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문제 정의
- 본 연구에서는 마늘이나 양파 등의 Allium속 채소류의 근권으로부터 미생물을 분리하여 마늘푸른곰팡이 병균에 대한 처리농도별 효과를 구명하였으며, 길항균을 마늘 종구 처리한 후 마늘 저장 중 부패 억제효과와 생육 초기 출현율에 미치는 영향을 조사하였다. 또한 항생제 마커를 선발하여 마늘처리부 위에서의 길항균의 밀도변동을 조사하였고, 실용화 가능성을 검토하기 위하여 시제품을 조제하여 마늘 저장 중 부패억제 효과를 조사하였다.
제안 방법
- Pa59-4의 방제 실용화 가능성을 검토하기 위하여 농약을 제조할 때 증량제로 많이 사용되고 있는 white carbon, pyro- phillite, talc를 첨가하여 시제품을 조제하였다. 시제품은 TSA 에서 고체 배양하여 얻은 Pa59-4 현탁액 (1(产 cfb/ml) 200 ml에 각 증량제 400 旋를 잘 섞고 음건한 후, 블렌더를 이용하여 골고루 마쇄하여 고운 분말가루로 조제하였다.
- 길항균 Pa59-4 시제품 처 리효과. Pa59-4의 방제 실용화를 위하여 TSA 배지상에서 대량으로 배양하여 얻은 Pa59-4 현탁액에 증량제로 white carbon, pyrophillite, talc를 첨가하여 미생물농약 시제품을 만들어 마늘종구에 분의 처리한 후 5개월 동안 저장하면서 부패율을 조사하였다. Pa59-4의 미생물농약 시제품의 처 리효과에 있어서는 pyrophillite나 talc를 첨가하여 만든 시제품에 비하여 white carbon을 첨가하여 조제한 시제품을 처리하였을 때 발병억제 효과가 가장 높았다 (Table 2).
- 그 상처 낸 마늘을 길항균 Pa59-4 현탁액(IO, ~10项 cfb/ml)에 침지한 후 건져서 건조한 다음 상처 주위에 Penicillium hirsutum 포자현탁액을(IO, 포지/ml)을 분무 접종하였다. 발병을 조장하기 위하여 밀폐통 바닥에 물에 적신 키친타올을 깔아 습실을 만들고 접종된 마늘을 넣은 다음 20℃ 배양기에서 14일간 배양한 후 마늘인편상에 형성된 병반직경을 측정하였다.
- 길항균 Pa59-4 처리하였을 때 처리 부위에서의 동태해석을 위한 항생제 marker를 얻기 위하여 pimaricin외 11종의 항생제를 25-100 飓/圳 농도로 처리한 배지상에서 길항균 Pa59-4의 생장을 조사하였다. 항생제 pimaricin과 vancomycin 을 25~100 姆靦 첨가한 배지상에서는 길항균 Pa59-4의 생장이 양호하였으나, 그 밖의 항생제를 첨가한 배지 상에서는 길항균 Pa59-4의 생장이 현저히 억제되었다.
- 길항균 처리농도별 푸른곰팡이병 억제효과 검정방법과 동일하게 마늘인편에 상처를 낸 다음, 상처 난 마늘인편을 길항균 Pa59-4 현탁액(1紡 cfWml)에 침지한 후 건져서 건조하였다. 길항균을 처리한 마늘인편의 다음 상처부위에 Penicillium 行s通期현탁액을 농도별로 101, 102, 103, 104, 105, 106 포자/ml씩 접종하였다.
- 길항균을 처리한 마늘인편의 다음 상처부위에 Penicillium 行s通期현탁액을 농도별로 101, 102, 103, 104, 105, 106 포자/ml씩 접종하였다. 발병을 조장하기 위하여 밀폐통 바닥에 물에 적신 키친타올을 깔아 습실을 만들고 접종된 마늘을 넣은 다음 20℃ 인큐베이터에서 10일간 인큐베이션하면서마늘인편상에 형성된 병반직경을 측정하였다.
- 시기별로 3개의 인편을 꺼내어 상처 처리구는 상처주위를, 무상처는 인편의 임의의 부위를 직경 8 mm 되는 크기로 절단한 후 유발에 넣고 살균수 20 I戒를 첨가한 다음 잘 마쇄하고 희석하여 TSA 배지상에 도말하였다. 도말한 배지는 25 C 에서 2일간 배양한 후 배지상에 형성된 균총수를 조사하였다.
- 항생제 pimaricin과 vancomycin 을 25~100 姆靦 첨가한 배지상에서는 길항균 Pa59-4의 생장이 양호하였으나, 그 밖의 항생제를 첨가한 배지 상에서는 길항균 Pa59-4의 생장이 현저히 억제되었다. 따라서 pimaricin 과 vancomycin을 길항균 Pa59-4의 동태를 추적하기 위한 항생제 마커로 선발하였다. 이들 항생제 마커는 길항균 Pa59-4 가 특정부위에 다른 균들과 섞여 있을 경우에도 Pa59-4만을 효율적으로 선발할 수 있는 지표가 될 수 있을 것으로 판단되었다.
- 따라서 마늘수확 후 푸른곰팡이병 방제를 위한 길항균 Pa59-4 의 적정처리농도를 10 ^10 cfu/i戒로 결정하였다. 푸른곰팡이병이 발병되기 전에는 마늘 표면에서의 푸른곰팡이병균 밀도가 103포자/戒이하일 것으로 추정되므로 마늘 수확 후 길항균 Pa59-4를 처리할 경우 저장 중 부패를 효과적으로 줄일 수 있을 것으로 사료된다.
- 본 연구에서는 마늘이나 양파 등의 Allium속 채소류의 근권으로부터 미생물을 분리하여 마늘푸른곰팡이 병균에 대한 처리농도별 효과를 구명하였으며, 길항균을 마늘 종구 처리한 후 마늘 저장 중 부패 억제효과와 생육 초기 출현율에 미치는 영향을 조사하였다. 또한 항생제 마커를 선발하여 마늘처리부 위에서의 길항균의 밀도변동을 조사하였고, 실용화 가능성을 검토하기 위하여 시제품을 조제하여 마늘 저장 중 부패억제 효과를 조사하였다.
- 마늘 푸른곰팡이병균에 대한 길항균Pa59M의 적정 처리농도를 알아보기 위하여 길항균을 선발할 때 사용한 방법과 동일하게 마늘인편을 차아염소산을 이용하여 표면 살균하여 건조한 후 이쑤시개 5개를 하나로 묶어 마늘 인편에 상처를 내었다. 그 상처 낸 마늘을 길항균 Pa59-4 현탁액(IO, ~10项 cfb/ml)에 침지한 후 건져서 건조한 다음 상처 주위에 Penicillium hirsutum 포자현탁액을(IO, 포지/ml)을 분무 접종하였다.
- 마늘 푸른곰팡이병균에 대한 길항균을 선발하기 위하여 미늘 재배지의 토양, 마늘과 양파의 근권, 저장 중인 마늘과 양파의 표면으로부터 세균을 분리하였다. 토양 시료는 토양 20 g에 물 200 ng을 첨가하여 상온에서 150 rpm으로 진탕한 후 이를 희석하였디.
- 마늘은 껍질을 벗긴 후 1% 차아염소산나트륨에 1시간동안 표면 살균하고 멸균수로 3번 씻어내고 건조시켰다. 마늘에 직경 2 mm, 깊이 1 mm의 구멍을 2개 내고 흘러넘치지 않을 정도로 길항균 현탁액을 구멍에 접종하였다. 약 30분정도 건조 후 구멍에 Penicillium 知祜必/所현탁액이 넘치지 않을 정도로 접종하여 습실 상자에 넣어 20℃ 항온기에 7일간 배양하고 형성된 병반 직경을 측정하여 억제효과가 우수한 균주를 선발하였다.
- 마늘에서 Pa59-4의 정착력을 보기위하여 밀도 변화를 조사하였다. 표면 소독한 마늘인편에 이쑤시개 5개로 상처를 준 처리와 상처를 주지 않은 처리로 구분하여 각각의 마늘을 Pa59-4 현탁액(IO® cfii/ml)에 1시간동안 침지한 후 각각 상온(23℃)과 저온(4℃)에 저장하면서 60일 동안 조사하였다.
- 마늘인편상에서 푸른곰팡이병에 대하여 높은 억제 효과를 보인 S59V균주에 대해서는 그람염색을 하여 음성과 양성으로 구분한 후 Biolog GN plate에 접종하여 영양원(탄소워질소원)의 이용성을 조사하여 동정하였다.
- 마늘종 구가 파종된 포트 상에 병원성이 확인된 푸른곰팡이병균 포자 현탁액(iV 포자/ml)을 포트 당 20 ml씩 관주 접종한 다음 병원균 접종 40일 후에 지상부 및 지하부에 나타난 발병률을 조사하였다.
- 그러나 PCR기법을 이용할 경우 균 검출을 위한 특이 primer 선발이 필요하고 핵산을 증폭하기 위한 기기가 필요한데 반해 본시험에서 선발한 길항균 Pa59-4 균주는 pimaricin이나 vancomycin에 대하여 뚜렷한 저항성을 보이므로 PCR기법을 이용하지 않더라도 항생제 저항성을 이용하여 처리한 부위에서의 밀도변동을 쉽게 확인할 수 있을 것으로 판단되었다. 마늘처리부위에서의 길항균 Pa59-4 의 정착능력을 알아보기 위하여 상처를 낸 마늘과 상처를 내지 않은 마늘 상에 길항균 Pa59-4를 처리하고, 저장온도는 상온(23℃)과 저온(4℃)으로 2수준으로 하여 경과일수별로 60일까지 밀도변화를 조사하였다. 상처를 준 마늘에서는 상온과 저온 모두에서 30일까지 꾸준히 길항균 밀도가 증가하였고, 저장온도간에도 큰 차이를 보이지 않아 처리한 길항균 Pa59-4는 상처부위에서 잘 정착된다는 것을 확인하였다.
- 먹이경합 우수하거나 유도저항성을 일으키는 미생물을 선발하기 위하여 마늘인편상에서 아래와 같은 방법으로 생물검정을 수행하여 병 진전을 억제하는 미생물을 선발하였다. 마늘은 껍질을 벗긴 후 1% 차아염소산나트륨에 1시간동안 표면 살균하고 멸균수로 3번 씻어내고 건조시켰다.
- 그 상처 낸 마늘을 길항균 Pa59-4 현탁액(IO, ~10项 cfb/ml)에 침지한 후 건져서 건조한 다음 상처 주위에 Penicillium hirsutum 포자현탁액을(IO, 포지/ml)을 분무 접종하였다. 발병을 조장하기 위하여 밀폐통 바닥에 물에 적신 키친타올을 깔아 습실을 만들고 접종된 마늘을 넣은 다음 20℃ 배양기에서 14일간 배양한 후 마늘인편상에 형성된 병반직경을 측정하였다.
- 길항균을 처리한 마늘인편의 다음 상처부위에 Penicillium 行s通期현탁액을 농도별로 101, 102, 103, 104, 105, 106 포자/ml씩 접종하였다. 발병을 조장하기 위하여 밀폐통 바닥에 물에 적신 키친타올을 깔아 습실을 만들고 접종된 마늘을 넣은 다음 20℃ 인큐베이터에서 10일간 인큐베이션하면서마늘인편상에 형성된 병반직경을 측정하였다.
- 배지에 생긴 곰팡이 균총을 새로운 PDA 배지에 이식하여 이를 시험 균주로 이용하였다. 접종원은 병원균을 PDA 배지상에 14일간 배양한 후 배지에 20 滅의 멸균수를 첨가하고 부드러운 고무 브러시로 문질러서 병원균 포자를 회수하고 hemacyto- meter로 계수하여 제조하였다.
- 표면 소독한 마늘인편에 이쑤시개 5개로 상처를 준 처리와 상처를 주지 않은 처리로 구분하여 각각의 마늘을 Pa59-4 현탁액(IO® cfii/ml)에 1시간동안 침지한 후 각각 상온(23℃)과 저온(4℃)에 저장하면서 60일 동안 조사하였다. 시기별로 3개의 인편을 꺼내어 상처 처리구는 상처주위를, 무상처는 인편의 임의의 부위를 직경 8 mm 되는 크기로 절단한 후 유발에 넣고 살균수 20 I戒를 첨가한 다음 잘 마쇄하고 희석하여 TSA 배지상에 도말하였다. 도말한 배지는 25 C 에서 2일간 배양한 후 배지상에 형성된 균총수를 조사하였다.
- 마늘에 직경 2 mm, 깊이 1 mm의 구멍을 2개 내고 흘러넘치지 않을 정도로 길항균 현탁액을 구멍에 접종하였다. 약 30분정도 건조 후 구멍에 Penicillium 知祜必/所현탁액이 넘치지 않을 정도로 접종하여 습실 상자에 넣어 20℃ 항온기에 7일간 배양하고 형성된 병반 직경을 측정하여 억제효과가 우수한 균주를 선발하였다.
- 저장중인 마늘에 푸른색 곰팡이 포자가 형성된 부패 마늘을 골라 포자를 루프에 묻힌 후 potato dextrose agar(PDA) 배지에 접종하고 20℃항온기에서 5일간 배양하였다. 배지에 생긴 곰팡이 균총을 새로운 PDA 배지에 이식하여 이를 시험 균주로 이용하였다.
- 상처 주위에 Penicillium hirsutum 현탁액(10, conidia/ml)을 충분하게 분무 접종하였다. 접종된 마늘인편은 발병이 잘되도록 상기한 방법으로 습실을 만들고 20℃ 에서 27일간 배양한 다음 병반직경과 발병률을 조사하여 병 억제 효과를 구하였다. 처리는 구당 30개의 마늘인편을 공시하였으며 2회 반복하여 시험을 수행하였다.
- 배지에 생긴 곰팡이 균총을 새로운 PDA 배지에 이식하여 이를 시험 균주로 이용하였다. 접종원은 병원균을 PDA 배지상에 14일간 배양한 후 배지에 20 滅의 멸균수를 첨가하고 부드러운 고무 브러시로 문질러서 병원균 포자를 회수하고 hemacyto- meter로 계수하여 제조하였다.
- 시제품은 TSA 에서 고체 배양하여 얻은 Pa59-4 현탁액 (1(产 cfb/ml) 200 ml에 각 증량제 400 旋를 잘 섞고 음건한 후, 블렌더를 이용하여 골고루 마쇄하여 고운 분말가루로 조제하였다. 조제 한길 항균 시제품의 효과를 확인하기 위하여 마늘 인편에 시제품을 골고루 잘 묻게 섞어준 후 망사자루에 넣어 바람이 잘 통하는 곳에 매달아 놓고 5개월간 4회에 걸쳐 시제품별 부패율을 조사하였다. 처리구당 시험 마늘 인편은 155개를 공시하였다.
- 처리부위에서의 길항균 Pa59-4의 밀도변동 조사용 marker 를 선발하기 위하여 ttyptic soy agar 배지(TSA)에 피마리신, 반코마이신, 리팜피신, 스펙티노마이 신, 가나마이신, 페니 실린 , 테트라사이클린, 스트렙토마이신, 클로람페니콜, 암피실린을 각각 25, 50, 100 姆I也 농도로 첨가하고 길항균을 배양하여 길항균 Pa59-4의 생장정도를 조사하였다.
- 파속채소 근권 및 근면에서 분리한 미생물을 공시하여 마늘인 편 검정법을 이용하여 3차에 걸쳐 마늘 푸른곰팡이병 발생 억제효과가 우수한 S59-4균주를 선발하였다. 선발된 S59-4균주를 그람 염색한 결과 음성으로 판명되었으며, Biolog GN plate를 사용하여 동정한 결과 Pantoea agglomerans S59-4(Pa59-4)로 최종 동정되었다.
- 포장조건에서 길항균처 리가 생육초기에 푸른곰팡이 병균에 의한 부패억제에 미치는 영향을 검토하기 위하여 마늘 종구를 길항균 Pa59-4 현탁액 (5xl07 cfWn盼에 1시간 동안 침지하여 포트(직경 13 cmx높이 10 cm) 에 파종하였다. 마늘종 구가 파종된 포트 상에 병원성이 확인된 푸른곰팡이병균 포자 현탁액(iV 포자/ml)을 포트 당 20 ml씩 관주 접종한 다음 병원균 접종 40일 후에 지상부 및 지하부에 나타난 발병률을 조사하였다.
- 표면 소독한 마늘인편에 이쑤시개 5개로 상처를 준 처리와 상처를 주지 않은 처리로 구분하여 각각의 마늘을 Pa59-4 현탁액(IO® cfii/ml)에 1시간동안 침지한 후 각각 상온(23℃)과 저온(4℃)에 저장하면서 60일 동안 조사하였다. 시기별로 3개의 인편을 꺼내어 상처 처리구는 상처주위를, 무상처는 인편의 임의의 부위를 직경 8 mm 되는 크기로 절단한 후 유발에 넣고 살균수 20 I戒를 첨가한 다음 잘 마쇄하고 희석하여 TSA 배지상에 도말하였다.
대상 데이터
- 마늘 푸른곰팡이병을 생물적으로 방제하기 위하여 2001년부터 2002년까지 2년에 걸쳐 파속채소의 근권 및 근면으로부터 표면서식미생물 1, 292종을 분리하였다.
- talc를 첨가하여 시제품을 조제하였다. 시제품은 TSA 에서 고체 배양하여 얻은 Pa59-4 현탁액 (1(产 cfb/ml) 200 ml에 각 증량제 400 旋를 잘 섞고 음건한 후, 블렌더를 이용하여 골고루 마쇄하여 고운 분말가루로 조제하였다. 조제 한길 항균 시제품의 효과를 확인하기 위하여 마늘 인편에 시제품을 골고루 잘 묻게 섞어준 후 망사자루에 넣어 바람이 잘 통하는 곳에 매달아 놓고 5개월간 4회에 걸쳐 시제품별 부패율을 조사하였다.
- 조제 한길 항균 시제품의 효과를 확인하기 위하여 마늘 인편에 시제품을 골고루 잘 묻게 섞어준 후 망사자루에 넣어 바람이 잘 통하는 곳에 매달아 놓고 5개월간 4회에 걸쳐 시제품별 부패율을 조사하였다. 처리구당 시험 마늘 인편은 155개를 공시하였다.
- 접종된 마늘인편은 발병이 잘되도록 상기한 방법으로 습실을 만들고 20℃ 에서 27일간 배양한 다음 병반직경과 발병률을 조사하여 병 억제 효과를 구하였다. 처리는 구당 30개의 마늘인편을 공시하였으며 2회 반복하여 시험을 수행하였다.
성능/효과
- 한편 처리한 부위에서의 길항균의 밀도변동을 정확히 추적하기 위하여 PCR기법을 이용하여 16S 또는 16S-23S rRNA의 상동성 분석을 행하기도 한다. 그러나 PCR기법을 이용할 경우 균 검출을 위한 특이 primer 선발이 필요하고 핵산을 증폭하기 위한 기기가 필요한데 반해 본시험에서 선발한 길항균 Pa59-4 균주는 pimaricin이나 vancomycin에 대하여 뚜렷한 저항성을 보이므로 PCR기법을 이용하지 않더라도 항생제 저항성을 이용하여 처리한 부위에서의 밀도변동을 쉽게 확인할 수 있을 것으로 판단되었다. 마늘처리부위에서의 길항균 Pa59-4 의 정착능력을 알아보기 위하여 상처를 낸 마늘과 상처를 내지 않은 마늘 상에 길항균 Pa59-4를 처리하고, 저장온도는 상온(23℃)과 저온(4℃)으로 2수준으로 하여 경과일수별로 60일까지 밀도변화를 조사하였다.
- 마늘푸른곰팡이병균은 저장 중 부패를 일으키고, 파종된 이병 마늘종구는 토양 속에서 대부분 부패되므로 마늘 수량감소에 주 원인이 되고 있다. 길항균 Pa59-4는 수확 후 마늘표면에 처리하였을 때 저장 중 마늘부패를 현저히 억제함은 물론 파종 후 토양 속에서 발생되는 푸른 곰팡이병균에 의한 부패억제 효과도 우수한 것으로 판명되었다.
- 마늘 종구를 길항균 Pa59-4의 현탁액으로 분의 처리하여 파종한 다음 마늘의 출현률을 조사한 결과, 길항균 현탁액을 처리한 시험구에서는 86.7%의 마늘이 출현한 반면 무처리구에서는 단지 23.1%만이 건전하게 생육되는 것으로 나타났다 (Fig. 4). 마늘푸른곰팡이병균은 저장 중 부패를 일으키고, 파종된 이병 마늘종구는 토양 속에서 대부분 부패되므로 마늘 수량감소에 주 원인이 되고 있다.
- 마늘에 상처를 내고 길항균 Pa59-4를 접종한 다음 저온에 저장의 경우 30일 이후부터는 밀도가 더 증가하지 않았으며 상온에 저장할 경우에는 30일 이후 고온성 병원균인 Aspergillus ”/ger가 발생하여 마늘을 급격히 부패시켜 계속적인밀도조사를 할 수 없었다. Kim 등(2000)에 따르면 푸른 곰팡이병원균은 토양 중에 편재하는 병원력이 약한 곰팡이로 수확 후 저장하는 과정에서 마늘의 활력이 떨어지고 상처가 생겼을 때 마늘에 큰 피해를 주는데, 길항균 Pa59-4는 상처 난 마늘에서 잘 정착하고 증식하기 때문에 수확 한 마늘에 길항균 Pa59-4를 처리할 경우 푸른곰팡이병 발생을 현저히 억제할 수 있을 것으로 생각된다.
- 마늘표면에 길항균 Pa59-4를 처리한 다음 푸른 곰 팡 병균을 접종하고 마늘을 저장하면서 길항균 Pa59-4의 발병억제 효과를 60일 동안 2회에 걸쳐 조사한 결과, 발병율과 병 진전을 현저히 억제하는 것으로 나타났다(Table 1).
- 마늘푸른곰팡이병균에 대한 길항균 Pa59-4의 적정처리농도를 구명하기 위하여 푸른곰팡이병균을 103, 104 포자/觇 농도로 접종한 다음 길항균 Pa59-4를 107, 108, 109, 1010 cfW I戒 농도로 접종하였을 때 모든 처리에서 푸른 곰팡이병균에 의한 부패가 현저히 억제되었다(Fig. 1과 Fig. 2).
- 마늘푸른곰팡이병균을 IO, ~I, 포자/觇 농도로 접종하였을 때 길항균 P&59-4의 처리농도가 IO, cfo/mi 이상만 되면 병원균 접종농도에 상관없이 높은 발병억제효과를 보였다. 따라서 마늘수확 후 푸른곰팡이병 방제를 위한 길항균 Pa59-4 의 적정처리농도를 10 ^10 cfu/i戒로 결정하였다.
- 마늘처리부위에서의 길항균 Pa59-4 의 정착능력을 알아보기 위하여 상처를 낸 마늘과 상처를 내지 않은 마늘 상에 길항균 Pa59-4를 처리하고, 저장온도는 상온(23℃)과 저온(4℃)으로 2수준으로 하여 경과일수별로 60일까지 밀도변화를 조사하였다. 상처를 준 마늘에서는 상온과 저온 모두에서 30일까지 꾸준히 길항균 밀도가 증가하였고, 저장온도간에도 큰 차이를 보이지 않아 처리한 길항균 Pa59-4는 상처부위에서 잘 정착된다는 것을 확인하였다. 반면에 무상처 처리구에서는 처리 후부터 15일까지는 길항균 Pa59-4의 밀도가 증가되다가 그 이후에는 상온 및 저온처리 모두 밀도가 감소하였다(Fig.
- 선발된 S59-4균주를 그람 염색한 결과 음성으로 판명되었으며, Biolog GN plate를 사용하여 동정한 결과 Pantoea agglomerans S59-4(Pa59-4)로 최종 동정되었다.
- 시제품 처리 3개월 후에 조사하였을 때 white carbon 시제품 처리구에서의 마늘 부패율은 8.4%인데 비해 무처리구의부패율은 16.8%로 50%의 병 발생억제 효과를 보였고, 5개월 후에는 white carbon 시제품처리구에서의 마늘 부패율이 27.1%인데 반해 무처리구에서는 45.8%로 40.8%의 발병억제 효과를 나타냈다. 이상의 결과로 볼 때 길항균 Pa59-4를 잘 제제화하여 수확한 마늘에 처리할 경우 저장 마늘의 푸른곰팡이병을 효과적으로 억제할 수 있을 것으로 보여 지며, 길항균 Pa59-4의 제제화를 위한 증량제로는 white carbon이 적당한 것으로 사료된다.
- 따라서 pimaricin 과 vancomycin을 길항균 Pa59-4의 동태를 추적하기 위한 항생제 마커로 선발하였다. 이들 항생제 마커는 길항균 Pa59-4 가 특정부위에 다른 균들과 섞여 있을 경우에도 Pa59-4만을 효율적으로 선발할 수 있는 지표가 될 수 있을 것으로 판단되었다. Johnson 등(2000)은 사과와 배 화상병에 방제 효과가 우수한 길항균 Pantoea agglomerans를 처리한 후 꽃에서의 밀도변동을 조사하면서 streptomycin에 저항성인 strain을 이용한 바 있으나 본 시험에 공시한 길항균 Pa59-4균주는 Jolmson등이 사용한 균주와 동일한 종이라 할지라도 strep- tomycin에 대해서는 저항성을 보이지 않았다.
- 8%의 발병억제 효과를 나타냈다. 이상의 결과로 볼 때 길항균 Pa59-4를 잘 제제화하여 수확한 마늘에 처리할 경우 저장 마늘의 푸른곰팡이병을 효과적으로 억제할 수 있을 것으로 보여 지며, 길항균 Pa59-4의 제제화를 위한 증량제로는 white carbon이 적당한 것으로 사료된다. 미생물 농약은 살아있는 미생물에 의해 효과가 발현되는 것이므로 제제화후 제품 중에 미생물 생존 여부가 매우 중요하다.
- 푸른곰팡이 병균의 접종농도별 길항균 Pa59-4 처 리효과를마늘인편을 이용하여 조사한 결과, 푸른곰팡이병균의 포자 접종농도가 IO’ 포자/圳이하일 때에는 높은 발병억제 효과를 보였으며 병원균의 접종농도를 증가시킴에 따라 길항균의 처 리효과는 감소되는 것으로 나타났다(Fig. 3).
- 따라서 마늘수확 후 푸른곰팡이병 방제를 위한 길항균 Pa59-4 의 적정처리농도를 10 ^10 cfu/i戒로 결정하였다. 푸른곰팡이병이 발병되기 전에는 마늘 표면에서의 푸른곰팡이병균 밀도가 103포자/戒이하일 것으로 추정되므로 마늘 수확 후 길항균 Pa59-4를 처리할 경우 저장 중 부패를 효과적으로 줄일 수 있을 것으로 사료된다. Nunes 등(2001, 2002)에 띠르면사과와 배 저장병 방제시 길항균 Pantoea a움glom아'arts를처리했을 때 병 억제 효과는 길항균의 처리농도가 매우 중요한 것으로 보고하였다.
- 생장을 조사하였다. 항생제 pimaricin과 vancomycin 을 25~100 姆靦 첨가한 배지상에서는 길항균 Pa59-4의 생장이 양호하였으나, 그 밖의 항생제를 첨가한 배지 상에서는 길항균 Pa59-4의 생장이 현저히 억제되었다. 따라서 pimaricin 과 vancomycin을 길항균 Pa59-4의 동태를 추적하기 위한 항생제 마커로 선발하였다.
후속연구
- 감염된 마늘을 제외하고는 1。4 포자/畝이하일 것으로 판단되므로 마늘을 수확한 후 길항균 현탁액에 침지 처리하거나 길항균 제제로 종구분의처리하면 소기의 성과를 거둘 수 있을 것으로 사료된다. Nunes 등(2002)도 사과 저장병을 생물적으로 방제하기 위하여 Pantoea 以응glomercms를 처리하면서길 항균의 처리효과는 병원균의 접종농도와 밀접한 관계가 있음을 보고한 바 있다.
- Abadias 등(2001)은 제품의 안정적 보존을 위하여 동결건조하거나 skim milk, galactose, raffinose, sodium glutamate 등을 첨가하여 제품중의 생존력을 증진시킬 수 있음을 보고하였다. 본 연구에서 선발된 길항균 Pa59.4의 실용화를 위해서는 그람 음성균은 내성 포자를 형성하지 않으므로 제제화하게 되면 저장 중 활력이 저하될 수 있으므로 Abdias 등이 한 것처럼 제품 중 균 생존력을 향상시킬 수 있는 안정제에 대한 검토도 필요할 것으로 사료된다. Costa 등(2000)은 Pantoea agglomerans strain CPA-2 를 가지고 제형화를 위한 동결건조를 하면서 길항균 밀도, 보호제 및 배지 등의 효과를 검토하면서 초기밀도를 높게(10'° cfUW)하고 보호제로 설탕을, 건조배지로서 무지방 skim milk를 사용하였을 때 동결과정에서 미생물의 활성을 유지할 수 있음을 보고하였는데, Pa59-4 균주도 긴 기간 활성을 유지하기 위해서는 보호제 및 배지에 대한 검토도 필요할 것으로 사료된다.
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