본 연구에서는 berberine이 전염증성사이토카인의 생성에 미치는 효과를 관찰하기 위하여 TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$, 그리고 IL-6생성을 정량하였다. 마우스 비장세포에 berberine을 작용시켰을 때 TNF-$\alpha$의 생성이 억제되었다. 또한 마우스 생체 내에서 LPS에 의한 TNF-$\alpha$의 상승이 berberine에 의해서 억제됨을 알 수 있었다. IL-$1{\beta}$의 생성에 있어서도 berberine을 고농도(3.0 ${\mu}g/ml$)로 작용시켰을 때 억제되었고 LPS에 의한 IL-$1{\beta}$의 상승이 고농도의 berberine에 의해서 억제되었다. IL-6의 생성은 berberine에 의해서 억제되었으며 낮은 berberine 농도(0.3 ${\mu}g/ml$)에서 LPS에 의한IL-6의 생성이 억제되었다. 따라서 이러한 결과들은 berberine이 TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$, 그리고 IL-6와 같은 전염증성사이토카인의 생성을 하향 조절할 가능성을 시사한다 하겠다.
본 연구에서는 berberine이 전염증성사이토카인의 생성에 미치는 효과를 관찰하기 위하여 TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$, 그리고 IL-6생성을 정량하였다. 마우스 비장세포에 berberine을 작용시켰을 때 TNF-$\alpha$의 생성이 억제되었다. 또한 마우스 생체 내에서 LPS에 의한 TNF-$\alpha$의 상승이 berberine에 의해서 억제됨을 알 수 있었다. IL-$1{\beta}$의 생성에 있어서도 berberine을 고농도(3.0 ${\mu}g/ml$)로 작용시켰을 때 억제되었고 LPS에 의한 IL-$1{\beta}$의 상승이 고농도의 berberine에 의해서 억제되었다. IL-6의 생성은 berberine에 의해서 억제되었으며 낮은 berberine 농도(0.3 ${\mu}g/ml$)에서 LPS에 의한IL-6의 생성이 억제되었다. 따라서 이러한 결과들은 berberine이 TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$, 그리고 IL-6와 같은 전염증성사이토카인의 생성을 하향 조절할 가능성을 시사한다 하겠다.
Berberine has shown a number of beneficial effects, including anti-tumor, anti-inflammation, and vasodilatory effects. In this work we investigated the effects of berberine on the production of proinflammatory cytokines such as TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$, and IL-6 in mice. The...
Berberine has shown a number of beneficial effects, including anti-tumor, anti-inflammation, and vasodilatory effects. In this work we investigated the effects of berberine on the production of proinflammatory cytokines such as TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$, and IL-6 in mice. The supernatants of cultured splenocytes exposed with berberine or berberine plus LPS were harvested to assay TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$, and IL-6. The sera from the mice injected with berberine or berberine plus LPS were then isolated to assay these cytokines. The TNF-$\alpha$ production in mice splenocyte cultures exposed to berberine was inhibited compared to the PBS control. The sera from LPS plus berberine injected mice showed lower levels of TNF-$\alpha$ compared to those of LPS only injected mice. The IL-$1{\beta}$ production in mice splenocyte cultures exposed to berberine was inhibited at a high dose (3.0 ${\mu}g/ml$) compared to the PBS control. Also, the increase of IL-$1{\beta}$ by LPS exposure in splenocyte cultures was inhibited by a high dose of berberine. The IL-6 in splenocyte culture supernatants showed lower levels after berberine compared to the PBS control. Also, production of IL-6 after LPS exposure in splenocyte cultures was inhibited by a low dose of berberine (0.3 ${\mu}g/ml$). These findings suggest the probability that berberine down-regulates the production of proinflammatory cytokines such as TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$, and IL-6.
Berberine has shown a number of beneficial effects, including anti-tumor, anti-inflammation, and vasodilatory effects. In this work we investigated the effects of berberine on the production of proinflammatory cytokines such as TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$, and IL-6 in mice. The supernatants of cultured splenocytes exposed with berberine or berberine plus LPS were harvested to assay TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$, and IL-6. The sera from the mice injected with berberine or berberine plus LPS were then isolated to assay these cytokines. The TNF-$\alpha$ production in mice splenocyte cultures exposed to berberine was inhibited compared to the PBS control. The sera from LPS plus berberine injected mice showed lower levels of TNF-$\alpha$ compared to those of LPS only injected mice. The IL-$1{\beta}$ production in mice splenocyte cultures exposed to berberine was inhibited at a high dose (3.0 ${\mu}g/ml$) compared to the PBS control. Also, the increase of IL-$1{\beta}$ by LPS exposure in splenocyte cultures was inhibited by a high dose of berberine. The IL-6 in splenocyte culture supernatants showed lower levels after berberine compared to the PBS control. Also, production of IL-6 after LPS exposure in splenocyte cultures was inhibited by a low dose of berberine (0.3 ${\mu}g/ml$). These findings suggest the probability that berberine down-regulates the production of proinflammatory cytokines such as TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$, and IL-6.
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문제 정의
본 연구에서는 berberine을 이용하여 전염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-1β, 그리고 IL-6의 생성을 마우스 비장세포 배양을 통하여 알아보고자 하였다.
제안 방법
또한 LPS 2 μg과의 복합작용도 함께 시험하였다.
본 연구에서는 berberine을 이용하여 전염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-1β, 그리고 IL-6의 생성을 마우스 비장세포 배양을 통하여 알아보고자 하였다. 또한 lipopolysaccharide (LPS)와 같은 세포자극물질에 대한 berberine의 효과를 보기위하여 혼합배양 후의 이들 사이토카인들의 생성변화를 관찰하였다.
또한 LPS 2 μg과의 복합작용도 함께 시험하였다. 배양시간은 상기의 조건에서 6, 24시간으로 하였다. 각각 일정시간 배양이 끝난 후 전량 배양액을 수거한 다음 300x g에서 10분간, 10,000x g에서 30분간 원침 시킨 후 그 상층 액을 수거하여 -70℃에 보관하였다.
비장세포배양 상층액 준비는 미리 준비된 비장세포 부유액을 10%가 되게 소 태아혈청을 가한 RPMI 1640 (Gibco, Grand Island, NY, USA) 배지(complete 10% FCS RPMI1640)로 ml 당 2x106 세포가 되도록 조절하여, 24 wells tissue culture plate (Costar, Cambridge, MA, USA)에 1 ml씩 분주한 후 berberine 0.3, 1.0, 3.0 μg을 각각 작용시켜 37oC, 5% CO2배양기에 배양하였다.
세척용 완충액으로 7 번 세척한 후 tetramethylbenzidine이 포함된 기질액 100 μl씩을 적하하여 실온에서 15분 동안 방치한 후 stop액 50 μl씩을 가하여 반응을 정지시켰다.
세척용 완충액으로 5번 세척한 후 plate의 각 well에 시료 100 μl씩을 적하하여 실온에서 2시간 동안 방치하였다. 이때 시료는 6, 24시간 배양상층액을 적용하였고 혈청은 PBS로10배 희석한 다음 사용하였다. 세척용 완충액으로 5번 세척한 후 detection 항체 100μl씩을 분주한 후 실온에서 1시간 동안 방치하였다.
정상마우스의 비장에서 분리된 세포 부유액에 berberine을 작용시켰을 때 생성되는 IL-1β의 양을 측정하였다.
정상마우스의 비장에서 분리된 세포 부유액에 berberine을 작용시켰을 때 생성되는 IL-6의 양을 측정하였다. Berberine, 0.
정상마우스의 비장에서 분리된 세포 부유액에 berberine을 작용시켰을 때 생성되는 TNF-α의 양을 측정하였다.
대상 데이터
Berberine과 lipopolysaccharide (LPS)는 Sigma Co. (USA)제품을 사용하였다.
5 μg과 berberine 50 μg을 주사하고 24시간 경과시킨 후 마우스 심장으로부터 혈액을 채취한 후 혈청을 분리하였다. 대조군은 PBS액을 사용하였다. 분리된 혈청은 -70℃에 보관하였다.
암컷 Balb/C 마우스로서 생후 8주 내외, 체중 25 g 내외 것을 한국 효창 사이언스(대구, 경북)로부터 구입하여 실험에 사용하였다.
데이터처리
실험성적은 평균 또는 평균±표준편차로 나타냈으며 각 군 간의 통계학적 검정에는 Student's t-test를 사용하고 P값이 0.05 미만일 때 의의 있는 차로 간주하였다.
성능/효과
1.0 μg/ml을 작용시켰을 때에도 6시간 배양에서 대조군보다 높았으며 24시간 배양에서도 대조군보다 높았다.
LPS 2.0 μg과 berberine 0.3 μg을 함께 작용시켰을 때는 LPS 단독 작용시보다 감소하였으나 1.0 μg을 작용시켰을 때에는 LPS단독 작용시보다 약간 상승하였다.
LPS 2.0 μg과 berberine 0.3 혹은 1.0 μg/ml을 함께 작용시켰을 때는 LPS 단독 작용시보다 약간 증가하였으나 LPS 2.0 μg과 berberine 3.0 μg을 작용시켰을 때는 LPS 단독 작용시보다 큰 증가를 보였다(Table 2).
그러나 LPS를 작용시킨 군들에 berberine을 추가하였을 때 TNF-α의 감소는 보이지 않았지만 마우스 생체 내에 LPS를 주사하고 추가로 berberine을 주사하였을 시 혈청 내 TNF-α가 LPS단독 주사시보다 감소함을 보임으로서 억제능을 나타냈다.
마우스에 LPS를 주사하고 24시간 후에 분리된 혈청에서의 IL-6는 8.79 pg/ml을 나타내어 대조군의 0.97 pg/ml보다 크게 증가하였고 berberine 50 μg을 주사하였을 때에도 대조군보다 증가하였으며 LPS와 berberine을 함께 주사했을 때에도 LPS 단독 주사시보다 증가하였다.
마우스에 LPS를 주사하고 24시간 후에 분리된 혈청에서의 TNF-α는 23.34 pg/ml을 나타내어 대조군의 3.69 pg/ml보다 크게 증가하였으며 berberine 50 μg을 주사하였을 때는 더 큰 증가를 보였다.
본 실험에서는 시험관내에서 마우스 비장세포에 berberine을 작용시켜 생성되는 IL-6를 정량 분석하였을 때 6 시간 배양의 경우 전체 농도들(0.3, 1.0, 3.0 μg/ml)에서 대조군에 비하여 IL-6생성이 감소하는 결과를 보였다. LPS와 복합으로 berberine을 작용시켰을 때에도 낮은 농도(0.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
Berberine이란?
Berberine은 황백(Phellodendri cortex) 및 황련(Coptis rhizoma)의 주성분인 isoquinoline 계 알칼로이드 물질로 항염증작용[12], 항부정맥작용[13], 항암작용[1,3,7,9,18], 면역억제작용[16], 항당뇨[20], 항고지혈작용[11,22] 등의 약리활성과 Candida albicans 등의 여러 가지 곰팡이, 박테리아, 원충, 바이러스, 기생충에 대항하여 항균작용[2,5,6,17]을 나타내는 것으로 알려져 있다. Berberine은 약제내성을 보이는 C.
Berberine의 약리활성 기능은?
Berberine은 황백(Phellodendri cortex) 및 황련(Coptis rhizoma)의 주성분인 isoquinoline 계 알칼로이드 물질로 항염증작용[12], 항부정맥작용[13], 항암작용[1,3,7,9,18], 면역억제작용[16], 항당뇨[20], 항고지혈작용[11,22] 등의 약리활성과 Candida albicans 등의 여러 가지 곰팡이, 박테리아, 원충, 바이러스, 기생충에 대항하여 항균작용[2,5,6,17]을 나타내는 것으로 알려져 있다. Berberine은 약제내성을 보이는 C.
정상마우스의 비장에서 분리된 세포 부유액에 농도별 berberine을 작용시켰을 때 생성되는 TNF-α의 양을 측정한 결과는?
정상마우스의 비장에서 분리된 세포 부유액에 berberine을 작용시켰을 때 생성되는 TNF-α의 양을 측정하였다. Berberine, 0.3μg/ml을 작용시켰을 때 6시간 배양에서 TNF-α가 35.14 pg/ml, 24시간 배양에서는 61.43 pg/ml을 나타내어 대조군보다 모두 감소하였다. 그러나 1.0 μg/ml을 작용시켰을 때는 6시간 배양에서 대조군보다 낮았으나 24시간 배양에서는 대조군보다 높았다. Berberine, 3.0 μg/ml을 작용시켰을 때에는 6, 24시간째 모두 대조군보다 낮게 나타났다(Table 1). 마우스 비장세포에 LPS를 2.
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