[논문]꾸지뽕열매 발효 추출물의 항산화 특성과 Elastase 및 Tyrosinase 저해활성

강대훈; 김재원; 윤광섭

doi:10.11002/kjfp.2011.18.2.236

꾸지뽕열매 발효 추출물의 항산화 특성과 Elastase 및 Tyrosinase 저해활성
Antioxidant Activities of Extracts from Fermented Mulberry (Cudrania tricuspidata) Fruit. and Inhibitory Actions on Elastase and Tyrosinase 원문보기

한국식품저장유통학회지 = Korean journal of food preservation, v.18 no.2, 2011년, pp.236 - 243

강대훈 ((주)상로) , 김재원 (대구가톨릭대학교 식품가공학) , 윤광섭 (대구가톨릭대학교 식품가공학)

초록
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발효 꾸지뽕열매의 기능성 소재으로서의 개발 가능성을 알아보고자 70% ethanol 추출물에 대한 항산화 활성과 elastase 및 tyrosinase 저해활성을 측정하였다. 실험군은 꾸지뽕열매 분말 70% ethanol 추출물(ECT), $40^{\circ}C$에서 48시간 발효시킨 분말의 70% ethanol 추출물(FECT), B. lichenifornis 균주로 $40^{\circ}C$에서 48시간 발효시킨 분말의 70% ethanol 추출물(FECTL), B. subtilis 균주로 $40^{\circ}C$에서 48시간 발효시킨 분말의 70% ethanol 추출물(FECTS) 각각을 동결건조하여 실험에 사용하였다. 수율은 ECT, EFCT, EFCTL 및 EFCTS가 각각 54.22%, 54.43%, 57.71% 및 57.23%로 높은 수율을 나타내었으며, 균주 발효 시 증가하는 경향을 보였다. L*, a* 및 b* 값은 발효 처리구에서 감소하였다. Total polyphenol 함량은 ECT 8.13 mg/g (w/w), EFCT 9.53 mg/g (w/w)로 EFCT가 ECT에 비하여 17.22%가 증가하였고, 균주발효군인 EFCTL (11.03 mg/g, w/w) 및 EFCTS (11.90 mg/g, w/w)는 ECT에 비하여 각각 35.67% 및 46.37%가 증가하였다. Total flavonoid 함량 역시 ECT 1.54 mg/g (w/w), EFCT 1.73 mg/g (w/w)로 EFCT가 ECT에 비하여 12.34%가 증가하였으며, EFCTL (1.94 mg/g, w/w) 및 EFCTS (1.85 mg/g, w/w)는 ECT에 비하여 각각 25.97% 및 20.13%가 증가하였다. ABS 라디칼 소거능은 ECT (94.61%), EFCT (95.85%), EFCTL (94.36%), EFCTS (96.69%)로 유사하였다. SOD 유사활성은 ECT (22.00%), EFCT(23.30%), EFCTL (32.60%), EFCTS (27.10%)로 EFCTL에서 높았으며 아질산염소거능에서도 유사한 경향을 나타내었다. Ferrous ion chelating 효과에서는 EFCTL (67.34%) > EFCTS (60.36%) > ECT (52.34%) > EFCT (51.73%) 순이었다. 발효처리군 EFCT, EFCTL 및 EFCTS는 무처리군 ECT에 비하여 xanthine oxidase 저해활성은 각각 9.53%, 38.66% 및 49.78%가, elastase는 19.93%, 86.19% 및 77.60%가, tyrosinase는 23.94%, 89.14% 및 78.86%가 증가하였으며 균주발효군에서 그 활성이 증가하였다. 이상의 결과, 발효 꾸지뽕열매 70% 에탄올 추출물은 항산화활성이 우수하여 기능성 증진용 소재 활용에 효과가 있을 것으로 판단된다.

Abstract ▼ AI-Helper

We evaluated the nutritional value of 70% ethanol extracts (EE) from fermented cudrania tricuspidata fruit (ECT: EE of C. tricuspidata, EFCT: EE of fermented C. tricuspidata, EFCTL: EE of fermented C. tricuspidata by B. licheniformis, EFCTS: EE of fermented C. tricuspidata by B. subtilis) by determined the total polyphenol and flavonoid contents, antioxidant activities, and inhibitory actions on elastase and tyrosinase. The yields of freeze-dried powder of ECT, EFCT, EFCTL, and EFCTS were 54.22%, 54.43%, 57.51%, and 57.23% (each w/w), respectively. The color of $L^*,\;a^*,\;b^*$ values decreased of fermented cudrania tricuspidata. The fermented EFCTL and EFCTS had relatively higher contents of total polyphenol and flavonoid than those of other extracts. ABTS radical scavenging ability were 94.61%, 95.85%, 94.36%, and 96.69%, respectively. SOD (superoxide dismutase)-like activities were in the order EFCT (32.60%) > EFCTS (27.10%) > EFCT (23.30%) > ECT (22.00%), and nitrite scavenging activity was in order of EFCTS (51.18%) > EFCTL (45.61%) > EFCT (41.93%) > ECT (27.76%), respectively. Ferrous ion chelating activity of EFCTL (67.34%) and EFCTS (60.36%) was significantly the highest, whereas ECT (52.34%) and EFCT (51.73%) had not different significantly. Xanthine oxidase, elastase and tyrosinase inhibitory activities at 0.5% (w/v) solutions of EFCTL and EFCTS were somewhat higher than those of non-fermented ECT. In conclusion, we provide experimental evidence that extracts of fermented cudrania tricuspidata of B. subtilis and B. licheniformis exhibited higher antioxidant activities and inhibitory actions on elastase and tyrosinase compared with non fermented cudrania tricuspidata.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

보고된 바 있다 (13). 따라서 본 연구에서는 다양한 효능을 가지는 꾸지뽕의 이용 가치를 향상시키고 아울러 새로운 약리 효과를 기대하기 위하여 다량의 당과 단백질을 함유한 꾸지뽕 열매에 Bacilus subtilis 및 Bacillus lichenlformis로 발효시킨 발효 꾸지뽕 열매의 항산화 활성과 elastase 및 tyrosinase 저해 활성을 측정함으로써 생리활성과 기능성 소재으로서의 개발 가능성을 검토하고자 하였다.

가설 설정

3)Different supeiscripts within a column (a-d) indicate significant differences (p<0.05).

제안 방법

1 mL를 가하였다. 다음에 37°C에서 15분간반응시킨 후 1 N HC₁ 1 mL를 가하여 반응을 종결시킨다음, 반응액 중에 생성된 uric acid의 양을 292 nm에서흡광도를 측정하였으며 계산식, xanthine oxidase inhibitory activity (%) = 100 - [(OD of sample/OD of control) x 100] 에의하여 산출하였다.
4 mL 을 순차적으로 가한 후 실온에서 15분간 방치, 520 nm에서 흡광도를측정흐]였다. 대조구는 Griess reagent 대신 증류수를 사용하였으며 계산식, nitrite scavenging activity(%) = 100 - [(OD of sample/OD of control) x 100]에 의하여 산출하였다.
1 mL를 첨가한 다음 혼합하여 실온에서 10분간 반응시킨 후 562 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조구는 대표적 chelating agent 인 EDTA를 사용하였으며 계산식, ferrous ion chelating effect(%) = 100 - [(OD of sample/OD of control) x 100] 에 의하여 산출하였다.
01 mm polyethylene film을 가볍게 덮어 40t, 상대 습도 90%에서 48시간 발효시켰다. 대조군으로는 플라스틱 용기(50 X 40 X 30 cm)에 꾸지뽕 열매 분말을 15 cm 깊이로 넣은 후 40°C에서 48시간 발효시킨 분말을대조군으로 하여 비교 분석하였다.
발효 꾸지뽕 열매의 기능성 소재으로서의 개발 가능성을알아보고자 70% ethanol 추출물에 대한 항산화 활성과 elastase 및 tyrosinase 저해 활성을 측정하였다. 실험군은 꾸지뽕열매 분말 70% ethanol 추출물(ECI), 40ºC에서 48시간발효시킨 분말의 70% eftanol 추출물(FECI), B.
Korea) 를 사용하여 측정하였다. 색도는 색차계 (Chromameter CR-2(X) Minolta, Tokyo, Japan)로 즉정하였으며, 밝기를 나타내는 L*(lightness), 적색도를 나타내는 a*(redness), 황색도를 나타내는 b*(yellowness) 및 H°(hue angle value)를 측정하였다.
수분 함량은 적외선 수분측정 장치(IRD-250, Woori Sci Co, Korea) 를 사용하여 측정하였다. 색도는 색차계 (Chromameter CR-2(X) Minolta, Tokyo, Japan)로 즉정하였으며, 밝기를 나타내는 L*(lightness), 적색도를 나타내는 a*(redness), 황색도를 나타내는 b*(yellowness) 및 H°(hue angle value)를 측정하였다.
및 tyrosinase 저해 활성을 측정하였다. 실험군은 꾸지뽕열매 분말 70% ethanol 추출물(ECI), 40ºC에서 48시간발효시킨 분말의 70% eftanol 추출물(FECI), B. licheniformis 균주로 40°C에서 48시간 발효시킨 분말의 70% ethanol 추출물(FECTL), B. subtilis 균주로 40°C에서 48시간 발효시킨분말의 70% ethanol 추출물(FECTS) 각각을 동결건조하여실험에 사용하였다. 수율은 ECT, EFCT, ETCTL 및 ETCTS 가 각각 54.
4)로 희석하여 사용하였다. 희석된 용액 950uL에 추출물 50uL를 가하여 암소에서 10분간 방응시킨 후 732 nm에서 흡광도를 측정하였으며 계산식, ABTS radical scavenging ability(%) = 100 - [(OD of sample)O.D. of control) x 100] 에 의하여 활성을 산출하였다.

대상 데이터

발효 꾸지뽕 제조는 각 균주(B. subtilis KCTC 1021, B. lichemqbrmQ를 멸균시킨 Bacto™ trypic soy broth (Becton, Dickison & Co., sparks, MD, USA)에 접종하여 40°C에서 24시간 동안 배양하여 배양액(IO, ceUs/mL)을 제조하였다. 배양액은 원심분리하여 균체를 침전시키고 다시 생리식염수로 씻어내는 작업을 2~3회 반복한 다음 각각의 균주를 0.
본 실험에서 사용된 꾸지뽕(Cwd/rmia tricuspidata) 열매는 X10 년 9월에 경북 경산 진량에서 수확한 열매를 주식회사 상로(Gyeong-san, Korea) 에서 공급받았으며, 꾸지뽕 열매는 동결건조(FD SFDSM12, Samwon, Kcsea)한 다음 균질기 (Nihonseili, Kaisha Ud, Japan) 를 사용하여 80 mesh로 분쇄한 후분말을 제조하여 실험에 사용하였다. 실험에 사용된 모든 시약은 Sigma-Aldrich사(St Louis, MO, USA) 의 제품을 사용하였으며, 균주로는 한국 종균협 회에서 분양받은 Bacillus subtilis KCTC 1021 와 재래청국장으로부터 우수 균주로 선발된 Bacillus licheniformis 균주(12)를 사용하였다.
후분말을 제조하여 실험에 사용하였다. 실험에 사용된 모든 시약은 Sigma-Aldrich사(St Louis, MO, USA) 의 제품을 사용하였으며, 균주로는 한국 종균협 회에서 분양받은 Bacillus subtilis KCTC 1021 와 재래청국장으로부터 우수 균주로 선발된 Bacillus licheniformis 균주(12)를 사용하였다.

데이터처리

모든 실험은 3회 반복으로 행하여 평균치와 표준편차로 나타내었고, 유의성 검증은 version 12의 SPSS (Statistical Package for Social Sciences, SPSS Inc, Chicago, IL, USA) software package program을 이용하여 Duncan's multiple range te머를 행하였다.

이론/모형

Dewanto 등(14)의 방법에 따라 추출물 100 uL에 2% sodium carbonate 2 mL과 50% Folin-Ciacalteu reagent 100 uL을 가한 후 720 nm에서 흡광도를 측정하였으며 gallic acid(Sigma-Aldrich Co, USA)의 검량선에 의하여 함량을 산출하였다.
James (21) 의 방법에 따라 0.2 M tris/HQ buffer용액 (pH 8.0) 1.0 mL에 N-succinyl-(Ala)3-p-nitroaniline (10.4 mM) 0.1 mL 및 추출물(T) 0.1 mL를 가한 후 25 °C에서 5분간반응시 킨 다음 elastase (Pancreatic from porcine pancreas, 3-6 units/mg-protein, EC 3.4.21.36, Sigma, USA, 1 iig/mL) 0.1 mL를 가하여 405 nm에서 0 time에서의 흡광도를 즉정한 후다시 25°C에서 20분간 반응한 후의 흡광도를 측정하였다. 대조군(C)은 시료 대신 buffer 용액을 사용하였다.
Marklund & Marklund (17) 의 방법에 따라 추출물 200 pL에 pH 8.5로 조정한 tris-HQ buffer 용액 3 mL와 7.2 mM pyrogallol 200 pL을 가하고 25ºC에서 10분간 반응시킨 후 1 N HC₁ 1 mL를 가하여 반응을 정지시키고 420 nm에서 흡광도를 측정하였으며 계산식, SOD-like activity%) = 100 - [(OD of sample/OD of control) x 100] 에 의하여 활성을 산출하였다.
Saleh와 Hameed (15) 의 방법에 따라 추출물 IO) mW] 5% sodium nitrite 0.15 mL을 가한 후 25°C에서 6분간 방치 한 다음 10% aluminium chloride 0.3 mL를 가하여 25°C에서 5분간 방치하였다. 다음 IN NaOH 1 mL를 가하고 vortex 상에서 가한 후 510 nm에서 흡광도를 측정하였으며 rutin hydrate (Sigma-Aldrich Co, USA)의 검량선에 의하여 함량을 산출하였다.

성능/효과

31%) 에비하여 유의적으로 높은 활성을 나타내었고 1, 000 mg%에서는 유사하였다. 1, 000 mg%에서의 SOD 유사활성은 EFCTL (32.60%) > EFCTS (27.10%) > EFCT (23.30%) > KT (22.00%) 순으로 EFCTL에서 높은 활성을 나타내었다. 이상의 결과 발효 꾸지뽕 열매 추출물의 phenol성 화합물 및 라디칼 소거 활성의 증진은 발효 중에 생산된 물질에기인된 것으로 사료되며 노화 억제와 함께 산화적 장애를 방어하는 천연물 소재로 활용이 가능할 것으로 사료된다.
1과 같다. ABS 라디칼 소거 활성 및 SOD 유사 활성은 모두 농도증가에 비례하여 활성이 증가되었으며, 500 mg%에서의 ABS 라디칼 소거 능은 균주 발효군인 EFCTL (87.93%) 및 EFCTS (90.01%)가 ECT (77.80%) 및 EFCT (47.31%) 에비하여 유의적으로 높은 활성을 나타내었고 1, 000 mg%에서는 유사하였다. 1, 000 mg%에서의 SOD 유사활성은 EFCTL (32.
13%가 증가하였다. ABS 라디칼 소거능은 ECT (94.61%), EFCT (95.85%), EFCTL (94.36%), EFCTS (96.69%)로 유사하였다. SOD 유사활성은 ECT (22.
10%)로 EFCTL에서 높았으며 아질산염소거능에서도유사한 경향을 나타내었다. Fenous ion chelating 효과에서는 EFCTL (67.34%) > EFCTS (60.36%) > ECT (52.34%) > EFCT (51.73%) 순이었다. 발효 처리군 EFCT, EFCTL 및 EFCTS는 무처리군 ECT에 비하여 xanthine oxidase 저해활성은 각각 9.
80% 이상이 탄수화물 및 단백질로 구성되어 있는 꾸지뽕열매의 경우 비극성 용매에서 잘 용출된 결과로 사료되며⑺, 발효 시효소 가수분해에 따른 수용성 및 지용성 폴리페놀화합물과 방향족 아민 등의 용출이 증가되어 수율이 높게나타난 것으로 판단된다(8). L*, a* 및 b* 값 모두는 발효처리구 EFCT, EFCTB 및 EFCTS 가 대조구 ECT에 비하여감소하는 추세를 보인 반면 H° 값은 높은 경향을 나타내었다. 이는 발효로 인하여 탄수화물과 단백질이 분해되어 생성된 당과 아미노산의 반응인 Maillard 반응의 결과(24)와유사한 경향을 나타내었다.
69%)로 유사하였다. SOD 유사활성은 ECT (22.00%), EFCT (23.30%), EFCTL (32.60%), 파PTS (27.10%)로 EFCTL에서 높았으며 아질산염소거능에서도유사한 경향을 나타내었다. Fenous ion chelating 효과에서는 EFCTL (67.
37%가 증가하였다. Total flavonoid 함량 역시 KT 1.54 mg/g (w/w), EFCT 1.73 mg/g Ww)로 EFCT가 ECT에 비하여 12.34%가 증가하였으며, EFCTL (1.94 mg/g, w/w) 및 EFCTS (1.85 mg/g, w/w)는 :KTT에 비하여 각각 25.97% 및 20.13%가 증가하였다. ABS 라디칼 소거능은 ECT (94.
37%가 증가하였다. Total flavonoid 함량은 ECT 1.54 mg/g (w/w), EFCT 1.73 mg/g (w/w) 로 EFCT가 ECT에 비하여 12.34%가 증가하였으며, ETCTL (1.94 n@g, w/w) 및 EFCTS (1.85 mg/g, w/w)는 ECT에 비하여 각각 25.97% 및 20.13%가 증가하였다. Baek (25)은 B.
L*, a* 및 b* 값은 발효 처리 구에서 감소하였다. Total polyjiienol 함랑은 ECT 8.13 mg/g (w/w), EFCT 9.53 mg/g (w/w)로 EFCT가 ECT에 비하여 17.22%가 증가하였고, 균주발효군인 EFCTL (11.03 mg/g, w/w) 및 ETCTS (11.90 mg/g, wjw)는 ECT에 비하여 각각 35.67% 및 46.37%가 증가하였다. Total flavonoid 함량 역시 KT 1.
ECT, EFCT, EFCTL 및 EFCIS의 total polyphenol 및 total flavonoid 함량을 조사한 결과는 Table 2와 같다. Total polyphenol 함랑은 ECT 8.13 mg/g (w/w), EFCT 9.53 mg/g (w/w)로 발효에 의하여 17.22%가 증가하였고, 균주 발효군인 EFCTL (11.03 mg/g, w/w) 및 EFCTS (11.90 mg/g, w/w)는 ECT에 비하여 각각 35.67% 및 46.37%가 증가하였다. Total flavonoid 함량은 ECT 1.
31%가 증가하였다. Tyrosinase 저해 활성에도 균주 발효군 EFCTL (69.32%) 및 EFCTS (66.12%)가 ECT (37.23%)에 비하여 각각 86.19% 및 77.60%가, EFCT (44.65%)에 비하여 각각 55.25% 및 48.09%가 증가되어 발효 처리시 저해 활성이 증가하는 것으로 나타났다. Hatano 등(33)은 galloyl기를 함유한 flavonoid 화합물이 xanthine oxidase를 경쟁적으로 저해한다고 하여 본 연구에서 균주발효 군에서 저해 활성이 증가한 것은 total polyphenol 및 flavonoid 함량이 증가한 것과 더불어 발효 중에 생산된 물질에 기인된 결과라 사료된다.
3과 같다. Xanthin oxidase 저해 활성에서는 ECT, EFCT, EFCTL 및 EFCTS가 각각 57.94%, 63.46%, 80.34% 및 86.78%로 EFCT는 Ect에 비하여 9.53% 가 증가하였으며 EFCTL 및 EFCTS는 각각 38.66% 및 49.78%가 증가하였다. Elastase 저해활성에는 EFCT (50.
34%) > ETCT (51.73%) 순으로 :BCT 및 ETC! 는 유사한 활성을 나타낸 반면 균주발효군인 EFCTL 및 EFCTS 에서 유의적으로 높은 활성을 나타내었으며, EFCTL에서 가장 높은 활성을 나타내었다. Takashi 등(29)은 polyphenol 과 flavcmoid 화합물은 종류에 따라 차이는 있으나 아질산염을 효과적으로 분해하여 nitrosamine 의 생성을 억제한다는 보고하여 본 연구와 일치하였다.
2와 같다. 모두 농도증가에 비례하여 활성이 증가되 었으며, 1, 000 mg% 에서의 아질산염 소거 능은 EFCTS (51.18%) 그 EFCTL (45.61%) > EFCT (41.93%) > ECT (27.76%) 순으로 EFCTL 및 EFCTS가 ECT에 비하여 각각 64.30% 및 84.37%가, EFCT에 비하여 각각 22.06% 및 8.78%가 증가하였다. 1, 000 mg%에서의 ferrous ion chelating 효과는 EFCTL (67.
94%가 증가하였다. 반면에 균주 발효군 EFCTL (76.49%) 및 EFCTS (72.33%)는 ECT에 비하여 각각 89.14% 및 31.89%가, EFCT에 비하여 각각 52.61% 및 44.31%가 증가하였다. Tyrosinase 저해 활성에도 균주 발효군 EFCTL (69.
73%) 순이었다. 발효 처리군 EFCT, EFCTL 및 EFCTS는 무처리군 ECT에 비하여 xanthine oxidase 저해활성은 각각 9.53%, 38.66% 및 49.78%가, elastase는 19.93%, 86.19% 및 77.60%가, tyrosinase는 23.94%, 89.14% 및 78.86%가 증가하였으며 균주 발효 군에서 그 활성이 월등히증가하였다. 이상의 결과, 발효 꾸지 뽕 열매 70% 에탄올추출물은 항산화 활성이 우수하여 기능성 증진용 소재 활용에 효과가 있을 것으로 판단된다.
수율은 ECT (ethanol extract of C. tricuspidatd), EFCT (thanol extract of ferment^ C. tricuspidata)^ EFCTL (ethanol extract of fermented C. tricuspidata by B. lichemformisj 및 EFCTS(ethanol extract of fermented C. tricuspidata by B. subtilis)^ 각각 54.22%, 54.43%, 57.71% 및 57.23%로 높은수율을 나타내었으며, 균주 발효 시 증가하는 경향을 보였다. 식물성 polyphenolic 화합물들은 수용성 또는 지용성으로 구분되어 있어 추출되는 용매에 따라 그 성분들이 달라지기 때문에 추출 수율에 있어서도 많은 치이를 보인다(23).
subtilis 균주로 40°C에서 48시간 발효시킨분말의 70% ethanol 추출물(FECTS) 각각을 동결건조하여실험에 사용하였다. 수율은 ECT, EFCT, ETCTL 및 ETCTS 가 각각 54.22%, 54.43%, 57.71% 및 57.23%로 높은 수율을나타내었으며, 균주 발효 시 증가하는 경향을 보였다. L*, a* 및 b* 값은 발효 처리 구에서 감소하였다.

후속연구

한편 ferrous ion chelating 효과에서 EFCTL 이 EFCTS 에 비하여 높은 활성을 나타내는 것은 금속이온을 제거할 수 있는 물질과 radical을 제거할 수 물질이 다르기 때문이라 판단된다(30). 따라서 발효 꾸지뽕 열매 추출물은 체내에 생성된 Fe2+를 효과적으로 제거시킬 수 있는 천연물로 활용할 수 있을 것으로 사료된다.
따라서 이는 미생물 또는 균사체로 발효시킬 시세포독성 경감, tyrosinase 및 elastase 활성을 저해 활성이 증진됨을 시사한다. 이상의 결과 발효 꾸지 뽕열매 추출물은 다양한 항산화 활성 증대 효과를 나타냄으로써 산화적손상 예방 소재 개발에 활용 가치가 있다고 사료되며, 또한 기능성 화장품의 소재로 다양한 분야에서 활용가치가 있을 것으로 기대된다.
00%) 순으로 EFCTL에서 높은 활성을 나타내었다. 이상의 결과 발효 꾸지뽕 열매 추출물의 phenol성 화합물 및 라디칼 소거 활성의 증진은 발효 중에 생산된 물질에기인된 것으로 사료되며 노화 억제와 함께 산화적 장애를 방어하는 천연물 소재로 활용이 가능할 것으로 사료된다.
86%가 증가하였으며 균주 발효 군에서 그 활성이 월등히증가하였다. 이상의 결과, 발효 꾸지 뽕 열매 70% 에탄올추출물은 항산화 활성이 우수하여 기능성 증진용 소재 활용에 효과가 있을 것으로 판단된다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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