[국내논문]프로테오믹스 기술을 통한 쥐의 신장 피질에서 알도스테론(Aldosterone)에 의해 조절되는 단백질 동정 Proteome-based Identification of Proteins Regulated by Aldosterone in Rat Kidney Cortex원문보기
Aldosterone, mineralocorticoid hormone, has important functions related to the regulation of blood pressure and balance of fluids and electrolytes in the distal region of the nephron. By genomic and non-genomic action of aldosterone, the physiological kidney functions are modulated. However, many of...
Aldosterone, mineralocorticoid hormone, has important functions related to the regulation of blood pressure and balance of fluids and electrolytes in the distal region of the nephron. By genomic and non-genomic action of aldosterone, the physiological kidney functions are modulated. However, many of them except several kind of sodium channel have not been identified and analyzed yet. In this study, proteomic technologies with two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) gel using aldosterone rat model were applied to analyze and identify the aldosterone dependently expressed proteins in rat kidney cortex. As a result, the established aldosterone rat model exhibited the normal physiological responses to aldosterone and modulated proteins were identified, which included 15 increased and 3 decreased proteins on 2-DE analysis. Among them, 11 proteins were identified as changed proteins by LC-MS/MS analysis. These proteins identified as aldosterone induced proteins were involved in several cellular pathways such as cytoskeleton remodeling, energy metabolism, amino acid metabolism, and chaperone process. In conclusion, our data could provide the insights into the new mechanism underlying regulation of kidney functions by aldosterone.
Aldosterone, mineralocorticoid hormone, has important functions related to the regulation of blood pressure and balance of fluids and electrolytes in the distal region of the nephron. By genomic and non-genomic action of aldosterone, the physiological kidney functions are modulated. However, many of them except several kind of sodium channel have not been identified and analyzed yet. In this study, proteomic technologies with two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) gel using aldosterone rat model were applied to analyze and identify the aldosterone dependently expressed proteins in rat kidney cortex. As a result, the established aldosterone rat model exhibited the normal physiological responses to aldosterone and modulated proteins were identified, which included 15 increased and 3 decreased proteins on 2-DE analysis. Among them, 11 proteins were identified as changed proteins by LC-MS/MS analysis. These proteins identified as aldosterone induced proteins were involved in several cellular pathways such as cytoskeleton remodeling, energy metabolism, amino acid metabolism, and chaperone process. In conclusion, our data could provide the insights into the new mechanism underlying regulation of kidney functions by aldosterone.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
문제 정의
따라서, 본 연구에서는 이차원 전기영동 후 나노 초고성능 액체 크로마토그래피(nano Ultra Performance Liquid Chromatography) 질량분석기(nano Electron Spray Ionization QuadrupleTime Of Flight Mass spectrometry)를 기반으로 실험용 쥐(rat) 에 알도스테론을 장기적으로 처리하여 알도스테론의 지노믹 작용에 의해 변화하는 신장 피질 단백질을 연구하였다. 이 결과는 알도스테론의 메커니즘을 이해하는데 도움을 줄 것이다.
본 실험에서는 실험용 쥐에 알도스테론을 처리하여 알도스테론에 의해 변화하는 단백질을 보고자 하였다. 알도스테론은 삼투압 소형 펌프(osmotic minipump)를 이용하여 실험용 쥐의 목덜미에 삽입하여 하루 동안 100 µg씩 주입하였다.
2). 이 두 결과로 미루어 보아, 동물모델이 잘 만들어 진 것을 확인하고 실험을 진행하였다.
본 연구에서는 알도스테론 처리 후 변화하는 전체 신장 피질 단백질의 변화를 보여주는 최초의 논문이다. 알도스테론에 의해 변화하는 신장 피질 단백질을 이차원 전기영동을 이용하여 분석한 결과 pyruvate carboxylase와 argininosuccinate synthase가 증가하고, ATP synthases subunit β는 감소하는 것으로 나타났다.
제안 방법
알도스테론은 삼투압 소형 펌프(osmotic minipump)를 이용하여 실험용 쥐의 목덜미에 삽입하여 하루 동안 100 µg씩 주입하였다.
개체간의 차이를 줄이기 위하여 각 군에서 동일한 양의 단백질을 취합하여 그 중 200 µg으로 이차원 전기영동을 실시하였다.
신장 피질부를 채취하여 균질기(Homogenizer)를 이용하여 균질화 하였고, 그 후 4,000 ×g에서 15분 동안 원심분리하였다.
채취한 소변과 혈액은 Na+와 K+ 농도, 크레아틴 농도 등을 측정하였고, α-ENaC 항체(antibody)를 이용하여 웨스턴 블롯(western blot)을 수행하였다.
알도스테론은 삼투압 소형 펌프(osmotic minipump)를 이용하여 실험용 쥐의 목덜미에 삽입하여 하루 동안 100 µg씩 주입하였다. 10) 알도스테론 주입 하루 전 소변을 채취하였고, 7일 동안 알도스테론을 처리한 후 동물모델로부터 소변과 혈액 및 신장 피질을 채취하였다. 채취한 소변과 혈액은 Na+와 K+ 농도, 크레아틴 농도 등을 측정하였고, α-ENaC 항체(antibody)를 이용하여 웨스턴 블롯(western blot)을 수행하였다.
신장 피질부를 채취하여 균질기(Homogenizer)를 이용하여 균질화 하였고, 그 후 4,000 ×g에서 15분 동안 원심분리하였다. 상등액 부분에 주로 단백질이 분포하고 침전물에는 세포 막 세포 소기관 등이 주로 많이 분포되어 있으므로 본 실험에서는 원심분리 후 상등액을 취하여 단백질 실험을 진행하였다.
등전점에 의한 단백질 분리는 35,000 Vhr에서 진행하였다. 등전점에 의한 단백질 분리 후 각각의 strip 젤은 평형화 완충액 (equilibration buffer, 50 mM Tris pH 8.8, 6 M Urea, 30% glycerol, 2% SDS)에 1% DTT를 첨가하여 15분 동안 처리하였고 다시 평형화 완충액에 4% IAA를 첨가하여 30분 동안 평형화 하였다. 평형화가 끝난 IPG strip은 12% 폴리아크릴아마이드젤(polyacrylamide gel)에서 120 V로 전압을 주어 단백질의 분자량에 따라 분리하였다.
각각의 젤은 코마시 블루 R-250을 사용하여 염색하였다. 각각의 영역을 분석하기 위하여 2-DE 젤 분석 소프트웨어인 MelanineTM Ver 6.1(Genebio, Geneva, Switzerland)을 이용하여 분리된 단백질 영역들을 분석하였다.
이후 5% formic acid를 첨가하여 트립신의 작용을 중지시킨 후 60% ACN을 이용하여 펩타이드를 추출하였다. 추출된 펩 타이드들은 감압건조기를 이용하여 완전히 건조시켰고, 분석 직전에 A 완충액(0.1% formic acid)에 녹여 질량분석기로 분석하였다.
Pyruvate carboxylase (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA/USA), argininosuccinate synthase(BD, San Jose, CA/USA), ATP synthase β (Abcam, Cambridge, UK) 등 3종류의 일차항체(primary antibody) 를 각각 1 : 1000으로 희석하여 블롯을 진행하였고 이차항체 (secondary antibody)로 anti-mouse(Cell signaling Technology, Danver, MA)를 1 : 3000으로 희석하여 웨스턴 블롯을 진행하여 단백질의 증감을 확인하였다.
모든 시료는 나노 초 고성능 액체 크로마토그래피와 연결된 질량분석기로 분석하였다. 분석 이전, 모든 시료는 C18 nanocolumn(75 µm id, 150 mm length, 1.
3 µl의 유속으로 1% B 완충액에서 5% B 완충액(5분)으로, 후에 25% B 완충액(10분), 60% B 완충액(30분), 99% B 완충액(35~55분) 로 차례로 증가시킨 후 다시 처음의 농도인 1% B 완충액(60~80분)로 흘려주었다. 분리된 펩타이드들은 순차적으로 nano Ultra Performance Liquid Chromatography(nanoUPLC, Waters Corporation, Manchester, UK)와 연결된 nano-전자분부(ESI) 사 극자(quadrupole) 이온 비행 시간차 분석기(TOF) 질량분석기 (QTOF Premier, Waters Corporation, Manchester, UK)에 의하여 분석이 이루어졌다. 데이터는 충돌관(collision cell)에서 낮은 에너지에서 높은 에너지로 주기적으로 충돌 에너지를 변환 시킬 때 사극자에서 모든 이온을 방출하게 되는 MSE (Expression) mode 로 받았다.
그 결과로 펩타이드가 동시에 용출된 경우라도 모든 검출된 이온의 정보를 얻을 수 있다. 모든 실험 데이터는 Protein Lynx Global Server Ver 2.3(PLGS 2.3, Waters Corporation, Manchester, UK)를 이용하여 데이터를 변 환하였고 IPI rat 3.65 version 으로 단백질을 동정하였다. 데이 터 변환 및 단백질 동정을 위한 파라미터로는 fixed modification 에 carbarmidomethyl C, variable modification 에 oxidation M 을 선택하였고 트립신 missed cleavage는 2개의 조건으로 단백 질을 동정하였다.
65 version 으로 단백질을 동정하였다. 데이 터 변환 및 단백질 동정을 위한 파라미터로는 fixed modification 에 carbarmidomethyl C, variable modification 에 oxidation M 을 선택하였고 트립신 missed cleavage는 2개의 조건으로 단백 질을 동정하였다.
80 V에서 단백질을 분리하였고, 70 V, 1시간 동안 nitrocellulose transfer membrane(Watman, Dassel, Germany) 으로 이동되었다. 비 특이적 결합 방지(blocking)는 TTBS 완충 액(Tris buffer saline(TBS), 0.1% Tween 20)에 5% 탈지분유 (skim milk)를 녹여 1시간 동안 진행하였다. Pyruvate carboxylase (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA/USA), argininosuccinate synthase(BD, San Jose, CA/USA), ATP synthase β (Abcam, Cambridge, UK) 등 3종류의 일차항체(primary antibody) 를 각각 1 : 1000으로 희석하여 블롯을 진행하였고 이차항체 (secondary antibody)로 anti-mouse(Cell signaling Technology, Danver, MA)를 1 : 3000으로 희석하여 웨스턴 블롯을 진행하여 단백질의 증감을 확인하였다.
Pyruvate carboxylase (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA/USA), argininosuccinate synthase(BD, San Jose, CA/USA), ATP synthase β (Abcam, Cambridge, UK) 등 3종류의 일차항체(primary antibody) 를 각각 1 : 1000으로 희석하여 블롯을 진행하였고 이차항체 (secondary antibody)로 anti-mouse(Cell signaling Technology, Danver, MA)를 1 : 3000으로 희석하여 웨스턴 블롯을 진행하여 단백질의 증감을 확인하였다. 또한, Tubulin을 기준으로 단백질 발현양을 평준화 하였고, ECL 솔루션(GE Healthcare, Buckinghamshire, UK)을 이용하여 단백질의 발현양을 탐지하였다.
알도스테론이 처리된 동물모델은 웨스턴 블롯과 혈액 내 전해 질 농도측정을 통해 동물모델을 확인하였다. 알도스테론에 의해 K+는 분비되기 때문에 혈중 K+ 농도는 감소하는 반면, 상피세 포막에서 Na+ 수송에 관여하는 α-ENaC 단백질은 증가하는 것 으로 알려져 있다.
전체 신장 단백질들은 매우 다양하기 때문에 재현성 있는 분을 위하여 본 연구에서는 신장 피질부분만 따로 분리하여 실 험을 진행하였다. 실험에 이용된 이차원 전기영동은 단백질이 가 진 고유의 등전점과 크기에 의해 단백질을 분리하는 기법으로, 다르게 발현된 단백질의 폭넓은 연구가 가능하다는 장점이 있다.
Pyruvate carboxylase, argininosuccinate synthase, ATP synthases subunit β 등 알도스테론에 의해 변화하는 것으로 동 정된 3가지 단백질에 대하여 웨스턴 블롯으로 확인하였다(Fig. 4).
마지막으로, 아미노산 대사에 관여하는 protein disulfide-isomerase A3는 단백질의 접 합에 관여하는 시스테인 잔기 사이의 이황화 결합을 해리시켜 단 백질의 접합을 해리하는 작용을 촉매한다. 이들 동정된 단백질 들 중 증감이 두드러지는 3종류의 단백질을 대상으로 웨스턴 블 롯을 통해 실제로 이차원 전기영동의 결과가 동물모델의 결과와 일치하여 나타나는지를 확인하였다.
대상 데이터
평형화가 끝난 IPG strip은 12% 폴리아크릴아마이드젤(polyacrylamide gel)에서 120 V로 전압을 주어 단백질의 분자량에 따라 분리하였다. 각각의 젤은 코마시 블루 R-250을 사용하여 염색하였다. 각각의 영역을 분석하기 위하여 2-DE 젤 분석 소프트웨어인 MelanineTM Ver 6.
분리된 펩타이드들은 순차적으로 nano Ultra Performance Liquid Chromatography(nanoUPLC, Waters Corporation, Manchester, UK)와 연결된 nano-전자분부(ESI) 사 극자(quadrupole) 이온 비행 시간차 분석기(TOF) 질량분석기 (QTOF Premier, Waters Corporation, Manchester, UK)에 의하여 분석이 이루어졌다. 데이터는 충돌관(collision cell)에서 낮은 에너지에서 높은 에너지로 주기적으로 충돌 에너지를 변환 시킬 때 사극자에서 모든 이온을 방출하게 되는 MSE (Expression) mode 로 받았다. Scan은 0.
이론/모형
신장 피질부에서 얻어진 단백질 층을 이차원 전기영동을 위해 2-DE clean up kit(GE Healthcare, Buckinghamshire, UK)를 이용하여 제조사에서 제공되는 방법에 따라 염을 제거하고 농축하였다. 염이 제거된 시료는 2-DE lysis buffer(7 M urea, 2 M thiourea, 4% CHAPS, 130 mM DTT, 0.
성능/효과
알도스테론은 신장에서 Na+ 재흡수와 K+ 분비 및 수분 조절작용을 하는데, 이러한 작용은 혈압을 조절하고 체수분 및 체내 전해질의 균형을 조절한다.1,2) 이러한 알도스테론의 작용은 상피세포(epitherial cell)에서 채널 단백질(channel protein)들의 발현에 영향을 주어 전해질 및 체수분을 조절하는 것으로 보인다. 알도스테론의 채널 단백질에 대한 작용은 주로 두 가지로 나 누어 볼 수 있는데, 그 중 비지노믹(non-genomic) 작용은 수분에서 수 십분 내에 나타나며 세포 내에서 Diacylglycerol(DAG), PI3K, Ca++ 등 신호전달물질을 증가시켜 채널 단백질을 활성화시키고, 지노믹(genomic) 작용은 수 시간에 걸쳐 일어나는 반응으로 알도스테론 - 알도스테론수용체 복합체(Aldosterone - Aldosterone receptor)가 핵에서 전사 인자로 작용하여 관련 단백질들의 발현양을 증가시키므로 채널 단백질의 양을 증가시킨다.
알도스테론의 채널 단백질에 대한 작용은 주로 두 가지로 나 누어 볼 수 있는데, 그 중 비지노믹(non-genomic) 작용은 수분에서 수 십분 내에 나타나며 세포 내에서 Diacylglycerol(DAG), PI3K, Ca++ 등 신호전달물질을 증가시켜 채널 단백질을 활성화시키고, 지노믹(genomic) 작용은 수 시간에 걸쳐 일어나는 반응으로 알도스테론 - 알도스테론수용체 복합체(Aldosterone - Aldosterone receptor)가 핵에서 전사 인자로 작용하여 관련 단백질들의 발현양을 증가시키므로 채널 단백질의 양을 증가시킨다.3) 특히, 지노믹 작용은 latent, early, late의 세 구간으로 다시 나뉘어지는데, latent 구간에서 다양한 신호 단백질들을 증가시키고, early(1~6 h) 구간에서는 Serum and GlucocorticoidInducible Kinase(Sgk), Kirsten Ras GTP binding protein(KiRas) 등의 단백질 양이 증가되어 채널 단백질들을 활성화시킨다. 마지막으로 late(>6 h) 구간에서는 Epitherial sodium channel(ENaC), Na+/K+ ATPase 등의 채널 단백질(channel protein) 들의 발현양을 증가시켜 Na+와 K+ 및 수분조절작용을 가능하게 한다.
그 결과, 알도스테론 처리 후 혈액 내 K+ 농 도를 측정하였을 때 혈중 K+ 농도는 감소하였고(Table I), 웨스 턴 블롯을 통해 α-ENaC 단백질은 증가하는 것을 확인할 수 있 었다(Fig. 2).
그 결과, 이 차원 전기영동에서 18개의 단백질 영역들이 재현성 있게 2배 이상 차이를 보이는 것으로 나타났다. 그 중 15개의 단백질 영역 이 알도스테론에 의하여 증가하는 것으로 나타났고 3개의 단백 질 영역이 감소하는 것으로 나타났다. 이 18개의 단백질 영역들 은 각각 트립신 절단을 통해 질량분석기로 분석되었고 PLGS 2.
4). Pyruvate carboxylase와 argininosuccinate synthase는 알도 스테론에 의해 신장 피질에서 증가하는 것으로 나타났다. Pyruvate carboxylase의 경우 TCA 회로에서 pyruvate가 TCA 회로 중간 대사산물인 oxaloacetate로 바로 전환시켜주는 효소로써, 미토콘 드리아 내에 존재하는 효소이다.
알도스테론에 의해 변화하는 신장 피질 단백질을 이차원 전기영동을 이용하여 분석한 결과 pyruvate carboxylase와 argininosuccinate synthase가 증가하고, ATP synthases subunit β는 감소하는 것으로 나타났다.
알도스테론에 의해 변화하는 신장 피질 단백질을 이차원 전기영동을 이용하여 분석한 결과 pyruvate carboxylase와 argininosuccinate synthase가 증가하고, ATP synthases subunit β는 감소하는 것으로 나타났다. 이로 미루어 보아 알도스테론이 에너지 대사와 연관성을 가지는 것을 추측할 수 있었고, 이는 알도스테론의 역할을 더욱 폭 넓게 이해하는데 도움을 줄 것이다. 이를 위해 pyruvate carboxylase와 argininosuccinate synthase, ATP synthases subunit β에 대한 더욱 심층있는 연구가 필요할 것으로 사료된다.
1에 의하여 각각 분석되었다. 그 결과, 이 차원 전기영동에서 18개의 단백질 영역들이 재현성 있게 2배 이상 차이를 보이는 것으로 나타났다. 그 중 15개의 단백질 영역 이 알도스테론에 의하여 증가하는 것으로 나타났고 3개의 단백 질 영역이 감소하는 것으로 나타났다.
후속연구
pombe는 핵 내에 스테로이드 수용체(nuclear steroid receptors)가 존재하지 않으므로, 알도스테론에 의한 지노믹 작용보다는 비지노믹 작용에 의해 변화하는 단백질을 주로 연구하 였다. 하지만 좀 더 폭넓은 범위에서 알도스테론의 작용을 연구하려면 동물 모델과 같은 상위 모델에서의 연구가 필요할 것으로 보인다.
16) 이로 미루어 보아 알도스테론 처리 시 에너지 대사와 연관된 단백질들의 발현양이 변화하게 되고 이에 따라 채널 단백질들의 발현양이 변화할 것으로 예상된다. 알도스테론에 의한 이들 단백질들의 증감이 에너지 대사와 관련하여 신장 피질 내에서 어떻게 작용하는지는 앞으로 연구가 더 필요할 것으로 보인다. 또한, 이 연구에서는 이차원 전기영동을 통하여 양적으로 풍부한 단백질들의 증감에 대해 연구하였는데, 이차원 전기영동은 양이 적은 단백질의 경우 동정하기가 어려우므로 상대적으로 적은 양의 단백질들을 동정하기 위해서는 LC-MS/MS를 이용한 분석이 필요할 것으로 보인다.
알도스테론에 의한 이들 단백질들의 증감이 에너지 대사와 관련하여 신장 피질 내에서 어떻게 작용하는지는 앞으로 연구가 더 필요할 것으로 보인다. 또한, 이 연구에서는 이차원 전기영동을 통하여 양적으로 풍부한 단백질들의 증감에 대해 연구하였는데, 이차원 전기영동은 양이 적은 단백질의 경우 동정하기가 어려우므로 상대적으로 적은 양의 단백질들을 동정하기 위해서는 LC-MS/MS를 이용한 분석이 필요할 것으로 보인다.
이로 미루어 보아 알도스테론이 에너지 대사와 연관성을 가지는 것을 추측할 수 있었고, 이는 알도스테론의 역할을 더욱 폭 넓게 이해하는데 도움을 줄 것이다. 이를 위해 pyruvate carboxylase와 argininosuccinate synthase, ATP synthases subunit β에 대한 더욱 심층있는 연구가 필요할 것으로 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
알도스테론은 어떤 것에 의해 분비되나?
무기질코르티코이드(minerallocorticoid)인 알도스테론은 레닌안지오텐신 시스템과 부신피질(adrenal cortex) 호르몬에 의해 분비된다. 알도스테론은 신장에서 Na+ 재흡수와 K+ 분비 및 수분 조절작용을 하는데, 이러한 작용은 혈압을 조절하고 체 수분 및 체내 전해질의 균형을 조절한다.
알도스테론의 역할은?
무기질코르티코이드(minerallocorticoid)인 알도스테론은 레닌안지오텐신 시스템과 부신피질(adrenal cortex) 호르몬에 의해 분비된다. 알도스테론은 신장에서 Na+ 재흡수와 K+ 분비 및 수분 조절작용을 하는데, 이러한 작용은 혈압을 조절하고 체 수분 및 체내 전해질의 균형을 조절한다. 1,2) 이러한 알도스테론의 작용은 상피세포(epitherial cell)에서 채널 단백질(channel protein)들의 발현에 영향을 주어 전해질 및 체 수분을 조절하는 것으로 보인다.
무기질코르티코이드인 알도스테론의 비지노믹작용은 무엇인가?
1,2) 이러한 알도스테론의 작용은 상피세포(epitherial cell)에서 채널 단백질(channel protein)들의 발현에 영향을 주어 전해질 및 체 수분을 조절하는 것으로 보인다. 알도스테론의 채널 단백질에 대한 작용은 주로 두 가지로 나 누어 볼 수 있는데, 그 중 비지노믹(non-genomic) 작용은 수분에서 수 십분 내에 나타나며 세포 내에서 Diacylglycerol(DAG), PI3K, Ca++ 등 신호전달물질을 증가시켜 채널 단백질을 활성화시키고, 지노믹(genomic) 작용은 수 시간에 걸쳐 일어나는 반응으로 알도스테론 - 알도스테론수용체 복합체(Aldosterone - Aldosterone receptor)가 핵에서 전사 인자로 작용하여 관련 단백질들의 발현양을 증가시키므로 채널 단백질의 양을 증가시킨다. 3) 특히, 지노믹 작용은 latent, early, late의 세 구간으로 다시 나뉘어지는데, latent 구간에서 다양한 신호 단백질들을 증가시키고, early(1~6 h) 구간에서는 Serum and GlucocorticoidInducible Kinase(Sgk), Kirsten Ras GTP binding protein(KiRas) 등의 단백질 양이 증가되어 채널 단백질들을 활성화 시킨다.
참고문헌 (16)
Booth, R. E., Johnson, J. P. and Stockand, J. D. : Aldosterone. Avd. Physiol. Educ. 26, 8 (2002).
Verrey, F., Pearce, D., Pfeiffer, R., Spindler, B., Mastroberardino, L., Summa, V. and Zecevic, M. : Pleiotropic action of aldosterone in epithelia mediated by transcription and posttranscription mechanisms. Kidney Int. 57, 1277 (2000).
Geheb, M., Huber, G., Hercker, E. and Cox, M. : Aldosteroneinduced Proteins in Toad Urinary Bladders. Identification and characterization using two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis. J. Biol. Chem. 256, 11716 (1981).
Bindels, R. J., Engbersen, A. M., Hartog, A. and Blazer-Yost B. L. : Aldosterone-induced proteins in primary cultures of rabbit renal cortical collecting system. Biochim. Biophys. Acta. 1284, 63 (1996).
Szerlip, H. M., Weisberg, L., Geering, K., Rossier, B. C. and Cox, M. : Aldosterone-induced glycoproteins: electrophysiologicai-biochemical correlation. Biochim. Biophys. Acta. 940, 1 (1988).
Pisitkun, T., Bieniek, J., Tchapyjnikov, D., Wang, G., Wu W. W., Shen, R. F. and Knepper, M. A. : High-throughput identification of IMCD proteins using LC-MS/MS. Physiol. Genomics. 25, 263 (2006).
Bhmer, S., Carapito, C., Wilzewski, B., Leize, E., Van Dorsselaer, A. and Bernhardt, R. : Analysis of aldosteroneinduced differential receptorindependent protein patterns using 2D-electrophoresis and mass spectrometry. Biol. Chem. 387, 917 (2006).
Kwon, T. H., Nielsen, J., Knepper, M. A., Frokiaer, J. and Nielsen, S. : Angiotensin II AT1 receptor blockade decreases vasopressin-induced water reabsorption and AQP2 levels in NaCl-restricted rats. Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 288, 673 (2005).
Jitrapakdee, S., Nezic, M. G., Cassady, A. I., Khew-Goodall, Y. and Wallace, J. C. : Molecular cloning and domain structure of chicken pyruvate carboxylase. Biochem. Biophys. Res. Commun. 295, 387 (2002).
Jitrapakdee, S., Walker, M. E. and Wallace, J. C. : Identification of novel alternatively spliced pyruvate carboxylase mRNAs with divergent 5'-untranslated regions which are expressed in a tissue-specific manner. Biochem. Biophys. Res. Commun. 223, 695 (1996).
Thomas, D. : Biochemistry for the Medical Sciences. Addison-Westley Publishing (1996).
Nelson, D. L., Cox, M. M. : Amino acid oxidation and the production of urea, in Lehniger Principles of biochemistry (4th ed), Freeman, New York, p. 656 (2005).
Zhang, X., Niwa, H. and Rappas, M. : Mechanisms of ATPases--a multi-disciplinary approach. Curr. Protein. Pept. Sci. 5, 89 (2004).
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.