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문제 정의
- 生血潤膚飮이 면역계에 미치는 영향을 조사하기 위하여 마우스 비장세포 증식능에 미치는 효과를 관찰하였다. 분리된 마우스 비장세포에 生血潤膚飮 열수추출액을 농도별(500, 1000, 1500, 2000 ㎍/㎖)로 처리하여 24시간, 48시간 세포 증식능을 관찰하였다.
- 이렇듯 NO는 상황에 따라서 세포, 조직 혹은 개체에 이로울 수도 있고 해로울 수도 있어서 상황에 맞게 NO 분비를 촉진시키거나 억제시킴으로써 인체 생리현상을 조절 할 수있으므로, NO 생성을 조절할 수 있는 물질을 찾고자 하는 많은 연구가 활발히 진행되고 있다. 따라서 본 실험에서 生血潤膚飮의 항 염증성 효과를 관찰하기 위해 LPS로 RAW 264.7 마우스 대식세포주를 자극하여 과도한 NO 생성을 유도한 후 生血潤膚飮의 NO 생성 조절에 미치는 영향을 관찰하였다. 그 결과, LPS로 자극된 RAW 264.
- 따라서 본 실험에서는 生血潤膚飮의 항알러지 효과를 알아보기 위해 RBL-2H3 세포주에 비면역자극제인 compound 48/80로 자극 후 이들 세포의 분비과립에 존재하는 β-hexosaminidase와 histamine 분비에 미치는 영향을 관찰하였다.
- 본 연구는 아토피성 피부염에 사용하는 生血潤膚飮의 항 알레르기에 대한 효과와 항염증 효과를 알아보기 위하여 정상 면역세포 증식에 미치는 영향, 알레르기 반응의 주요 세포인 비만 세포와 상동성이 높은 RBL-2H3 basophilic leukemia 세포주를 이용하여 알레르기 반응 시 이들 세포의 탈과립 지표로 알려진β-hexosaminidase 및 histamine 분비 억제에 미치는 영향, RAW264.7 대식세포주를 이용하여 염증반응과 관련된 Nitric Oxide 생성 및 조절기전에 미치는 영향 등을 관찰하여 유의적인 결과를 얻었기에 보고 하는 바이다.
- 본 연구에서는 아토피성 피부염에 사용하는 生血潤膚飮의 항 알레르기에 대한 효과와 항염증 효과를 알아보기 위하여 정상세포 증식에 미치는 영향, 알레르기 반응의 주요 세포인 비만 세포와 상동성이 높은 RBL-2H3 basophilic leukemia 세포주를 이용하여 알레르기 반응 시 이들 세포의 탈과립 지표로 알려진β-hexosaminidase 및 histamine 분비 억제에 미치는 영향, RAW264.7 대식세포주를 이용하여 염증반응과 관련된 Nitric Oxide 생성 및 조절기전에 미치는 영향 등을 관찰하였다.
제안 방법
- 5× RT buffer 2 ㎕ (10 mM dATP 0.25 ㎕, 10 mM dGTP 0.25 ㎕, 10 mM dTTP 0.25 ㎕, 10 mM dCTP 0.25 ㎕, MMLV reverse transcriptase (200 U/㎕) 0.25 ㎕, RNase inhibitor (28 U/㎕) 0.25 ㎕, 50 uM oligo dT primer 0.5 ㎕, DEPC-distilled water 4 ㎕)를 PCR tube에 넣어 42℃에서 60분간 열처리하여 역전사 반응을 완료하였다.
- BCA protein assay kit (Pierce, Rockford, IL, U.S.A)로 정량한 후 동일량의 단백질(30 또는 40 ㎍)을 sodium dodecyl sulfate-polyacrlyamide gel eletrophoresis (SDS-PAGE)로 분리한 후, nitrocellulose membrane (NC, Schleicher & Schuell BioScience, Germany)에 transfer하였다.
- A)용액으로 2회 세척하였다. Ficoll-pague (Amersham Biosciences, Sweden)을 이용하여 1,800 rpm 에서 30분 원심 분리하여 임파구 층을 수거한 후, RPMI 1640 (GibcoBRL, NY, U.S.A) media로 1회 더 세척하고 10% fetal bovine serum (FBS)이 첨가된 RPMI 1640에 현탁 시켰다. 현탁된 세포는 일정액을 취하여 0.
- 25 ㎕)를 혼합하고, 여기에 증류수로 최종 부피가 20 ㎕ 되게 하여 PCR mixture를 만들었다. PCR mixture를 PCR tube에 넣고 여기에 역전사 산물을 5 ㎕첨가하여 혼합한 뒤 PCR 장치에 넣어 다음의 조건으로 PCR을 실시하였다. PCR 반응은 94℃에 3분간 1 cycle 반응 후 94℃ 45초, 57℃ 45초, 72℃ 45초간 35 cycle 반응시켰으며, 72℃에서 10분간 extension을 시행한 후 반응을 완료시켰다.
- PCR 은 10× PCR buffer 3 ㎕ (25 mM MgCl2 1.8 ㎕, 10 mM dATP 0.3 ㎕, 10 mM dGTP 0.3 ㎕, 10 mM dTTP 0.3 ㎕, 10 mM dCTP 0.3 ㎕, 50 uM sense 및 antisense primer 0.25 ㎕, Tag polymerase (5 U/㎕, Promega Co.) 0.25 ㎕)를 혼합하고, 여기에 증류수로 최종 부피가 20 ㎕ 되게 하여 PCR mixture를 만들었다.
- 그 후 4℃, 12,000rpm에서 15분간 원심 분리하고 상등액을 조심스럽게 취한 후 동량의 isopropanol을 첨가하여 -20℃에서 45분간 정치한 후 원심 분리하여, 70% DEPC-Ethanol로 1회 세척하였다. RNA를 실온에서 건조시킨 후 DEPC가 첨가된 증류수에 일정량 희석하여 spectrophotometer로 농도를 측정하였다. 5× RT buffer 2 ㎕ (10 mM dATP 0.
- 生血潤膚飮 10첩 분량 372 g을 증류식 약탕기 (CME 592, 미강기업, Korea)에 전탕 하였다. 전탕 후 얻어진 3 L를 rotary evaporator (Eyela N-11, Tokyo Rikakikai Co.
- 生血潤膚飮에 의한 RAW 264.7 마우스 대식세포에서 NO 생성의 억제가 iNOS mRNA 유전자 발현 및 iNOS 단백질 발현과의 관련성을 조사하기위해 RAW 264.7 마우스 대식세포주에 LPS와 生血潤膚飮을 처리한 후 iNOS mRNA 유전자 발현과 iNOS 단백질 발현을 RT-PCR 과 Western blotting 으로 관찰하였다. 실험결과, LPS 단독 처리시 iNOS mRNA 유전자 발현이 강하게 유도됨이 관찰되었으며, 이러한 유전자 발현은 생혈유부음 처리에 의해 감소되었으며, iNOS 단백질 발현 또한 生血潤膚飮 처리에 의해 감소되었다(Fig.
- 生血潤膚飮의 항알러지 효과를 살펴보기 위해 비만세포나 호염구 세포의 분비과립에 초래하는 β-hexosaminidase 분비에 미치는 영향을 RBL-2H3 basophilic 세포주에서 관찰하였다.
- 生血潤膚飮의 항알러지 효과를 살펴보기 위해 알레르기 반응의 원인세포로 알려진 비만세포dhk 호염구 세포의 분비 과립에 존재하는 histamine의 분비에 미치는 영향을 RBL-2H3 basophilic 세포주를 이용하여 관찰하였다. RBL-2H3 세포에 탈 과립을 유도하기 위해 compound 48/80을 사용하였다.
- 生血潤膚飮의 항알레르기 효과를 관찰하기위하여 生血潤膚飮이 정상 면역세포의 증식에 미치는 영향, 알레르기 반응의 주요 세포인 비만세포와 상동성이 높은 RBL-2H3 basophilic leukemia 세포주를 이용하여 이들 세포의 탈과립 지표로 알려진β-hexosaminidase 및 histamine 분비 억제에 미치는 영향, RAW264.7 대식세포주를 이용하여 염증반응과 관련된 NO 생성 및 조절기전에 미치는 영향 등을 관찰하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
- 生血潤膚飮의 항염증성 효과를 관찰하기 위해 LPS로 자극된 RAW 264.7 마우스 대식세포주를 이용하여 NO 생성 조절에 미치는 영향을 조사하였다. LPS로 자극된 RAW 264.
- 1% Tween 20)으로 1시간 동안 반응 시켜 비특이적 단백질에 대한 반응성을 차단하고 anti-iNOS 항체와 반응시킨 후 2차 항체인 anti-mouse IgG로 1시간 30분 반응시켰다. 각 반응 사이에 TBS-T로 10분씩 3회 30분 동안 수세하였다. 이어서 항체에 대한 대응 단백질 band를 enhanced chemiluminescence(ECL, Amersham Pharmacia Biotech, UK) detection 방법으로 확인하였다.
- . 따라서 본 실험에서는 소아 아토피성 피부염에 다용되는 生血潤膚飮을 시간별(24시간, 48시간) 농도별(500, 1000, 1500, 2000 ㎍/㎖)로 처리하여 마우스 비장세포에 증식에 미치는 영향을 관찰하였다. 실험 결과 처리시간 24시간에서는 500, 1000 ㎍/㎖에서 대조군에 비해 세포증식능이 유의성 있게 증가하였고, 48시간 배양시 마우스 비장세포의 증식능은 약간의 세포증식이 관찰되었다.
- A)를 이용하여 분리하였다. 마우스 비장세포에서 RNA를 분리하기 위하여 0.1% DEPC (diethyl pyrocarbonate)가 첨가된 PBS로 비장세포를 3회 세척 후 RNA-Bee 900 ㎕를 첨가하여 균질화시켰다. 여기에 클로로포름 100 ㎕를 넣고 15분간 얼음에 정치시켰다.
- 마우스를 경추 탈골시킨 후 무균적으로 비장을 적출하여 주위 조직을 제거하였다. Slide glass로 부드럽게 압착하여 비장을 분쇄한 후 4℃ Hanks Balanced Salt Solution (GibcoBRL, NY, U.
- Histamine 과 β-hexosaminidase는 이들 세포에서 탈과립의 지표로 알려져 있어 알레르기 억제물질의 생물활성 측정에 유용하게 사용되고 있다24,28-30). 본 연구에서는 Rat 점막 비만세포와 상동성이 높은 Rat RBL-2H3 basophilic leukemia 세포주인 RBL-2H3 세포주를 지시세포로 사용하여 비만세포의 탈과립을 유도하는 compound 48/80을 사용하여 탈과립을 유도 하였다. Compound 48/80 은 비만세포내로 칼슘 유입을 증가시켜 세포내 칼슘 수준을 증가시키고 세포내 cAMP phosphodiesterase를 활성화시켜 세포내 cAMP 수준을 감소시킴으로써 비만세포의 탈과립을 일으키는 비면역학적 자극제로 알려져 있다25,27).
- 生血潤膚飮이 면역계에 미치는 영향을 조사하기 위하여 마우스 비장세포 증식능에 미치는 효과를 관찰하였다. 분리된 마우스 비장세포에 生血潤膚飮 열수추출액을 농도별(500, 1000, 1500, 2000 ㎍/㎖)로 처리하여 24시간, 48시간 세포 증식능을 관찰하였다. 그 결과 24시간 배양시 마우스 비장세포의 증식능은 生血潤膚飮 처리 농도에 따라 0.
- 사육실의 조명은 12시간씩 dark/light 주기로 실시하였고, 온도는 22±2℃, 습도는 55±2%를 유지하였다.
- 1 ㎖의 1% OPA(o-phthalaldehyde)를 첨가하고 실온에서 5분간 방치하였다. 여기에 1N HCl 0.2 ㎖ 첨가하여 반응을 종결시킨 다음, fluorometer(Genios, Tecan, Austria)를 사용하여 360 nm의 excitation 파장과 450 nm의 emission 파장을 사용하여 측정하였다.
- 각 반응 사이에 TBS-T로 10분씩 3회 30분 동안 수세하였다. 이어서 항체에 대한 대응 단백질 band를 enhanced chemiluminescence(ECL, Amersham Pharmacia Biotech, UK) detection 방법으로 확인하였다.
- PCR 반응은 94℃에 3분간 1 cycle 반응 후 94℃ 45초, 57℃ 45초, 72℃ 45초간 35 cycle 반응시켰으며, 72℃에서 10분간 extension을 시행한 후 반응을 완료시켰다. 증폭된 산물은 1.2% agarose gel에 전기 영동하여 Gel Doc (Bio Lad, Italy)를 이용하여 DNA band를 확인하였다. RT-PCR에 사용한 primer는 (주)바이오니아사 (Bioneer Co, Choongbook)에 의뢰하여 합성하였으며, 각 primer의 염기서열은 Table 2와 같다.
- A) media로 1회 더 세척하고 10% fetal bovine serum (FBS)이 첨가된 RPMI 1640에 현탁 시켰다. 현탁된 세포는 일정액을 취하여 0.4% tryphan blue에 동량으로 혼합한 후 hemacytometer를 이용하여 세포수를 산정하였다.
대상 데이터
- 生血潤膚飮의 항알러지 효과를 살펴보기 위해 비만세포나 호염구 세포의 분비과립에 초래하는 β-hexosaminidase 분비에 미치는 영향을 RBL-2H3 basophilic 세포주에서 관찰하였다. RBL-2H3 세포에 탈과립을 유도하기 위하여 세포내 칼슘 유입을 증가시켜 세포내 탈과립을 유도할 수 있는 compound 48/80을 사용하였다. 실험결과, compound 48/80 자극에 의한 β-hexosaminidase 분비가 compound 48/80 단독처리 60.
- RNA분리는 RNA-Bee (TEL-ＴEST, INC, U.S.A)를 이용하여 분리하였다. 마우스 비장세포에서 RNA를 분리하기 위하여 0.
- 2% agarose gel에 전기 영동하여 Gel Doc (Bio Lad, Italy)를 이용하여 DNA band를 확인하였다. RT-PCR에 사용한 primer는 (주)바이오니아사 (Bioneer Co, Choongbook)에 의뢰하여 합성하였으며, 각 primer의 염기서열은 Table 2와 같다.
- A)을 첨가하여 100 ㎜ dish에 80% 세포의 밀도를 유지하면서 37℃, 5% CO2 incubator에서 배양하였다. Rat의 basophilic 세포주인 RBL-2H3 세포주는 RPMI 1640 Medium (GibcoBRL, NY, U.S.A)에 10% heat-inactivated fetal bovine serum (GibcoBRL, NY, U.S.A)과 1 mM sodium pyruvate, 100 IU/㎖ penicillin, 50 ㎍/㎖ streptomycin (GibcoBRL, NY, U.S.A)을 첨가하여 37℃, 5% CO2 incubator에서 배양하였다.
- 마우스 대식세포 세포주 RAW 264.7 (America Type Culture Collection, Rockville, MD, U.S.A)은 Dulbecco′s Modified Eagle‘s Medium (GibcoBRL, NY, U.S.A)에 10% heat-inactivated fetal bovine serum (GibcoBRL, NY, U.S.A)과 1 mM sodium pyruvate, 100 IU/㎖ penicillin, 50 ㎍/㎖ streptomycin (GibcoBRL, NY, U.S.A)을 첨가하여 100 ㎜ dish에 80% 세포의 밀도를 유지하면서 37℃, 5% CO2 incubator에서 배양하였다.
- 무균 환경에서 사육된 5주령의 수컷 ICR 마우스와 6주령의 암컷 마우스를 ( )오리엔트 (경기도 가평, 한국)에서 구입하여 각 실험에 사용하였다. 마우스는 사료와 물을 무제한으로 공급하면서 실험 전 약 1주간 안정화 시킨 후 실험에 사용하였다. 사육실의 조명은 12시간씩 dark/light 주기로 실시하였고, 온도는 22±2℃, 습도는 55±2%를 유지하였다.
- 무균 환경에서 사육된 5주령의 수컷 ICR 마우스와 6주령의 암컷 마우스를 ( )오리엔트 (경기도 가평, 한국)에서 구입하여 각 실험에 사용하였다. 마우스는 사료와 물을 무제한으로 공급하면서 실험 전 약 1주간 안정화 시킨 후 실험에 사용하였다.
- 실험에 사용한 藥材는 대구한의대학교 부속한방병원에서 구입하여 良質의 것을 精選하여 사용하였으며, 처방은 『醫學正傳7)』에 收載된 生血潤膚飮으로서 내용 및 1첩 분량은 다음과 같다(Table 1).
- 배양 후 배양액 100 ㎕에 세포 증식능 시약을 20㎕를 첨가한 후 37℃, 5% CO2 incubator에 1시간 30분 배양한 후 490 nm에서 흡광도를 측정 하였다. 임파구 증식능을 측정하기 위해 CellTiter 96Ⓡ AQueous one solution cell proliferation assay kit (Promega, Madison, WI, U.S.A) 시약을 사용하였다.
이론/모형
- 배양 후 RBL-2H3 세포주를 4℃에서 10분간 방치하여 반응을 종결시킨 후 상층액을 회수하였다. Histamine의 정량은 Shore가 보고한 fluorometer를 이용한 측정방법을 사용하였다. 간단히 설명하면, 회수한 상층액 1 ㎖에 0.
- 7 cells were incubated with lipopolysaccharide (LPS ; 1 ㎍/㎖) for 24hr in the presence or absence of SHU at indicated doses. The amount of NO released by cells were measured by the method of Griess. All values are means ± S.
- 7 cells were stimulated with lipopolysaccharide (LPS ; 1 ㎍/㎖) in the presence or absence of various concentration of SHU for 24hr. The protein extracts were prepared, and the samples analyzed for iNOS expression by western blotting as described in the method. HSP70 was a control protein.
성능/효과
- 48시간 배양시 마우스 비장세포의 증식능은 生血潤膚飮 처리 농도에 따라 0.193±0.015, 0.168±0.015, 0.172±0.002, 0.181±0.0 7의 세포 증식능을 보였다(Fig. 1)
- LPS로 자극된 RAW 264.7 세포에서 유도된 NO 생성 31.2±0.08(μM/㎖)은 生血潤膚飮의 처리 농도별에 23.4±0.08, 14.2±0.15, 9.6±0.08, 9.1±0.13(μM/㎖)으로 유의하게 억제되었다(Fig. 4).
- 生血潤膚飮의 항알레르기 효과를 측정하기위하여 비만세포의 탈과립을 일으키는 비면역학적 자극제인 compound 48/80을 사용 β-hexosaminidase분비에 미치는 영향을 관찰한 결과, 生血潤膚飮의 처리에 의해 β-hexosaminidase 분비가 유의하게 억제되었다. 生血潤膚飮의 항알레르기 효과를 측정하기위하여 비만세포의 탈 과립을 일으키는 비면역학적 자극제인 compound 48/80을 사용 Histamine 분비에 미치는 영향을 관찰한 결과, 生血潤膚飮의 처리에 의해 Histamine 분비가 유의하게 억제되었다. 生血潤膚飮의 항염증 효과를 관찰하기위해 급․만성 염증시 과도한 생성되는 NO 조절에 미치는 영향을 조사한 결과 生血潤膚飮이 LPS로 자극된 RAW 264.
- 生血潤膚飮의 항알레르기 효과를 측정하기위하여 비만세포의 탈과립을 일으키는 비면역학적 자극제인 compound 48/80을 사용 β-hexosaminidase분비에 미치는 영향을 관찰한 결과, 生血潤膚飮의 처리에 의해 β-hexosaminidase 분비가 유의하게 억제되었다.
- 生血潤膚飮의 항알레르기 효과를 측정하기위하여 비만세포의 탈 과립을 일으키는 비면역학적 자극제인 compound 48/80을 사용 Histamine 분비에 미치는 영향을 관찰한 결과, 生血潤膚飮의 처리에 의해 Histamine 분비가 유의하게 억제되었다. 生血潤膚飮의 항염증 효과를 관찰하기위해 급․만성 염증시 과도한 생성되는 NO 조절에 미치는 영향을 조사한 결과 生血潤膚飮이 LPS로 자극된 RAW 264.7 세포에서 유도된 NO 생성을 유의하게 감소되었으며 iNOS mRNA 유전자 발현 및 iNOS 단백질 발현 또한억제시켰다.
- 生血潤膚飮이 정상면역세포에 미치는 영향을 살펴보기 위해 2차 면역장기인 비장의 세포증식능을 조사한 결과, 生血潤膚飮을 처리에 의해 비장세포증식능이 유의성 있게 증가되었다. 生血潤膚飮의 항알레르기 효과를 측정하기위하여 비만세포의 탈과립을 일으키는 비면역학적 자극제인 compound 48/80을 사용 β-hexosaminidase분비에 미치는 영향을 관찰한 결과, 生血潤膚飮의 처리에 의해 β-hexosaminidase 분비가 유의하게 억제되었다.
- 그 결과 24시간 배양시 마우스 비장세포의 증식능은 生血潤膚飮 처리 농도에 따라 0.276±0.007, 0.271±0.005, 0.239±0.0 4 및 0.234±0.0 4로 대조군 0.237±0.0 3에 비해 500 ㎍/㎖와 1000 ㎍/㎖에서 유의한 세포 증식능이 관찰되었다.
- 그 결과, β-hexosaminidase 분비가 生血潤膚飮 처리시 농도 1000, 1500, 2000 ㎍/㎖에서 유의하게 억제됨이 관찰 되었으며, histamine 분비 또한 1500, 2000 ㎍/㎖에서 유의하게 억제됨이 관찰되었다.
- 7 마우스 대식세포주를 자극하여 과도한 NO 생성을 유도한 후 生血潤膚飮의 NO 생성 조절에 미치는 영향을 관찰하였다. 그 결과, LPS로 자극된 RAW 264.7 세포에서 유도된 NO 생성은 生血潤膚飮의 처리 농도 모두에서 유의하게 억제됨이 관찰되었으며 NOS mRNA 유전자 발현 및 iNOS 단백질 발현이 감소됨이 관찰되었다. 이러한 결과는 生血潤膚飮이 염증성 질환의 예방 및 치료에 효과적일 것으로 생각된다.
- 따라서 본 실험에서는 소아 아토피성 피부염에 다용되는 生血潤膚飮을 시간별(24시간, 48시간) 농도별(500, 1000, 1500, 2000 ㎍/㎖)로 처리하여 마우스 비장세포에 증식에 미치는 영향을 관찰하였다. 실험 결과 처리시간 24시간에서는 500, 1000 ㎍/㎖에서 대조군에 비해 세포증식능이 유의성 있게 증가하였고, 48시간 배양시 마우스 비장세포의 증식능은 약간의 세포증식이 관찰되었다. 이는 生血潤膚飮이 면역 세포를 활성화하여 주로 기능이 저하되고 허약한 환자에게 사용하여 저하된 기능을 강화 시켜 줄 수 있음을 알 수 있었다.
- 7 마우스 대식세포주에 LPS와 生血潤膚飮을 처리한 후 iNOS mRNA 유전자 발현과 iNOS 단백질 발현을 RT-PCR 과 Western blotting 으로 관찰하였다. 실험결과, LPS 단독 처리시 iNOS mRNA 유전자 발현이 강하게 유도됨이 관찰되었으며, 이러한 유전자 발현은 생혈유부음 처리에 의해 감소되었으며, iNOS 단백질 발현 또한 生血潤膚飮 처리에 의해 감소되었다(Fig. 5, 6).
- 실험결과, compound 48/80 자극에 의한 β-hexosaminidase 분비가 compound 48/80 단독처리 60.3±0.7%에 비해 生血潤膚飮 처리시 농도에 따라 61.6±0.8, 57.5±0.1, 54.6±0.6, 52.4±0.2%로 1000, 1500, 2000 ㎍/㎖에서 β-hexosaminidase 분비가 유의하게 억제되었다(Fig. 2).
- 실험결과, compound 48/80 자극에 의한 histamine 분비가 compound 48/80 단독처리 74.1±3% 에 비해 生血潤膚飮 처리에 의해 histamine 분비가 65.2±2, 67.6±2, 58.7±3, 52.2±3%의 결과를 보였으며 1500, 2000 ㎍/㎖에서 유의하게 억제되었다(Fig. 3).
- 실험 결과 처리시간 24시간에서는 500, 1000 ㎍/㎖에서 대조군에 비해 세포증식능이 유의성 있게 증가하였고, 48시간 배양시 마우스 비장세포의 증식능은 약간의 세포증식이 관찰되었다. 이는 生血潤膚飮이 면역 세포를 활성화하여 주로 기능이 저하되고 허약한 환자에게 사용하여 저하된 기능을 강화 시켜 줄 수 있음을 알 수 있었다.
- 그 결과, β-hexosaminidase 분비가 生血潤膚飮 처리시 농도 1000, 1500, 2000 ㎍/㎖에서 유의하게 억제됨이 관찰 되었으며, histamine 분비 또한 1500, 2000 ㎍/㎖에서 유의하게 억제됨이 관찰되었다. 이러한 결과는 生血潤膚飮이 비만세포의 탈과립으로 촉발되는 알레르기 염증질환에 매우 효과적일 것이라는 것을 시사하였다.
후속연구
- 이상의 결과는 生血潤膚飮이 항알레르기 및 항염증효과가 알레르기 반응 시 비만세포 세포의 탈과립 지표로 알려진 β-hexosaminidase 및 histamine 분비 억제, 염증반응과 관련된 NO 생성 조절 등에 관여되고 있는 것이 관찰되었으며, 추후 生血潤膚飮의 항알레르기 및 항염증에 효과적인 활성물질의 분리 정체가 수행된다면 새로운 항알레르기성, 항염증성 기능 물질로 이용될 수 있을 것이라 생각된다.
- 이상의 결과로 보아 生血潤膚飮은 알레르기 반응 세포의 탈과립 지표인 β-hexosaminidase 및 histamine 분비 억제와 염증 반응과 관련된 NO 생성 억제를 통해 염증과 관련된 알레르기 질환에 유용하게 사용될 수 있을 것이라 생각되며, 추후 生血潤膚飮의 항알레르기 및 항염증에 효과적인 활성물질의 분리 정체가 수행된다면 새로운 항알레르기성, 항염증성 기능 물질로 이용될 수 있을 것이라 사료된다.
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