Traditionally, the root of Lithospermum erythrorhizon Sieb. et Zucc(L.E) has been used as efficacious therapy for inflammation, burns, frostbite and skin ailments (e.g eczema and psoriasis). It contains isohexenylnaphthoquinone derivatives (shikonin and its esters) and furylhydroquinones (shikonofur...
Traditionally, the root of Lithospermum erythrorhizon Sieb. et Zucc(L.E) has been used as efficacious therapy for inflammation, burns, frostbite and skin ailments (e.g eczema and psoriasis). It contains isohexenylnaphthoquinone derivatives (shikonin and its esters) and furylhydroquinones (shikonofurans) in lipophilic fractions and caffeic acid oligomers (rosmarinic acid, lithospermic acid B) in polar fractions. Recently, new preparative isolation and analysis procedures of shikonin along with its oligomers from the extract of L. erythrorhizon by the combination of high-speed counter-current chromatography with high-performance liquid chromatography-diode array detection have also been introduced. Although there have been many reports on the wound healing, antiinflammatory, and anticancer effects, the research on the effects of anti-atopic dermatitis of the root of L. erythrorhizon were relatively scarce. However, in recent years, new information gathered from research efforts, on the anti-atopic dermatitis properties of the extract or constituents of L. erythrorhizon has been accumulated. In this paper, the findings and advance on the in vitro and in vivo activities of L. erythrorhizon and its constituents especially focused on antiinflammatory and anti-atopic dermatitis effects are summarized. The phytochemical constituents of L. erythrorhizon or its tissue cultures are also presented. Although there are few to verify or refute its activity in human, one result of clinical study of the extract of L. erythrorhizon on the atopic dermatitis patients was introduced to assess the possibility of its clinical use. The reported mechanisms of action and in vivo pharmacological studies in different animal models for the various types of extracts or constituents of L. erythrorhizon are supportive of its therapeutic potential or dietary supplement, however, more evidence from clinically relevant models, as well as systemic studies on the active constituents or the various types of standardized extracts at the cellular and molecular level, are required.
Traditionally, the root of Lithospermum erythrorhizon Sieb. et Zucc(L.E) has been used as efficacious therapy for inflammation, burns, frostbite and skin ailments (e.g eczema and psoriasis). It contains isohexenylnaphthoquinone derivatives (shikonin and its esters) and furylhydroquinones (shikonofurans) in lipophilic fractions and caffeic acid oligomers (rosmarinic acid, lithospermic acid B) in polar fractions. Recently, new preparative isolation and analysis procedures of shikonin along with its oligomers from the extract of L. erythrorhizon by the combination of high-speed counter-current chromatography with high-performance liquid chromatography-diode array detection have also been introduced. Although there have been many reports on the wound healing, antiinflammatory, and anticancer effects, the research on the effects of anti-atopic dermatitis of the root of L. erythrorhizon were relatively scarce. However, in recent years, new information gathered from research efforts, on the anti-atopic dermatitis properties of the extract or constituents of L. erythrorhizon has been accumulated. In this paper, the findings and advance on the in vitro and in vivo activities of L. erythrorhizon and its constituents especially focused on antiinflammatory and anti-atopic dermatitis effects are summarized. The phytochemical constituents of L. erythrorhizon or its tissue cultures are also presented. Although there are few to verify or refute its activity in human, one result of clinical study of the extract of L. erythrorhizon on the atopic dermatitis patients was introduced to assess the possibility of its clinical use. The reported mechanisms of action and in vivo pharmacological studies in different animal models for the various types of extracts or constituents of L. erythrorhizon are supportive of its therapeutic potential or dietary supplement, however, more evidence from clinically relevant models, as well as systemic studies on the active constituents or the various types of standardized extracts at the cellular and molecular level, are required.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
문제 정의
28) 자초의 뿌리에서 분리된 shikonin의 광학활성 값은 대체적으로 alkannin의 값보다 적게 측정되는데 이는 자초의 추출물에서는 shikalkin이라는 shikonin과 alkannin의 라세미체가 섞여서 존재하기 때문으로 생각되며, circular dichroism이나 chiral-HPLC 분석에 의하면 특이하게도 shikonin과 alkannin의 비율은 식물의 종에 따라 다르게 분포되어 있는 것으로 보고되었다.29-31) 이와 같이 자초 뿌리의 성분에는 shikonin과 alkannin이 함께 분리되어 보고되고 있으며, 채취된 지역에 따라 자초 뿌리 성분의 함량비율 또한 다양하게 분포하지만 본 논문에서 편의상 자초 뿌리의 함유성분에 관한 보고를 shikonin 유도체들에 국한하여 소개하고자 한다(Table I).
tinctoria의 효능에 주목하여 그 동안 shikonin과 alkannin 및 이들의 유도체들의 화학 및 약리학적 측면에 대한 리뷰들이 일부 발표되었다.6,22-24) 본 리뷰에서는 지금까지 발표된 연구들을 토대로 자초의 구성성분을 간략하게 정리하고, 자초의 광범위한 효능 중에서 항염증 및 아토피피부염에 초점을 맞추어 간략히 살펴보고자 한다. 기존의 리뷰들은 대부분 자초의 구성성분인 shikonin 및 유도체들의 효능에 국한되어 기술하고 있지만, 본 문헌에서는 자초의 구성성분 뿐만 아니라 자초 추출물의 in vitro 및 in vivo 효능을 함께 다루고자 하며, 자초 추출물을 이용한 임상사례를 함께 살펴봄으로써 자초가 herbal drug 또는 천연물신약으로 개발되는데 조금이나마 기여할 수 있기를 기대한다.
자초는 오래전부터 한방과 민간에서 피부질환의 치료에 사용되어 피부염에 대한 효능은 어느 정도 인정되어 왔다. 본 리뷰에서는 아토피피부염에 대한 부작용 없는 치료 약물로서 자초의 가능성을 살펴보기 위하여 아토피피부염과 관련된 자초 및 주요성분 shikonin 유도체의 약리효과 연구에 대하여 그 성과를 살펴보았다.
50) 자초는 한방 및 민간에서 오래 전부터 항염증, 피부질환치료제로서 많이 사용되어 왔으며, 최근 추출물의 항균, 항염증, 항알레르기 작용이 연구를 통해 밝혀지면서 아토피치료제 및 항암제로 관심을 받고 있다. 이에 자초 추출물 및 함유성분들의 항염 및 항알레르기 연구를 중심으로 약리 효과를 살펴보고자 한다.
제안 방법
21,71) 5주간 BALB/c mice와 NC/Nga mice를 대상으로 자초추출물(자초무게의 2배에 해당하는 70%에탄올로 추출)과 보라지유를 혼합하거나 또는 개별적으로 식이공급하여 실시한 실험에서 소양증(total scratching number 및 scratch intensity score로 판단)과 IgE에 대한 변화를 조사하였다. 소양증 행동분석 면에서는 보라지유군의 총 소양빈도(total scratching number)가 제일 낮았으며, 자초군이 그 다음으로 낮은 수치를 기록한 것으로 나타났다.
73) 건강한 일반 대상자 83명(남자 34명, 여자 49명)을 42명의 normal gromwell group(NG, 자초그룹)과 41명의 normal placebo group(NP)으로 나누었으며, 아토피환자 66명(남자 28명, 여자 38명) 중 38명의 atopic dermatitis(AD) gromwell group(AG)과 28명의 AD placebo group(AC)으로 나누어 자초 추출물(70% 에탄올로 추출)을 분말형태로 10주 동안 복약지도하면서 body composition, blood analysis, skin hydration 및 skin ceramide 함량에 대한 결과를 수집하였다.
이러한 알레르기성 피부염 개선효과는 IκB의 분해와 COX-2 및 iNOS의 억제에 인한 것으로 보여지며, oxazolone-유도 생쥐 만성아토피피부염 모델(chronic Oxinduced murine atopic dermatitis(AD))을 알레르기성 피부염 치료제 발굴에 유용한 모델로 제안하였다.
대상 데이터
아토피성 환자에 대한 자초 추출물의 효능을 조사하기 위한 임상실험은 경희대학교 한의학과 학생과 경희 의료원 외래환자 149명을 대상으로 이루어졌다.73) 건강한 일반 대상자 83명(남자 34명, 여자 49명)을 42명의 normal gromwell group(NG, 자초그룹)과 41명의 normal placebo group(NP)으로 나누었으며, 아토피환자 66명(남자 28명, 여자 38명) 중 38명의 atopic dermatitis(AD) gromwell group(AG)과 28명의 AD placebo group(AC)으로 나누어 자초 추출물(70% 에탄올로 추출)을 분말형태로 10주 동안 복약지도하면서 body composition, blood analysis, skin hydration 및 skin ceramide 함량에 대한 결과를 수집하였다.
성능/효과
et Zucc)는 지치과 Boraginacese에 속하는 다년생 초본으로 지초(芝草), 자근(紫根), 지치, 자경, 자초자, 자근추지 등의 여러 가지 이름으로 불리어지고 있다.1) 자초는 우리나라 전역에 야생하고 있는데, 5~6월에 흰빛의 꽃을 피기 시작하여, 7~8월까지 계속 피고난 뒤에 둥글고 하얀 씨앗을 맺는다. 자초의 생김새는 높이 30~70 cm로 잎과 줄기 전체에 흰빛의 거친 털이 빽빽하게 나있고, 줄기자체는 연한 녹색을 띠며, 진한 녹색의 잎은 잎자루가 없는 피침꼴로 돌려난다.
100 µg/ml 농도의 자초 물 추출물은 대조군(45.5% 생산)에 비하여 IgE의 생산(27.4%)을 억제하는 효과를 나타내었다.
4) 자초의 건조된 뿌리는 중국에서는 주로 Zicao로(지치과인 신강자초, Arnebia euchroma를 주로 사용), 일본에서는 Shikon으로 불리며, 염료로서 뿐만 아니라 민간요법에서 다양한 질환의 치료를 목적으로 사용되어 왔다. 일본에서 자초의 뿌리는 상처를 치료하는데 효과적인 전통약초로 인식되어 당귀, 자초, 밀랍 등과 함께 혼합하여 자운고(紫雲膏, Shiunko)라는 상품명의 피부연고제로 제조되어 동상, 화상, 치질, 습진 등의 치료에 사용하여 왔다.
일본에서 자초의 뿌리는 상처를 치료하는데 효과적인 전통약초로 인식되어 당귀, 자초, 밀랍 등과 함께 혼합하여 자운고(紫雲膏, Shiunko)라는 상품명의 피부연고제로 제조되어 동상, 화상, 치질, 습진 등의 치료에 사용하여 왔다.5) 자초의 뿌리에는 naphthoquinone 구조의 shikoin(1) 및 이의 유도체가 주요 색소성분으로 존재하며(Fig. 1), 이들 성분은 상처치유 효과뿐만 아니라6) 항염증, 항-HIV,7) 항산화,8,9) 항혈전,10) 항암작용,11) 항균작용 등 다양한 효능을 나타내는 것으로 보고되었으며, 특히 항암작용은 최근에 와서 더욱 많은 관심을 받고 있다.12-15)
67) 본 연구에서는 각각의 측정 대상별로 자초 뿌리의 물 추출물을 0.5% 함유한 에멀젼을 도포한 후총 160 시간 동안 가장 큰 효과를 나타낸 시간대와 그때의 수치들을 살펴본 결과, 삼투수분손실량 면에서는 24 시간대에서 대조군에 비해 약 32%의 감소효과를 보였다. 홍반지수(erytherma index)에서도 24 시간대에서 대조군에 비해 약 23%의 진정효과가 있었다.
70) Kim 등은 NC/Nga mice를 대상으로 자초 추출물(70%에탄올 추출, LE군)을 10주간 무게의 5%를 식이공급하여 표피의 ceramide 함량, SPT의 mRNA 및 SPT protein의 발현, ceramidase의 발현을 조사하였다.71) 정상조군(CB군, BALB/c mice)에 비해 아토피대조군(CA군, NC/Nga mice)은 57.14%, 실험군(LE군)은 171.4%로 LE군에서 정상대조군에 비해 표피 ceramide 함량이 유의적으로 높은 것으로 나타났다. SPT의 mRNA 발현에서는 CB군, CA군, LE군 각각 100±1.
Compound 48/80을 유발성분으로 하여 Sprague-Dawley계 흰쥐를 대상으로 자초 물 추출물의 효능을 측정한 실험에서는 정상군, 대조군, 자초군의 histamine 농도가 각각 6.10±0.20, 348.59±30.77, 284.96±30.28 (nM)으로 조사되었다.
3%가 증가된 것으로 나타났다. Epidermal ceramide의 농도 수치에서도 NG group과 AG group은 각각 100%, 45%의 큰 증가를 보인 것으로 나타났다. 이를 통해 자초추출물이 skin hydration과 epidermal ceramide의 향상에 어느 정도 효과가 있는 것으로 보여진다.
홍반지수(erytherma index)에서도 24 시간대에서 대조군에 비해 약 23%의 진정효과가 있었다. SOD의 활성은 120 시간대에서 대조군에 비해 약 21%의 감소효과가 관찰되었지만, CAT의 측정은 48 시간대에서 대조군에 비해 약 167%의 증가효과가 있는 것으로 관찰되었다. 광학현미경과 주사현미경으로 관찰한 결과, 자초추출물을 투입한 160 시간 이후에는 거의 대조군의 피부수준으로 회복되는 것으로 보고되었다.
SPT의 mRNA 발현에서는 CB군, CA군, LE군 각각 100±1.37, 107±0.96%, 92.6±1.68%(SPT/GAPDH(%control))을 보임으로써 군간의 유의적 차이는 없었다.
003% shikonin 함유)의 항균효과를 측정하였다. Shikonin과 에탄올 수용액 추출물은 모두 현재 화장품 제조 시 항균작용을 목적으로 사용되고 있는 20% chlorhexidine bigluconate 용액, citric acid triethyl ester 및 sanguiritrine 보다 S. aureus에 대해서 월등한 항균작용을 보였다. 그 중 자초의 에탄올 수용액 추출물의 S.
Park 등은 자초의 뿌리를 식품보존제로 사용할 목적으로 다양한 농도의 에탄올 수용액으로 추출한 자초뿌리 추출액을 제조하고 이들의 항균력을 측정하였다. 그 결과 0.1% 에탄올 용액 추출액은 48시간까지 S. aureus의 증식을 억제하였으며, 0.15% 에탄올 용액 추출액은 Candida나 Saccharomyces 속의 효모류의 증식을 96시간까지 억제하였다. 특히 곰팡이 중 Aspergillus versicolor에 대해서는 0.
그 중 shikonin(1)과 isobutylshikonin(5)이 가장 강력한 TNF-α promotor의 활성 억제력을 보였으며, transgenic human TNF-α mRNA의 발현과 단백질의 생산을 억제하였으므로 항염증제로 임상에서의 사용가능성을 제시하였다.
자초의 성분 중 어떠한 것이 이러한 효과에 대해 직접적으로 작용하는가에 대한 연구는 아직 부족한 것이 사실이나, 최근 이루어지고 있는 연구의 성과를 통해 자초의 주요 성분인 shikonin과 그 유도체가 중요한 역할을 담당하고 있는 것으로 생각된다. 따라서 in vitro와 in vivo 상의 연구 결과로 볼 때 자초는 아토피 치료제로서 가능성과 가치를 지니고 있는 것으로 보인다.
이를 통해 자초추출물이 skin hydration과 epidermal ceramide의 향상에 어느 정도 효과가 있는 것으로 보여진다. 또한 자초 투여후 IgE 수치의 변화를 조사한 실험에서는 건강한 일반 대상자 집단에서의 NG group은 5.3%가 증가했고, NP group은 0.7% 감소했으며, 아토피 환자 집단에서의 NG group은 12.3% 감소했고, NP group은 22.3% 증가한 것으로 나타났다. 그러나 본 임상실험에서는 skin hydration과 epidermal ceramide 및 IgE의 수치 변화만 조사되었으며, 사용된 자초추출물의 성분에 대한 규격화나 추출물의 아토피피부염 개선에 대한 자료는 명확하게 보여주지는 못한 것으로 보여 다양한 후속 실험들이 필요한 것으로 생각된다.
Lee 등은 oxazolone-유도 생쥐 만성아토피피부염 모델(chronic Ox-induced murine atopic dermatitis(AD))을 이용하여 자초추출물이 아토피피부염에서 염증의 진행을 억제하는지를 조사하였다. 본 모델에 자초의 70% 에탄올 추출물(0.23% lithosperic acid 함유)을 투여한 결과 피부장벽의 붕괴, 혈장 내 IgE의 감소 및 뚜렷한 임상해부병리학적 개선이 관찰되었다. 이러한 알레르기성 피부염 개선효과는 IκB의 분해와 COX-2 및 iNOS의 억제에 인한 것으로 보여지며, oxazolone-유도 생쥐 만성아토피피부염 모델(chronic Oxinduced murine atopic dermatitis(AD))을 알레르기성 피부염 치료제 발굴에 유용한 모델로 제안하였다.
사용 대상 모든 군에서 hydroxyfatty acid와 TEWL에 대한 유의적차이는 관찰되지 않았지만, 표피두께 측정에서는 대조군(HCO 10주 공급)은 45.4 µm로 측정된 반면, 자초 추출물군은 9.2 µm로 측정되어 실험 대상에서 가장 우수한 결과를 보여주었다.
세 화합물 모두 100 µg/mL 농도에서 HaCaT 세포의 SPT 단백질의 발현을 각각 55%, 23%, 및 81% 증가시켜서 표피의 투과장벽 기능을 향상시킬 수 있을 것으로 보았다.
21,71) 5주간 BALB/c mice와 NC/Nga mice를 대상으로 자초추출물(자초무게의 2배에 해당하는 70%에탄올로 추출)과 보라지유를 혼합하거나 또는 개별적으로 식이공급하여 실시한 실험에서 소양증(total scratching number 및 scratch intensity score로 판단)과 IgE에 대한 변화를 조사하였다. 소양증 행동분석 면에서는 보라지유군의 총 소양빈도(total scratching number)가 제일 낮았으며, 자초군이 그 다음으로 낮은 수치를 기록한 것으로 나타났다. 반면에 소양강도지수(scratch intensity score)에서는 보라지유군과 자초군이 각각 42±1.
실험 결과, 자초뿌리의 헥산 추출물뿐만 아니라 분리성분인 shikonin(1), dimethylacrylshikonin(4), isobutylshikonin(5), acetylshikonin(7) 및 isovalerylshikonin(8) 모두가 농도 의존적으로 human TNF-α promotor의 활성을 억제하는 것으로 나타났다.
73) 아울러 자초 물 추출물군과 자초 유기 추출물군에서는 HCO는 처리하지 않고 10주 동안 보라지유만 공급한 정상대조군과 유사한 수준의 증식지수(proliferation score) 및 ceramide 함량을 보였다. 이러한 결과로 자초추출물은 아토피피부염에서 ceramide의 함량을 증가시킴으로써 표피세포 과다증식을 개선하는데 효과적인 것으로 보인다.74)
이외에도 cytokine IL-1β, IL-4, IL-5, IL-6 및 TNF-α의 유전자 발현을 유의적으로 억제하는 효과를 나타내었으나 IFN-γ의 생산은 유의적으로 증가시키는 효과를 나타냈다.
임상실험 결과 skin hydration 면에서는 자초를 식이투여 받은 NG group과 AG group이 0주에서 10주 동안 각각 14.8%, 17.3%가 증가된 것으로 나타났다. Epidermal ceramide의 농도 수치에서도 NG group과 AG group은 각각 100%, 45%의 큰 증가를 보인 것으로 나타났다.
1 mg/ml 이상에서 농도 의존적으로 탈과립을 억제하는 효과를 나타냈으며, 5 mg/ml의 농도에서는 90%의 억제효과를 보였다. 자초의 물 추출물은 histamine 분비에 대해서도 0.1 mg/ml 이상에서 농도의존적으로 억제하였으며, 1 mg/ml의 농도에서는 92%의 억제효과를 보였다. HMC-1에 대해서는 phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)와 A23187로 염증을 유발시킨 후 IL-6, IL8, TNF-α의 분비를 유의적으로 억제하는 효과가 보고되었다.
자초의 추출물은 비록 일부 상반되는 경우가 있었지만 항균작용, B세포의 IgE 생성 억제작용, 비만세포의 탈과립과 histamine 방출 억제작용, 염증세포의 pro-inflammatory cytokine의 생성 억제작용, 및 피부의 ceramide 함량 증가 등 다양한 효능이 in vitro 및 in vivo 실험을 통해 확인되어 아토피 치료제로서의 기본적인 효능이 입증되었다고 본다. 특히 자초 추출물이 IFN-γ를 증가시키는 작용을 가진다는 실험 결과를 볼 때 아토피피부염의 만성기보다는 급성기 치료제로서 보다 유용하다고 볼 수 있다.
특히 자초 추출물이 IFN-γ를 증가시키는 작용을 가진다는 실험 결과를 볼 때 아토피피부염의 만성기보다는 급성기 치료제로서 보다 유용하다고 볼 수 있다.
Kim 등은 자초가 항알레르기 효과를 나타내는 작용기전을 조사하기 위하여 흰쥐의 비만세포와 인체 비만세포(Human mast cell, HMC-1)를 이용한 연구결과를 보고하였다. 흰쥐의 비만세포에 자초의 물 추출물을 전처리 한 후 compound 48/80으로 탈과립을 유도한 결과, 0.1 mg/ml 이상에서 농도 의존적으로 탈과립을 억제하는 효과를 나타냈으며, 5 mg/ml의 농도에서는 90%의 억제효과를 보였다. 자초의 물 추출물은 histamine 분비에 대해서도 0.
후속연구
100 g 자초를 1리터의 증류수에서 3시간 환류추출하여 얻은 자초의 물 추출물 20 mg을 첨가한 후 18~20시간 배양한 결과 Shigella sonnei 균주에 대해서는 약한 증식 억제력을 나타내었지만 다른 균주에 대해서는 유의성 있는 항균효과를 발견할 수 없었다고 보고되었다.53) 따라서 물 추출물보다 에탄올 추출물에서 보다 나은 항균효과를 보인다고 추정할 수 있으나 보다 다양한 용매를 이용한 체계적인 연구가 필요할 것으로 보인다.
그러나 IL-1β의 발현에 대해서는 hydrocortisone과는 반대로 오히려 유의하게 증가하는 효과를 나타냈다.58) 이는 자초가 hydrocortisone과는 염증과정에 대해 다른 기전을 가지고 있을 것이라고 추정할 수 있으나 좀 더 구체적인 연구가 필요할 것으로 보인다. Han 등은 LPS를 처리한 생쥐 대식세포(macrophage cell)에서 자초추출물은 염증성 cytokine을 유도하는 전사인자인 AP-1과 NF-κB의 활성화를 억제함으로써 염증성 질환의 예방에 효과적일 것으로 보았다.
특히, 최근에 신강자초를 석유에테르(petroleum ether), 에텔 아세테이트, 에탄올 및 물로 각각 추출하고 이들의 shikonin 함량을 UV로 측정한 결과, 석유에테르>에틸 아세테이트>에탄올 추출물 순서로 shikonin이 많이 존재하였으며, 물 추출물에서는 shikonin을 발견할 수 없었다고 보고되었다.83) 따라서 보다 다양한 용매를 사용한 추출물의 제조에 의한 추출물들의 효능 비교나 추출물에 존재하는 활성물질 또는 지표물질의 함량제시를 통한 추출물의 표준화/규격화 등을 위한 연구도 필요할 것으로 보인다. 마지막으로 아토피 치료제로서 다양한 효과와 장점을 가지고 있는 자초 뿌리의 표준화/규격화, in vivo 효능확인, 제형개발 및 임상연구 등이 향후 체계적으로 이루어지기를 기대하며 부족하지만 본 리뷰가 그 과정에 기여할 수 있기를 기대한다.
3% 증가한 것으로 나타났다. 그러나 본 임상실험에서는 skin hydration과 epidermal ceramide 및 IgE의 수치 변화만 조사되었으며, 사용된 자초추출물의 성분에 대한 규격화나 추출물의 아토피피부염 개선에 대한 자료는 명확하게 보여주지는 못한 것으로 보여 다양한 후속 실험들이 필요한 것으로 생각된다.
6,22-24) 본 리뷰에서는 지금까지 발표된 연구들을 토대로 자초의 구성성분을 간략하게 정리하고, 자초의 광범위한 효능 중에서 항염증 및 아토피피부염에 초점을 맞추어 간략히 살펴보고자 한다. 기존의 리뷰들은 대부분 자초의 구성성분인 shikonin 및 유도체들의 효능에 국한되어 기술하고 있지만, 본 문헌에서는 자초의 구성성분 뿐만 아니라 자초 추출물의 in vitro 및 in vivo 효능을 함께 다루고자 하며, 자초 추출물을 이용한 임상사례를 함께 살펴봄으로써 자초가 herbal drug 또는 천연물신약으로 개발되는데 조금이나마 기여할 수 있기를 기대한다.
아토피피부염과 관련된 자초의 임상 연구사례는 단 한 차례에 불과했으며, 의약품보다는 건강기능식품 수준에서 이루어져 수집된 결과가 치료제로 사용되기에는 충분한 수준에 도달하지 못한 것으로 보이며, 효능 이외에도 안전성 및 대사과정, 약물동력학시험, 안정성, 제형 등 보다 엄밀하게 설계된 전임상 및 임상 연구가 필요할 것으로 보인다. 또한 제형의 측면에서도 경구복용과 연고제 등 어떠한 방식이 좀 더 효과적이고 바람직한 방향인가에 대한 연구도 필요할 것이라고 생각된다. 연관된 임상 사례로서 shikonin 성분의 항암효과를 살펴보기 위하여 폐암 말기 환자들을 대상으로 실시했던 임상연구 결과와11) 상처치료제로서 현재 사용되고 있는 Helixderm®(주성분은 shikonin과 유사효과를 지닌 alkannin)에 대한 임상 시험 사례가 두 가지가 존재한다.
83) 따라서 보다 다양한 용매를 사용한 추출물의 제조에 의한 추출물들의 효능 비교나 추출물에 존재하는 활성물질 또는 지표물질의 함량제시를 통한 추출물의 표준화/규격화 등을 위한 연구도 필요할 것으로 보인다. 마지막으로 아토피 치료제로서 다양한 효과와 장점을 가지고 있는 자초 뿌리의 표준화/규격화, in vivo 효능확인, 제형개발 및 임상연구 등이 향후 체계적으로 이루어지기를 기대하며 부족하지만 본 리뷰가 그 과정에 기여할 수 있기를 기대한다.
그러나 임상 연구에 있어서는 아직 많은 과제를 남기고 있다고 생각된다. 아토피피부염과 관련된 자초의 임상 연구사례는 단 한 차례에 불과했으며, 의약품보다는 건강기능식품 수준에서 이루어져 수집된 결과가 치료제로 사용되기에는 충분한 수준에 도달하지 못한 것으로 보이며, 효능 이외에도 안전성 및 대사과정, 약물동력학시험, 안정성, 제형 등 보다 엄밀하게 설계된 전임상 및 임상 연구가 필요할 것으로 보인다. 또한 제형의 측면에서도 경구복용과 연고제 등 어떠한 방식이 좀 더 효과적이고 바람직한 방향인가에 대한 연구도 필요할 것이라고 생각된다.
광학현미경과 주사현미경으로 관찰한 결과, 자초추출물을 투입한 160 시간 이후에는 거의 대조군의 피부수준으로 회복되는 것으로 보고되었다. 이 실험에서 UVB 조사 후 일어나는 염증반응에 관한 부가적인 실험을 작용기전 측면에서 수행된다면, UVB에 의한 혈청 내 히스타민 유리 및 비만세포의 탈 과립과 혹은 광과민물질의 유입으로 일광에 노출될 때마다 생기는 여러 가지 형태의 광과민성 피부질환에 관한 연구68)에도 참고가 될 수 있을 것으로 보여진다.
연관된 임상 사례로서 shikonin 성분의 항암효과를 살펴보기 위하여 폐암 말기 환자들을 대상으로 실시했던 임상연구 결과와11) 상처치료제로서 현재 사용되고 있는 Helixderm®(주성분은 shikonin과 유사효과를 지닌 alkannin)에 대한 임상 시험 사례가 두 가지가 존재한다. 이러한 사례들도 향후 임상연구 설계에 도움을 줄 수 있을 것으로 생각된다. 부연하여 또 하나 아쉬웠던 점은 국내에서 이루어진 자초추출물에 대한 많은 연구가 주로 물을 용매로 한 추출에 편중되어 나타났다는 것이다.
12 µg/ml). 이와 같은 연구결과를 토대로 저자들은 shikonin과 자초의 에탄올 수용액 추출물을 항균작용을 가지는 비누나 화장품으로 사용할 수 있을 것으로 기대하였다.54)
6). 이와 같이 A. tinctoria 뿌리에서 다양한 올리고머 형태의 shikonin/alkannin 유도체들이 분리되었기 때문에 자초의 뿌리 또한 이들 성분을 포함할 것으로 예상되며, 향후 이들 유도체들의 효능연구 또한 관심을 받을 것으로 생각된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
자초의 뿌리에 있는 shikoin 성분의 효능은?
5) 자초의 뿌리에는 naphthoquinone 구조의 shikoin(1) 및 이의 유도체가 주요 색소성분으로 존재하며(Fig. 1), 이들 성분은 상처치유 효과뿐만 아니라6) 항염증, 항-HIV,7) 항산화,8,9) 항혈전,10) 항암작용,11) 항균작용 등 다양한 효능을 나타내는 것으로 보고되었으며, 특히 항암작용은 최근에 와서 더욱 많은 관심을 받고 있다.12-15)
자초 추출물이 아토피 치료제로써 만성기보다 급성기에 더 유용하다고 보는 것은 무엇 때문인가?
자초의 추출물은 비록 일부 상반되는 경우가 있었지만 항균작용, B세포의 IgE 생성 억제작용, 비만세포의 탈과립과 histamine 방출 억제작용, 염증세포의 pro-inflammatory cytokine의 생성 억제작용, 및 피부의 ceramide 함량 증가 등 다양한 효능이 in vitro 및 in vivo 실험을 통해 확인되어 아토피 치료제로서의 기본적인 효능이 입증되었다고 본다. 특히 자초 추출물이 IFN-γ를 증가시키는 작용을 가진다는 실험 결과를 볼 때 아토피피부염의 만성기보다는 급성기 치료제로서 보다 유용하다고 볼 수 있다. 자초의 성분 중 어떠한 것이 이러한 효과에 대해 직접적으로 작용하는가에 대한 연구는 아직 부족한 것이 사실이나, 최근 이루어지고 있는 연구의 성과를 통해 자초의 주요 성분인 shikonin과 그 유도체가 중요한 역할을 담당하고 있는 것으로 생각된다.
일본에서 자초의 뿌리를 이용해 제조한 피부연고제 자운고는 어떤 질환의 치료에 사용하는가?
4) 자초의 건조된 뿌리는 중국에서는 주로 Zicao로(지치과인 신강자초, Arnebia euchroma를 주로 사용), 일본에서는 Shikon으로 불리며, 염료로서 뿐만 아니라 민간요법에서 다양한 질환의 치료를 목적으로 사용되어 왔다. 일본에서 자초의 뿌리는 상처를 치료하는데 효과적인 전통약초로 인식되어 당귀, 자초, 밀랍 등과 함께 혼합하여 자운고(紫雲膏, Shiunko)라는 상품명의 피부연고제로 제조되어 동상, 화상, 치질, 습진 등의 치료에 사용하여 왔다.5) 자초의 뿌리에는 naphthoquinone 구조의 shikoin(1) 및 이의 유도체가 주요 색소성분으로 존재하며(Fig.
참고문헌 (90)
Cho, M. H., Paik, Y. S. and Hahn, T. R. (1999) Propionylshikonin from the roots of Lithospermum erythrorhizon cultivated in Korea. J. Agric. Food. Chem. 47: 4117-4120.
Cho, M. H., Paik, Y. S. and Hahn, T. R. (1999) Physical stability of shikonin derivatives from the roots of Lithospermm erythrorhizon cultivated in Korea. J. Agric. Food Chem. 47: 4117-4120.
Papageorgioua, V. P., Assimopoulou, A. N., Samanidou, V. F. and Papadoyannis, I. N. (2006) Recent advances in chemistry, biology and biotechnology of alkannins and shikonins. Curr. Org. Chem. 10: 2123-2142.
Chen, X., Yang, L., Zhang, N., Turpin, J. A., Buckheit, R. W., Osterling, C., Oppenheim, J. J. and Howard, O. M. Z. (2003) Shikonin, a component of Chinese herbal medicine, inhibits chemokine receptor function and suppresses human immunodeficiency virus type 1. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 47: 2810-2816.
Niwano, Y., Nishizawa, M. and Kohno, M. (2007) Shikonin, an active principle of the medicinal plant Lithospermm erythrorhizon, is a potent scavenger of peroxyradicals in cigarette smoke. Recent Progress in Medicinal Plants 18: 201-214.
Weng, X. C., Xiang, G. Q., Jiang, A. L., Liu, Y. P., Wu, L. L., Dong, X. W. and Duan, S. (2000) Antioxidant properties of components extracted from puccoon (Lithospermm erythrorhizon Sieb. et Zucc.). Food Chemistry 69: 143-146.
Ko, F. N., Lee, Y. S., Chang, Y. S. and Teng, C. M. (1995) Inhibition of platelet activation by shikonin derivatives isolated from Arnebia euchroma. Biochim. Biophys. Acta 1268: 329-334.
Guo, X. P., Zhang, X. Y. and Zhang, S. D. (1991) Clinical trial on the effects of shikonin mixture on later stage lung cancer. Zhong xi yi jie he za zhi (Chinese Journal of Modern Developments in Traditional Medicine) 11: 598-590, 580 [PubMed ID 1806305 AN 1992217142].
Yoon, Y., Kim, Y.-O., Lim, N.-Y., Jeon, W.-K. and Sung, H. J. (1999) Shikonin, an ingredient of Lithospermm erythrorhizon induced apoptosis in HL60 human premyelocytic leukemia cell line. Planta Medica 65: 532-535.
Kim, S. J., Kwon, B.-M., Kim, S.-H., Baek, N.-I., Yang, J. H., Lee, J. J., Lee, S. I., Kwon, Y.-E., Park, H. W., Lee, J. H., Park, J.-S. and Kim, D. K. (2007) Farnesyl protein transferase inhibitory components of Lithospermm erythrorhizon. Natural Product Sciences 13: 328-331.
Kim, S.-H., Song, G.-Y., Jin, G.-Z. and Ahn, B.-Z. (1996) Antitumor activity of arylacetylshikonin analogs. Archives of Pharmacal Research 19: 416-422.
Zhang, Y., Qian, R.-Q. and Li, P.-Pi. (2009) Shikonin, an ingredient of Lithospermm erythrorhizon, down-regulates the expression of steroid sulfatase genes in breast cancer cells. Cancer Letters 284: 47-54.
Takwale, A., Tan, E.; Agarwal, S., Barclay, G., Ahmed, I., Hotchkiss, K., Thompson, J. R., Chapman, T. and Berth- Jones, J. (2003) Efficacy and tolerability of borage oil in adults and children with atopic eczema: randomised, double blind, placebo controlled, parallel group trial. British Medical Journal 327: 1385-1387.
김영란 (2007) 아토피 동물모델 NC/Nga mice에서 자초 및 보라지 추출물의 식이공급이 소양증, IgE 및 표피 세라마이드 함량에 미치는 효과 비교. 경희대학교 동서의학대학원, 석사학위논문.
Ahn, Y. H., Jin, Y. H., Choe, C. Y., Lee, K. M. and Lee, S. (2009) Ecological characteristics of Lithospermum erythrorhizon population in habitat, Korean Journal of Pharmacognosy 40: 289-297.
Papageorgiou, V. P.; Assimopoulou, A. N.; Couladouros, E. A.; Hepworth, D. and Nicolaou, K. C. (1999) The chemistry and biology of alkannin, shikonin, and related naphthazarin natural products. Angew. Chem. Int. Ed. 39: 270-300.
Chen, X., Yang, L., Oppenheim, J. J. and Howard, O. M. Z. (2002) Cellular pharmacology studies of shikonin derivatives. Phytother. Res. 16: 199-209.
Papageorgiou, V. P., Assimopoulou, A. N. and Ballis, A. C. (2008) Alkannins and Shikonins: A new class of wound healing agents. Curr. Med. Chem. 15: 3248-3267.
Kuroda, C. (1918) The coloring matter in Lithospermum erythrorhizone. Tokyo Kagaku Kaishi 39: 1051-1115.
Miamima, R. and Kuroda, C. (1922) The coloring matter of Lithospermum erythrorhizon. Acta Phytochimica 1: 43-65.
Brockmann, H. (1935) Constitution of alkannin, shikonin and alkannan. Justus Liebigs Ann. Chem. 521: 1-47.
Arakawa, H. and Nakazaki, M. (1961) Absolute configuration of shikonin and alkannin. Chem. Ind. (London) 947.
Fukui, H., Tsukada, M., Mizukami, H. and Tabata, M. (1983) Formation of stereoisomeric mixtures of naphthoquinone derivatives in Echium lycopsis callus cultures. Phytochemistry 22: 453-456.
Fu, S. L., Shang, T. M. and Xiao, P. G. (1984) Analysis of naphthoquinone pigments in Chinese medicinal 'zicao'. Arnebia euchroma. Yaoxue Xuebao 19: 921-920.
Kim, J.-s., Han, Y.-s. and Kang, M.-h. (2006) Identification of shikonin and its derivatives for Lithospermum erythrorhizon. J. Korean Soc Food Sci. Nutr. 35: 177-181.
Morimoto, I. and Hirata, Y. (1965) New naphthoquinone derivative from Lithospermm erythrorhizon. Tetrahedron Lett. 7: 4737-4739.
Kyogoku, K., Terayama, H., Tachi, Y., Suzuki, T. and Komatsu, M. (1973) Constituents of shikon. II. Comparison of contents, constituents, and antibacterial effect of fat soluble fraction between nanshikon and kosikon. Shoyakugaku Zasshi 27: 24-30.
Cui, X.-R., Tsukada, M., Suzuki, N., Shimamura, T., Gao, L., Koyanagi, J., Komada, F. and Saito, S. (2008) Comparison of the cytotoxic activities of naturally occurring hydroxyanthraquinones and hydroxynaphthoquinones. European J. Med. Chem. 43: 1206-1215.
Hisamichi, S. and Yoshizaki, F. (1982) Studies on the shikon I. Structures of new minor pigments and isolation of two isomers of shikonin derivatives from Lithospermum erythrorhizon Sieb. et Zucc. Shoyakugaku Zasshi 36: 154-159.
Yoshizaki, F., Hisamichi, S., Kondo, Y., Sato, Y. and Nozoe, S. (1982) Studies on shikon. III. New furylhydroquinone derivatives, shikonofurans A, B, C, D and E, from Lithospermum erythrorhizon Sieb. et Zucc. Chem. Pharm. Bull. 30: 4407-4411.
Papageorgiou, V. P., Assimopoulou, A. N. and Kyriacou, G. (2002) Determination of naturally occurring hydroxynaphthoquinone polymers by size-exclusion chromatography. Chromatographia 55: 423-430.
Assimopoulou, A. N., Sturm, S., Stuppner H. and Papageorgiou, V. P. (2009) Preparative isolation and purification of alkannin/shikonin derivatives from natural products by high-speed counter-current chromatography. Biomed. Chromatogr. 23: 182-198.
Yamamoto, H., Inoue, K. and Yazaki, K. (2000) Caffeic acid oligomers in Lithospermum erythrorhizon cell suspension cultures. Phytochemistry 53: 651-657.
Yamamoto, H., Zhao, P., Yazaki, K. and Inoue, K. (2002) Regulation of lithospermic Acid B and shikonin production in Lithospermm erythrorhizon cell suspension cultures. Chem. Pharm. Bull. 50: 1086-1090.
Lin, L. and Wu, J. (2002) Enhancement of shikonin production in single- and two-phase suspension cultures of Lithospermm erythrorhizon cells using low-energy ultrasound. Biotechnology and Bioengineering 78: 81-88.
Williams, H., Robertson, C., Stewart, A., Ait-Khaled, N., Anabwani, G. A., Anderson, R. et al. (1999) Worldwide variations in the prevalence of symptoms of atopic eczema in the international study of asthma and allergies in childhood. J. Allergy Clin. Immunol. 103: 125-138.
Hong, S. J. (2007) Korean ISAAC Study Group of Korean Association of Allergy and Respiratory Diseases: Report of Korean ISAAC epidemiologic study for asthma and allergic diseases in children. Pediatr. Allergy Respir. Dis. (Korea) 17: Suppl 1: S55-66.
Cooper, K. D. (1994) Atopic dermatitis: recent trends in pathogenesis and therapy. J. Invest. Dermatol. 102: 128-37.
민영기 (1993) 자초의 효능에 관한 실험적 연구. 경희대학교 대학원 한의학과, 석사학위논문.
Karyagina, T. B., Arzumanyan, V. G., Timchenko, T. V. and Bairamashvili, D. I. (2001) Antimicrobial activity of shikonin preparations. Pharmaceutical Chemistry Journal 35: 435-436.
Park, D. W., Lee, Y. S., Seo, Y. B., Ahn, D.-K., Seo, Y.-B. and Choi, H.-Y. (2003) Effects of Lithospermi radix on anti-CD40 and recombinant interleukin-A4-induced cytokine production in murine B-cells. The Korean Journal of Herbology 18: 73-81.
김수용 (2006) 자초가 비만세포의 알레르기 염증 반응에 미치는 영향. 경희대학교 대학원 한의학과, 석사학위논문.
Kim, E. K., Kim, E.-Y., Moon, P.-D., Um, J.-Y., Kim, H.-M., Lee, H.-S., Sohn, Y., Park, S. K., Jung, H.-S. and Sohn, N.-W. (2007) Lithospermi radix extract inhibits histamine release and production of inflammatory cytokine in mast cells. Bioscience Biotechnology and Biochemistry 71: 2886-2892.
Han, K. Y., Kwon, T. H., Lee, T. H., Lee, S. J., Kim, S. H. and Kim J. (2008) Suppressive effects of Lithospermm erythrorhizon extracts on lipopolysaccharide-induced activation of AP-1 and NF-kappaB via mitogen-activated protein kinase pathways in mouse macrophage cells. BMB Rep. 41: 328-333.
Ishida, T. and Sakaguchi, I. (2007) Protection of human keratinocytes from UVB-induced inflammation using root extract of Lithospermm erythrorhizon. Biol. Pharm. Bull. 30: 928-934.
Nam, K. N., Son, M. S., Park, J. H. and Lee, E. H. (2008) Shikonins attenuate microglial inflammatory responses by inhibition of ERK, Akt, and NF- ${\kappa}B$ : neuroprotective implications. Neuropharmacology 55: 819-825.
Chen, X., Oppenheim, J. and Howard, O. M. (2001) Shikonin, a component of antiinflammatory Chinese herbal medicine, selectively blocks chemokine binding to CC chemokine receptor-1. Int. Immunopharmacol. 1: 229-236.
Wang, W. J., Bai, J. Y., Liu, D. P., Xue, L. M. and Xue, X. Y. (1994) The antiinflammatory activity of shikonin and its inhibitory effect on leukotriene $B_4$ biosynthesis. Yaoxue Xuebao 29: 161-165
Wang, W. J., Bai, J. Y., Liu, D. P., Xue, L. M. and Xue, X. Y. (1994) The antiinflammatory activity of shikonin and its inhibitory effect on leukotriene $B_4$ biosynthesis. CAN 121: 148550.
Hanada, K., Hara, T. and Nishijima, M. (2000) D-Serine inhibits serine palmitoyltransferase, the enzyme catalyzing the initial step of sphingolipid biosynthesis. FEBS Letters 474: 63-65.
Tanno, O., Ota, Y., Kitamura, N., Katsube, T. and Inoue, S., (2000) Nicotinamide increases biosynthesis of ceramides as well as other stratum corneum lipids to improve the epidermal permeability barrier. Br. J. Dermatol. 143: 524-531.
Thuong, P. T., Kang, K. W., Kim, J. K,, Seo, D. B., Lee, S. J., Kim, S. H. and Oh, W. K. (2009) Lithospermic acid derivatives from Lithospermm erythrorhizon increased expression of serine palmitoyltransferase in human HaCaT cells. Bioorg. Med. Chem. Lett. 19: 1815-1817.
송선영 (2008) UVB에 손상된 생쥐의 피부에 미치는 자초 추출물의 효과. 조선대학교 대학원 생물학과, 석사학위논문.
대한 피부과학회 교과서 편찬위원회 (2008) 피부과학(제5판), p136-142, 여문각, 서울.
Rawlings, A. V., Davies, A., Carlomusto, M., Pillai, S., Zhang, K., Kosturko, R.,Verdejo, P., Feinberg, C., Nguyen, L. and Chandar, P. (1996) Effect of lactic acid isomers on keratinocyte ceramide synthesis, stratum corneum lipid levels and stratum corneum barrier function. Arch. Dermatol. Res. 288: 383-390.
김정민 (2006) 자초추출물의 식이공급이 아토피 동물모델인 NC/Nga mice에게 식이공급하여 세라마이드 함량 및 천연 보습인자의 함량에 미치는 영향. 경희대학교 동서의학대학원, 석사학위논문.
Kim, J.-.M., Kim, Y.-R., Seo, D.-B., Kim, S.-H., Lee, S.-J. and Cho, Y. (2009) Oral supplementation of Lithospermm erythrorhizon prevents the development of atopic dermatitis with reducing ceramide degradation in the epidermis of NC/Nga mice. Phytother. Res. 23: 1250-1256.
김주영 (2006) The effects of gromwell (Lithospermm erythrorhizon Sieb. et Zucc.) for skin moisturizing and treatment of atopic dermatitis. 경희대학교 동서의학대학원, 박사학위논문.
Kim, J., Kim, H., Jeong, D. H., Kim, S. H., Park, S. K. and Cho, Y. (2006) Comparative effect of gromwell (Lithospermm erythrorhizon) extract and borage oil on reversing epidermal hyperproliferation in guinea pigs. Biosci. Biotechnol. Biochem. 70: 2086-95.
김선형 (2005) 상엽 우방자 자초가 항알러지 염증반응에 미치는 영향. 경희대학교 대학원 한의학과, 석사학위논문.
김시혜 (2004) 자초가 아토피 피부염에 미치는 영향. 경희대학교 대학원 한의학과, 박사학위논문.
Staniforth, V., Wang, S. Y., Shyur, L. F. and Yang, N. S. (2004) Shikonins, phytocompounds from Lithospermm erythrorhizon, inhibit the transcriptional activation of human tumor necrosis factor alpha promoter in vivo. J. Biol. Chem. 279: 5877-5885.
Chiu, S. C. and Yang, N. S. (2007) Inhibition of tumor necrosis factor-alpha through selective blockade of Pre-mRNA splicing by shikonin. Mol. Pharmacol. 71: 1640-1645.
Su, P.-F., Staniforth, V., Li, C.-J., Wang, C.-Y., Chiao, M.-T., Wang, S.-Y., Shyur, L.-F. and Yang, N.-S. (2008) Immunomodulatory effects of phytocompounds characterized by in vivo transgenic human GM-CSF promoter activity in skin tissues. Journal of Biomedical Science 15: 813-822.
Lee, J. H., Jung, K.-M., Bae, I.-H., Cho, S. Y., Seo, D.-B., Lee, S.-J., Park Y. H. and Lim, K.-M. (2009) Anti-inflammatory and barrier protecting effect of Lithospermm erythrorhizon extracts in chronic oxazolone-induced murine atopic dermatitis. Journal of Dermatological Science 256: 64-66.
Majlathova, L. (1971) Feeding trial with alkannin on mice. Die Nahrung 15: 505-508
Majlathova, L. (1971) Feeding trial with alkannin on mice. Chem. Abstr. 76: 122513.
Hayashi, M. (1977) Pharmacological studies of shikon and tooki. (2) Pharmacological effects of the pigment components, shikonin and acetylshikonin. Nippon Yakurigaku Zasshi 73: 193-203
Hayashi, M. (1977) Pharmacological studies of shikon and tooki. (2) Pharmacological effects of the pigment components, shikonin and acetylshikonin. Chem. Abstr. 88: 44863e.
Hayashi, M. (1977) Pharmaceutical studies on crude plant drugs, shikonin and tooki. Nippon Yakurigaku Zasshi 73: 177-191.
Dai, B., Zhou, X.-b., Yin, A.-w., Pan, Y.-s. and Zou, S.-h. (2005) Determination of shikonin content in Arnebia euchroma extracts from four kinds of solvent systems and experimental observation on its acute toxicity. Zhongguo Zhongyiyao Keji 12: 168-169
Dai, B., Zhou, X.-b., Yin, A.-w., Pan, Y.-s. and Zou, S.-h. (2005) Determination of shikonin content in Arnebia euchroma extracts from four kinds of solvent systems and experimental observation on its acute toxicity. CAN 146: 344647.
Wang, W. J., Yi, M. G. and Zhu, X. Y. (1988) A study on absorption, distribution and excretion of $[^3H]shikonin$ in mice. Yaoxue Xuebao 23: 246-251
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.