[논문]달맞이꽃 종자유와 미강유로부터 효소적 합성한 재구성 지질의 이화학적 특성 분석

김효진; 이경수; 이기택

doi:10.3746/jkfn.2010.39.8.1156

달맞이꽃 종자유와 미강유로부터 효소적 합성한 재구성 지질의 이화학적 특성 분석
Synthesis and Characterization of Structured Lipids from Evening Primrose Seeds Oil and Rice Bran Oil 원문보기

한국식품영양과학회지 = Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition, v.39 no.8, 2010년, pp.1156 - 1164

김효진 (충남대학교 식품공학과) , 이경수 (충남대학교 식품공학과) , 이기택 (충남대학교 식품공학과)

초록
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미강유(RBO)와 달맞이꽃 종자유(EPO)를 기질로 한 다양한 몰비율(1:3, 1:4, 1:5)을 가지고 효소촉매를 이용한 재구성 지질을 합성하였다. 달맞이꽃 종자유의 주요 지방산은 필수 지방산인 linoleic acid(C18:2)와 $\gamma$-linolenic acid(C18:3n-6)가 각각 74.9%와 8.1%를 차지하였다. 비율별로 합성된 재구성 지질의 주요 지방산을 살펴보면 oleic acid, linoleic acid, $\gamma$-linolenic acid가 전체 지방산 조성의 88% 이상을 차지하였다. 합성한 재구성 지질은 $\gamma$-linolenic acid를 각각 7.2%(1:3)와 7.9%(1:4), 8.3%(1:5)로 함유하였다. 반응에 사용된 기질 및 합성된 재구성 지질의 TAG 조성을 reversed-phase HPLC를 이용하여 분석한 결과, 미강유의 비율이 증가할수록 달맞이꽃 종자유의 주요한 peak인 LLL(trilinolein) peak는 감소하였고, 새로운 peak의 형성은 점차 증가하였다. 재구성 지질 및 반응에 사용된 미강유와 달맞이꽃 종자유의 $\alpha$-, $\gamma$-, $\delta$-tocopherol 함량을 분석한 결과, 미강유는 $\alpha$-tocopherol과 $\gamma$-tocopherol이 각각 7.60, 2.11(mg/100 g) 함량을 나타내었으며, $\delta$-tocopherol은 검출되지 않았다. 달맞이꽃 종자유는 $\alpha$-tocopherol 및 $\gamma$-tocopherol은 각각 13.36과 10.82(mg/100 g)를 나타내었다. Phytosterol 함량은 달맞이꽃 종자유가 744.49 mg/100 g으로 가장 높은 수치를 보였고, 미강유는 606.64 mg/100 g이었다. 한편, scale-up한 재구성 지질의 phytosterol 함량을 분석해 본 결과, 반응하기 전 campesterol, stigmasterol 및 $\beta$-sitosterol 함량이 3시간 반응 후 감소하였다. 이로써 필수지방산인 $\gamma$-linolenic acid를 함유한 재구성지질을 효소를 이용하여 성공적으로 합성하였다.

Abstract ▼ AI-Helper

Structured lipids (SLs) were synthesized by enzymatic interesterification with evening primrose oil (EPO) and rice bran oil (RBO) in a batch-type reactor. The interesterification was performed using a water shaker for 24 hr at $55^{\circ}C$. Mixing speed was set at 200 rpm and Lipozyme RM IM (immobilized lipase from Rhizomucor miehei, 10% by weight of total substrates) was used as a biocatalyst. Rice bran oil and evening primrose oil were interesterified with various molar ratios (RBO : EPO, 1:3, 1:4, and 1:5 mol/mol). Reversed-phase high performance liquid chromatography connected with evaporative light-scattering detector was performed to separate the triacylglycerol (TAG) species of SLs. In the fatty acid analysis, $\gamma$-linolenic acid (7.9 mol%), linoleic acid (67.3 mol%) and oleic acid (13.2 mol%) were the most abundant fatty acids in the SLs. During 24 hr reaction, most of the reaction occurred within 3 hr. TAG compositions, tocopherols and phytosterols were also analyzed. In the TAG species analysis, LLL (ECN=42, L=linoleic acid) dramatically decreased when the reaction time increased.

주제어

AI 본문요약
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가설 설정

1)Molar ratio of substrate was 1:4. All values are mean±SD (n=2).
1)Structured lipid (SL) was synthesized using RBO and EPO (1:4, mol/mol).

제안 방법

α-, γ- 및 δ-tocopherol 표준물질(Sigma)을 hexane에 50～125 μg/mL의 농도로 희석하여 외부표준물질 분석법을 이용하여 얻어진 그래프를 이용하여 함량을 구하였다.
산화방지력 향상을 위해 천연 산화방지제인 catechin과 합성 산화방지제인 butylated hydroxyl toluene(BHT)을 각각 400 ppm씩 첨가하였고, δ-tocopherol 200 ppm, rosemary 500 ppm을 각각 첨가하였다. Catechin을 유지에 녹이기 위하여 유화하였으며, 이를 위해 전체 유지의 20% 농도의 glycerin monooleate(GMO)를 60℃로 가온한 후 약 10분간 ultrasonication하였다. 항산화제를 첨가한 모든 시료는 10분간 60℃의 동일한 조건으로 ultra-sonicator로 균질화한 후 실험하였다.
Column은 LiChrosorb Diol(5 μm×3 mm×100 mm, Chrompack, Raritan, NJ, USA)을 사용하였고, mobile phase는 hexane : acetic acid(100:0.1, v/v)로 유속 1.0 mL/min의 등용리로 30분간 분석하였다.
Column은 SPTM-2560(biscyanopropyl polysiloxane, 100 m×0.25 mm i.d., 0.2 μm film thickness, Supelco, Bellefonte, PA, USA)을 통하여 분석하였으며, column oven 온도는 150℃에서 5분 동안 유지 후 4℃/min씩 승온 시켜 220℃까지 도달하여 30분간 유지하여 peak의 분리 효율을 높였다.
HPLC를 이용하여 재구성 지질 및 반응에 사용된 기질의 α-, γ-, δ-tocopherol 함량을 분석하였다(Table 5).
Injector 온도는 250℃, detector 온도는 260℃로 각각 설정하였고, split ratio는 50:1로써 carrier gas는 N2로 1 mL/min을 유지시켰으며 시료 1 μL 주입하여 지방산메틸에스테르 분석을 실행하였다.
이에 BF₃-methanol 용액을 2 mL 넣고 약 100℃에서 2분간 다시 한 번 반응하고 30～40℃에서 냉각하였다. Isooctane 2 mL과 포화 NaCl 용액을 1 mL을 넣고 약 1분 동안 진탕 후, 원심분리(1500 rpm)를 이용하여 3분 시행하여 분리된 두 층의 위층을 획득하여 sodium sulfate column을 통해 수분을 제거하여 GC 분석을 하였다.
본 실험에서 사용된 RBO와 달맞이꽃 종자유의 TAG 조성은 위의 보고와 유사하였다. Retention time에 따른 area의 반응률을 100으로 정하여 각 시간별로 반응하였을 경우, 달맞이꽃 종자유에 높은 함량을 차지하고 있는 trilinolein(LLL) peak와 두 기질이 반응하였을 때 새롭게 형성된 peak 하나를 선택하여 그 변화 정도를 살펴보았다. Fig.
TAG species 형태는 retention time(RT)와 partition number(PN) 사이의 관계식을 통해 반응생성물 내 새로운 TAG species 형태를 분석하였다(23,24).
재구성 지질을 합성하기 위해 screw-cap flask(250 mL)에 정제된 미강유(rice bran oil, RBO)와 달맞이꽃 종자유(evening primrose oil, EPO)를 각각 비율(RBO : EPO, mol/mol)을 달리하여 1:3, 1:4, 1:5가 되도록 취하였다. 각 기질을 비율별로 섞고 충분히 교반 후, 전체 기질 무게의 10%에 해당하는 Lipozyme RM IM을 넣고 충분히 질소로 충진 하였다. 반응 조건은 유기용매를 사용하지 않은 상태에서 55℃, 200 rpm의 항온교반수조에서 1, 3, 6, 10, 24시간마다 시료를 취하였으며, 반응이 끝난 후 기질은 PTFE syringe로 lipase를 제거하였다.
달맞이꽃 종자유와 미강유 및 재구성 지질에 함유되어 있는 유지의 α-, γ- 및 δ-tocopherol의 분석은 HPLC를 통하여 normal-phase로 정량 분석하였다.
따라서 scale-up을 위한 재구성지질의 합성은 달맞이꽃 종자유가 비교적 적은 양 들어가면서 γlinolenic acid의 함량이 높은 1:4의 기질 비율을 선정하였다.
화학적 합성의 경우 에너지의 소비가 크고 부반응이 생기는 단점이 있으나, 효소 반응은 재사용이 가능하며 친환경적이고, 효소의 기질 특이성을 이용하여 고부가 가치의 선택적, 효율적인 반응을 할 수 있다(19). 따라서 본 연구는 미강유와 달맞이꽃 종자유로부터 TAG의 sn-1,3 위치에서 특이적으로 작용하는 고정화 효소 Lipozyme RM IM(Rhizomucor miehei, EC 3.1.1.3)을 이용한 interesterification 반응을 통하여 비율을 달리해 가며 TAG의 지방산 조성을 재구성 하였다. 이때 공정의 간소화 및 식품의 안전성 등에 장점이 있는 비용매계 조건(solvent free system)에서 수행하였으며(20), 합성된 재구성 지질의 특성, 위치별 지방산 조성 분석, tocopherol 및 phytosterol의 함량 변화를 연구하였다.
또한 impeller를 stirrer motor(MS-3060D, Mtops, Yangju, Korea)에 장착하여 200 rpm으로 충분히 기질과 효소를 교반하였으며 합성된 재구성 지질은 filter paper를 이용하여 진공상태에서 효소를 걸렀다. 또한 탈산과정을 통하여 합성 중 발생한 유리지방산을 제거한 후 실험에 사용할 재구성 지질을 획득하였다.
미강유(RBO)와 달맞이꽃 종자유(EPO)를 기질로 한 다양한 몰비율(1:3, 1:4, 1:5)을 가지고 효소촉매를 이용한 재구성 지질을 합성하였다. 달맞이꽃 종자유의 주요 지방산은 필수지방산인 linoleic acid(C18:2)와 γ-linolenic acid(C18:3 n-6)가 각각 74.
미강유, 달맞이꽃 종자유 및 재구성 지질의 지방산 조성분석을 하기 위하여 methylation을 한 후 gas chromatograph(GC) 분석을 실시하였다. Test tube에 시료 약 25 mg을 취하고 0.
각 기질을 비율별로 섞고 충분히 교반 후, 전체 기질 무게의 10%에 해당하는 Lipozyme RM IM을 넣고 충분히 질소로 충진 하였다. 반응 조건은 유기용매를 사용하지 않은 상태에서 55℃, 200 rpm의 항온교반수조에서 1, 3, 6, 10, 24시간마다 시료를 취하였으며, 반응이 끝난 후 기질은 PTFE syringe로 lipase를 제거하였다. 탈산은 재구성 지질에 0.
1은 미강유와 달맞이꽃 종자유의 반응 시간에 따라 합성한 재구성 지질을 reversed-phase HPLC의 분석에 따른 TAG 조성을 나타내었다. 반응에 사용된 기질 및 합성된 재구성 지질의 TAG를 구성하는 지방산들의 길이 및 불포화도에 따른 PN과 각 TAG standard의 RT를 구하기 위하여 reversed- phase HPLC 분석을 수행하였다. 일부보고에 의하면, 미강유(RBO)의 주요 TAG 조성은 OOO(PN=48), OOL(PN=46), POO(PN=48), PLO(O=oleic acid, L=linoleic acid, P=palmitic acid) 등(25)이고, 달맞이꽃 종자유는 LnLnO(Ln=linolenic acid, O=oleic acid), LLL, LLO, PLL, SLL(S=stearic acid)로 이루어져 있으며(26), 그중 trilinolein peak의 경우 달맞이꽃 종자유의 약 70%를 차지하고 있다.
반응에 사용된 기질 및 효소적 합성을 통해 얻어진 재구성 지질을 각각 25 mg 시료에 internal standard로써 5α-cholestane(1 mg/mL in hexane) 50 μL와 2 N KOH ethanol 용액 2 mL을 가한 후, 90℃의 항온수조에서 15분 동안 비누화 반응을 하였다.
산화 안정성이 비교적 낮은 달맞이꽃 종자유와 재구성 지질(RBO : EPO＝1:4, mol/mol)에 산화방지제를 제조하여 실험하였다. 산화방지력 향상을 위해 천연 산화방지제인 catechin과 합성 산화방지제인 butylated hydroxyl toluene(BHT)을 각각 400 ppm씩 첨가하였고, δ-tocopherol 200 ppm, rosemary 500 ppm을 각각 첨가하였다.
산화방지력 향상을 위해 천연 산화방지제인 catechin과 합성 산화방지제인 butylated hydroxyl toluene(BHT)을 각각 400 ppm씩 첨가하였고, δ-tocopherol 200 ppm, rosemary 500 ppm을 각각 첨가하였다.
일반적으로 유지의 산소 흡수 속도는 그 유지의 불포화도에 가장 큰 영향을 받는다. 유도 기간을 Rancimat을 이용하여 간단히 측정할 수 있으며, 본 실험에서는 기질 및 합성 후 천연 산화방지제와 합성 산화방지제를 첨가한 재구성 지질의 유도기간을 측정하였다(Table 7). 합성한 재구성 지질에 천연 산화방지제인 δ-tocopherol 200 ppm을 첨가하였을 경우, 아무것도 첨가하지 않은 재구성 지질에 비해 약 2.
항산화제를 첨가한 모든 시료는 10분간 60℃의 동일한 조건으로 ultra-sonicator로 균질화한 후 실험하였다. 유지의 induction period(IP) 측정은 자동 산화 측정 기계인 Rancimat(Rancimat 743, Metrohm, Herisau, Switzerland)을 사용하여 각각의 시료를 3 g씩 정확히 reaction vessel에 취하고 시료 온도 100℃, gas(air) flow rate 20 L/hr의 조건에서 실시하였다(25).
유지의 sn-2와 sn-1,3 위치의 지방산 조성 분석을 위하여 pancreatic lipase(from hog pancreas, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA)에 의한 가수분해를 실행하였다. 약 7 mg의 시료에 1 M Tris-HCl buffer(pH 7.
3)을 이용한 interesterification 반응을 통하여 비율을 달리해 가며 TAG의 지방산 조성을 재구성 하였다. 이때 공정의 간소화 및 식품의 안전성 등에 장점이 있는 비용매계 조건(solvent free system)에서 수행하였으며(20), 합성된 재구성 지질의 특성, 위치별 지방산 조성 분석, tocopherol 및 phytosterol의 함량 변화를 연구하였다.
5 N KOH in ethanol(100 mL ethanol/ 400 mL H₂O) solution을 이용하여 적정하였으며, 적정이 끝난 후 warm water로 비누화된 물질을 수차례 제거하여 재구성 지질 합성 중 생성될 수 있는 유리지방산을 제거하였다. 이러한 탈산 공정을 거친 후 얻은 반응물은 anhydrous sodium sulfate(Junsei Chemical Co., Ltd., Tokyo, Japan) column을 이용하여 수분을 제거하였으며, 진공감압농축기(N-1000, EYELA, Tokyo, Japan)와 N₂를 이용하여 hexane을 완전히 제거한 후 이화학적 분석을 통하여 재구성 지질의 특성을 살펴보았다.
한편, scale-up한 재구성 지질의 phytosterol 함량을 분석해 본 결과, 반응하기전 campesterol, stigmasterol 및 β-sitosterol 함량이 3시간 반응 후 감소하였다. 이로써 필수지방산인 γ-linolenic acid를 함유한 재구성지질을 효소를 이용하여 성공적으로 합성하였다.
이를 n-hexane : diethyl ether : acetic acid(50:50:1, v/v/v) 전개용매를 사용하여 TLC(20×20 cm, Merck, Darmstadt, Germany)를 전개하였으며, 완료된 TLC silica plate로부터 Rf값이 0.03인 부위(2-monoacylglycerol)만 취하여 위의 지방산 조성 분석과 동일한 방법으로 sn-2 위치의 지방산 조성을 분석하였다.
이에 hexane 5 mL로 희석하여 syringe filter(13 mm, 0.2 μm, Whatman, Maidstone, England)를 이용하여 여과 후 20 μL을 주입하였으며, SP930D dual pump와 UV730 detector(Young-Lin Instrument Co., Ltd.)가 장착되어 있는 HPLC로 295 nm에서 분석하였다.
재구성 지질 내 생성된 TAG와 반응기질과의 비교를 위하여 reversed-phase high performance liquid chromatograph(RP-HPLC) 분석을 시행하였다. SP930D dual pump(Younglin, Anyang, Korea)와 Sedex Model 75 evaporative light scattering detector(ELSD, Dedere, Alfortvill, France), 20 μL injection loop가 부착된 autosampler(Marathon, Young-Lin Instrument Co.
재구성 지질을 합성하기 위해 screw-cap flask(250 mL)에 정제된 미강유(rice bran oil, RBO)와 달맞이꽃 종자유(evening primrose oil, EPO)를 각각 비율(RBO : EPO, mol/mol)을 달리하여 1:3, 1:4, 1:5가 되도록 취하였다. 각 기질을 비율별로 섞고 충분히 교반 후, 전체 기질 무게의 10%에 해당하는 Lipozyme RM IM을 넣고 충분히 질소로 충진 하였다.
반응 조건은 유기용매를 사용하지 않은 상태에서 55℃, 200 rpm의 항온교반수조에서 1, 3, 6, 10, 24시간마다 시료를 취하였으며, 반응이 끝난 후 기질은 PTFE syringe로 lipase를 제거하였다. 탈산은 재구성 지질에 0.5 N phenolphthalein solution(1 g/100 mL in 95% ethanol)을 지시약으로 몇 방울 첨가한 후, 유리지방산들을 0.5 N KOH in ethanol(100 mL ethanol/ 400 mL H₂O) solution을 이용하여 적정하였으며, 적정이 끝난 후 warm water로 비누화된 물질을 수차례 제거하여 재구성 지질 합성 중 생성될 수 있는 유리지방산을 제거하였다. 이러한 탈산 공정을 거친 후 얻은 반응물은 anhydrous sodium sulfate(Junsei Chemical Co.
25 μm film thickness)을 사용하였다. 한편, oven program은 285℃에서 25분 동안 유지하였으며, injector 및 detector 온도는 각각 300℃로 설정해 주어 phytosterol을 정량 분석하였다.
합성한 재구성 지질은 γ-linolenic acid를 각각 7.2%(1:3)와 7.9%(1:4), 8.3%(1:5)로 함유하였다.

대상 데이터

North American Inc.(Franklinton, NC, USA)로부터 구입하여 사용하였다. α, γ 및 δ-tocopherol과 phytosterol 표준물질은 각각 Fluka Chemika-Biochemika(Buchs, Switzerland)와 Sigma-Aldrich Chemical Co.
Louis, MO, USA)에서 구입하였다. Rosemary extract(ROS. con)는 Pinus Tki d.d.(Race, Slovenia)에서 제공받았다.
SP930D dual pump(Younglin, Anyang, Korea)와 Sedex Model 75 evaporative light scattering detector(ELSD, Dedere, Alfortvill, France), 20 μL injection loop가 부착된 autosampler(Marathon, Young-Lin Instrument Co., Ltd., Emmen, Netherlands)가 장착된 HPLC를 사용하였다.
본 실험에 사용된 미강유(RBO)는 주식회사 세림(Serim Co., Daejeon, Korea)에서 제공받았고, 달맞이꽃 종자유(EPO)는 주식회사 H사(Pahjoo, Korea)에서 구입한 것을 사용하였다. 효소적 interesterification에 의한 재구성 지질의 합성 시에는 효소 촉매로서 Rhizomucor miehei로부터 유래한 Lipozyme RM IM을 Novo Nordisk Biochem.
분석 시 flame ionized detector(FID, Younglin 5890)가 장착된 GC를 사용하였으며, SACTM-5 capillary column(30 m×0.25 mm×0.25 μm film thickness)을 사용하였다.
분석 장치는 gas chromatograph(Hewlett-Packard 6890 series, Avondale, PA, USA)와 flame ionized detector(FID)를 사용하였다. Column은 SP^TM-2560(biscyanopropyl polysiloxane, 100 m×0.

데이터처리

각 실험 군별 결과는 2000 Statistical Analysis, System S/W Package(SAS Institute Inc., North Carolina, USA)를 이용하여 95% 신뢰구간에서 Student-Newman-Keul's를 적용한 Multivariate Analysis of Variance(MANOVA) 통계처리와 Duncan's multiple range test(DMRT)로 각 군별 유의성을 검증하였다.

이론/모형

03인 부위(2-monoacylglycerol)만 취하여 위의 지방산 조성 분석과 동일한 방법으로 sn-2 위치의 지방산 조성을 분석하였다. Sn-1,3 위치의 지방산 조성 계산식은 Fomuso과 Akoh의 계산식을 따랐으며(22), 다음과 같다.
Injector 온도는 250℃, detector 온도는 260℃로 각각 설정하였고, split ratio는 50:1로써 carrier gas는 N₂로 1 mL/min을 유지시켰으며 시료 1 μL 주입하여 지방산메틸에스테르 분석을 실행하였다. 지방산의 %를 구하기 위하여 다음 계산식을 사용하였으며 FID 전환계수와 지방산 메틸에스테르로부터의 지방산 전환계수는 식약청에서 제시한 방법(21)에 의해 산출하였다.

성능/효과

3시간 반응하였을 때, 총 지방산 조성에서 γ-linolenic acid의 함량은 7.2(1:3), 7.9(1:4), 8.3(1:5)로 크게 차이가 없었으나, sn-2 지방산 조성에서는 3.5(1:3), 5.6 (1:4), 6.7(1:5)을 나타내며, 1:4 비율과 1:5 비율이 비교적 높은 함량을 보였다.
이는 Mariod 등(29)의 연구결과와 유사하였다. Catechin 400 ppm을 첨가시켰을 경우 아무것도 첨가하지 않은 재구성 지질과 유도기간이 비슷하였으며, 합성 산화방지제인 BHT 400 ppm 첨가시킨 경우 아무것도 첨가하지 않은 재구성 지질에 비해 약 2.5배 유도기간이 연장되었다.
82(mg/100 g)를 나타내었다. Phytosterol 함량은 달맞이꽃 종자유가 744.49 mg/100 g으로 가장 높은 수치를 보였고, 미강유는 606.64 mg/100 g이었다. 한편, scale-up한 재구성 지질의 phytosterol 함량을 분석해 본 결과, 반응하기전 campesterol, stigmasterol 및 β-sitosterol 함량이 3시간 반응 후 감소하였다.
3%를 차지하여 높은 불포화지방산 함량을 나타내었으며, Shimizu 등(26)의 연구보고와 결과가 유사함을 확인할 수 있었다. 미강유와 달맞이꽃 종자유의 sn-2 position의 지방산 함량을 살펴보면, 미강유는 oleic acid가 47.0%, linoleic acid가 45.8%로 높은 비율을 차지하였고 달맞이꽃 종자유는 linoleic acid가 82.7%로 가장 많이 차지하였다.
기질로 사용된 미강유와 달맞이꽃 종자유 그리고 합성된 재구성 지질의 총 지방산 및 위치 별 지방산 조성을 분석한 결과는 Table 1과 같다. 미강유의 주요 지방산은 oleic acid (C18:1)와 linoleic acid(C18:2)가 각각 43.6%와 32.7%를 차지하였고, 총 불포화지방산과 총 포화지방산은 각각 77.2%와 22.8%를 나타내었다. 달맞이꽃 종자유의 경우, 주요 지방산은 필수지방산인 linoleic acid와 γ-linolenic acid(C18:3 n-6)가 각각 74.
여러 비율별로 미강유와 달맞이꽃 종자유의 합성된 유지의 주요 지방산, sn-2 position 지방산 및 sn-1,3 position 지방산은 Table 2～4와 같으며, 주요 지방산을 살펴보면 oleic acid, linoleic acid, γ-linolenic acid가 전체 지방산 조성의 88% 이상 차지하였다. 반응 조건에 따라 oleic acid(C18:1)는 약 11～15%임에 반해 linoleic acid(C18:2)는 약 65～69%로 각각의 기질의 차지하는 비율에 따라 차별적인 결과를 나타내었다. 3시간 반응하였을 때, 총 지방산 조성에서 γ-linolenic acid의 함량은 7.
3%(1:5)로 함유하였다. 반응에 사용된 기질 및 합성된 재구성 지질의 TAG 조성을 reversedphase HPLC를 이용하여 분석한 결과, 미강유의 비율이 증가할수록 달맞이꽃 종자유의 주요한 peak인 LLL(trilinolein) peak는 감소하였고, 새로운 peak의 형성은 점차 증가하였다. 재구성 지질 및 반응에 사용된 미강유와 달맞이꽃 종자유의 α-, γ-, δ-tocopherol 함량을 분석한 결과, 미강유는 α-tocopherol과 γ-tocopherol이 각각 7.
여러 비율별로 미강유와 달맞이꽃 종자유의 합성된 유지의 주요 지방산, sn-2 position 지방산 및 sn-1,3 position 지방산은 Table 2～4와 같으며, 주요 지방산을 살펴보면 oleic acid, linoleic acid, γ-linolenic acid가 전체 지방산 조성의 88% 이상 차지하였다.
재구성 지질 및 반응에 사용된 미강유와 달맞이꽃 종자유의 α-, γ-, δ-tocopherol 함량을 분석한 결과, 미강유는 α-tocopherol과 γ-tocopherol이 각각 7.60, 2.11(mg/100 g)함량을 나타내었으며, δ-tocopherol은 검출되지 않았다.
합성 반응에 사용된 각 기질 및 재구성 지질의 total phytosterol(campesterol, stigmasterol, β-sitosterol) 함량을 살펴보면 Table 6과 같다. 총 phytosterol 함량은 달맞이꽃 종자유가 744.49 mg/100 g으로 가장 높은 수치를 보였고, 미강유는 606.64 mg/100 g의 수치를 나타내었다. 미강유는 campesterol, stigmasterol 및 β-sitosterol의 함량이 각각 111.
한편 scale-up한 재구성 지질의 tocopherol 함량을 분석해 본 결과, 반응하기 전 α-tocopherol 및 γtocopherol의 함량이 12.10, 9.53(mg/100 g)에서 3시간 반응 후 각각 11.84, 9.08(mg/100 g)로 감소하였음을 확인할 수 있었다.
한편, scale-up한 재구성 지질의 phytosterol 함량을 분석해 본 결과, 반응하기 전 campesterol, stigmasterol 및 β-sitosterol 함량이 각각 81.42, 20.64, 614.74 mg/100 g에서 3시간 반응 후 각각 68.31, 20.74, 614.74를 나타내었으며, 다른 phytosterol 함량에 비해 반응 후 campesterol 함량이 감소한 것을 알 수 있었다.
64 mg/100 g이었다. 한편, scale-up한 재구성 지질의 phytosterol 함량을 분석해 본 결과, 반응하기전 campesterol, stigmasterol 및 β-sitosterol 함량이 3시간 반응 후 감소하였다. 이로써 필수지방산인 γ-linolenic acid를 함유한 재구성지질을 효소를 이용하여 성공적으로 합성하였다.

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	감마리놀렌산의 효능은 무엇인가?	감마리놀렌산은 주로 달맞이꽃 종자유(evening primrose oil, EPO)에 7～10%(8,9), 까막까치밥나무유(blackcurrant oil)에 12～20% 및 서양 자초유(borage oil) 등에 13～25%(9-11), 삼씨유(hemp seed oil)에 5～8%(12,13) 정도 함유되어 있다고 알려져 있다(14). 감마리놀렌산(GLA, γ-linolenic acid, 18:3n-6, 18:3Δ6,9,12)은 특히, 여성의 생리통 경감, 피부질환 방지, 노화지연으로 인한 화장품 사용여성들의 피부보호, 심혈관계질환, 비만 예방 효과 등이 있는 것으로 알려져 있으며(8), 국내외적으로 건강보조식품과 스킨, 로션 등의 화장품 및 의약품소재로서 새롭게 부각되고 있는 고기능유지이다. 한편, 미강(rice bran)은 현미의 약 8～10% 정도를 차지하며 혈중 콜레스테롤 저하효과, 항산화 효과, 혈압상승 억제 효과가 우수한 다양한 유효성분들이 확인되어 그 효능이 보고되었고(15-18), 일부가 기능성 소재로서 제품화되기도 한다.
	사람이나 동물이 식이를 통해 필수지방산을 보충해야 하는 이유는 무엇인가?	필수지방산의 결핍 시 성장 저하, 상처 치료의 어려움, 수정율 감소, 신장장애 등을 초래할 수 있으며, 필수지방산을 함유하는 식이를 제공해 줌으로써 이와 같은 결핍증을 예방 및 개선할 수 있다. 사람이나 동물의 경우 필수지방산을 생합성할 수 없기 때문에 반드시 식이를 통해서 공급해 주어야 한다(3-5). 오메가-6 계열의 필수지방산으로 볼 수 있는 감마리놀렌산은 사람의 모유에서도 발견되며, 사람 모유의 경우 리터당 100～400 mg의 감마리놀렌산이 함유되어 있다고 알려져 있다(3,6,7).
	재구성지질의 효소 반응을 통한 합성은 어떤 장점을 가지고 있는가	재구성지질(structured lipid, SL)은 화학적 또는 효소적 방법에 의해 triacylglycerol(TAG) 분자 안에서 지방산의 위치 및 조성을 변화시키거나 새로운 기능성 지방산의 결합을 통하여 생성할 수 있다. 화학적 합성의 경우 에너지의 소비가 크고 부반응이 생기는 단점이 있으나, 효소 반응은 재사용이 가능하며 친환경적이고, 효소의 기질 특이성을 이용하여 고부가 가치의 선택적, 효율적인 반응을 할 수 있다(19). 따라서 본 연구는 미강유와 달맞이꽃 종자유로부터 TAG의 sn-1,3 위치에서 특이적으로 작용하는 고정화 효소 Lipozyme RM IM(Rhizomucor miehei, EC 3.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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