Objectives : The aim of this study was to investigate the anti-obesity potential and mechanisms of action of Rhizoma Atractylodis(RA) herbal acupuncture in high fat diet- induced obese ICR mice. Methods : Sample solutions for herbal acupuncture were prepared from the Rhizoma Atractylodis water extra...
Objectives : The aim of this study was to investigate the anti-obesity potential and mechanisms of action of Rhizoma Atractylodis(RA) herbal acupuncture in high fat diet- induced obese ICR mice. Methods : Sample solutions for herbal acupuncture were prepared from the Rhizoma Atractylodis water extract powder at concentration of 150mg/kg and 300mg/kg with distilled water. Five week-old ICR mice acclimatized to the laboratory environment for 1 week were allocated into four groups: regular diet group (RD), high fat diet group(HFD), groups fed HFD with 150mg/kg RA herbal acupuncture treatment (RAE 150) and with 300mg/kg RA herbal acupuncture treatment(RAE 300). Herbal acupuncture groups were injected with either 150mg/kg or 300mg/kg of Rhizoma Atractylodis(RA) subcutaneously onto both Sinsu($BL_{23}$) alternately on the same time everyday for 30days. Body weight, gross appearance of epididymal fat area, blood glucose, insulin, insulin resistance(HOMA-IR), non-esterified fatty acid, cholesterol, triglyceride, AST, ALT, histological analysis of white adipose tissue, gene expression responsible for adipocyte differentiation and AMPK activation were analyzed. Results : RA herbal acupuncture inhibited the development of weight gain, hyperglycemia, hyperinsulinemia, hyperlipidemia, increases of AST and ALT, and the enlargement of fat cell size induced by HFD. Also, RA herbal acupuncture inhibited the expression of PPAR-${\gamma}$, C/$EBP{\alpha}$, aP2, LPL, FAS, SCD-1 and enhanced the activation of AMP-activated protein kinase. Conclusions : The results of this study demonstrate that RA herbal acupuncture can exert the anti-obesity effect and it is partially mediated by activation of AMPK and inhibition of the gene expressions responsible for adipocyte differentiation. Further studies will be required to ascertain the nti-obesity effect and mechanisms of action of RA herbal acupuncture in animal models and human for aclinical application.
Objectives : The aim of this study was to investigate the anti-obesity potential and mechanisms of action of Rhizoma Atractylodis(RA) herbal acupuncture in high fat diet- induced obese ICR mice. Methods : Sample solutions for herbal acupuncture were prepared from the Rhizoma Atractylodis water extract powder at concentration of 150mg/kg and 300mg/kg with distilled water. Five week-old ICR mice acclimatized to the laboratory environment for 1 week were allocated into four groups: regular diet group (RD), high fat diet group(HFD), groups fed HFD with 150mg/kg RA herbal acupuncture treatment (RAE 150) and with 300mg/kg RA herbal acupuncture treatment(RAE 300). Herbal acupuncture groups were injected with either 150mg/kg or 300mg/kg of Rhizoma Atractylodis(RA) subcutaneously onto both Sinsu($BL_{23}$) alternately on the same time everyday for 30days. Body weight, gross appearance of epididymal fat area, blood glucose, insulin, insulin resistance(HOMA-IR), non-esterified fatty acid, cholesterol, triglyceride, AST, ALT, histological analysis of white adipose tissue, gene expression responsible for adipocyte differentiation and AMPK activation were analyzed. Results : RA herbal acupuncture inhibited the development of weight gain, hyperglycemia, hyperinsulinemia, hyperlipidemia, increases of AST and ALT, and the enlargement of fat cell size induced by HFD. Also, RA herbal acupuncture inhibited the expression of PPAR-${\gamma}$, C/$EBP{\alpha}$, aP2, LPL, FAS, SCD-1 and enhanced the activation of AMP-activated protein kinase. Conclusions : The results of this study demonstrate that RA herbal acupuncture can exert the anti-obesity effect and it is partially mediated by activation of AMPK and inhibition of the gene expressions responsible for adipocyte differentiation. Further studies will be required to ascertain the nti-obesity effect and mechanisms of action of RA herbal acupuncture in animal models and human for aclinical application.
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문제 정의
ACC는 미토콘드리아에서 지방산 산화를 억제하는 중요한 역할을 하는 malonyl-CoA 합성을 조절하는 율속단계 효소로, AMPK 활성화는 ACC를 억제하고 그 결과줄어든 malonyl-CoA에 의해 지방산 산화가 촉진된다50,51). 따라서 본 연구에서는 창출약침이 AMPK 인산화를 촉진하여 지방분화과정과 지방산 산화에 미치는 영향을 알아보기 위하여 Western blot으로 AMPK, ACC 단백질의 인산화 정도를 그룹간 비교해 보았다. pAMPK, pACC 단백질은 창출약침 비치료군인 정상식이 대조군과 고지방식이 대조군에서는 거의 발현하지 않았지만 창출약침 치료를 시행한 결과 농도의존적으로 이 단백질들의 발현이 증가함이 관찰되었다.
이에 본 연구에서는 고지방식이로 유도된 비만 생쥐에서 蒼朮藥鍼을 腎兪(BL23)에 시행한 후, 체중변화, 혈청학적 지표, 지방조직의 형태학적 소견, 지방분화 관련 유전자 및 AMPK 활성을 관찰하여 유의한 결과를 얻었기에 이에 보고한다.
제안 방법
30일 동안 시료를 투여한 후 12시간 절식 후 공복상태의 실험동물의 혈액에서 유리지방산(NEFA), 총 콜레스테롤(TC), 중성지방(TG), 간 기능을 나타내는 효소(AST, ALT)를 측정하였다. 혈중 NEFA의 경우 HFD군은 RD군에 비해 204% 증가하였고 RAE 150군및 RAE 300군에서는 HFD군보다 각각 60.
Primer는 20mM Tris-HCl(pH 8.4), 50mM KCl, 1.5mM MgCl2, 0.5mM dNTP, 5㎕ cDNA 그리고 2.5unit의 Taq DNA polymerase가 포함되어 있는 25㎕의 반응 용액에 각각의 최종 농도가 0.5μM이 되도록 첨가하였다.
실험 동물은 RD 군(regular diet군), HFD군(high fat diet군), RAE 150군(HFD + 150mg/kg 약침군), RAE 300군(HFD + 300mg/kg 약침군)으로 나누었으며 30일 동안 매일 腎兪(BL23) 상응혈위에 하루 한 번씩 일정시간에 좌우 교대로 창출약침을 피하에 시침하였다. 각 실험군은 8마리씩 나누었고 체중과 혈당은 주 2회 측정하였다. 본 실험에 사용한 정상식이와 고지방식이(Labdiet, USA)의 조성은 Table 1과 같다.
단백질 정량은 Bio-Rad assay reagent(Bio-Rad, USA)를 이용하여 측정하였고 분석한 단백질 30μg을 SDS-PAGE로 분리한 후 gel membrane에 transfer하고 5% skim milk로 상온에서 1시간 blocking한 후 1 :1,000 비율로 희석시킨 primary antibody와 4℃에서 overnight 반응하였다.
부고환 지방조직에서 total RNA는 guanidine thiocyanate-water saturated phenol/chloroform 분리 방법을 이용하여 분리하였다. 물 층에 있는 total RNA 는 isopropyl alcohol을 이용하여 침전시키고 분리한 RNA는 260nm와 280nm 파장에서 흡광도를 측정하여정량하였으며 총 RNA 1㎍을 Moloney murine leukemia virus transcriptase와 Oligo(dT)15 primer를 이용하여 역전사하였다. Primer 종류 및 서열은 Table 2에 표시한 바와 같다.
실험동물은 plastic mouse cage에 보관하여 동물실험실에서 23±2℃, 상대 습도 50±10%, light/dark cycle(12/12hr)의 조건하에서 사육하였으며, 물과 사료는 자유로이 섭취하도록 하여 실험시작 전 일주일 동안 환경에 적응시켰고, 경희대학교 Institutional Animal Ethics Committee의 규정을 따랐다. 실험 동물은 RD 군(regular diet군), HFD군(high fat diet군), RAE 150군(HFD + 150mg/kg 약침군), RAE 300군(HFD + 300mg/kg 약침군)으로 나누었으며 30일 동안 매일 腎兪(BL23) 상응혈위에 하루 한 번씩 일정시간에 좌우 교대로 창출약침을 피하에 시침하였다. 각 실험군은 8마리씩 나누었고 체중과 혈당은 주 2회 측정하였다.
실험동물에서 적출한 부고환 조직(epididymal adipose tissue)을 10% neutral buffered formalin을 사용하여 고정하고 탈수 및 포매 과정을 거쳐 파라핀 블럭을 제작하여 두께 5㎛의 관상 절편으로 제작하였다. 이후 xylene을 사용하여 파라핀을 제거시키고, 100, 95, 90, 80, 70% 알코올로 친수화시킨 다음, hematoxylin & eosin으로 염색하고 다시 탈수과정을 거쳐 Canada balsam으로 봉입하고 광학현미경(Olympus, Japan)으로 관찰하였다.
위와 같은 보고를 바탕으로 창출약침이 비만 및 그 합병증에 미치는 효과를 알아보기 위하여, ICR mouse 에 고지방식이를 투여하며 비만을 유발하면서 양측 腎兪(BL23)의 상응 부위를 취혈하여 좌우 교대로 매일 농도별로 창출약침을 시술하면서 체중의 변화, 전반적 체구의 변화, 혈중 glucose, insulin, TG, TC, NEFA, AST, ALT level 및 insulin resistance를 측정하고 epididymis의 조직학적 분석, PPAR-γ, C/EBPα 및 AMPK, ACC의 발현을 관찰하였다.
다음 Tris-buffered saline tween20(TBST)로 3번 washing한 후 1 : 2,000 비율로 희석시킨 secondary antibody와 상온에서 1시간 반응시켰다. 이후 TBST로 3번 washing하고 ECL solution (Amersham, Sweden)을 이용하여 X-ray 필름에 developing하였다.
이후 xylene을 사용하여 파라핀을 제거시키고, 100, 95, 90, 80, 70% 알코올로 친수화시킨 다음, hematoxylin & eosin으로 염색하고 다시 탈수과정을 거쳐 Canada balsam으로 봉입하고 광학현미경(Olympus, Japan)으로 관찰하였다.
창출약침이 비만에 미치는 효과를 알아보기 위하여 ICR mouse에 고지방식이로 비만과 고혈당, 고지혈을 유도하면서 腎兪(BL23) 상응 혈위에 일정한 방법으로 창출(150mg/kg, 300mg/kg)약침을 시행하여 체중, insulin resistance, 혈중 glucose, insulin, NEFA, cholesterol, triglyceride, AST, ALT 농도를 평가하고 epididymis의 조직학적 관찰과 지방분화 유전자를 관찰하여 유의한 결과를 얻었다.
혈액지표분석을 위한 혈액채취는 12시간 절식 후 실시하였다. 채혈한 혈액은 5,000rpm에서 5분간 원심분리한 후 혈청을 분석에 사용하였다. 혈중 포도당, 중성지방, 총 콜레스테롤, 유리지방산(non-esterified fatty acid, NEFA), sAST, sALT 측정을 위해서 시판 kit(Stanbio, Boerne, Texas, USA)를 구입하여 생화학 분석기기(SMARTLAB, USA)를 사용하여 측정하였고 혈중 인슐린 농도는 마우스 insulin ELISA kit(Shibayagi, Japan)를 구입하여 ELISA reader(Labsystems, Finland)로 측정하였다.
채혈한 혈액은 5,000rpm에서 5분간 원심분리한 후 혈청을 분석에 사용하였다. 혈중 포도당, 중성지방, 총 콜레스테롤, 유리지방산(non-esterified fatty acid, NEFA), sAST, sALT 측정을 위해서 시판 kit(Stanbio, Boerne, Texas, USA)를 구입하여 생화학 분석기기(SMARTLAB, USA)를 사용하여 측정하였고 혈중 인슐린 농도는 마우스 insulin ELISA kit(Shibayagi, Japan)를 구입하여 ELISA reader(Labsystems, Finland)로 측정하였다. 인슐린 저항성지수(HOMA-IR)는 glucose(mM) × insulin(μU/ml) / 22.
대상 데이터
본 연구에서 사용한 창출(Rhizoma Atractylodis)은 경희한약(서울, 한국)에서 구입하였고 창출 100g에 물 1L을 첨가하여 열수 추출하고 추출 여과액을 감압농축(60℃)한 다음 동결 건조하여 얻은 분말가루를 각각 150mg/kg, 300mg/kg의 농도로 distilled water에 약침액으로 준비하여 사용하였다. 약침주입기는 1.
실험에 사용한 마우스는 5주령의 웅성 ICR 마우스를 (주) 오리엔트(Sungnam, Korea)에서 구입하였다. 실험동물은 plastic mouse cage에 보관하여 동물실험실에서 23±2℃, 상대 습도 50±10%, light/dark cycle(12/12hr)의 조건하에서 사육하였으며, 물과 사료는 자유로이 섭취하도록 하여 실험시작 전 일주일 동안 환경에 적응시켰고, 경희대학교 Institutional Animal Ethics Committee의 규정을 따랐다.
데이터처리
각 군의 결과값에 대해 one-way ANOVA 분석 후 Duncan’s multiple range test를 이용하여 p<0.05 이하인 경우 유의한 차이가 있는 것으로 판정하였다.
모든 실험 결과는 Sigma Plot(Ver. 8.0, SPSS Inc, USA)을 이용하여 분석하였으며, 분석결과는 mean±SE로 나타내었다.
이론/모형
부고환 지방조직에서 total RNA는 guanidine thiocyanate-water saturated phenol/chloroform 분리 방법을 이용하여 분리하였다. 물 층에 있는 total RNA 는 isopropyl alcohol을 이용하여 침전시키고 분리한 RNA는 260nm와 280nm 파장에서 흡광도를 측정하여정량하였으며 총 RNA 1㎍을 Moloney murine leukemia virus transcriptase와 Oligo(dT)15 primer를 이용하여 역전사하였다.
실험동물은 plastic mouse cage에 보관하여 동물실험실에서 23±2℃, 상대 습도 50±10%, light/dark cycle(12/12hr)의 조건하에서 사육하였으며, 물과 사료는 자유로이 섭취하도록 하여 실험시작 전 일주일 동안 환경에 적응시켰고, 경희대학교 Institutional Animal Ethics Committee의 규정을 따랐다.
성능/효과
1. 창출약침은 고지방식이 투여로 인한 체중의 증가를 억제하였다.
2. 창출약침은 고지방식이 투여로 인한 혈중 glucose, insulin level 및 insulin resistance의 상승을 억제하였다.
30일 동안 시료를 투여하고 12시간 fasting 후의 혈당변화에서 HFD군은 RD군에 비하여 255% 증가하였으나 RAE 150군 및 RAE 300군은 HFD군에 비해 각각 13.6% 및 38.4%씩 유의하게 감소하였다. 인슐린도 HFD군은 RD군에 비하여 209% 증가한 반면 RAE 150군 및 RAE 300군에서는 HFD군에 비하여 각각 11.
4. 창출약침은 고지방식이 투여로 인한 지방조직의 증식을 억제하였으며, 지방조직 크기의 분포를 정상화하였다.
AMP-activated protein kinase(AMPK)와 acetylCoA carbioxylase(ACC)에 대한 western blot analysis 결과, RD군 및 HFD군에서 pAMPK, pACC 단백질은 거의 발현되지 않았지만 RAE 150군 및 RAE 300군에서는 약침 농도의존적으로 단백질들의 발현이 증가되었다(Fig. 4).
H & E 염색을 통하여 white adipose tissue에 속하는 부고환지방의 형태를 관찰한 결과 HFD군은 RD군에 비하여 지방세포의 크기가 커진 반면 RAE 150군 및 RAE 300군에서는 HFD군보다 약침 농도의존적으로 작아졌다(Fig. 2-A).
Lipid profile의 경우 정상식이 대조군에 비하여 혈중 NEFA, total cholesterol, triglyceride 농도가 고지 방식이 투여를 통하여 유의하게 증가되는데, 창출약침 시행을 통하여 혈중 NEFA, triglyceride의 증가는 통계적으로 유의하게 억제되지만, total cholesterol은 창출약침 300mg/kg 치료군에서는 감소하는 경향을 나타내지만 통계적으로 유의하지는 않았다.
따라서 본 연구에서는 창출약침이 AMPK 인산화를 촉진하여 지방분화과정과 지방산 산화에 미치는 영향을 알아보기 위하여 Western blot으로 AMPK, ACC 단백질의 인산화 정도를 그룹간 비교해 보았다. pAMPK, pACC 단백질은 창출약침 비치료군인 정상식이 대조군과 고지방식이 대조군에서는 거의 발현하지 않았지만 창출약침 치료를 시행한 결과 농도의존적으로 이 단백질들의 발현이 증가함이 관찰되었다. 따라서 창출약침은 지방세포에서 AMPK 인산화를 촉진하여 지방분화과정을 억제하고 지방산 산화를 촉진하여 지방세포의 크기를 줄여주는 효과가 있는 것으로 사료된다.
각 실험군별 체중의 증가를 비교하면, 창출약침을 시행하여 고지방식이의 급여에 의한 실험동물의 체중 증가는 농도의존적으로 유의하게 억제되었고, 전체적으로 보아 날씬하였으며, 개복했을 때 내장지방 분포의 증가 역시 현저하게 억제됨이 관찰되었다. 이는 창출약침이 고지방식이 유도에 의한 체중 증가와 지방 조직의 증식을 유의하게 감소시키는 효과가 있는 것으로 볼 수 있다.
간기능 지표의 경우 창출약침 치료를 통하여 고지 방식이 투여로 인한 AST의 증가를 억제하지 못하는 것으로 나타났다. 반면 창출약침 치료군에서는 고지 방식이 투여로 인한 ALT의 증가를 유의하게 감소시키며, 정상식이 대조군과 비슷한 수준을 나타내었다.
고지방식이 투여로 두 가지 전사인자 PPAR-γ, C/EBPα의 발현 및 그 표적 유전자 aP2, LPL, FAS, SCD-1의 발현이 큰 폭으로 증가되었는데, 창출약침 치료군에서는 고지방식이 투여군과 비교하여 전사인자 및 표적 유전자들의 발현이 모두 유의하게 농도의존적으로 억제되는 것이 관찰되었다.
고지방식이로 비만을 유도 하면서 실험기간 동안의 체중변화를 측정한 결과 고지방식이 대조군(HFD군)은 정상식이군(RD군)에 비하여 체중증가가 현저하였고 개복하였을 때 현저하게 많은 내장지방의 분포를 나타내었다. 반면 창출약침군(RAE 150군 및 RAE 300군)은 HFD군에 비하여 날씬하였고 내장지방도 적게 나타났다(Fig.
또한 white adipose tissue에 속하는 부고환조직을 H & E 염색하여 관찰한 결과, 고지방식이군은 정상대조군에 비하여 지방세포의 크기가 현저하게 커진 반면 창출약침 치료군에서는 고지방식이 대조군보다 지방세포가 농도의존적으로 작아졌으며, 면적별 지방세포 수를 비교한 결과, 창출약침 치료를 시행하여 고지방식이 투여로 인한 면적이 넓은 지방세포 수의 증가가 현저하게 억제된 것이 관찰되었다.
2-A). 면적별 지방세포 수도 HFD군에서는 RD군에 비하여 면적이 큰 지방세포 수가 많았지만 RAE 150군 및 RAE 300군에서는 HFD군보다 수가 적게 나타났다(Fig. 2-B).
본 연구에서는 ICR mouse에 고지방식이를 투여하여, 정상대조군에 비하여 현저한 체중증가, 전반적인 체격의 비만, 복강 내 지방의 분포 증가, 혈청 중 glucose, insulin, insulin resistance(HOMA-IR), lipid profile, LFT 및 white adipose tissue의 크기 증가가 관찰되었다. 이는 고지방식이의 투여로 인한 비만 유도와 더불어 glucose 및 lipid homeostasis의 손상이 유발되어 비만 동물모델이 성공적으로 확립된 것으로 사료된다.
시료투여 종료 후 각 군 간의 체중 및 체중증가를 관찰한 결과, HFD군은 RD군에 비해 체중이 263% 증가하였으나, RAE 150군 및 RAE 300군은 HFD군에 비해 각각 35.2%(p<0.01) 및 49.2%(p<0.001) 체중 증가가 억제되었다(Table 3).
1-A). 실험기간 동안의 체중변화에서 비만 유도 전에는 각 군 간의 체중이 차이가 없었으나, 실험 10일 후부터 HFD군이 RD군보다 체중이 유의하게 증가하기 시작하였으며 시간이 지날수록 차이가 더 크게 벌어졌다(Fig. 1-B). 시료투여 종료 후 각 군 간의 체중 및 체중증가를 관찰한 결과, HFD군은 RD군에 비해 체중이 263% 증가하였으나, RAE 150군 및 RAE 300군은 HFD군에 비해 각각 35.
이상의 결과를 종합하면, 고지방식이 급여로 비만을 유도한 ICR mouse의 腎兪(BL23) 상응 혈위에 창출약침을 시행하여 지방분화 관련 유전자의 발현을 억제하고 지방산 산화를 촉진하여 체중 증가, 혈중 glucose, insulin 농도, insulin resistance, white adipose tissue의 증식, 혈중 NEFA, cholesterol, triglyceride, ALT 농도의 상승을 억제하는 효과가 있는 것으로 나타났다. 따라서 비만과 그 합병증의 예방과 치료를 위하여 창출약침의 시행 조건, 제제화 및 임상에 관한 지속적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.
5%씩 약침 농도의존적으로 감소하였다. 인슐린 저항성 지수(HOMA-IR)도 HFD군이 RD군에 비해 5.4배나 증가하였고 RAE 150군 및 RAE 300군에서는 HFD군에 비해 약침 농도의존적으로 각각 22.3%, 62.8%씩 감소하였다(Table 4).
총 콜레스테롤의 경우 HFD군은 RD군에 비하여 26% 유의하게 증가하였으나 RAE 150군 및 RAE 300군은 HFD군에 비하여 차이를 나타내지 않았다. 중성지방의 경우 HFD군은 RD군에 비해 233% 현저한 증가를 보였고 RAE 150군 및 RAE 300군에서는 HFD군과 비교 시 각각 38.7%, 44.6% 감소하여 약침 농도의존적으로 감소하는 경향을 보였다. AST 의 경우 HFD군이 RD군에 비해 5.
지방분화에 관계된 전사인자인 peroxisome proliferator activated receptor-γ(PPAR-γ), CCAAT/enhancer binding protein α(C/EBPα)와 표적 유전자인 fatty acid binding protein(aP2), lipoprotein lipase(LPL), fatty acid syntase(FAS), stearoyl-CoA desaturase-1(SCD-1)에 대하여 RT-PCR 분석 결과, HFD군에서 RD군에 비하여 두 전사인자 PPAR-γ와 C/EBPα의 발현 및 표적 유전자 aP2, LPL, FAS, SCD-1의 발현이 큰 폭으로 증가되었으며, RAE 150군 및 RAE 300군에서는 HFD군에 비하여 전사인자 및 유전자들의 발현이 모두 유의하게 약침 농도의존적으로 억제되었다(Fig. 3).
30일 동안 시료를 투여한 후 12시간 절식 후 공복상태의 실험동물의 혈액에서 유리지방산(NEFA), 총 콜레스테롤(TC), 중성지방(TG), 간 기능을 나타내는 효소(AST, ALT)를 측정하였다. 혈중 NEFA의 경우 HFD군은 RD군에 비해 204% 증가하였고 RAE 150군및 RAE 300군에서는 HFD군보다 각각 60.6%, 60.5%감소하였다. 총 콜레스테롤의 경우 HFD군은 RD군에 비하여 26% 유의하게 증가하였으나 RAE 150군 및 RAE 300군은 HFD군에 비하여 차이를 나타내지 않았다.
혈중 glucose의 경우 창출약침 치료를 통하여 고지 방식이 투여로 인한 혈중 glucose 수치의 상승을 통계적으로 유의하게 농도의존적으로 억제함을 관찰하였다. 혈중 insulin level 역시 창출약침 치료를 통하여 고지방식이 투여로 인한 insulin level의 증가를 농도의존적으로 유의하게 억제하였으며, insulin resistance index(HOMA-IR) 역시 창출약침 치료군에서 고지방식이 급여로 인한 HOMA-IR의 상승을 농도 의존적으로 유의하게 억제함을 관찰하였다. 이는 고지방식이 급여로 인해 급격하게 증가되는 인슐린 저항성이 창출약침 치료군에서는 매우 효과적으로 차단되는 것으로 볼 수 있다.
후속연구
) 상응 혈위에 창출약침을 시행하여 지방분화 관련 유전자의 발현을 억제하고 지방산 산화를 촉진하여 체중 증가, 혈중 glucose, insulin 농도, insulin resistance, white adipose tissue의 증식, 혈중 NEFA, cholesterol, triglyceride, ALT 농도의 상승을 억제하는 효과가 있는 것으로 나타났다. 따라서 비만과 그 합병증의 예방과 치료를 위하여 창출약침의 시행 조건, 제제화 및 임상에 관한 지속적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.
이전 연구에서 한 등28)은 창출의 경구투여를 통해서는 AST, ALT 수치의 유의한 감소를 관찰하지 못하였다고 보고하였고, 장 등47)은 창출 엑스를 경구투여하여 CCl4 유발 간독성에 대한 보호효과가 없으며 오히려 BuOH 분획의 경우 오히려 약간의 독성이 있음을 보고하였지만, 허 등48)은 한방 비만 치료 후 비알코올성 지방간 질환과 동반된 AST, ALT, ALP, rGT 등 간기능 검사 수치의 이상을 개선시킴을 보고하였다. 이전의 연구와 본 연구 결과를 종합하면, 본 연구에서의 ALT 감소는 창출약침의 비만 및 dyslipidemia의 개선을 통한 간기능 개선효과에 의한 것으로 볼 수 있으나, 향후 추가적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
창출이란?
창출은 한의학 임상에서 널리 사용되는 약재 중 하나로, ≪동의보감≫에 수재된 처방만 232종이 된다11). 창출은 국화과(Compositae)의 삽주속(Astractylodes) 의 근경으로서12), 주피가 붙어 있고 불규칙하게 구부러진 원주형 또는 덩어리로 바깥 면이 갈색의 약재로그 효능에 있어 芳香化濕藥으로 분류되며13), 性溫, 味苦辛, 無毒하여 上中下焦의 濕疾을 다스려서 조습건비, 거풍습의 효능이 있어14), 다양한 복합 탕약에서 효과적으로 비만을 개선시킴이 보고되고 있다15-18). 창출은 위장관의 움직임을 개선시키는 효능 이외에19,20), platelet aggregation 억제 효과가 있으며21), 면역력을 강화시키고22), 안태작용이 있으며23,24), 무산소성 손상을 억제하는 효과가 있으며25), 특히 이뇨효과26)와 혈압강압효과27), 혈청 중 cholesterol 감소효과28)가 보고되었고, 창출약침을 豊隆․陽陵泉 穴位에 시행하여 체중, 식이섭취량, HDL, TG, free fatty acid, AST, ALT의 감소를 보고한 연구가 있으나29), 腎兪(BL23)에 시행한 창출약침의 항비만, 항고지혈, 항고혈당 효과에 대한 기전 연구는 현재까지 보고되지 않았다.
비만이란?
비만은 에너지 불균형에 의하여 과도하게 지방이 침착되는 만성질환으로1), 유전적·영양적·환경적 및 사회적 요인 등 다양한 원인들이 관여하는 복잡한 증후군이다2). 비만환자에서 제2형 당뇨병, 고혈압, 심혈관질환, 고관절 및 슬관절 등 체중지지관절의 골관절염, 악성종양, 폐쇄성 수면무호흡증, 담낭질환 등 동반 질환의 발생률이 높으며, 체질량 지수가 30kg/m2를 초과하는 경우 사망률의 증가와 관련된다3,4).
창출약침이 비만에 미치는 효과를 알아보기 위하여 ICR mouse에 고지방식이로 비만과 고혈당, 고지혈을 유도하면서 腎兪(BL23) 상응 혈위에 일정한 방법으로 창출(150mg/kg, 300mg/kg)약침을 시행하여 체중, insulin resistance, 혈중 glucose, insulin, NEFA, cholesterol, triglyceride, AST, ALT 농도를 평가하고 epididymis의 조직학적 관찰과 지방분화 유전자를 관찰하여 얻은 결과는?
1. 창출약침은 고지방식이 투여로 인한 체중의 증가를 억제하였다.
2. 창출약침은 고지방식이 투여로 인한 혈중 glucose, insulin level 및 insulin resistance의 상승을 억제하였다.
3. 창출약침은 고지방식이 투여로 인한 혈중 NEFA, cholesterol, TG, ALT의 상승을 억제하였다.
4. 창출약침은 고지방식이 투여로 인한 지방조직의 증식을 억제하였으며, 지방조직 크기의 분포를 정상화하였다.
5. 창출약침은 고지방식이 투여로 인한 PPAR-γ, C/EBPα, aP2, LPL, FAS, SCD-1의 발현 증가를 억제하였다.
6. 창출약침은 AMPK, ACC를 활성화시켰다.
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