산거울 추출물의 Elastase 활성 저해 및 Matrix Metalloproteinase-1 발현 억제 효과 Inhibitory Effects of Carex humilis Extract on Elastase Activity and Matrix Metalloproteinase-1 Expression원문보기
본 연구에서는 산거울 추출물의 항주름 활성을 연구하기 위하여 항산화, 엘라스타제 활성 억제, Matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) mRNA 발현 및 단백질의 생성 억제 관련 실험을 진행하였다. 산거울의 뿌리부분을 95 % 에탄올로 추출하고 유기 용매로 분획하여 각 추출물 분획물에 대한 항산화 활성과 엘라스타제 억제 효능을 측정한 결과, EtOAc 분획이 각각 SC50=4.89 ${\mu}g/mL$, IC50=23.5 ${\mu}g/mL$ 로 가장 우수한 결과를 나타내었다. 따라서 활성이 가장 좋은 EtOAc 분획물로 부터 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 활성물질을 분리하고, 분리된 물질이 ${\alpha}$-viniferin임을 분광학적 분석결과로 확인하였다. RT-PCR을 이용한 MMP-1 mRNA 발현능 평가에서 EtOAc 분획물과 ${\alpha}$-viniferin은 각각 50 ~ 60 % (10 ~ 100 ${\mu}g/mL$), 약 60 ~ 75 % (0.5 ~ 2 ${\mu}g/mL$)의 저해효과를 나타내었으며, Western-blot을 이용한 MMP-1 단백질 생성을 평가한 결과에서 역시 EtOAc 분획물과 ${\alpha}$-viniferin은 같은 농도에서 각각 50 ~ 65 %와 55 ~ 65 % 저해 효과를 나타내었다. 결론적으로, ${\alpha}$-viniferin을 함유한 산거울의 EtOAc 분획층의 주름 개선용 기능성 화장품 개발을 위한 소재로 개발 가능성을 확인하였다.
본 연구에서는 산거울 추출물의 항주름 활성을 연구하기 위하여 항산화, 엘라스타제 활성 억제, Matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) mRNA 발현 및 단백질의 생성 억제 관련 실험을 진행하였다. 산거울의 뿌리부분을 95 % 에탄올로 추출하고 유기 용매로 분획하여 각 추출물 분획물에 대한 항산화 활성과 엘라스타제 억제 효능을 측정한 결과, EtOAc 분획이 각각 SC50=4.89 ${\mu}g/mL$, IC50=23.5 ${\mu}g/mL$ 로 가장 우수한 결과를 나타내었다. 따라서 활성이 가장 좋은 EtOAc 분획물로 부터 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 활성물질을 분리하고, 분리된 물질이 ${\alpha}$-viniferin임을 분광학적 분석결과로 확인하였다. RT-PCR을 이용한 MMP-1 mRNA 발현능 평가에서 EtOAc 분획물과 ${\alpha}$-viniferin은 각각 50 ~ 60 % (10 ~ 100 ${\mu}g/mL$), 약 60 ~ 75 % (0.5 ~ 2 ${\mu}g/mL$)의 저해효과를 나타내었으며, Western-blot을 이용한 MMP-1 단백질 생성을 평가한 결과에서 역시 EtOAc 분획물과 ${\alpha}$-viniferin은 같은 농도에서 각각 50 ~ 65 %와 55 ~ 65 % 저해 효과를 나타내었다. 결론적으로, ${\alpha}$-viniferin을 함유한 산거울의 EtOAc 분획층의 주름 개선용 기능성 화장품 개발을 위한 소재로 개발 가능성을 확인하였다.
In order to evaluate anti-wrinkle activity of Carex humilis extract, free radical scavenging activity, elastase inhibitory activity and reduction of expression Matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) mRNA and MMP-1 protein were investigated. The roots of Carex humilis were extracted with 95 % ethanol and...
In order to evaluate anti-wrinkle activity of Carex humilis extract, free radical scavenging activity, elastase inhibitory activity and reduction of expression Matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) mRNA and MMP-1 protein were investigated. The roots of Carex humilis were extracted with 95 % ethanol and successively partitioned with organic solvents with increasing polarity of the solvents. Each fraction of organic solvent were investigated by using free radical scavenging activity and elastase inhibitory activity test. Among them, EtOAc fraction showed antioxidant activity ($SC_{50}$=4.89 ${\mu}g/mL$) and elastase inhibitory activity ($IC_{50}$=23.5 ${\mu}g/mL$). EtOAc fraction was developed on silica gel by open-column chromatography and consecutively re-developed on C18 resin by prep-HPLC to give ${\alpha}$-viniferin as a major component, which was confirmed by spectrometric analysis. In the assay on expression of MMP-1 mRNA by RT-PCR and protein by western-blot, EtOAc layer (10 ~ 100 ${\mu}g/mL$) was reduced about 50 ~ 60 %, 50 ~ 65 % respectively and ${\alpha}$-viniferin (0.5 ~ 2 ${\mu}g/mL$) was inhibited about 60 ~ 75 %, 55 ~ 65 % respectively in human fibroblast. Therefore, our findings suggest that EtOAc layer of Carex humilis containing ${\alpha}$-viniferin can be useful as an active ingredient for cosmeceuticals of anti-wrinkle effects.
In order to evaluate anti-wrinkle activity of Carex humilis extract, free radical scavenging activity, elastase inhibitory activity and reduction of expression Matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) mRNA and MMP-1 protein were investigated. The roots of Carex humilis were extracted with 95 % ethanol and successively partitioned with organic solvents with increasing polarity of the solvents. Each fraction of organic solvent were investigated by using free radical scavenging activity and elastase inhibitory activity test. Among them, EtOAc fraction showed antioxidant activity ($SC_{50}$=4.89 ${\mu}g/mL$) and elastase inhibitory activity ($IC_{50}$=23.5 ${\mu}g/mL$). EtOAc fraction was developed on silica gel by open-column chromatography and consecutively re-developed on C18 resin by prep-HPLC to give ${\alpha}$-viniferin as a major component, which was confirmed by spectrometric analysis. In the assay on expression of MMP-1 mRNA by RT-PCR and protein by western-blot, EtOAc layer (10 ~ 100 ${\mu}g/mL$) was reduced about 50 ~ 60 %, 50 ~ 65 % respectively and ${\alpha}$-viniferin (0.5 ~ 2 ${\mu}g/mL$) was inhibited about 60 ~ 75 %, 55 ~ 65 % respectively in human fibroblast. Therefore, our findings suggest that EtOAc layer of Carex humilis containing ${\alpha}$-viniferin can be useful as an active ingredient for cosmeceuticals of anti-wrinkle effects.
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문제 정의
선행 연구에서는 산거울 추출물과 이것에서 분리한 αviniferin에 대한 연구 중에서 성분과 작용에 대한 연구는 보고되어 있으나, 주름 관련 유전자인 MMP-1의 발현 및 생성에 대한 산거울 추출물과 이것에서 분리한 αviniferin의 영향을 평가한 연구는 아직까지 보고되어 있지 않다. 따라서 본 연구에서는 화장품 원료로서 사용 가능한 산거울 추출물을 제조하여 이들 추출물(혹은 분획) 의 MMP-1의 발현 저해능력을 측정하여 항주름 효과를 측정하고 항주름 화장품 소재로서의 개발 가능성이 있는지를 검토하였다.
제안 방법
cells/dish의 농도로 60 mm cell culture dish에 24 h 배양하였다. 24 h 후 배지를 제거하고 phosphate buffered saline (PBS)으로 세척하여 배지의 serum 성분 제거 후 PBS 3 mL을 넣어 6 J/cm2 UVA를 조사하였다. UVA 조사 후 serum-free 배지로 교체하고 시험품을 처리하여 24 h 배양하였다.
Hatano 등의 방법을 변용하여[17] 0.2 mM 의 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) 용액 0.5 mL에 시료를 농도별로 1 mL을 첨가하고, Voltex mixer로 10 s 간 진탕 후 상온에서 10 min 간 반응시킨 후, 520 nm 에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조물로는 ellagic acid를 조제 하여 측정하였다.
정량 후 1 µg의 total RNA를 Allin-one RT-PCR kit를 사용하여 MMP-1과 β-actin의 RT-PCR를 수행하였으며, 반응 조건은 MMP-1은 95 ℃ 1 min, 48 ℃ 1 min, 72 ℃ 1 min, 25 cycles이고, β-actin은 95 ℃ 1 min, 62 ℃ 1 min, 72 ℃ 1 min, 25 cycles로반응시켰다. RT-PCR product는 2 % (w/v) agarose gel 에 전기 영동하여 image analysis system으로 결과를 정량하였으며, 발현률은 UVA만을 처리한 대조군과 비교하여 백분율로 나타내었다.
흡광도 측정은 Tecan사(Austria)의 Infinity M200 microplate reader (Tecan, Switzerland)를 사용하여 측정 하였다. RT-PCR은 SuperBio사(Korea)의 All-in-one RT-PCR Kit (P7004)를 하였으며, Western blot을 위해 Bio-Rad (USA)의 western blot kit 및 semi-dry transfer system을 사용하였고 image analysis system (Bio-rad, USA)으로 결과를 확인하였다. 항체는 Santa Cruz Biotech (USA)에서 구입하였다.
RT-PCR을 사용하여 MMP-1 발현의 확인을 위하여 UVA를 조사하여 24 h 배양한 세포로부터 TRIzol regent를 이용한 phenol-chloroform 추출 방법으로 total RNA를 분리하였다. 정량 후 1 µg의 total RNA를 Allin-one RT-PCR kit를 사용하여 MMP-1과 β-actin의 RT-PCR를 수행하였으며, 반응 조건은 MMP-1은 95 ℃ 1 min, 48 ℃ 1 min, 72 ℃ 1 min, 25 cycles이고, β-actin은 95 ℃ 1 min, 62 ℃ 1 min, 72 ℃ 1 min, 25 cycles로반응시켰다.
2 mm, Japan)을 사용하였다. UV 측정은 UV500 (Perkinelmer, USA)을 사용하였고, IR은 FTS3000 (BIO RAD ; USA)을 사용하였으며, 구조분석은 500 MHz NMR spectroscopy (BURKER; Australia)로 측정하였다. LC-Mass는 HEWRETT PACKARD 8453 Spectrophotometer (Varian, USA)를 사용하여 positive ESI로 분석하였다.
산거울 추출물을 제조하여 각각의 분획물의 항산화 효능과 엘라스타제 활성 억제 효능을 측정한 결과, EtOAc 분획물에서 강한 활성을 보였다. 강한 활성을 보이는 EtOAc 분획물을 HPLC를 통하여 대략적인 성분들을 확인하고 많은 양을 차지하는 피크를 선별하여 분리/정제하였다. 이렇게 얻어진 α-viniferin을 이후 MMP-1 mRNA 발현 및 단백질 생성 억제 실험에 사용하였다.
건조한 산거울(Carex humillis) 뿌리를(41 kg) 95 %에탄올에 침적하여 상온에서 10일간 추출하였다. 추출이 끝난 후 추출액을 농축하여 농축물 0.
88 kg을 획득하였다. 농축물을 10 L 정제수에 분산시키고 MC, EtOAc, BuOH 순서로 분획하여 각각 MC층 0.02 kg, EtOAc층 0.48 kg, BuOH층 0.09 kg, 정제수층 0.29 kg을 얻었다.
정량 후 1 µg의 total RNA를 Allin-one RT-PCR kit를 사용하여 MMP-1과 β-actin의 RT-PCR를 수행하였으며, 반응 조건은 MMP-1은 95 ℃ 1 min, 48 ℃ 1 min, 72 ℃ 1 min, 25 cycles이고, β-actin은 95 ℃ 1 min, 62 ℃ 1 min, 72 ℃ 1 min, 25 cycles로반응시켰다. RT-PCR product는 2 % (w/v) agarose gel 에 전기 영동하여 image analysis system으로 결과를 정량하였으며, 발현률은 UVA만을 처리한 대조군과 비교하여 백분율로 나타내었다.
203± 2 nm, 287 ± 2 nm에 나타났다. 브롬화칼륨정제법에따라 적외선을 측정할 때 파수 3,308, 1,590, 1,504, 1,436, 1,350, 1,218, 1,165, 1,109 및 817 cm-1 부근에서 흡수하였다. LC-MS로 측정한 결과 m/z = 679 [M+H], 678[M]로 확인 되었으며 1 H-NMR과 13C-NMR 자료는 이미 보고된 자료와 동일한 것을 확인 하였다[15,16].
산거울 뿌리 95 % 에탄올 추출물과 용매 극성을 변화시키며 추출한 유기용매 분획물을 항산화 활성과 엘라스타제 억제 효능을 측정한 결과, EtOAc 분획물이 가장 활성이 뛰어남(SC50= 4.89 µg/mL, IC50 = 23.5 µg/mL)을 확인하고, 활성 성분 규명을 위하여 활성에 따른 분획을 추적하여 단일 물질을 분리하고, 분광학적 분석법을 통하여 α-viniferin 임을 확인하였다.
산거울 에탄올 추출물의 EtOAc 분획물이 항산화 및 엘라스타제 활성 억제 효과가 가장 우수하였기 때문에, EtOAc 분획물과 EtOAc 분획물의 지표물질인 α-viniferin에 대한 사람의 피부 세포에서의 항주름 효과를 조사하였다.
산거울 추출물의 항주름 활성을 연구하기 위하여 항산화, 엘라스타제 활성 억제, MMP-1 mRNA 발현 및 단백질의 생성 억제 관련 실험을 진행하였다. 산거울 뿌리 95 % 에탄올 추출물과 용매 극성을 변화시키며 추출한 유기용매 분획물을 항산화 활성과 엘라스타제 억제 효능을 측정한 결과, EtOAc 분획물이 가장 활성이 뛰어남(SC50= 4.
색보정은 N-succinyl-(Ala)3-p-nitroanilide가 용해된 완충용액 대신 123.2 mM Tris-Cl 완충용액 1,300 mL를 첨가하며, 실험군과 동일한 농도의 시료를 첨가하였다.
037 u/mL양의 elastase 수용액)을 100 mL 첨가하여 25 ℃ 수욕상에서 10 min 간 반응시켜 UV-Visible spectrum 410 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조구로는 oleanolic acid를 조제하여 측정하였다. 각 시료의 억제 작용은 SC50치 (N-Succinyl-(Ala)3-p-nitroanilide를 N-succinyl-(Ala)3와 p-nitroanilide로 분해되는 것을 50 %로 억제하는데 필요한 µg/mL 농도)로 나타내었다.
5 mL에 시료를 농도별로 1 mL을 첨가하고, Voltex mixer로 10 s 간 진탕 후 상온에서 10 min 간 반응시킨 후, 520 nm 에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조물로는 ellagic acid를 조제 하여 측정하였다. 각 시료의 항산화작용은 SC50치(scavenging concentration50: DPPH 라디칼 형성을 50 %로 억제하는 데 필요한 µg/mL 농도)로 나타내었다.
주름 관련 유전자인 MMP-1의 발현 및 생성에 대한 EtOAc 분획물 및 그의 지표물질인 α-viniferin의 영향을 평가하기 위해 사람 섬유아세포를 이용하여 RT-PCR과 Western blot을 실시하였다.
초기 분리에는 silica gel (Fuji, Japan)를 사용하였고, α-viniferin 함량 분석과 정제에는 HPLC (10A, SHIMADZU SCC, JAPAN) 시스템을 사용하였다.
사람 섬유아세포(CRL-2076)는 American Type Culture Collection (ATCC, USA)로부터 구입하였으며, 세포배양에 필요한 배지 및 시약은 Invitrogen (USA), Sigma (USA), Nunc (USA)로부터 구입하여 사용하였다. 흡광도 측정은 Tecan사(Austria)의 Infinity M200 microplate reader (Tecan, Switzerland)를 사용하여 측정 하였다. RT-PCR은 SuperBio사(Korea)의 All-in-one RT-PCR Kit (P7004)를 하였으며, Western blot을 위해 Bio-Rad (USA)의 western blot kit 및 semi-dry transfer system을 사용하였고 image analysis system (Bio-rad, USA)으로 결과를 확인하였다.
대상 데이터
ATCC사로부터 구입한 사람 섬유아세포(CRL-2076) 를 10 % fetal bovine serum (FBS), 1 % penicillinstreptomycin을 첨가한 Iscove's modified Dulbeco's medium (IMDM)으로 세포수가 5 × 105 cells/dish가 되도록 하여 배양하였다.
또한 정제에 사용한 컬럼은 ACE HPLC Column사에서 제조한 ACE 5C18 (250 × 21.2 mm, Japan)을 사용하였다.
cells/dish가 되도록 하여 배양하였다. 배양용기는 100 mm cell culture dish를사용하였으며, 10 ~ 12 mL의 배지로 37 ℃, 포화습도로 유지되는 5 % CO2 배양기에서 단층 배양하였다. 배지는 일주일에 두 번씩 갈아주고, confluency에 도달한 세포는 0.
사람 섬유아세포(CRL-2076)는 American Type Culture Collection (ATCC, USA)로부터 구입하였으며, 세포배양에 필요한 배지 및 시약은 Invitrogen (USA), Sigma (USA), Nunc (USA)로부터 구입하여 사용하였다. 흡광도 측정은 Tecan사(Austria)의 Infinity M200 microplate reader (Tecan, Switzerland)를 사용하여 측정 하였다.
산거울(Carex humillis)은 경동 약업 시장에서 구입한 것으로 음건 후 지상부를 제거한 뿌리 부분만을 사용하였다. 추출 및 분리정제에 사용한 methanol (MeOH), methylene chloride (MC), ethyl acetate (EtOAc), butanol (BuOH), n-hexane은 덕산화학(Korea)에서 생산한 용매를 사용하였고, 정량에 사용한 acetonitrile (MeCN)은 J.
산거울(Carex humillis)은 경동 약업 시장에서 구입한 것으로 음건 후 지상부를 제거한 뿌리 부분만을 사용하였다. 추출 및 분리정제에 사용한 methanol (MeOH), methylene chloride (MC), ethyl acetate (EtOAc), butanol (BuOH), n-hexane은 덕산화학(Korea)에서 생산한 용매를 사용하였고, 정량에 사용한 acetonitrile (MeCN)은 J.T.Baker (USA)의 용매를 사용하였다. 초기 분리에는 silica gel (Fuji, Japan)를 사용하였고, α-viniferin 함량 분석과 정제에는 HPLC (10A, SHIMADZU SCC, JAPAN) 시스템을 사용하였다.
RT-PCR은 SuperBio사(Korea)의 All-in-one RT-PCR Kit (P7004)를 하였으며, Western blot을 위해 Bio-Rad (USA)의 western blot kit 및 semi-dry transfer system을 사용하였고 image analysis system (Bio-rad, USA)으로 결과를 확인하였다. 항체는 Santa Cruz Biotech (USA)에서 구입하였다.
이론/모형
Western blot 방법으로 MMP-1 단백질 발현을 확인하기 위해, UVA를 조사하여 24 h 배양한 세포의 배지를 모아 ultra-filter concentrator로 농축하여 western blot에 사용한다. 단백질 정량은 BCA (SIGMA, USA) 시약을 함께 제공된 메뉴얼 방법에 따라 정량하였으며, 정량된 total protein을 protein electrophoresis system (BIO-RAD, USA)을 이용하여 10 % acrylamide gel에 전기영동한 후 semi-dry 방법으로 PVDF membrane에 전기영동한 단백질을 transfer하였다. 단백질이 transfer된 membrane을 5 % skim milk로 blocking하고 anti-MMP-1 primary antibody로 반응시킨 후 anti-MMP-1을 인지하는 HRP-conjugated anti-rabbit secondary antibody를 처리하여 반응시켰다.
성능/효과
EtOAc 분획층과 α-viniferin의 MMP-1 mRNA 발현 및 단백질 생성을 평가한 결과, EtOAc 분획층은 10 ~ 100 µg/mL 처리시 각각 약 50 ~ 60 %, 50 ~ 65 % 저해 효과를, α-viniferin은 0.5 ~ 2 µg/mL 처리 시 각각 약 60 ~ 75 %, 55 ~ 65 % 저해 효과를 보였다.
주름 관련 유전자인 MMP-1의 발현 및 생성에 대한 EtOAc 분획물 및 그의 지표물질인 α-viniferin의 영향을 평가하기 위해 사람 섬유아세포를 이용하여 RT-PCR과 Western blot을 실시하였다. MMP-1 발현 및 생성을 유도하기 위해 UVA 6J를 조사하였으며, EtOAc 분획물을 처리하여 배양한 결과, EtOAc 분획물은 UVA 대조군과 비교하여 MMP-1 mRNA 발현과 단백질 발현을 유의성 있게 감소시켰다(Figures 3, 4). RT-PCR을 이용한 MMP-1 mRNA 발현 조사에서, EtOAc 분획물은 10µg/mL에서부터 UVA 대조군의 발현량보다 약 50 % 이상 감소시켰으며, 100 µg/mL에서는 약 60 % 이상 감소시켰다.
Western blot을 통한 MMP-1 단백질 생성량 조사 결과, RT-PCR 결과와 비슷한 양상을 보였으며, EtOAc 분획물은 10 ~ 100 µg/mL 처리시 약 50 ~ 65 % 저해율을 보였고, α-viniferin은 0.5 ~ 2 µg/mL 처리시 약 55 ~ 65 % 저해율을 보였다.
먼저 일련의 항주름 실험을 진행하기 위해, 사람 섬유아세포에서 EtOAc 분획물의 세포 독성 시험을 실시한 결과, 시험 농도인 100 µg/mL까지 독성이 없었으며, EtOAc 분획물의 지표물질인 α-viniferin도 시험 농도인 2.0 µg/mL까지 독성이 없음을 확인하였다(Figure 2).
산거울 에탄올 추출물과 각각의 분획물의 엘라스타제 활성 억제 효능을 평가한 결과, 에탄올 추출물과 EtOAc 분획물에서 IC50이 각각 31.2 µg/mL, 23.5 µg/mL으로 나왔으며, 대조구로 사용한 oleanolic acid는 11.85 µg/mL 으로 나왔다.
산거울 추출물을 제조하여 각각의 분획물의 항산화 효능과 엘라스타제 활성 억제 효능을 측정한 결과, EtOAc 분획물에서 강한 활성을 보였다. 강한 활성을 보이는 EtOAc 분획물을 HPLC를 통하여 대략적인 성분들을 확인하고 많은 양을 차지하는 피크를 선별하여 분리/정제하였다.
후속연구
결론적으로, α-viniferin을 함유한 산거울의 EtOAc 분획층의 주름 개선용 기능성 화장품 소재로서의 개발가능성을 확인하였으며, 추후 제형을 통한 임상시험 결과를 진행한다면 기능성 화장품 신소재로 개발할 수 있으리라 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
산거울이란 무엇인가?
산거울(Carex humilis Leyss)은 우리나라 각처의 그늘진 바위틈이나 건조한 숲 속에 나는 사초과의 다년초로 그 종류만 2,000가지 정도가 분포하고 있다. 키는 6 ~ 10 cm, 근경은 굵고 짧으며, 줄기는 적고, 총생이다.
산거울의 특징은 무엇인가?
산거울(Carex humilis Leyss)은 우리나라 각처의 그늘진 바위틈이나 건조한 숲 속에 나는 사초과의 다년초로 그 종류만 2,000가지 정도가 분포하고 있다. 키는 6 ~ 10 cm, 근경은 굵고 짧으며, 줄기는 적고, 총생이다. 잎은 좁고 길며, 길이는 30 cm 정도, 폭은 1 mm 정도 되며, 가장자리는 거칠거칠하고, 짧은 털이 나 있다. 작은 이삭은 2~ 3개, 수꽃 이삭은 1개가 줄기 끝에 붙고, 선상 피침형, 자루가 있으며, 길이 12 mm 정도의 엷은 적갈색이다. 암꽃이삭은 1 ~ 2개가 줄기 옆에 붙고, 선형이며, 길이는3 mm 정도의 적갈색이다. 비늘조각은 타원형으로 끝이 날카롭고 작으며, 가는 까락이 있다. 과낭은 비늘조각보다 매우 짧으며, 암술머리는 3갈래로 갈라진다. 열매는 수과로 길이 2 mm의 세모진 넓은 도란형이다[6].
피부의 노화는 어떻게 나타나는가?
피부의 노화는 주름 증가와 탄력감소, 색소 침착 등의 여러 형태로 나타난다. 그 중 가장 대표적인 노화의 현상은 바로 주름이다.
참고문헌 (18)
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