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문제 정의
- 본 연구팀에서 최근에 마카의 생리활성을 최적으로 하는 추출 방법(Kwun 등 2009)과 마카 추출액 첨가에 따른 시럽의 항산화성 정도(Chung 등 2009) 및 마카 추출물을 첨가한 제품의 항산화능(Chung 등 2010)을 보고한 바 있지만, 생체 내에서의 기능은 국내에서 연구가 보고된 바가 없다. 따라서 본 연구에서는 여러 가지 마카의 기능 중에서 정자 수로 측정한 성기능과 스코폴아민에 의해 유도된 기억력 손상에 미치는 마카 추출물 보충의 영향을 생쥐에서 측정하고자 하였다.
제안 방법
- 테스트 당일 스코폴아민 투여 후, 탈출 플랫폼을 기준으로 학습 때와 다른 방향에서 출발시킨 후, 플랫폼을 찾을 때까지의 탈출 시간(escape latency)을 측정하여 시간이 짧을수록 기억력이 좋은 것으로 판단하였다. 120초 이내에 실패할 경우 15초 휴식 후 다시 플랫폼 위에 올려놓아 15초 동안 재탐색 기회를 주고, 10분간 휴식 시간을 취하게 한 후 탈출 시간을 재측정하였다. 이와 같은 방법으로 한 마리당 3회 반복 실험하였다.
- 실험동물은 (주)오리엔트바이오(Seoul, Korea)로부터 구입한 9주령 SPF/VAF CrljBgi: CD-1(ICR) 수컷 생쥐였다. 1주일 간 적응시킨 후, 군 당 평균 체중이 동일하도록 15마리씩 5군으로 배분하여 5마리씩 한 cage에 사육하였다. 실험동물은 고형사료(카길애그퓨리나, Korea)와 증류수를 자유롭게 섭취하도록 하였고, 사육실 조건은 온도 22～26℃, 상대습도 50±10% 및 12시간 광주기(09:00～21:00)로 유지되게 하였다.
- Following four consecutive days training, mice were tested for spatial memory of the platform by determining escape latency. Four subsets of mice received scopolamine(1.
- 실험동물은 고형사료(카길애그퓨리나, Korea)와 증류수를 자유롭게 섭취하도록 하였고, 사육실 조건은 온도 22～26℃, 상대습도 50±10% 및 12시간 광주기(09:00～21:00)로 유지되게 하였다. 각 군은 무작위로 다섯 가지 처리군 중에 하나에 배당되었다: 정상대조군(Control, 스코폴아민 및 마카 무투여), 스코폴아민(scopolamine hydrobromide, Sigma) 보충군(Scopolamine군, 마카 무투여), 마카 0.5 g/㎏ 보충 후 SCP 투여군(Maca0.5+S), 마카 1.0 g/㎏ 보충 후 SCP 투여군(Maca1.0+S) 및 마카 2.0 g/㎏ 투여 후 SCP 투여군(Maca2.0+S). 다섯 군 중에서 정상대조군을 제외한 네 군은 마카 추출액을 경구 투여하였는데, 마카 추출액의 투여량은 2일 간격으로 측정한 체중에 따라 계산하였고, 6주에 걸쳐 매일 동일 시간(오후 2～4시)에 투여하였다.
- 정상대조군은 같은 방법으로 증류수를 경구 투여하였다. 기억력 테스트 시작 30분 전에, 정상대조군을 제외한 네 군은 스코폴아민(1.0 ㎎/㎏ BW)을, 정상대조군은 생리식염수를 복강주사로 투여하였다.
- 현대 사회에서 평균 수명이 증가함에 따라 치매와 성기능 감소에 효과적인 생리활성물질에 대한 관심이 증가하고 있는데, 뇌기능과 성기능 관련 약용식물로 안데스 고산지대 주민에게 사용되어온 마카에 대해 생체 내에서의 기능이 국내에서는 보고된 바가 없다. 뇌 손상에 대한 보호 효과와 남성 성기능에 미치는 영향을 측정하기 위해 생쥐에서 열수 추출물 보충이 수미로와 수동회피검사로 측정한 뇌기능과 정자세포수로 측정한 남성 성기능에 미치는 영향을 측정하였다. 마카 분말과 증류수의 비율을 1:20(w/v)으로 하여 100℃에서 3시간 동안 추출하고 원심분리 후, 동결 건조로 만든 분말을 생쥐 체중당 0.
- 0+S). 다섯 군 중에서 정상대조군을 제외한 네 군은 마카 추출액을 경구 투여하였는데, 마카 추출액의 투여량은 2일 간격으로 측정한 체중에 따라 계산하였고, 6주에 걸쳐 매일 동일 시간(오후 2～4시)에 투여하였다. 정상대조군은 같은 방법으로 증류수를 경구 투여하였다.
- 뇌 손상에 대한 보호 효과와 남성 성기능에 미치는 영향을 측정하기 위해 생쥐에서 열수 추출물 보충이 수미로와 수동회피검사로 측정한 뇌기능과 정자세포수로 측정한 남성 성기능에 미치는 영향을 측정하였다. 마카 분말과 증류수의 비율을 1:20(w/v)으로 하여 100℃에서 3시간 동안 추출하고 원심분리 후, 동결 건조로 만든 분말을 생쥐 체중당 0.5 g/㎏, 1.0 g/㎏ 및 2.0 g/㎏으로 6 주간 투여하였다. 시험 30분 전에 투여한 스코폴아민(1.
- 입수에서 다음 입수까지는 5분간 휴식을 취하게 하였다. 모든 학습과 테스트를 위해 수미로 장치는 실험실 내에서의 위치, 조명과 실험자의 위치를 실험 전 기간을 통해 동일하게 하여 동물로 하여금 공간적 지각의 기준을 삼을 수 있도록 하였다. 테스트 당일 스코폴아민 투여 후, 탈출 플랫폼을 기준으로 학습 때와 다른 방향에서 출발시킨 후, 플랫폼을 찾을 때까지의 탈출 시간(escape latency)을 측정하여 시간이 짧을수록 기억력이 좋은 것으로 판단하였다.
- 5 ㎝까지 채워서 실험하였다. 물에 White Cloudy(아라비아검, 테르펜계 탄수화수소류, 자당지방산에스테르로 구성된 현탁액, 주식회사 보락, Korea)를 섞어서 탈출 플랫폼이 보이지 않도록 하여 실험동물의 시각이 아닌 기억력을 측정하도록 하였다. 선행 연구(Rubio 등 2007)에서는 수미로의 수온이 26±1℃로 제시되었으나, 본 연구의 실험동물들은 탈출 플랫폼의 위치를 스친 경우에도 수영을 계속하여, 수온을 14±1℃로 낮춤으로써 탈출 플랫폼이 충분한 보상이 되도록 조정하였다.
- 실험동물은 고형사료(카길애그퓨리나, Korea)와 증류수를 자유롭게 섭취하도록 하였고, 사육실 조건은 온도 22～26℃, 상대습도 50±10% 및 12시간 광주기(09:00～21:00)로 유지되게 하였다.
- 이와 같은 방법으로 한 마리당 3회 반복 실험하였다. 연습과 테스트는 연속된 4일간 하루 중 동일 시간대에 동일한 시작 위치에서 실시하였다(Kang 등 2004; Rubio 등 2007).
- 120초 이내에 실패할 경우 15초 휴식 후 다시 플랫폼 위에 올려놓아 15초 동안 재탐색 기회를 주고, 10분간 휴식 시간을 취하게 한 후 탈출 시간을 재측정하였다. 이와 같은 방법으로 한 마리당 3회 반복 실험하였다. 연습과 테스트는 연속된 4일간 하루 중 동일 시간대에 동일한 시작 위치에서 실시하였다(Kang 등 2004; Rubio 등 2007).
- Quick Stert™ Bradford Protein Assay kit(Bio-rad, USA)을 사용하였다. 인산완충액으로 100배 희석한 뇌균질액 20 ㎕씩 담겨있는 1.5 ㎖ cuvette에 1 ㎖씩 Bradford 염료 시약을 첨가하여 잘 혼합하고 5분 방치 후 1시간 내 595 ㎚에서 흡광도를 측정하였다.
- 3 mA의 전류를 10초간 흐르게 하여 충격을 주었다. 전기충격 18시간 후에 생쥐를 밝은 방에 다시 놓았을 때, 어두운 방의 전기충격 기억을 기억하여 어두운 방으로 가고 싶은 본성을 억제함으로써 밝은 방에서 체류하는 시간(step through latency)을 측정하였다(Jung 등 2006; Choi 등 2009).
- 전뇌를 제거한 생쥐의 복부를 절개한 후, 양쪽 정소의 무게를 측정하고 백막(tunica albuginea)을 제거하여 50 ㎖ 시험관에 넣어 생리식염수 10 ㎖와 함께 균질기로 2,000 rpm에서 10초간 분쇄 후, 2분간 sonicator로 정자의 꼬리를 절단하였다. 정소 균질액의 용량을 측정하고 혈구측정기(hematocytometer)에 10 ㎕를 넣어 정자 두부를 센 후 정소 g당 정자 수를 계산하였다(임경순 등 2000).
- 다섯 군 중에서 정상대조군을 제외한 네 군은 마카 추출액을 경구 투여하였는데, 마카 추출액의 투여량은 2일 간격으로 측정한 체중에 따라 계산하였고, 6주에 걸쳐 매일 동일 시간(오후 2～4시)에 투여하였다. 정상대조군은 같은 방법으로 증류수를 경구 투여하였다. 기억력 테스트 시작 30분 전에, 정상대조군을 제외한 네 군은 스코폴아민(1.
- 전뇌를 제거한 생쥐의 복부를 절개한 후, 양쪽 정소의 무게를 측정하고 백막(tunica albuginea)을 제거하여 50 ㎖ 시험관에 넣어 생리식염수 10 ㎖와 함께 균질기로 2,000 rpm에서 10초간 분쇄 후, 2분간 sonicator로 정자의 꼬리를 절단하였다. 정소 균질액의 용량을 측정하고 혈구측정기(hematocytometer)에 10 ㎕를 넣어 정자 두부를 센 후 정소 g당 정자 수를 계산하였다(임경순 등 2000).
- 선행 연구(Rubio 등 2007)에서는 수미로의 수온이 26±1℃로 제시되었으나, 본 연구의 실험동물들은 탈출 플랫폼의 위치를 스친 경우에도 수영을 계속하여, 수온을 14±1℃로 낮춤으로써 탈출 플랫폼이 충분한 보상이 되도록 조정하였다. 학습으로는 연속된 2일간 3회 입수시켜 탈출 플랫폼을 찾아보게 하였고, 일단 탈출 플랫폼에 도달하면 그 위에서 15초간 휴식을 취하는 보상을 주었다. 입수에서 다음 입수까지는 5분간 휴식을 취하게 하였다.
- 수미로 시험이 종료되고 일주일이 경과되었을 때, 수동회피시험(step-down avoidance test)은 생쥐의 야행성을 이용한 기억력 측정 방법으로서 가로, 세로가 각각 17 ㎝인 흰색방과 검은색 방, 두 방이 연결되어 있고, 흰색 방은 전구를 달아 조명이 되도록 아크릴 재질의 장치를 이용하였다(대종기기, 한국). 학습은 실험동물을 밝은 방에서 20초간 적응시킨 후, 어두운 방의 문을 열어 유인하고, 동물의 네 다리가 어두운 방에 들어가자마자 두 방의 경계가 되는 문을 닫아 밝은 방으로 돌아가는 것을 차단하였다. 차단과 동시에 어두운 방에서 0.
- 2). 한편, 수동회피시험으로 측정한 생쥐의 학습 능력이 스코폴아민으로 손상되는 것을 마카 보충에 의해 보호된 것을 보고한 선행 연구에서는 본 연구에서와 동일한 마카의 추출 방법(열수 추출)과 용량(0.5～2.0 g/㎏) 및 스코폴아민 투여 시간(30분 전)과 투여 용량(1.0 ㎎/㎏)을 사용하였다. 따라서 본 실험이 Rubio 등(2007)의 연구 결과와 다른 원인은 사용한 마카의 종류의 차이에 있을 가능성이 있겠다.
- 5)로 다시 100배 희석하였다. 희석된 균질액을 10 ㎕씩 96 well plate에 넣고 assay reagent를 190 ㎕씩 가하여 잘 혼합 후, 혼합 시작 2분과 10분 후 의료용 면역흡광측정기(Sunrise, Tecan Austria GMBH)로 405 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 측정된 흡광도로부터 다음 식을 이용하여 효소활성을 구하였다.
대상 데이터
- Maca (Lepidium meyenii)는 페루에서 재배되어 분말 상태로 가공된 것을 수입하였다(A.T.S. Corp., Korea). 선행 연구 결과 (Kwun 등 2009)에서 시간과 에너지의 효율적 측면을 고려한 최적 추출 방법으로 결정된 바대로 100℃에서 3시간 동안 마카 분말과 증류수의 비율을 1:20(w/v)으로 하여 추출하였다.
- 수미로는 지름 70 ㎝와 높이 45 ㎝의 원통형으로 스텐레스 스틸로 주문 제작(대종기기산업, 대한민국)되었다. 수미로는 사분원으로 나누어지고, 그 중 한 사분원의 중앙에 탈출 플랫폼(지름 10.3 ㎝, 높이 19 ㎝)을 장착하였으며, 물은 플랫폼 위로 1.5 ㎝까지 채워서 실험하였다. 물에 White Cloudy(아라비아검, 테르펜계 탄수화수소류, 자당지방산에스테르로 구성된 현탁액, 주식회사 보락, Korea)를 섞어서 탈출 플랫폼이 보이지 않도록 하여 실험동물의 시각이 아닌 기억력을 측정하도록 하였다.
- 실험동물은 (주)오리엔트바이오(Seoul, Korea)로부터 구입한 9주령 SPF/VAF CrljBgi: CD-1(ICR) 수컷 생쥐였다. 1주일 간 적응시킨 후, 군 당 평균 체중이 동일하도록 15마리씩 5군으로 배분하여 5마리씩 한 cage에 사육하였다.
데이터처리
- 0)를 이용하여 평균과 표준편차로 표시하였다. 분산분석(ANOVA)을 실시하여 실험군 간의 초기 및 최종 체중, 뇌 무게 및 정소 무게, 총 정자 수, 정소당 정자 수, AChE 활성, 수미로 탈출 시간(escape latency) 및 검은방 체류 시간(step though latency)에서의 차이에 대한 유의적 차이를 검증하였다. 유의적 차이가 있는 항목은 Duncan의 다중범위검정(Duncan's multiple range test)을 실시하였고, 각 실험군의 비교는 p<0.
- 실험 결과는 SPSS(Statistical Package for Social Sciences version 18.0)를 이용하여 평균과 표준편차로 표시하였다. 분산분석(ANOVA)을 실시하여 실험군 간의 초기 및 최종 체중, 뇌 무게 및 정소 무게, 총 정자 수, 정소당 정자 수, AChE 활성, 수미로 탈출 시간(escape latency) 및 검은방 체류 시간(step though latency)에서의 차이에 대한 유의적 차이를 검증하였다.
- 유의적 차이가 있는 항목은 Duncan의 다중범위검정(Duncan's multiple range test)을 실시하였고, 각 실험군의 비교는 p<0.05 수준에서 유의차를 검정하였다.
이론/모형
- Ellman 등의 방법(1961)을 토대로 Quantichrom™ Acetylcholinesterase Assay Kit(Bio Assay systems)를 사용하였다.
성능/효과
- 마카 추출물 보충에 따라 정소 무게나 정자 수에 유의적 차이가 없었으므로 본 연구에서와 같이 12주령의 실험동물보다는 성기능이 퇴화된 주령의 실험동물을 이용하는 것이 추후 연구에서 필요할 것으로 제안한다. 0.5 g/㎏, 1.0 g/㎏ 및 2.0 g/㎏으로 마카 추출물 보충 효과가 용량에 따라 증가하지 않았으므로 수미로 관련 뇌기능 효과는 0.5 g/㎏이 충분할 것으로 보인다. 따라서 본 연구는 6주간의 0.
- 0.5～2.0 g의 마카의 보충은 생쥐의 정소 무게와 정소 내정자 수 및 정소 g당 정자 수에 영향을 미치지 않았다(Table 2). 선행 연구에서 마카의 보충으로 생쥐와 흰쥐에서 정자 수의 증가와 정소 무게 증가를 보인 것과 일치하지 않는데, 이것은 해발 4,340 m의 고산지대 조건이나(Gonzales 등 2004) 말리치온(Bursto 등 2005)과 초산납(Rubio 등 2006b)과 같은 살충제의 처리로써 정자 생성을 억제시킨 후에 마카를 보충하였던 점에서 차이가 나는 것으로 보인다.
- 그러나 마카의 투여량이 0.5 g/㎏, 1.0 g/㎏ 및 2.0 g/㎏으로 증가함에 따라 밝은 방에서의 체류 시간이 53.7±47.2초, 52.1±38.9초 및 41.0±38.0초로 나타나 유의적으로 높지 않았으므로 이 용량의 마카 추출액 투여로는 스코폴아민이 수동회피를 위한 뇌기능 손상을 회복시킬 수 없음을 제시한다(Fig. 2).
- 44 U/㎎ protein으로 대조군과의 유의적인 차이가 없었다. 따라서 스코폴아민 투여는 본 실험에서와 같이 3일간 시간이 경과한 경우, 아세틸콜린에스터라제 활성을 저해 효과가 사라지는 것으로 확인된다.
- 또한 체중 당 0.5 g, 1.0 g, 2.0 g의 마카를 투여 받은 군에서 뇌균질액의 아세틸콜린에스터라제 활성은 각각 8.40±2.57 U/㎎ protein, 7.94±2.05 U/㎎ protein, 9.05±3.44 U/㎎ protein으로 대조군과의 유의적인 차이가 없었다.
- 마카를 0.5 g/㎏(0.5MSCP군), 1.0 g/㎏(1MSCP 군) 및 2.0 g/㎏(2MSCP군)을 투여 받은 군은 각각 11.5±6.8초, 13.4±5.5초 및 17.8±10.4초로 스코폴아민군에 비해 탈출에 걸리는 시간이 짧아 마카의 투여가 스코폴아민에 의한 기억력 손상을 예방한 것을 보여주었다.
- 스코폴아민군(SCP)은 탈출 시간이 25.7±12.4초로 11.0±4.8초인 정상대조군(Nomal)에 비해 탈출 플랫폼을 찾는 데 걸리는 시간이 길어져 스코폴아민으로 인한 기억력 손상이 확인되었다(Fig. 1).
- 스코폴아민군에서는 밝은 방에서의 체류 시간이 37.2±38.8초로서 정상대조군의 81.7±43.0초보다 유의적으로 짧았으므로, 1 ㎎/㎏ BW의 스코폴아민 투여에 의해 수동회피에 필요한 기억력에 관여하는 뇌기능이 손상되었음을 확인할 수 있었다.
- 0 g/㎏으로 6 주간 투여하였다. 시험 30분 전에 투여한 스코폴아민(1.0 ㎎/㎏)로 손상된 수미로 관련 뇌기능이 마카 보충에 의해 약 55% 보호할 수 있었으나, 수동회피검사 관련 뇌기능에 대해서는 마카 보충의 효과가 유의하지 않았다. 또한 아세틸콜린에스터라제 활성을 증가시키는 스코폴아민의 효과가 충분하지 않아 마카 추출물 보충의 아세틸콜린에스터라제 저해 효과가 측정되지 않았으므로 추후 연구에서 스코폴아민 투여 시간을 조절할 필요를 제시한다.
- 모든 학습과 테스트를 위해 수미로 장치는 실험실 내에서의 위치, 조명과 실험자의 위치를 실험 전 기간을 통해 동일하게 하여 동물로 하여금 공간적 지각의 기준을 삼을 수 있도록 하였다. 테스트 당일 스코폴아민 투여 후, 탈출 플랫폼을 기준으로 학습 때와 다른 방향에서 출발시킨 후, 플랫폼을 찾을 때까지의 탈출 시간(escape latency)을 측정하여 시간이 짧을수록 기억력이 좋은 것으로 판단하였다. 120초 이내에 실패할 경우 15초 휴식 후 다시 플랫폼 위에 올려놓아 15초 동안 재탐색 기회를 주고, 10분간 휴식 시간을 취하게 한 후 탈출 시간을 재측정하였다.
후속연구
- 그러나 분말의 색은 연노란색이었으므로 yellow maca일 가능성이 높아 선행 연구에서 보고된 정자 생성 증가가 측정 되지 않은 원인으로 제시될 수 있을 것이다. 결론적으로 추후 연구에서 노화 생쥐의 성기능 증진 효과를 측정하기 위해서는 black maca 종을 이용할 필요성을 확인한다.
- 본 실험에서 사용한 마카는 분말 상태로 수입되었기 때문에 원래 어떤 종류이었는지 확실하지않고 확인이 불가능하여 연구의 제한점으로 제시될 수 있다. 그러나 분말의 색은 연노란색이었으므로 yellow maca일 가능성이 높아 선행 연구에서 보고된 정자 생성 증가가 측정 되지 않은 원인으로 제시될 수 있을 것이다. 결론적으로 추후 연구에서 노화 생쥐의 성기능 증진 효과를 측정하기 위해서는 black maca 종을 이용할 필요성을 확인한다.
- 5 g/㎏이 충분할 것으로 보인다. 따라서 본 연구는 6주간의 0.5 g/㎏의 마카 추출물 보충은 생쥐에서 뇌 손상에 대한 보호 효과가 있음을 시사하고, 추후 연구에서 마카 보충 기간을 연장하거나 노화 생쥐를 이용한 뇌 손상 보호 효과에 관한 연구를 제안한다.
- 본 연구에서는 16주령의 실험동물을 이용하였으므로 성기능이 왕성한 시점이므로 마카의 보충 효과가 나타나지 않을 수 있겠다. 따라서 정자 수 증가에 미치는 마카의 기능을 연구하기 위해서는 성기능 퇴화된 주령의 실험동물을 이용하는 것이 추후 연구에서 필요할 것으로 제안한다. 마카의 종은 뿌리의 외관의 색에 의해 white에서 black에 이르기까지 총 13종류로 분류되는데 (Rubio 등 2007), black, red 및 yellow maca가 주종이고, 그중에서도 yellow maca가 상업적으로 가장 선호된다.
- 4초로 스코폴아민군에 비해 탈출에 걸리는 시간이 짧아 마카의 투여가 스코폴아민에 의한 기억력 손상을 예방한 것을 보여주었다. 또한 마카의 투여량이 0.5㎎, 1.0 ㎎ 및 2.0 ㎎으로 증가함에 따라 용량의존적 반응은 보이지 않았으므로(Fig. 1) 비용과 노력면에서 0.5 g/㎏ 이상으로 투여할 필요가 없음은 물론 더 적은 용량으로 동일 효과를 낼 수 있는지를 추후 연구에서 확인할 것으로 보인다. 한편, 흰쥐에서 5 g/㎏까지 독성을 나타내지 않고 안전하다고 알려진 선행 연구(Chung 등 2005)에 따라, 본 실험에서 사용한 마카 투여 용량은 0.
- 0 ㎎/㎏)로 손상된 수미로 관련 뇌기능이 마카 보충에 의해 약 55% 보호할 수 있었으나, 수동회피검사 관련 뇌기능에 대해서는 마카 보충의 효과가 유의하지 않았다. 또한 아세틸콜린에스터라제 활성을 증가시키는 스코폴아민의 효과가 충분하지 않아 마카 추출물 보충의 아세틸콜린에스터라제 저해 효과가 측정되지 않았으므로 추후 연구에서 스코폴아민 투여 시간을 조절할 필요를 제시한다. 마카 추출물 보충에 따라 정소 무게나 정자 수에 유의적 차이가 없었으므로 본 연구에서와 같이 12주령의 실험동물보다는 성기능이 퇴화된 주령의 실험동물을 이용하는 것이 추후 연구에서 필요할 것으로 제안한다.
- 또한 아세틸콜린에스터라제 활성을 증가시키는 스코폴아민의 효과가 충분하지 않아 마카 추출물 보충의 아세틸콜린에스터라제 저해 효과가 측정되지 않았으므로 추후 연구에서 스코폴아민 투여 시간을 조절할 필요를 제시한다. 마카 추출물 보충에 따라 정소 무게나 정자 수에 유의적 차이가 없었으므로 본 연구에서와 같이 12주령의 실험동물보다는 성기능이 퇴화된 주령의 실험동물을 이용하는 것이 추후 연구에서 필요할 것으로 제안한다. 0.
- 마카의 영양성분과 기능성분에 대한 연구 중에서 종에 따른 비교는 발표된 바가 많지 않으나, glucosinolate와 anthocyanine 함량에 따른 차이가 기능상 차이를 초래하는 원인으로 제기된 바가 있다(Gonzales 등 2004). 본 실험에서 사용한 마카는 분말 상태로 수입되었기 때문에 원래 어떤 종류이었는지 확실하지않고 확인이 불가능하여 연구의 제한점으로 제시될 수 있다. 그러나 분말의 색은 연노란색이었으므로 yellow maca일 가능성이 높아 선행 연구에서 보고된 정자 생성 증가가 측정 되지 않은 원인으로 제시될 수 있을 것이다.
- AChE 저해에 대한 스코폴아민의 이용은 Bursto 등이 제안하고, 다른 선행 연구에서 확인된 바이나(Bursto 등 1982; Kang 등 2005; Yamada 등 2004), 실험동물에 스코폴아민 투여 시점에 대한 언급은 없었다. 본 연구결과에 따라, 추후 연구에서는 아세틸콜린에스터라제 효소 활성 저해를 보기 위해서는 보다 스코폴아민 투여가 동물의 희생 직전이 되어야 할 것으로 보인다. 따라서 스코폴아민의 투여가 본 실험의 생쥐 뇌에서 아세틸콜린에스터라제 활성 저해를 유발하지 못했기 때문에 마카 보충에 의한 효소 활성 회복의 효과 또한 나타나지 않은 것으로 보인다.
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