in situ Hybridization; FISH)은 Sohn et al.(2007)이 소 수컷 특이 프로브(bovine male specific probe)를 이용하여 수행한 FISH 방법을 다소 변형하여 적용하였다.
9% sodium citrate(Sigma)를 첨가하고 15분간 실온에 둔 후 고정액을 10방울 정도 첨가하여 원심 분리시켰다. 고정 처리는 methanol과 acetic acid가 3:1로 혼합된 고정액을 이용하고 이를 3회 이상 반복 처리한 후 냉장 보관된 slide의 가장자리에 3～4방울 떨어뜨려 표본을 제작하였다.
닭 염색체 상에서 텔로미어의 위치를 확인하기 위하여 우선 한국 재래닭의 초기 배아로부터 염색체를 유도하여 표본을 제작하고 동일 표본으로서 G-banding을 실시한 후 핵형 분석을 하였다.
닭 염색체의 텔로미어 분포 양상을 살펴보고자 제작된 염색체 표본에 telomeric DNA probe를 이용하여 FISH를 수행하였다. 분석 결과 Fig.
염색체 표본은 한국 재래닭의 수정란으로부터 초기 배아를 분리하여 이용하였다. 닭 초기 배아로부터 염색체 분리는 손 등(2000)이 제시한 방법을 다소 변형하여 수행한 것으로 수정란을 37.5℃의 배양기에서 24～48시간 배양하고, 배양 종료 1～2시간 전에 난의 둔단부를 천공하여 0.2 mg colchicine(Sigma Chem, St Louis, MO, USA)을 주입하였다. 배양이 종료되면 가위와 핀셋을 이용하여 배아를 떼어내고, 이를 D-PBS(Gibco, Invitrogen Corp, Grand Island, N.
또한, 이들은 텔로미어의 크기 및 위치를 기준으로 southern blot 방법에 의해 닭의 telomeric DNA 배열을 3개의 집단으로 나누고, Class Ⅰ은 0.5∼8/10 kb의 sequence로서 이들은 산재된 telomeric DNA로서 연령에 따른 감축 텔로미어와는 관련이 없는 DNA로서 주로 interstitial telomeric DNA sequence에 해당하는 것이고, Class Ⅱ는 10∼35/40 kb의 크기로 연령에 따른 감축 텔로미어로 구분하며, Class Ⅲ는 40 kb∼2 Mb로 개체 간 매우 큰 변이를 가지는 sequence로 microchromosome의 telomeric DNA가 이에 해당하는 것으로 구분하였다.
본 연구를 위한 닭 telomeric DNA probe의 제작은 CCCTAA가 7번 반복(42 mers)된 단일 oligomers를 primer로 하여 증폭된 PCR산물을 Dig-PCR probe synthesis kit(Roche, Mannheim, Germany)를 이용하여 제조사 지침에 따라 labeling하였다. DigPCR probe synthesis 방법은 PCR을 하면서 dig-labeling을 시행하는 것으로 증폭 후 labeling된 DNA를 대량으로 얻을 수 있는 장점이 있다.
배경 염색을 위해 propidium iodide solution(Sigma) 20 μL를 떨어뜨린 후 커버 글라스를 덮고 nail polish로 밀봉하였다. 처리가 끝난 표본은 적녹 파장대의 겸용 필터를 부착한 형광 현미경(model AX-70 with WIB filter, Olympus, Tokyo, Japan)으로 probe의 접합 양상을 관찰하고 최소 50여개의 중 기상을 디지털 카메라(Model DP-70, Olympus)로 촬영하여 컴퓨터에 저장한 다음 이미지 분석 프로그램(MetaMorph, UIC, Pennsylvania, USA)을 이용하여 telomeric DNA의 상대적 함량을 분석하였다.
대상 데이터
닭 염색체 분리 및 텔로미어 분포 양상을 분석하기 위하여 진주산업대학교 종합 농장에서 사육 중인 한국 재래닭 암, 수 100수를 대상으로 이들이 생산한 수정란을 이용하였다.
염색체 표본은 한국 재래닭의 수정란으로부터 초기 배아를 분리하여 이용하였다. 닭 초기 배아로부터 염색체 분리는 손 등(2000)이 제시한 방법을 다소 변형하여 수행한 것으로 수정란을 37.
이론/모형
본 연구에서 이용한 형광 보인법(Fluorescence in situ Hybridization; FISH)은 Sohn et al.(2007)이 소 수컷 특이 프로브(bovine male specific probe)를 이용하여 수행한 FISH 방법을 다소 변형하여 적용하였다.
성능/효과
결론적으로 한국 재래닭 염색체의 텔로미어 분포 양상은 염색체 양 말단을 포함한 특정 염색체에 ITS가 존재하고, 다른 동물 종에 비해 telomeric DNA의 함유율이 상대적으로 높으며, 소형 염색체를 포함한 대부분의 염색체 단완 말단부의 telomeric sequence의 분포가 장완 말단부보다 많이 분포되어있다. 이러한 각 염색체 상 텔로미어의 분포율에 대한 분석은 본 연구에서 Q-FISH 방법에 의해 처음 시도한 내용으로 개개 염색체에 대한 텔로미어의 상대적 함량을 제시할 수 있는 매우 유용한 분자 세포 유전학적 기법으로 생각된다.
3에 이의 물리적 지도를 작성하였다. 닭의 대형 염색체 8쌍에서 텔로미어의 분포는 염색체 양 말단부와 더불어 ITS는 1번 염색체의 1q32, 1p11, 1p23과 2번 염색체의 2q24 및 3번 염색체의 3q32 부위에 존재하는 것으로 분석되었다. 특히 ITS의 위치는 닭의 C-band positive site와 거의 일치하는 것으로 나타났다.
3%로 가장 높은 함유율을 나타내었고, 6, 8번 및 W 염색체가 1～5번 및 Z 염색체에 비해 상대적으로 telomeric DNA의 분포 함량이 높게 나타났다. 또한, 3, 4, 6번 염색체를 제외한 모든 대형 염색체는 장완(qarm) 말단보다 단완(p-arm) 말단 부위의 telomeric DNA 함유율이 상대적으로 높았고, 특히 7번 염색체에서는 단완 말단의 함량이 장완 말단 부위에 비해 거의 2배 가량 높게 나타났다. 한편, 1번 염색체의 경우, 양 말단의 텔로미어 함유율보다 interstitial 텔로미어의 함유율이 훨씬 높게 나타남을 확인하였다.
2와 같이 닭의 모든 염색체 양 말단부에 텔로미어가 분포하고, 양 말단 간에는 다소의 양적 변이를 나타내었다. 또한, 대형 염색체 중 1번, 2번 및 3번 염색체에 interstitial telomeric signal(ITS)의 존재가 확인되었다. 닭 염색체 상 텔로미어의 분포 위치를 보다 명확히 제시하기 위하여 Fig.
닭 염색체의 텔로미어 분포 양상을 살펴보고자 제작된 염색체 표본에 telomeric DNA probe를 이용하여 FISH를 수행하였다. 분석 결과 Fig. 2와 같이 닭의 모든 염색체 양 말단부에 텔로미어가 분포하고, 양 말단 간에는 다소의 양적 변이를 나타내었다. 또한, 대형 염색체 중 1번, 2번 및 3번 염색체에 interstitial telomeric signal(ITS)의 존재가 확인되었다.
본 연구는 닭 염색체에 있어 telomeric DNA의 분포 양상을 제시하고자 한국 재래닭의 초기 배아로부터 염색체 표본을 제작하고, telomeric DNA probe를 이용한 FISH를 수행하여 염색체 상 텔로미어의 분포 양상을 분석하였다. 분석 결과, 닭의 모든 염색체 양 말단부에 텔로미어가 분포하는 것으로 나타났으며, 더불어 대형 염색체 중 1번의 1q32, 1p11, 1p23 위치와 2번 염색체의 2q24 및 3번 염색체 3q32에 interstitial telomeric signal(ITS)이 존재하는 것이 확인되었다. 이러한 한국 재래닭 염색체의 텔로미어 분포 양상은 이전 Gallus domesticus에서 발표한 분포 양상과 거의 일치한 것으로 나타났다.
분석 결과, 닭의 모든 염색체 양 말단부에 텔로미어가 분포하는 것으로 나타났으며, 더불어 대형 염색체 중 1번의 1q32, 1p11, 1p23 위치와 2번 염색체의 2q24 및 3번 염색체 3q32에 interstitial telomeric signal(ITS)이 존재하는 것이 확인되었다. 이러한 한국 재래닭 염색체의 텔로미어 분포 양상은 이전 Gallus domesticus에서 발표한 분포 양상과 거의 일치한 것으로 나타났다. 한국 재래닭의 각 염색체별 텔로미어 함유율은 4.
한편, 성 염색체인 Z와 W 및 8번 염색체는 단완과 장완의 길이가 거의 비슷한 metacentric chromosomes이다. 이상과 같이 한국 재래닭 염색체의 형태적 특징은 백규흠 등(2003)이 제시한 한국 재래닭의 핵형과 일치하고, 지금까지 보고된 닭(Gallus domesticus)의 핵형 양상(Ohno, 1961; Pollock and Fechheimer, 1976; 손시환과 오봉국, 1987; Ladjali-Mohammedi et al., 1999)과 비교할 때도 한국 재래닭 만의 고유한 핵형적 특징은 없는 것으로 판단된다.
3% 정도로 분석되었다. 특히 7번 염색체가 16.3%로 가장 높은 함유율을 나타내었고, 6, 8번 및 W 염색체가 1～5번 및 Z 염색체에 비해 상대적으로 telomeric DNA의 분포 함량이 높게 나타났다. 또한, 3, 4, 6번 염색체를 제외한 모든 대형 염색체는 장완(qarm) 말단보다 단완(p-arm) 말단 부위의 telomeric DNA 함유율이 상대적으로 높았고, 특히 7번 염색체에서는 단완 말단의 함량이 장완 말단 부위에 비해 거의 2배 가량 높게 나타났다.
이러한 한국 재래닭 염색체의 텔로미어 분포 양상은 이전 Gallus domesticus에서 발표한 분포 양상과 거의 일치한 것으로 나타났다. 한국 재래닭의 각 염색체별 텔로미어 함유율은 4.6～16.3% 정도로 분석되었으며, 거의 대부분의 염색체에서 단완 말단부의 telomeric DNA의 함량이 장완 말단부보다 높은 것으로 나타났다. 닭 염색체에서 ITS의 존재와 분포 양상은 핵형학적으로 진화 과정 중 염색체 간의 융합에 의해 신생 염색체가 형성되었을 가능성을 시사한다.
또한, 3, 4, 6번 염색체를 제외한 모든 대형 염색체는 장완(qarm) 말단보다 단완(p-arm) 말단 부위의 telomeric DNA 함유율이 상대적으로 높았고, 특히 7번 염색체에서는 단완 말단의 함량이 장완 말단 부위에 비해 거의 2배 가량 높게 나타났다. 한편, 1번 염색체의 경우, 양 말단의 텔로미어 함유율보다 interstitial 텔로미어의 함유율이 훨씬 높게 나타남을 확인하였다. 닭 세포의 텔로미어 함량 및 길이에 대한 정량 분석은 Bloom et al.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
텔로미어는 무엇인가?
텔로미어(telomere)는 대부분의 진핵생물 염색체 양 말단에 위치하는 것으로 DNA와 단백질의 복합 구조 형태이고, 고등생물의 DNA는 주로 TTAGGG의 단순 반복 염기 서열로 이루어져 있다. 텔로미어의 역할은 염색체의 안정성을 유지하도록 하여 정상적인 생명주기를 가질 수 있도록 하나, 세포 분열 때마다 DNA 말단 부위의 복제 손실로 인해 그 길이가 짧아지게 되어 세포의 노화를 야기하게 된다(Blackburn, 1991; Zakian, 1995; Shay, 1999; Weng and Hodes, 2000).
닭의 모든 염색체 양 말단부에 텔로미어가 분포하는 것과 대형 염색체 중 1번의 1q32, 1p11, 1p23 위치와 2번 염색체의 2q24 및 3번 염색체 3q32에 interstitial telomeric signal(ITS)이 존재하는 것은 무엇을 시사하는가?
3% 정도로 분석되었으며, 거의 대부분의 염색체에서 단완 말단부의 telomeric DNA의 함량이 장완 말단부보다 높은 것으로 나타났다. 닭 염색체에서 ITS의 존재와 분포 양상은 핵형학적으로 진화 과정 중 염색체 간의 융합에 의해 신생 염색체가 형성되었을 가능성을 시사한다.
거의 대부분의 포유동물은 telomeric sequence가 염색체 양 말단에만 나타나는 것과 달리 대부분의 가금류에서는 어떻게 분포하는 것으로 나타나는 가?
일반적으로 텔로미어는 염색체의 양 말단에 분포된 것을 지칭하는 것으로, 일부 몇몇 동물을 제외한 거의 대부분의 포유동물은 telomeric sequence가 염색체 양 말단에만 나타난다. 그러나 조류의 경우, 특히 닭을 비롯한 타조, 거위, 오리, 꿩 등 대부분의 가금류에서는 염색체의 양 말단 부위외 특정 위치에 telomeric sequence가 존재하는 간질적 텔로미어(interstitial telomere)가 분포하는 것으로 밝혀졌다(Nanda et al., 2002).
참고문헌 (41)
Abuin M, Martinez P, Sanchez L 1996 Localization of the repetitive telomeric sequence (TTAGGG)n in four salmonid species. Genome 39(5):1035-1038.
Blackburn EH, Gall JG 1978 A tandemly repeated sequence at the termini of the extrachromosomal ribosomal RNA genes in Tetrahymena. Mol Biol 120(1):33-53.
Bloom SE, Delany ME, Muscarella DM 1993 Constant and variable features of avian chromosomes. pp 39-59 In:Manipulation of the Avian Genome. Etches RJ and Verrinder Gibbins AM, CRC Press Inc, Boca Raton, FL.
Bolzan AD, Bianchi MS 2006 Telomeres, interstitial telomeric repeat sequences, and chromosomal aberrations. Mutat Res 612:189-214.
Delany ME, Krupkin AB, Miller MM 2000 Organization of telomere sequences in bird: evidence for arrays of extreme length and for in vivo shortening. Cytogenet Cell Genet 90: 139-145.
Ladjali-Mohammedi K, Bitgood JJ, Tixier-Boichard M, Ponce de Leon FA 1999 International system for standardized avian karyotypes (ISSAK): Standardized banded karyotypes of the domestic fowl (Gallus domesticus). Cytogenet Cell Genet 86:271-276.
Law HKW, Lau YU 2001 Validation and development of quantitative flow cytometry-based fluorescence in situ hybridization for intercenter comparison of telomere length measurement. Cytometry 43:150-153.
Lee C, Sasi R, Lin CC 1993 Interstitial localization of telomeric DNA sequences in the Indian muntjac chromosomes: further evidence for tandem chromosome fusions in the karyotypic evolution of the Asian muntjacs. Cytogenet Cell Genet 63(3):156-159.
Lejnine S, Vladimir L, Langmore JP 1995 Conserved nucleoprotein structure at the ends of vertebrate and invertebrate chromosomes. Proc Natl Acad Sci USA 92:2393-2397.
Nanda I, Schmid M 1994 Localization of the telomeric $(TTAGGG)_n$ sequence in chicken (Gallus domesticus) chromosomes. Cytogenet Cell Genet 65(3):190-193.
Nanda I, Schrama D, Feichtinger W, Haaf T, Schrtl M, Schmid M 2002 Distribution of telomeric $(TTAGGG)_n$ sequences in avian chromosomes. Chromosoma 111:215-227.
Rufer N, Dragowska W, Thornbury G, Roosnek E, Lansdorp PM 1998 Telomere length dynamics in human lymphocyte subpopulations measured by flow cytometry. Nat Biotechnol 16(8):743-747.
Santani A, Raudsepp T, Chowdhary BP 2002 Interstitial telomeric sites and NORs in Hartmann's zebra (Equus zebra hartmannae) chromosomes. Chromosome Res 10(7):527- 534.
Shay JW 1999 At the end of the millennium, a view of the end. Science 288:1377-1379.
Sohn SH, Cho EJ, Son WJ, Lee CY 2007 Diagnosis of bovine freemartinism by fluorescence in situ hybridization on interphase nuclei using a bovine Y chromosome-specific DNA probe. Theriogenology 68:1003-1011.
Venkatesan RN, Price C 1998 Telomerase expression in chicken constitutive activity in somatics tissues and down-regulation in culture. Proc Natl Acad Sci USA 95:14763- 14768.
Wiley JE, Meyne J, Little ML, Stout JC 1992 Interstitial hybridization sites of the $(TTAGGG)_n$ telomeric sequence on the chromosomes of some North American hylid frogs. Cytogenet Cell Genet 61:55-57.
Wnuk M, Bugno M, Slota E 2008 Application of primed in situ DNA synthesis (PRINS) with telomere human commercial kit in molecular cytogenetics of Equus caballus and Sus scrofa scrofa. Folia Histochemica et Cytobiologica 46:85-88.
Wright WE, Tesmer VM, Huffman KE, Levene SD, Shay JW 1997 Normal human chromosomes have long G-rich telomeric overhangs at one end. Gen Dev 11:2801-2809.
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