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문제 정의
- 본 연구에서는 고로쇠 일반 열수 추출물의 나노 입자화를 통해 생체적용성이 향상된 나노입자 제조를 통하여 항산화 활성 및 항암 활성 실험을 진행하였다. 나노입자는 인체에 쉽게 침투할 수 있으며 순환을 통하여 각기 다른 신체 부위에 전달되며, 혈액 내에서 더욱 긴 순환 시간을 갖는 것이 밝혀 졌다.
- 본 연구에서는 천연 고로쇠 수피 수용성 추출물 및 이들 수용성 추출물의 나노입자화를 통하여 항산화 활성을 분석하였고, 항산화력과 항암활성이 밀접하게 연관되어있다는 연구들(안덕호 등, 2006; 이세진 등, 2003)에 근거하여 추출물의 나노입자화를 통한 항암활성 증진 효과에 대하여 연구하였다.
제안 방법
- 견고하게 형성된 나노입자 내부의 수용성 추출물과 외부의 고분자 소재를 분리하기 위해서 Sephadex G-75 gel (SIGMA, USA) 크로마토그래피를 이용하여 특정 fraction 을 모았다. 나노입자는 모두 22, 000 rpm에서 30분 동안 초 원심분리 한 후, 침 전만을 분리해 99.
- 고로쇠 일반 열수 추출물과 이들 나노입자의 농도를 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 그리고 1.0 mg/mL로 조절하여 인간 정상 폐 세포인 HEL299에 대한 세포독성을 측정하였다(Figure 4). HEL299에 대한 세포독성 실험 결과 일반 열수 추출물과 나노입자 모두 농도가 증가할수록 세포 독성 또한 증가하는 경향을 나타내었고, 1.
- 고로쇠 수피 열수 추출 시료 50 mg을 1 mg/mL 의 농도로 증류수에 녹이고, 둥근바닥플라스크에 식용 가능 소재인 gelatin 50 mg을 chloroform (minimum, 99%, USA)에 녹여 감압기를 사용해 chloroibrm을 제거하면서 , multilayer를 형성시 킨다. 그 후 질소가스를 사용하여 유화제를 완전히 건조시킨 후 건조된 layer가 형성된 둥근바닥플라스크에 고로쇠 수피 열수 추출 시료를 1 mg/mL의 농도로 녹인 sample을 넣고, 초음파 분산기(VCX-500, Sonics & Materials, CT, USA)를 이용하여 상온에서 2시간 동안 균질화시켜 수용성 나노입자를 제조하였다(Kang et al., 2005).
- 8) solution 과 나노입자화된 시료를 1:1의 비율이 되도록 섞어주어 한 시간 동안 염색시킨 후, fbrmvar와 carbon film이 코팅되어 있는 copper grid 위에 얇게 올려 말린 뒤 EF-TEM(Energy-filtering Transmission Electron Microscope, Carl Zeiss, Germany)으로 120 kV에서 관찰하였다(권민철 등, 2008). 그리고 다중 형광 염색법(박현정 등, 2007)을 이용하여 살아있는 나노입자화된 추출물이 세포 속으로 들어가는 모습을 1시간 동안 5분 간격으로 Multi-photon Confocal Laser Scanning Microscope(X 500) 촬영하였다.
- 전자공여능(%)은 [(l-As/Ac) xl00]으로나타내었고, As와 Ac에 실험군과 대조군의 흡광도 값을 각각 대입하여 계산하였다. 그리고 항산화제인 butylated hydroxy anisole (BHA)의 활성을 조사하여 본 실험의 주출물과의 비교를 실시 하였다.
- Instrument Co)를 이용하였다. 또한 제조된 나노입자의 형태 관찰을 위해 0.1% phosphotungstic acid (pH 6.8) solution 과 나노입자화된 시료를 1:1의 비율이 되도록 섞어주어 한 시간 동안 염색시킨 후, fbrmvar와 carbon film이 코팅되어 있는 copper grid 위에 얇게 올려 말린 뒤 EF-TEM(Energy-filtering Transmission Electron Microscope, Carl Zeiss, Germany)으로 120 kV에서 관찰하였다(권민철 등, 2008). 그리고 다중 형광 염색법(박현정 등, 2007)을 이용하여 살아있는 나노입자화된 추출물이 세포 속으로 들어가는 모습을 1시간 동안 5분 간격으로 Multi-photon Confocal Laser Scanning Microscope(X 500) 촬영하였다.
- 또한, 혈청은 fetal bovine serum과 horse serum을 이용하였고 gentamycin sulfate, trypsin-EDTA를 배지 제조 시 사용하였다.
- 본 실험에서 나노입자화를 통한 생체활용성 증진 효과의 탐색을 위해 고로쇠 추출물을 이용해 nanoparticle을 제조하였다. 고로쇠 수피 열수 추출 시료 50 mg을 1 mg/mL 의 농도로 증류수에 녹이고, 둥근바닥플라스크에 식용 가능 소재인 gelatin 50 mg을 chloroform (minimum, 99%, USA)에 녹여 감압기를 사용해 chloroibrm을 제거하면서 , multilayer를 형성시 킨다.
- 실온에서 음건 시킨 후 분쇄기로 분말화한 후 수직 환류 냉각기가 부착된 추출 플라스크에 시료와 시료 중량의 1(배수의 증류수를 용매로 넣고 100。(:에서 12시간 씩 2회 반복 추출을 시행하였다. 상기와 같은 열수 추출공정으로부터 얻어진 각각의 추출물을 감압농축기 (ratary vacuum evaporator N-N series, Eyela, Tokyo, Japan)를 이용하여 여과, 농축한 뒤 동결건조를 통해 용매를 완전히 제거하여 건조한 Powder 상태로 제조하여 본 실험에 사용하였다.
- 실험 대상 세포의 농도를 4* -5x10 cells/mL 으로 96 well plate의 각 well에 100 卩L 씩 첨가하여 24시간 동안 배양(371 5% CO)한 후, 각각의 시료를 최종농도 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 그리고 1.0 mg/mL로 100 卩L 씩 첨가하여 48시간 배양하였다. 배양이 완료된 후에 상등액을 제거하고 차가운 10%(w/v)TCA(trichloroacetic acid) 100 卩L를가하여 4。(:에서 1시간 동안 방치한 후 증류수로 5회 세척하여 TCA를 제거하고 실온에서 plate를 건조한 뒤 각 well 에 l%(v/v) acetic acid에 녹인 0.
- 2 의 총 페놀 함량과 86%의 높은 라디칼 소거활성을 나타내었고, 대장암 암세포주인 HT- 29와 유방암 암세포주 MCF-7에 대한 암세포 성장 억제 효과가 각각 51%, 40%의 활성을 나타내었다. 이와 같은 항산화 활성과 항암활성 선행 연구 결과들을 바탕으로 하여 인간 암세포주(MCF-7, AGS, A549 그리고 Hep3B)에 대한 항암 활성을 측정하였다. 그 결과 모든 암세포에서 나노 입자화를 통해 일반 열수 추출물보다 약 10% 이상 활성 이 증진된 결과를 확인할 수 있었고, 특히 소화기 계통의 암세포인 인간 위암세포(AGS)와 인간 간암세포(Hep3B) 에서 나머지 암세포주 보다 높은 암세포 억제 활성을 나타내는 것을 알 수 있었다.
- 5% ethanol (SIGMA, USA)과 1:1 (v/v) 또는 acetone(SIGMA, USA)로 혼합하여 녹였다. 이후 0.2 pim의 필터로 필터링 하여 나노입자를 고분자와 최종 분해시켜 HPLC 분석을 하였다. 천연 추출물의 유용성분 분석을 위해서 C18 column(l 50 mm x 4.
- 2 pim의 필터로 필터링 하여 나노입자를 고분자와 최종 분해시켜 HPLC 분석을 하였다. 천연 추출물의 유용성분 분석을 위해서 C18 column(l 50 mm x 4.6 mm, Supelco, PA, USA)을 사용하여 Waters (M600E, M7725i, Taxas, USA)로 측정하였다. Figure 2는 위와 같은 방법을 모식도로 표현한 그림 이 다.
- 추출물의 전자공여 작용(electron donating abilities, EDA) 은 각각의 추출물에 대한 DPPH(a, a-diphenyl-picrylhydrazyl) 의 전자공여효과로 각 시료의 환원력을 측정하였다. 즉, 에탄올 1 mL, 시료 10 piL, 100 mM sodium acetate buffer (pH 5.
대상 데이터
- 고로쇠나무의 수피 부위를 사용하였으며, 2010년 3월에 채취한 것을 국립산림과학원으로부터 지원받았다 . 실온에서 음건 시킨 후 분쇄기로 분말화한 후 수직 환류 냉각기가 부착된 추출 플라스크에 시료와 시료 중량의 1(배수의 증류수를 용매로 넣고 100。(:에서 12시간 씩 2회 반복 추출을 시행하였다.
- 대조군으로 합성 항산화제인 BHA(butylated hydroxy anisole)를 사용하였다. 0.
- 세포배양에 필요한 배지로 RPMI 1640과 Dulbecco's Modified Eagle Medium:Nutrient Mixture F-12(D-MEM/ F-12)를 사용하였고, Hepes b* uffer 배지 제조 시 사용하였다. 또한, 혈청은 fetal bovine serum과 horse serum을 이용하였고 gentamycin sulfate, trypsin-EDTA를 배지 제조 시 사용하였다.
- 실험에 이용된 세포주는 인간 위암세포인 AGS(stomach adenocarcinoma, human, ATCC CRL-1739, USA), 인간 폐암 세포인 A549(lung adenocarcinoma, human, ATCC CCL-185, USA), 인간 유방암세포인 MCF-7(breast adenocarcinoma, human, ATCC HTB-22, USA), 인간 간암 세포인 Hep3B(liver adenocarcinoma, human, ATCC HB-8064, USA)를 사용하였고, 시료 자체의 세포 독성을 알아보기 위한 정상세포로는 인간 정상 폐 세포인 HEL299 (Human Embryonic lung, ATCC CCL-137, USA)를 사용하였다.
데이터처리
- 데이터의 통계처리는 각 시료를 3회 반복으로 행해졌으며, 실험값의 통계는 SAS(Statistical Analysis System) 프로그램을 사용하여 평균과 표준편차를 구하여 처 리 하였다.
이론/모형
- SOD 유사활성은 Markhmd와 Markhmd의 방법 (Markhmd and Marklund, 1974)에 따라 과산화수소(^0)로 전환 반응을 촉매하는 pyrogallol^] 생성 량을 측정 하여 SOD 유사 활성으로 나타내었다. 즉, 일정 농도의 시료 0.
- 고로쇠 수피 수용성 추출물 나노입자의 크기와 균일성, 크기별 분포 측정을 위해 DLS(Dynamic light scattering, Brookhaven Instrument Co)를 이용하였다. 또한 제조된 나노입자의 형태 관찰을 위해 0.
성능/효과
- 대조군으로 합성 항산화제인 BHA(butylated hydroxy anisole)를 사용하였다. 0.2-1.0 mg/mL의 농도로 실험을 진행한 결과 모든 시료가 농도 의존적으로 활성이 증가하는 경향을 나타내었고, 1.0 mg/mL의 농도에서 합성 항산화제인 BHA가 90.11%로 가장 높은 DPPH radical 소거활성을 나타내었고, 그 다음으로 고로쇠 추출물 나노입자가 73.15%, 고로쇠 일반 열수 추출물이 66.94%를 나타내었다. 나노입자의 경우 BHA보다는 낮은 수치이나 일반 열수 추출물과 비교하여 약 8% 이상 활성이 증진된 결과를 나타내어 추출물의 나노입자화를 통해 DPPH radical 소거활성이 증가된 것을 확인할 수 있다.
- 0 mg/mL로 조절하여 인간 정상 폐 세포인 HEL299에 대한 세포독성을 측정하였다(Figure 4). HEL299에 대한 세포독성 실험 결과 일반 열수 추출물과 나노입자 모두 농도가 증가할수록 세포 독성 또한 증가하는 경향을 나타내었고, 1.0 mg/mL의 농도에서 나노입자가 24.51%로 가장 높은 세포 독성을 나타내었다. 대체적으로 25% 이하의 세포독성을 나타내어 일반 열수 추출물 및 나노입자 모두 세포 수준에서 안전성을 나타냄을 알 수 있었다.
- Hep3B에 대한 암세포 억제 활성이 각각 나노입자의 경우 71.69%, 59.88%, 73.81%를 나타내었고, 일반 열수 추출물의 경우 58.19%, 53, 91%, 65.99%를 나타내어 나노입자가 최고 15%이상 암세포 억제 활성 이 증진된 결과를 나타냄을 알 수 있다. Table 2의 결과를 살펴보면 암세포 종류에 따라 억제 활성이 정도가 크게 차이가 나는 것을 알 수 있는데, 앞의 MCF-7 결과까지 포함하여 비교하여 보면 소화기 계통의 암세포인 AGS와 Hep3B의 암세포에 대한 억제 활성의 경우, 나노입자가 각각 70% 이상의 높은 암세포 억제율을 나타낸 반면, 호흡기 계통의 암세포인 A549 와 내분비계 암세포인 MCF-7의 경우 각각 60% 정도의 억제율을 나타내어 그 차이가 10% 이상 나는 것을 알 수 있다.
- TEM micrograph를 분석한 결과 나노입자가 구형의 모양을 나타내고 있고, 100-200 nm의 크기로 형성된 것을 알 수 있다. 이와 같은 TEM 사진 결과로 미루어 보아 제조된 나노입자는 수용성 추출물을 유상이 포집한 w/o 형태의 에멀젼 형태를 나타냄을 알 수 있다.
- 99%를 나타내어 나노입자가 최고 15%이상 암세포 억제 활성 이 증진된 결과를 나타냄을 알 수 있다. Table 2의 결과를 살펴보면 암세포 종류에 따라 억제 활성이 정도가 크게 차이가 나는 것을 알 수 있는데, 앞의 MCF-7 결과까지 포함하여 비교하여 보면 소화기 계통의 암세포인 AGS와 Hep3B의 암세포에 대한 억제 활성의 경우, 나노입자가 각각 70% 이상의 높은 암세포 억제율을 나타낸 반면, 호흡기 계통의 암세포인 A549 와 내분비계 암세포인 MCF-7의 경우 각각 60% 정도의 억제율을 나타내어 그 차이가 10% 이상 나는 것을 알 수 있다. 또한, 모든 암세포주에서 가장 높은 억제 활성을 나타내었던 1.
- 고로쇠 수피 일반 열수 추출물과 이들 나노입자의 superoxide anion radical 소거능을 즉정한 결과(Table 1) 0.2-1.0 mg/mL의 농도 범위에서 대조군으로 비교한 BHA 의 활성이 가장 높았고, 그 다음으로 나노입자, 일반 열수 추출물 순으로 활성이 높은 것을 확인할 수 있다. 나노입자의 경우 일반 열수 추출물에 비하여 모든 농도에서 높은 활성을 나타내었고, 1.
- 이와 같은 항산화 활성과 항암활성 선행 연구 결과들을 바탕으로 하여 인간 암세포주(MCF-7, AGS, A549 그리고 Hep3B)에 대한 항암 활성을 측정하였다. 그 결과 모든 암세포에서 나노 입자화를 통해 일반 열수 추출물보다 약 10% 이상 활성 이 증진된 결과를 확인할 수 있었고, 특히 소화기 계통의 암세포인 인간 위암세포(AGS)와 인간 간암세포(Hep3B) 에서 나머지 암세포주 보다 높은 암세포 억제 활성을 나타내는 것을 알 수 있었다. 특히 간암세포에 대해 높은 selectivity와 함께 높은 암세포 생육 저해율을 보였는데 간암은 잔존 간 기능과 환자의 활력상태 및 지속적인 관리 등이 치료에 영향을 미치는 중요한 인자로 작용한다는 점에서 다른 암과는 구별되며 종양 특성상 성장과 침윤이 빨라 암화가 상당히 진행된 상태에서의 치료가 어렵다는 특징 이 있다.
- 나노입자 제조 공정을 통해 제조된 나노입자의 형태를 TEM을 이용하여 관찰한 결과 약 100-200 nm의 크기의 구형을 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 나노입자 인간 정상 폐 세포(HEL299)에 대한 세포 독성을 측정한 결과 일반 열수 주줄물과 비교하여 큰 독성을 나타내지 않았고, 일반 열수 추출물 및 나노입자 모두 25% 이하의 독성을 나타내어 정상세포에 대해 안전한 것을 알 수 있었다.
- 94%를 나타내었다. 나노입자의 경우 BHA보다는 낮은 수치이나 일반 열수 추출물과 비교하여 약 8% 이상 활성이 증진된 결과를 나타내어 추출물의 나노입자화를 통해 DPPH radical 소거활성이 증가된 것을 확인할 수 있다. 이는 일반 약용 식물의 항산화 활성 연구 논문(J니ng et al.
- 0 mg/mL의 농도 범위에서 대조군으로 비교한 BHA 의 활성이 가장 높았고, 그 다음으로 나노입자, 일반 열수 추출물 순으로 활성이 높은 것을 확인할 수 있다. 나노입자의 경우 일반 열수 추출물에 비하여 모든 농도에서 높은 활성을 나타내었고, 1.0 mg/mL의 농도에서 32.33%로 최고 약 6% 정도 활성이 증진된 것을 확인할 수 있다. 이는 헛개나무 추출물의 항산화 활성에 관한 연구(이승은 등, 2004)에서 보고된 200 卩g/mL에서의 99.
- 0 mg/mL로 처리한 농도가 높아질수록 암세포 생육 억제활성이 증가하는 경향을 나타내었다. 대부분의 농도에서 나노입자의 암세포 억제 활성이 약 8% 정도 높은 것을 확인할 수 있고, selectivity 또한 나노입자가 2-4의 값을 나타내어 일반 열수 추출물보다 높은 것을 알 수 있다. 특히 , 0.
- 51%로 가장 높은 세포 독성을 나타내었다. 대체적으로 25% 이하의 세포독성을 나타내어 일반 열수 추출물 및 나노입자 모두 세포 수준에서 안전성을 나타냄을 알 수 있었다. 또한 나노입자와 일반 열수 추출물간의 큰 세포독성을 나타내지 않음을 알 수 있는데, 이는 나노입자 제조를 통해 그 크기가 작아짐으로 인한 독성 증가와 같은 부작용이 나타나지 않음을 나타내는 결과라 할 수 있다.
- AGS cell에 나노입자를 처리한 후 5분이 되었을 때는 나노입자가 cell 속으로 침투한 것을 관찰할 수 없으나, 나노입자 처리 시간이 흐를수록 고로쇠 추출물 나노입자가 세포 표면에 존재하다가 나중에는 cell 속으로 침투하는 것을 관찰할 수 있다. 본 연구에서 약 100 nm의 크기로 제조된 나노입자의 경우 세포의 침투성이 일반 열수 추출물에 비해 뛰어난 것을 확인할 수 있으며, 앞의 항산화 활성 이나 항암활성 실험 결과로부터 말미암아 일반 열수 추출물보다 적은 농도, 적은 양으로도 높은 활성 효과를 나타냄을 알 수 있다.
- 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 나노입자 인간 정상 폐 세포(HEL299)에 대한 세포 독성을 측정한 결과 일반 열수 주줄물과 비교하여 큰 독성을 나타내지 않았고, 일반 열수 추출물 및 나노입자 모두 25% 이하의 독성을 나타내어 정상세포에 대해 안전한 것을 알 수 있었다. 이러한 세포독성 실험 결과를 바탕으로 하여 DPPH radical 소거 활성과 SOD 유사활성과 같은 항산화 활성 실험을 진행한 결과 합성 항산화제로 쓰이고 있는 BHA와 비교하여 비슷하거나 조금 낮은 활성을 나타내었고, 일반 열수 추출물에 비 하여 DPPH radical 소거 활성의 경우 약 8%, SOD 유사활성의 경우 약 6% 정도 활성이 증진된 결과를 확인할 수 있었다.
- 이러한 나노입자 인간 정상 폐 세포(HEL299)에 대한 세포 독성을 측정한 결과 일반 열수 주줄물과 비교하여 큰 독성을 나타내지 않았고, 일반 열수 추출물 및 나노입자 모두 25% 이하의 독성을 나타내어 정상세포에 대해 안전한 것을 알 수 있었다. 이러한 세포독성 실험 결과를 바탕으로 하여 DPPH radical 소거 활성과 SOD 유사활성과 같은 항산화 활성 실험을 진행한 결과 합성 항산화제로 쓰이고 있는 BHA와 비교하여 비슷하거나 조금 낮은 활성을 나타내었고, 일반 열수 추출물에 비 하여 DPPH radical 소거 활성의 경우 약 8%, SOD 유사활성의 경우 약 6% 정도 활성이 증진된 결과를 확인할 수 있었다. 이와 같이 항산화에 대한 활성 증진결과를 바탕으로 하여 항산화 활성과 항암 활성 이 밀접하게 관련되어 있다는 선행 연구 결과(안덕호 등, 2006; 이세진 등, 2003)에서도 비단풀 물 추출물의 1, 000 卩g/mL의 농도에서 659.
- 17의 높은 selectivity를 나타내어 특정농도에서 암세포에대한 선택적 사멸이 가능할 것으로 사료된다. 이와 같은 결과는운지버섯 배양 추출물의 생리활성에 관한 연구(이세진 등, 2003)에서 보고된 MCF-7어] 대한 암세포 생육 저해율 실험에서 6.0 mg/mL로 처리하였을 때 82%의 암세포 억제 활성과 비교하여 1.0 mg/mL의 농도에서 보여준 64.18% 의 MCF-7 생육저해 활성이 낮은 세포독성에 비해 높은 암세포 생육저해 활성을 나타낸 것이라 판단되며, 나노 입자화 공정을 통해 암세포 억제활성이 증진된 결과를 확인할 수 있었다.
- 4 ppm을 나타내었다. 이와 같은 결과를 바탕으로 nanoparticle 속에 고로쇠 수피 추출물이 약 65% 정도 봉입된 효율을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
- Selectivity를 나타낸 그림이다. 일반 열수 추출물 및 나노입자 모두 0.2부터 1.0 mg/mL로 처리한 농도가 높아질수록 암세포 생육 억제활성이 증가하는 경향을 나타내었다. 대부분의 농도에서 나노입자의 암세포 억제 활성이 약 8% 정도 높은 것을 확인할 수 있고, selectivity 또한 나노입자가 2-4의 값을 나타내어 일반 열수 추출물보다 높은 것을 알 수 있다.
- 대부분의 농도에서 나노입자의 암세포 억제 활성이 약 8% 정도 높은 것을 확인할 수 있고, selectivity 또한 나노입자가 2-4의 값을 나타내어 일반 열수 추출물보다 높은 것을 알 수 있다. 특히 , 0.6 mg/mL의 농도에서 4.17의 높은 selectivity를 나타내어 특정농도에서 암세포에대한 선택적 사멸이 가능할 것으로 사료된다. 이와 같은 결과는운지버섯 배양 추출물의 생리활성에 관한 연구(이세진 등, 2003)에서 보고된 MCF-7어] 대한 암세포 생육 저해율 실험에서 6.
후속연구
- 특히 간암세포에 대해 높은 selectivity와 함께 높은 암세포 생육 저해율을 보였는데 간암은 잔존 간 기능과 환자의 활력상태 및 지속적인 관리 등이 치료에 영향을 미치는 중요한 인자로 작용한다는 점에서 다른 암과는 구별되며 종양 특성상 성장과 침윤이 빨라 암화가 상당히 진행된 상태에서의 치료가 어렵다는 특징 이 있다. 따라서 간암을 일으키는 요인에 대한 연구와 함께 그에 대한 요인을 선택적으로 조절할 수 있는 치료가 필요하며, Hep3B에 대한 나노입자화 공정을 통한 고로쇠 추출물의 암세포 생육 저해율의 결과 0.6 mg/mL의 농도에서 낮은 정상세포 독성과 함께 높은 selectivity를 나타낸 결과를 바탕으로 고로쇠 추출물의 나노입자화를 통한 항암 소재로서의 활용을 기대할 수 있을 것으로 사료된다.
- Table 2의 결과를 살펴보면 암세포 종류에 따라 억제 활성이 정도가 크게 차이가 나는 것을 알 수 있는데, 앞의 MCF-7 결과까지 포함하여 비교하여 보면 소화기 계통의 암세포인 AGS와 Hep3B의 암세포에 대한 억제 활성의 경우, 나노입자가 각각 70% 이상의 높은 암세포 억제율을 나타낸 반면, 호흡기 계통의 암세포인 A549 와 내분비계 암세포인 MCF-7의 경우 각각 60% 정도의 억제율을 나타내어 그 차이가 10% 이상 나는 것을 알 수 있다. 또한, 모든 암세포주에서 가장 높은 억제 활성을 나타내었던 1.0 n回mL에서의 selectivity보다 0.6 mg/mL에서의 selectivity가 높은 것을 확인할 수 있는데, 이러한 이유는 0.6 mg/mL의 농도에서 매우 적은 세포독성에 비하여 높은 암세포 억제 활성을 보인 결과로 설명될 수 있는데, 이러한 결과를 바탕으로 특정 암에 대해서, 특정 농도로의 조절을 통해 효과적인 암세포 억제 효과를 나타낼 수 있을 것으로 사료되며, 고로쇠 추출물 나노입자의 경우 0.6 mg/mL의 농도로 조절한 시료가 소화기 계통의 암세포에 대해 효율적인 억제 활성을 나타낼 것으로 기대되며 이에 관한 심도 있는 연구가 수반 되어야 할 것으로 사료된다.
- 나노입자의 경우 BHA보다는 낮은 수치이나 일반 열수 추출물과 비교하여 약 8% 이상 활성이 증진된 결과를 나타내어 추출물의 나노입자화를 통해 DPPH radical 소거활성이 증가된 것을 확인할 수 있다. 이는 일반 약용 식물의 항산화 활성 연구 논문(J니ng et al., 2004)에서 보고된 1.0 mg/mL 의 농도에서 생강의 48.3%, 작약의 57.1% 등과 비교하여 높은 DPPH radical 소거 활성을 나타내는 것으로 고로쇠 추출물의 나노입자화를 통하여 항산화 활성의 증진을 가져올 수 있으며, 이를 통해 항산화제로의 개발 가능할 것이라 사료된다.
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