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문제 정의
- 이렇게 생성된 NO와 PGE2와 같은 염증촉진 매개물은 DSS 유도 마우스 대장염에서도 더욱더 염증을 악화시킨다. DSS 유도 마우스 대장염에서 NO와 PGE2의 생성에 黃連解毒湯 투여가 어떠한 영향을 미치는지 알아보았다. DSS만 투여한 양성 대조군은 혈청 내 대량의 NO와 PGE2가 생성되었지만, 黃連解毒湯을 투여할 경우 NO와 PGE2 생성이 현저히 억제되는 결과를 얻었다(Fig.
- 1과 2). DSS 유도 마우스 대장염에서 黃連解毒湯의 증상적 개선에 대해서 본 연구는 조직학적 조사를 수행하였다. 정상 대조군은 결장 점막에서 술잔세포가 선와의 벽을 잘 이루고 있었으며, 그 사이로 표면 상피세포가 규칙적으로 존재하였다(Fig.
- 그러나 dextran-sulfate sodium (DSS) 유도 마우스 대장염에서黃連解毒湯의 항산화 및 항염증 효과에 대한 조사는 없는 실정이다. 따라서 본 연구는 DSS 유도마우스 대장염에서 黃連解毒湯의 항산화 및 항염증 효과를 조사하여 다음과 같은 결과를 얻게 되었다.
- 그러나 항산화 효소의 활성에 대한 보고는 없는 실정이다. 따라서 본 연구는 DSS로 유도 된 마우스 대장염에 대하여 黃連解毒湯의 항염증 및 항산화 효과를 검증하였다.
- 이러한 DSS 유도에 의한 병리학적 특징을 토대로 전 염증성 사이토카인 및 케모카인 등 염증 기전에 대한 연구 결과가 매우 활발히 진행되고 있다23). 따라서 본 연구는 黃連解毒湯이 DSS 유도 급성 UC 유사 대장염 발달에 어떠한 영향을 미치는지 조사하였다.
- 따라서 본 연구는 黃連解毒湯이 臟毒症을 치료한다고 하는 韓醫學的 측면과 광범위한 spectra작용 소염, 해열, 항균 항바이러스 작용이 있는 약리학적 측면에 착안하여 黃連解毒湯 자체의 항산화 효과를 검증한 후 dextran sulfate sodium(DSS) 유도 마우스 대장염에서 黃連解毒湯이 항산화 및 항염증 효과를 입증하는 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
제안 방법
- 그 후 Calbiochem사가 제공하는 방법대로 수행하여 Multiple spectrophotomer(Molecular Devise, CA USA)을 활용하여 SOD(450 nm), catalase (540 nm) 및 GPx (340 nm)의 활성을 측정하였다. SOD의 활성은 ml당 Unit로, catalase는 ml/min 당 nM로, GPx는 ml/min 당 nM로 각각 계산하였다.
- 黃芩(Scutellariae Radix), 黃連(Rhizoma Coptidis), 黃柏(Cortex Phellodendri), 梔子(Fructus Gardeniae)로 구성된 黃連解毒湯의 약재는 경동시장(서울, 대한민국)으로부터 구입하였고, 약재는 원광대학교 한의과대학 방제학교실에서 형태학적으로 동정하였고, 표본(2010-HHDT)는 원광대학교 한의과대학 방제학교실에 보관 중에 있다. 藥物의 제조는 잘 건조된 黃芩, 黃連, 黃柏, 梔子을 각각 100 g 씩 정량하여 총 400 g을 한약추출기(대웅약탕기, SK-1600))에 주입하였고, 4,000 mL증류수를 첨가하여 100℃에서 2시간 30분 동안 煎湯하였다. 이와 같이 추출한 藥物을 -70℃에서 동결 건조하여 38.
- 黃連解毒湯 투여가 DSS 유도 마우스 대장염에서 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위해서, 농도를 각각 25-100 mg/kg의 농도로 DSS와 동시에 7일간 투여하였다. 그 결과 Fig.
- 黃連解毒湯 투여가 DSS 유도 마우스 대장염의 결장 조직 손상에 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위해서, 각 실험군의 결장 형태와 조직을 hematoxylin과 eosin으로 염색하여 조사하였다. Fig.
- 앞서 준비된 조직 용출 시료를 대상으로 Biorad사(CA, USA)가 제공하는 단백질 assay kit를 활용하여 단백질을 정량 하였다. 그 후 Calbiochem사가 제공하는 방법대로 수행하여 Multiple spectrophotomer(Molecular Devise, CA USA)을 활용하여 SOD(450 nm), catalase (540 nm) 및 GPx (340 nm)의 활성을 측정하였다. SOD의 활성은 ml당 Unit로, catalase는 ml/min 당 nM로, GPx는 ml/min 당 nM로 각각 계산하였다.
- 그결과 다른 전 연구자들의 결과와 같이 심각한 체중의 감소, 설사, 결장의 길이 감소, DIA, histological score 및 염증침윤지수 등 전형적인 급성 UC의 특징을 보였다. 그러므로 본 연구는 UC에 黃連解毒湯의 효과를 알아보기 위해서 DSS 투여와 동시에 각각의 약물 25-100 mg/kg을 하루에 1회 씩 경구투여하면서 7일 동안 병리적 현상을 조사하였다. 黃連解毒湯 추출물인 HHDT를 25-100 mg/kg 투여한 결과 저 농도에서는 효과가 없었으나, 50 mg/kg과 100 mg/kg 투여군에서는 DSS 단독 투여 군에 비해서 체중 감소 억제와 결장길이의 복원 및 DAI가 현저히 개선의 효과를 얻었다(Fig.
- 급성 대장염의 유도는 무균 정제수에 DSS을 5%되게 적정하여 7일간 투여했다19). 대조군은 모든 실험 기간 동안 정제수와 식염수를 투여했다.
- 적출된 결장의 설사 및 출혈 상태를 조사하고, 디지털 켈리퍼(Mitutoyo, Japan)로 결장의 길이를 측정하였다. 대조군과 실험군의 결장 길이를 비교하기 위해 모눈종이 위에 결장과 측정자를 올려놓고, 카메라(Canon, Japan)로 촬영하여 계측하였다. 적출된 결장의 일정 부위를 선정하고 약 30 mm을 떼어낸 후, 결장 내 잔여 분뇨를 인산완충액으로 잘 세척하고, 물기를 제거한 다음 Invitrongen사(CA, USA) 제공하는 tissue lysis 완충액을 소량 주입하고 안과용 가위를 사용하여 세절하였다.
- . 대조군은 모든 실험 기간 동안 정제수와 식염수를 투여했다. 양성 대조군은 5% DSS을 자연스럽게 공급하였고, 5% DSS와 黃連解毒湯 (HHDT)은 마우스 체중 kg 당 25-100 mg를 각각 경구투여 하였다.
- 마지막으로 黃連解毒湯 투여가 DSS 유도 마우스 대장염에서 생체 내 항산화효소로 잘 알려진 superoxide dismutase(SOD), catalase 및 glutathione peroxidase(Gpx) 등의 활성에 미치는 영향을 알아보기 위해서, 실험이 종료된 마우스의 결장 조직을 적출하여, 조직을 tissue lysis 완충액과 초음파 분쇄기를 활용하여 조직 용출액을 제조한 후 단백질을 정량하고 효소 활성을 측정 하였다. 그 결과 SOD와 catalase의 활성은 Fig.
- 본 연구에서 급성 UC 모델을 만들기 위해서 5% DSS 드링크제를 제조하여 7일 동안 투여했다. 그결과 다른 전 연구자들의 결과와 같이 심각한 체중의 감소, 설사, 결장의 길이 감소, DIA, histological score 및 염증침윤지수 등 전형적인 급성 UC의 특징을 보였다.
- 실험이 종료된 마우스를 대상으로 혈액을 얻은 후 장을 정리하고 결장을 적출하였다. 적출된 결장의 설사 및 출혈 상태를 조사하고, 디지털 켈리퍼(Mitutoyo, Japan)로 결장의 길이를 측정하였다.
- SOD, catalase 및 GPx의 활성의 측정은 Calbiochem 사(CA, USA)가 제공하는 assay kit를 사용하여 회사가 제공하는 방법에 준하여 수행했다. 앞서 준비된 조직 용출 시료를 대상으로 Biorad사(CA, USA)가 제공하는 단백질 assay kit를 활용하여 단백질을 정량 하였다. 그 후 Calbiochem사가 제공하는 방법대로 수행하여 Multiple spectrophotomer(Molecular Devise, CA USA)을 활용하여 SOD(450 nm), catalase (540 nm) 및 GPx (340 nm)의 활성을 측정하였다.
- 대조군은 모든 실험 기간 동안 정제수와 식염수를 투여했다. 양성 대조군은 5% DSS을 자연스럽게 공급하였고, 5% DSS와 黃連解毒湯 (HHDT)은 마우스 체중 kg 당 25-100 mg를 각각 경구투여 하였다. 투여할 때 약물의 양은 마리 당 200 μl를 하루에 1회씩 7일간 존데(feeding needle, Sonde)를 이용하였다.
- 요약하면, 혈청을 10배 또는 25배 희석하여 각 well에 주입하고 R&D System사가 제공하는 표준시료를 주입하여 제조회사에서 제시하는 방법에 준하여 측정하였다.
- 내장의 염증반응이 원인인 IBD 환자의 경우에도 ROS가 대량 생산된다는 사실이 밝혀지면서 생체의 항산화효소의 역할에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다27). 이러한 UC의 특징을 고려하여 DSS 유도마우스 대장염에서 항산화 효과가 우수한 黃連解毒湯을 투여하였다. 그 결과 SOD와 catalase의 활성은 Fig.
- 잘 세절된 시료에 Invitrongen사가 제공하는 방법에 준하여 tissue lysis 완충액과 단백질분해 억제물을 주입한 후 Vibra cell 초음파분쇄기(Sonics & Materials, CA USA)를 사용하여 조직을 용출시키고, 지방을 제거하기 위해서 거즈를 통과시킨 후 10,000 rpm으로10분간 원심하여 상등액을 얻고, -20℃에 보관하면서 실험에 사용하였다.
- 적출된 결장 내 잔여 분뇨를 인산완충액을 사용하여 깨끗이 제거하고 4% paraformaldehyde를 주입하여 4℃ 냉장 상태에서 24시간 고정 후 전북대학교 임상연구센터에 의뢰하여 파라핀 조직표본을 제작하여 5 μm로 각 조직표본을 절편하였다.
- 실험이 종료된 마우스를 대상으로 혈액을 얻은 후 장을 정리하고 결장을 적출하였다. 적출된 결장의 설사 및 출혈 상태를 조사하고, 디지털 켈리퍼(Mitutoyo, Japan)로 결장의 길이를 측정하였다. 대조군과 실험군의 결장 길이를 비교하기 위해 모눈종이 위에 결장과 측정자를 올려놓고, 카메라(Canon, Japan)로 촬영하여 계측하였다.
- 대조군과 실험군의 결장 길이를 비교하기 위해 모눈종이 위에 결장과 측정자를 올려놓고, 카메라(Canon, Japan)로 촬영하여 계측하였다. 적출된 결장의 일정 부위를 선정하고 약 30 mm을 떼어낸 후, 결장 내 잔여 분뇨를 인산완충액으로 잘 세척하고, 물기를 제거한 다음 Invitrongen사(CA, USA) 제공하는 tissue lysis 완충액을 소량 주입하고 안과용 가위를 사용하여 세절하였다. 잘 세절된 시료에 Invitrongen사가 제공하는 방법에 준하여 tissue lysis 완충액과 단백질분해 억제물을 주입한 후 Vibra cell 초음파분쇄기(Sonics & Materials, CA USA)를 사용하여 조직을 용출시키고, 지방을 제거하기 위해서 거즈를 통과시킨 후 10,000 rpm으로10분간 원심하여 상등액을 얻고, -20℃에 보관하면서 실험에 사용하였다.
- 조직학적 검사와 백혈구 침윤을 검사하기 위해서 hematoxylin & eosin으로 염색하여 저배율(X40)에서 관찰하고 확대하면서 X200 현미경 시야에서 사진을 찍어 제시하였고, 백혈구의 침윤을 확인하기 위해서 X400 현미경 시야에서 검경하였다(Olympus, 일본).
- 조직학적 검사와 백혈구 침윤을 검사하기 위해서 hematoxylin & eosin으로 염색하여 저배율(X40)에서 관찰하고 확대하면서 X200 현미경 시야에서 사진을 찍어 제시하였고, 백혈구의 침윤을 확인하기 위해서 X400 현미경 시야에서 검경하였다(Olympus, 일본). 조직학적 소견은 2명의 블라인드 병리학자에게 의뢰하여 판명하였으며, 조직학적 스코어(histopathological score)는 crypt distortion의 수, muco-secretive capability의 감소, severe ulcers의 비율 및 inflammatory infiltrate량 등을 합산하여 0-15로 계산하였다. Inflammatory score는 과립백혈구(granulocytes)/괴양 두께(ulcer thickness)의 비율을 적용하여 0-5로 계산하였다.
- DAI는 체중감소, 설사, 직장출혈 등 3가지 주요 변화를 중심으로 평가했다. 체중감소 평가는 실험시작 직전부터 1일 간격으로 7일 동안 측정하였고, 설사는 결장에 형성된 연속적인 용액상태의 배설물의 상태를 조사하였으며, 설사에 의한 배설물의 출혈흔과 직장의 출혈 등을 조사하여 이들의 지수를 종합하여 계산하였다.
- 투여할 때 약물의 양은 마리 당 200 μl를 하루에 1회씩 7일간 존데(feeding needle, Sonde)를 이용하였다.
- 한편 DSS 유도 마우스 대장염의 체중 감소에 대한 黃連解毒湯의 투여효과를 검증하기 위해서 결장의 길이를 측정하고 조직의 형태학적인 관찰을 통화여 질병활성지수(disease activity index, DAI)를 조사하였다. 그 결과 Fig.
- 한편 黃連解毒湯 투여가 DSS 유도 마우스 대장염에서 염증 매개물질로 잘 알려진 NO와 PGE2생성에 미치는 영향을 알아보기 위해서, 실험이 종료된 마우스의 간문맥으로부터 혈액을 얻어 혈청을 분리하여 NO와 PGE2의 생성을 조사하였다. 그 결과 Fig.
대상 데이터
- 8 주령의 수컷 NC/Nga 마우스는 중앙실험동물(주)(서울)로부터 구입하여 1주간 낮과 밤의 주기를 12시간씩 고정하여 사료(중앙실험동물(주))와 멸균 물을 공급하면서 사육한 후 실험에 사용하였다. 실험은 원광대학교 동물윤리위원회의 규정에 따라 수행하였다.
- DSS(mol wt, 36,000-50,000)은 MP biomedicals 사(LLC, France)로부터 구입했다. Prostaglandin(PG) E2 assay kit는 R&D System사(MN, USA)로부터 구입했으며, nitric oxide(NO) colorimetric assay kit는 Biovision사(CA, USA)로부터 구입했다.
- Superoxide dismutase(SOD), catalase 및 glutathione peroxidase(Gpx) 등의 assay kit는 Calbiochem사(CA, USA)로부터 구입했다. Paraformaldehyde, hematoxylin, eosin과 기타 시약은 Sigma-Aldrich Chemical사(Louis, MO. USA)로부터 구입했다.
- Prostaglandin(PG) E2 assay kit는 R&D System사(MN, USA)로부터 구입했으며, nitric oxide(NO) colorimetric assay kit는 Biovision사(CA, USA)로부터 구입했다.
- 黃芩(Scutellariae Radix), 黃連(Rhizoma Coptidis), 黃柏(Cortex Phellodendri), 梔子(Fructus Gardeniae)로 구성된 黃連解毒湯의 약재는 경동시장(서울, 대한민국)으로부터 구입하였고, 약재는 원광대학교 한의과대학 방제학교실에서 형태학적으로 동정하였고, 표본(2010-HHDT)는 원광대학교 한의과대학 방제학교실에 보관 중에 있다. 藥物의 제조는 잘 건조된 黃芩, 黃連, 黃柏, 梔子을 각각 100 g 씩 정량하여 총 400 g을 한약추출기(대웅약탕기, SK-1600))에 주입하였고, 4,000 mL증류수를 첨가하여 100℃에서 2시간 30분 동안 煎湯하였다.
- 실험이 종료된 마우스는 에테르로 마취하여 복강을 절개하고 간 문맥(hepatic portal vein)에서 약 600 μl을 채혈하여 4℃에서 12시간 방치한 후 3,000 rpm으로 원심하여 상층액의 혈청을 얻어 NO와 PGE2 측정에 사용하였다.
데이터처리
- 모든 실험값은 평균±표준오차(mean±SE)로 표시했으며, 통계분석은 ANOVA와 Student’s t-test 로 처리했으며, 유의성 한계는 P<0.05로 정하였다.
이론/모형
- DSS을 투여하면서 질병의 진행 상태는 질병활성지수(disease activity index, DAI)로 평가했으며 범위는 0-10으로 구분하였다20,21). DAI는 체중감소, 설사, 직장출혈 등 3가지 주요 변화를 중심으로 평가했다.
- PGE2는 R&D System사가 제공하는 ELISA assay kit와 방법에 따라 각각 측정하였다.
- SOD, catalase 및 GPx의 활성의 측정은 Calbiochem 사(CA, USA)가 제공하는 assay kit를 사용하여 회사가 제공하는 방법에 준하여 수행했다. 앞서 준비된 조직 용출 시료를 대상으로 Biorad사(CA, USA)가 제공하는 단백질 assay kit를 활용하여 단백질을 정량 하였다.
- 혈청 내 염증 매개물인 NO와 PGE2 함량을 측정하기 위해서 NO는 Biovision사가 제공하는 assay kit와 측정 방법에 따라 수행하였다. PGE2는 R&D System사가 제공하는 ELISA assay kit와 방법에 따라 각각 측정하였다.
성능/효과
- 1. 黃連解毒湯 투여에 따른 DSS 유도 증상 완화 효과 체중의 감소, 결장길이의 감소, 증가된 질병활성지수(disease activity index, DAI)및 결장조직의 손상을 개선하는데 우수한 효과를 보여주었다.
- 2. 黃連解毒湯 투여에 따른 DSS 유도 항염증 효과 DSS 유도 염증 매개물인 NO와 PGE2를 억제하는 우수한 항염증 효과가 있었다.
- 25 mg/kg 투여군는 5일가지 계속적으로 체중이 감소되었으나, 6일재부터 DSS 단독 투여군에 비해 체중의 감소가 억제되었다(p<0.05).
- 3. 黃連解毒湯 투여에 따른 DSS 유도 항산화 효과 DSS 유도에 의한 감소된 결장조직의 SOD, catalase및 GPx등 효소 활성을 증가 시키는 우수한 효과가 있었다.
- 50 mg/kg 투여군는 4일째부터 체중 감소가 억제되기 시작하여(p<0.05) 6일부터는 현저히 체중의 감소가 억제되는 효과가 있었다(p<0.01).
- 50 mg/kg과 100 mg/kg 투여군는 DSS 단독투여군에 비해서 유의하게 증가되었다(p<0.05, p<0.01).
- DSS 단독 투여군의 경우 설사, 출혈, 혈흔분뇨 등 심각하고 전형적인 대장염 질환 증세를 보인 반면, 黃連解毒湯 투여군은 농도에 의존적으로 DSS 단독 투여군에 비해 개선되는 효과를 보였으며, 50 mg/kg과 100 mg/kg 투여군는 DSS 단독 투여군에 비해서 유의하게 증가되었다(p<0.05, p<0.01).
- DSS 유도 마우스 대장염의 조직학적 스코어(histological score)와 염증반응침윤 지수(inflammatory infiltrate)를 조사한 결과 Fig. 4A와 B에서 보여준 바와 같이 DSS 단독 투여 양성대조군은 심각한 상태로 조직이 손상되었을 뿐만 아니라 염증반응을 야기하는 과립백혈구와 림프구의 침윤이 현저히 높았다. 그러나 黃連解毒湯 투여군의 경우 25 mg/kg을 제외한 50 mg/kg과 100 mg/kg의 경우 양성 대조군에 비해 조직손상의 개선과 염증반응 침윤 지수가 낮아짐을 확인할 수 있었고((p<0.
- DSS 유도 마우스 대장염에서 NO와 PGE2의 생성에 黃連解毒湯 투여가 어떠한 영향을 미치는지 알아보았다. DSS만 투여한 양성 대조군은 혈청 내 대량의 NO와 PGE2가 생성되었지만, 黃連解毒湯을 투여할 경우 NO와 PGE2 생성이 현저히 억제되는 결과를 얻었다(Fig. 5). 따라서 본 연구의 결과 黃連解毒湯의 투여에 따른 염증 백혈구의 침윤이 억제되는 이유는 NO와 같은 염증 매개물을 억제할 뿐만 아니라 염증 야기 사이토카인 및 케모카인 그리고 즉시형 과민반응을 억제시켜 DSS가 유도하는 대장염을 개선하는 것이라 생각된다.
- DSS 단독 투여군의 경우 결장 조직의 손상이 crypt distortion의 수, muco-secretive capability의 감소, 궤양 등 심각한 수준이었다. 黃連解毒湯 25 mg/kg 투여군은 조직손상이 약간 개선되는 효과를 보였지만 유의한 효과는 없었으나, 50 mg/kg과 100 mg/kg 투여군은 뚜렷한 개선효과가 있었다. 특히 100 mg/kg 투여군은 아무런 약물이 투여되지 않은 정상군과 유사하게 현저한 개선 효과가 있었다.
- 그러므로 본 연구는 UC에 黃連解毒湯의 효과를 알아보기 위해서 DSS 투여와 동시에 각각의 약물 25-100 mg/kg을 하루에 1회 씩 경구투여하면서 7일 동안 병리적 현상을 조사하였다. 黃連解毒湯 추출물인 HHDT를 25-100 mg/kg 투여한 결과 저 농도에서는 효과가 없었으나, 50 mg/kg과 100 mg/kg 투여군에서는 DSS 단독 투여 군에 비해서 체중 감소 억제와 결장길이의 복원 및 DAI가 현저히 개선의 효과를 얻었다(Fig. 1과 2). DSS 유도 마우스 대장염에서 黃連解毒湯의 증상적 개선에 대해서 본 연구는 조직학적 조사를 수행하였다.
- 黃連解毒湯 투여가 DSS 유도 마우스 대장염에서 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위해서, 농도를 각각 25-100 mg/kg의 농도로 DSS와 동시에 7일간 투여하였다. 그 결과 Fig. 1과 같이 DSS만 투여하였을 때 아무런 약물이 투여되지 않은 정상군에 비해서 3일째부터 체중이 현저히 감소되었다. 그러나 黃連解毒湯이 투여된 실험군에서는 DSS 단독 투여군에 비해서 약물의 농도에 의존적으로 체중의 감소가 억제되었다.
- 한편 DSS 유도 마우스 대장염의 체중 감소에 대한 黃連解毒湯의 투여효과를 검증하기 위해서 결장의 길이를 측정하고 조직의 형태학적인 관찰을 통화여 질병활성지수(disease activity index, DAI)를 조사하였다. 그 결과 Fig. 2A와 같이 결장의 길이는 정상군에 비해서 DSS 단독 투여군의 결장의 길이는 현저히 줄어들었다. 그러나 DSS 단독 투여군의 결정 길이에 비해서 黃連解毒湯의 투여 농도에 의존적으로 증가되었다.
- 그 결과 Fig. 5A와 B에서 보여준 바와 같이 DSS 단독 투여군에서는 NO와 PGE2 생성이 매우 높았지만, 黃連解毒湯투여군 25 mg/kg을 제외하고 50 mg/kg과 100 mg/kg에서는 NO와 PGE2 생성이 유의하게 억제되었다 (p<0.05, p<0.01).
- 그 결과 SOD와 catalase의 활성은 Fig. 6 A-B와 같이 DSS 단독 투여군의 경우 아무런 약물이 투여되지 않은 정상군에 비해 그 활성이 현저히 줄어들었으나, 黃連解毒湯을 투여한 결과 50 mg/kg과 100 mg/kg에서 효소 활성이 증가하는 효과가 있었다 (p<0.05, p<0.01).
- 이러한 UC의 특징을 고려하여 DSS 유도마우스 대장염에서 항산화 효과가 우수한 黃連解毒湯을 투여하였다. 그 결과 SOD와 catalase의 활성은 Fig. 6A-B와 같이 DSS 단독 투여군의 경우 아무런 약물이 투여되지 않은 정상군에 비해 그 활성이 현저히 줄어들었으나, 黃連解毒湯을 투여한 결과 50 mg/kg과 100 mg/kg에서 효소 활성이 증가하는 효과가 있었다. 또한 Fig.
- 본 연구에서 급성 UC 모델을 만들기 위해서 5% DSS 드링크제를 제조하여 7일 동안 투여했다. 그결과 다른 전 연구자들의 결과와 같이 심각한 체중의 감소, 설사, 결장의 길이 감소, DIA, histological score 및 염증침윤지수 등 전형적인 급성 UC의 특징을 보였다. 그러므로 본 연구는 UC에 黃連解毒湯의 효과를 알아보기 위해서 DSS 투여와 동시에 각각의 약물 25-100 mg/kg을 하루에 1회 씩 경구투여하면서 7일 동안 병리적 현상을 조사하였다.
- 그러나 黃連解毒湯 투여군의 경우 25 mg/kg을 제외한 50 mg/kg과 100 mg/kg의 경우 양성 대조군에 비해 조직손상의 개선과 염증반응 침윤 지수가 낮아짐을 확인할 수 있었고((p<0.05, p<0.01), 100 mg/kg 투여군의 경우 아무런 약물이 투여되지 않은 대조군과 유사하게 조직손상과 염증반응이 현저히 개선되는 효과를 보였다.
- 1과 같이 DSS만 투여하였을 때 아무런 약물이 투여되지 않은 정상군에 비해서 3일째부터 체중이 현저히 감소되었다. 그러나 黃連解毒湯이 투여된 실험군에서는 DSS 단독 투여군에 비해서 약물의 농도에 의존적으로 체중의 감소가 억제되었다. 25 mg/kg 투여군는 5일가지 계속적으로 체중이 감소되었으나, 6일재부터 DSS 단독 투여군에 비해 체중의 감소가 억제되었다(p<0.
- 5). 따라서 본 연구의 결과 黃連解毒湯의 투여에 따른 염증 백혈구의 침윤이 억제되는 이유는 NO와 같은 염증 매개물을 억제할 뿐만 아니라 염증 야기 사이토카인 및 케모카인 그리고 즉시형 과민반응을 억제시켜 DSS가 유도하는 대장염을 개선하는 것이라 생각된다.
- 또한 100 mg/kg 투여군는 4일재까지 체중이 약간 감소하였으나, 정상군과 유사하였고, 실험종료시까지 체중이 DSS 단독 투여군에 비해서 현저히 감소되는 효과가 있었다(p<0.01).
- 또한 Fig. 6C와 같이 GPx의 활성의 경우는 DSS에 의해 억제되었던 효소의 활성이 黃連解毒湯 50 mg/kg과 100 mg/kg을 투여함으로써 그 활성이 증가하는 효과가 있었다 (p<0.05, p<0.01).
- 6A-B와 같이 DSS 단독 투여군의 경우 아무런 약물이 투여되지 않은 정상군에 비해 그 활성이 현저히 줄어들었으나, 黃連解毒湯을 투여한 결과 50 mg/kg과 100 mg/kg에서 효소 활성이 증가하는 효과가 있었다. 또한 Fig. 6C와 같이 GPx의 활성의 경우는 DSS에 의해 억제되었던 효소의 활성이 黃連解毒湯 50 mg/kg과 100 mg/kg을 투여함으로써 그 활성이 증가하는 효과가 있었다. 특히 黃連解毒湯 100 mg/kg의 투여는 DSS에 의해 억제되었던 항산화효소의 활성을 증가시켜 아무런 약물이 투여되지 않은 대조군과 유사하게 그 활성이 현저히 증가했다.
- 이러한 결과는 DSS 유도 마우스 대장염에서 黃連解毒湯이 대장염의 증상 개선과 항염증 효과 및 항산화효소 활성을 유도하는데 우수한 효과가 있음을 보여 주고 있다. 따라서 黃連解毒湯을 항궤양 치료에 응용할 수 있음을 제시하고 있다.
- 그러나 黃連解毒湯을 투여할 경우 25 mg/kg의 저농도 에서는 DSS가 유도한 결장내 손상을 개선하지 못했을 지라도 50 mg/kg과 100 mg/kg 투여군에서는 술잔세포와 주변세포는 물론 상피세포의 괴사가 현저히 개선되는 효과를 보여주었다. 이러한 결과는 黃連解毒湯이 DSS 유도에 의한 결장내 세포 및 장벽물질을 효과적으로 보호해 준다는 것을 제시해 주었다.
- 이상의 결과를 종합하면, 黃連解毒湯은 약물자체의 항산화력이 우수하였으며, DSS 유도 마우스 대장염에서 체중의 감소, 조직병리학적 악화, 염증 반응 및 산화적 스트레스를 개선하는 효과가 있었다. 따라서 黃連解毒湯을 UC와 같은 염증성 내장 질환 치료에 응용할 수 있음을 제시해 주고 있다.
- 黃連解毒湯 25 mg/kg 투여군은 조직손상이 약간 개선되는 효과를 보였지만 유의한 효과는 없었으나, 50 mg/kg과 100 mg/kg 투여군은 뚜렷한 개선효과가 있었다. 특히 100 mg/kg 투여군은 아무런 약물이 투여되지 않은 정상군과 유사하게 현저한 개선 효과가 있었다.
- 특히 黃連解毒湯 100 mg/kg의 투여는 DSS에 의해 억제되었던 항산화효소의 활성을 증가시켜 아무런 약물이 투여되지 않은 정상군과 유사하게 그 활성이 현저히 증가했다(p<0.01).
후속연구
- 이상의 결과를 종합하면, 黃連解毒湯은 약물자체의 항산화력이 우수하였으며, DSS 유도 마우스 대장염에서 체중의 감소, 조직병리학적 악화, 염증 반응 및 산화적 스트레스를 개선하는 효과가 있었다. 따라서 黃連解毒湯을 UC와 같은 염증성 내장 질환 치료에 응용할 수 있음을 제시해 주고 있다.
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