[논문]방풍통성산(防風通聖散)의 급성 메스암페타민에 의한 보행성 행동량과 c-Fos발현에 대한 효과

신지섭; 장은영; 김단효; 김상찬; 김광중; 양재하

doi:10.14374/hfs.2011.19.2.039

방풍통성산(防風通聖散)의 급성 메스암페타민에 의한 보행성 행동량과 c-Fos발현에 대한 효과
Effect of BangPungTongSungSan(BPTSS, 防風通聖散) on acute methamphetamine-induced locomotor activity and c-Fos expression in mice 원문보기

大韓韓醫學方劑學會誌 = Herbal formula science, v.19 no.2, 2011년, pp.39 - 46

신지섭 (대구한의대학교 한의과대학 한의학과) , 장은영 (대구한의대학교 한의과대학 한의학과) , 김단효 (대구한의대학교 한의과대학 한의학과) , 김상찬 (대구한의대학교 한의과대학 한의학과) , 김광중 (대구한의대학교 한의과대학 한의학과) , 양재하 (대구한의대학교 한의과대학 한의학과)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : The BangPungTongSungSan(BPTSS) has been used as a therapeutic agent for cerebrovascular disease, cerebral hemorrhage, hypertension, diabetes and obesity in oriental medicine. The present study designed to investigate the effect of BPTSS on behavioral change and neuronal activation induced by acute methamphetamine(METH, 2 mg/kg, i.p.) in C57BL/6 mice. Methods : Mice received the oral administration of BPTTS(25, 50 and 100 mg/kg) 1 h prior to saline or METH administration. Locomotor activity was measured for 90 min using videotractking method and c-Fos expression, as marker of neuronal activation, was identified in a separate groups of mice by immunohistochemistry. Results and conclusions : Methamphetamine injection significantly increased locomotor activity and c-Fos expression in the nucleus accumbens and striatum. Interestingly, BPTTS(100 mg/kg) significantly suppressed locomotor activity and c-Fos expression in the nucleus accumbens and striatum by acute exposure to METH. These results suggest that BangPungTongSungSan may be effective in suppressing the reinforcing effect of methamphetamine by modulation neuronal activity.

주제어

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문제 정의

일반적으로, 메스암페타민을 비롯한 중독성 약물에 의한 행동적 변화들은 주로 신경세포에서 도파민이 담당하고 있으며, 그 표적 영역으로 측핵과 선조체가 이를 담당하고 있다. 따라서 본 연구에서는 급성 메스암페타민투여에 의한 행동변화를 매개하는 신경화학전 기전을 살펴보기 위해 c-Fos 발현을 통하여 신경활성도를 측정하였다. 생화학적 지표인 c-Fos는 초기유전자(immediately early gene)로서 Fos family는 c-Fos, FosB, ΔFosB, Fra1, Fra2 등이 있으며 이들 Fos family는 Jun family 와 이형이량체(heterodimer)인 AP-1 복합체를 형성하여 여려가지 유전자의 전사인자로 작용하게 된다²⁰⁾.
따라서, 본 연구에서는 C57BL/6 마우스를 이용하여 급성메스암페타민에 의한 보행성 활동량과 뇌의 c-Fos 발현 변화에 대한 미치는 방풍통성산의 효과를 실험적으로 알아보고자 하였다.
본 연구에서는 防風通聖散이 급성 메스암페타민에 의한 행동적 변화와 그에 따른 신경활성도에 변화에 미치는 영향을 알아보기 위해 C57BL/6계 mouse로 실험하였다. 메스암페타민 단회 투여군에서는 생리식염수 투여군에 비해 보행성 활동량과 신경활성의 지표인 c-Fos 단백발현이 측핵과 선조체 모두에서 유의하게 증가하였다.

제안 방법

실험 당일, 실험동물은 정사각형의 검은 상자(28X28X28cm)에 넣어 30분 간 적응시킨 다음 생리식염수 또는 防風通聖散(25, 50와 100 mg/kg)을 농도 의존적으로 경구 투여 하였다. 60분 후 생리식염수 또는 메스암페타민 (2 mg/kg)를 복강주사 한 후, 90분 동안의 활동량을 측정하였다.
행동측정그룹과 다른 mice를 사용하여, 생리식염수 또는 防風通聖散 100 mg/kg를 경구투여한 후, 메스암페타민을 복강 주사하였다. 90분 후 sodium pentobarbital(80 mg/kg)를 복강 주사하여 마취한 후, 0.9% 생리식염수 20 ml에 이어 4% paraformaldehyde(PFA)를 50 ml을 심장을 통해 관류하였다. 고정이 끝난 쥐는 뇌를 꺼내 10% 자당(sucrose)이 함유된 4% PFA에 넣어 2시간 동안 후고정시키고, 20% 자당이 함유된 인산 완충액 (PBS, phosphate buffer saline)에 넣어 4℃에서 최소 48시간 보관하였다.
발색이 끝난 조직은 gelatine coated slide에 얹어서 2시간 동안 상온에서 건조 시킨 후 알코올(50%→70%→90%→99%, 각 3분씩)에 담궈 탈 수 시킨 다음 xylene으로 투명화시켜 polymount로 봉입하였다. c-Fos 발현 세포 수는 디지털카메라(iCAM2000)가 연결된 LABOMED light microscope (LABO Ameriac Inc., Fremont, CA, USA)로 분석하였다.
그 후 1% triton X-100에 담궈 10분 반응 후 다시 10분씩 세 번 세척하였다. 그 후 3% 과산화수소(H₂O₂)를 30분 간 처리하여 내인성 과산화효소를 억제시켰고, non-specific한 반응을 줄이기 위해 3% BSA(Bovine serum albumin) 를 1시간 동안 처리하였다. 그 후 10분씩 3번 세척 후 c-Fos antibody(1:1000 in 0.
그 후, 완충용액으로 세척 후 실온에서 1시간 동안 ABC reagent(Avidin-Biotin Complex Elite kit; Vector Laboratories, CA, USA)에 담궈 1시간 반응시키고, 세척 후, 착색제인 DAB(3,3'- diaminobenzidine)을 사용하여 발색하였다.
본 연구에서는 급성 메스암페타민 처치로 인한 보행성 활동량 및 신경활성지표인 c-Fos발현을 통해서 防風通聖散의 메스암페타민 중독에 대한 치료효과를 알아보았다.
실험동물의 보행성 활동량을 측정하기 위해 실험동물은 동물사육실에서 분리된 행동측정 실험실에 두어 하루 정도 적응시켰다. 실험 당일, 실험동물은 정사각형의 검은 상자(28X28X28cm)에 넣어 30분 간 적응시킨 다음 생리식염수 또는 防風通聖散(25, 50와 100 mg/kg)을 농도 의존적으로 경구 투여 하였다. 60분 후 생리식염수 또는 메스암페타민 (2 mg/kg)를 복강주사 한 후, 90분 동안의 활동량을 측정하였다.
실험동물의 보행성 활동량을 측정하기 위해 실험동물은 동물사육실에서 분리된 행동측정 실험실에 두어 하루 정도 적응시켰다. 실험 당일, 실험동물은 정사각형의 검은 상자(28X28X28cm)에 넣어 30분 간 적응시킨 다음 생리식염수 또는 防風通聖散(25, 50와 100 mg/kg)을 농도 의존적으로 경구 투여 하였다.
우선, 급성 메스암페타민 투여 후 행동적 변화에 대한 防風通聖散의 효과를 알아보기 위해 생리 식염수 또는 防風通聖散을 농도 의존적으로 경구투여하고 1시간 후 생리식염수 또는 메스암페타민을 복강주사하고 90분 동안 보행성 활동량을 측정하였다. 그 결과 메스암페타민 투여군은 생리식염수 투여군보다 보행성 활동량이 유의하게 증가하였으며, 防風通聖散 100 mg/kg 투여군에서만 메스암페타민에 의한 보행성 활동량이 유의하게 감소하였다.
행동측정그룹과 다른 mice를 사용하여, 생리식염수 또는 防風通聖散 100 mg/kg를 경구투여한 후, 메스암페타민을 복강 주사하였다. 90분 후 sodium pentobarbital(80 mg/kg)를 복강 주사하여 마취한 후, 0.

대상 데이터

메스암페타민(methamphetamine; Sigma, St Luis, U.S.A.)은 표준품을 구입하여, 생리식염수에 용해하여 사용하였다.
본 실험에 사용한 防風通聖散추출물은 대구한의대학교 방제학교실 김상찬 교수로부터 받아 실험하였고, 메스암페타민 투여 1시간 전에 생리식염수에 녹여 경구투여 하였다. 1첩의 구성과 용량은 다음과 같다(Table 1).
실험동물은 대구 효창사이언스로부터 C57BL/6 mice (20 - 25 g)를 구입하여 도착 후 cage 당 3~4마리씩 넣어 일주일 정도 실험실 환경(온도22 ±2℃, 습도 50 - 60%)에 적응시킨 후 사용하였다.
항체의 경우 Rabbit anti-c-Fos antibody, biotinylated anti-rabbit JgG antibody는 Santa cruz(Santa cruz, CA, USA)사 제품을, paraformaldehyde, sucrose, bovine sreum albumin(BSA) 등 그 외 실험에 사용한 시약들은 Sigma(Sigma, St Luis, U.S.A.)사 제품을 구입하여 사용하였다.

데이터처리

M of the total distance for 90 min. Data was analyzed by one-way ANOVA and followed Tukey test. *** P < 0.
보행성 활동량과 c-Fos 양성세포의 실험결과에 대한 통계분석은 SPSS 11.0 을 이용하여 one way ANOVA로 분석하였으며, 사후 검정은 Tukey test 를 통해 검정하였다. p값이 0.

성능/효과

메스암페타민 단회 투여군에서는 생리식염수 투여군에 비해 보행성 활동량과 신경활성의 지표인 c-Fos 단백발현이 측핵과 선조체 모두에서 유의하게 증가하였다. 防風通聖散 100 mg/kg 투여군에서는 메스암페타민 단독 투여군에 비해 보행성 행동량이 유의하게 감소하였고, c-Fos 발현 역시 측핵과 선조체에서 감소하였다. 그러므로 防風通聖散은 급성 메스암페타민에 의한 행동량의 증가와 신경활성의 지표인 c-Fos의 발현을 감소시킴으로써 치료약물의 보조식품 뿐만 아니라 치료제로써 메스암페타민 중독의 치료 및 예방에 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
우선, 급성 메스암페타민 투여 후 행동적 변화에 대한 防風通聖散의 효과를 알아보기 위해 생리 식염수 또는 防風通聖散을 농도 의존적으로 경구투여하고 1시간 후 생리식염수 또는 메스암페타민을 복강주사하고 90분 동안 보행성 활동량을 측정하였다. 그 결과 메스암페타민 투여군은 생리식염수 투여군보다 보행성 활동량이 유의하게 증가하였으며, 防風通聖散 100 mg/kg 투여군에서만 메스암페타민에 의한 보행성 활동량이 유의하게 감소하였다. 이런 결과는 防風通聖散이 메스암페타민의 약물중독치료에 효과가 있음을 제시하였다.
또한, 防風通聖散 100 mg/kg 단독 투여군은 6679.1±1400.3cm로 생리식염수군과 비슷한 경향을 보여 防風通聖散 그 자체로는 아무런 영향이 없음을 알 수 있었다.
또한, 측핵의 shell부위에서 c-Fos 발현을 측정한 결과, 생리식염수 투여군이 2.8±0.95인데 비해 메스암페타민 단독 투여군에서 c-Fos의 발현이 13.78±3.26으로 증가하였고, 防風通聖散 투여군에서는 3.21±0.42로 유의하게 감소됨을 확인하였다(Fig. 5).
먼저 선조체 부위에서는 생리식염수 투여군은 4.2±0.76에 비해 메스암페타민 단독 투여군에서 21.0±3.82로 c-Fos 발현이 확연히 증가하였으며, 防風通聖散 투여군에서는 10.9±0.93으로 유의한 차이가 있었다(Fig. 4).
본 연구에서는 防風通聖散이 급성 메스암페타민에 의한 행동적 변화와 그에 따른 신경활성도에 변화에 미치는 영향을 알아보기 위해 C57BL/6계 mouse로 실험하였다. 메스암페타민 단회 투여군에서는 생리식염수 투여군에 비해 보행성 활동량과 신경활성의 지표인 c-Fos 단백발현이 측핵과 선조체 모두에서 유의하게 증가하였다. 防風通聖散 100 mg/kg 투여군에서는 메스암페타민 단독 투여군에 비해 보행성 행동량이 유의하게 감소하였고, c-Fos 발현 역시 측핵과 선조체에서 감소하였다.
코카인이나 메스암페타민 등 약물중독을 일으키는 여러 가지 약물들을 급성으로 투여하게 되면 특히나 약물중독에 따른 강화효과나 활동량 변화와 같은 행동변화에 중요한 역할을 담당하는 측핵과 선조체에서 현저한 변화가 나타난다고 보고되고 있다^21-23). 본 연구결과에서도 생리식염수 투여군에 비해 메스암페타민 단독 투여군의 측좌 핵과 선조체에서 c-Fos의 발현의 현저한 증가가 확인되었고, 防風通聖散 투여군에서는 메스암페타민 단독 투여군에 비해 감소된 발현을 확인하였다. 이는 도파민성 신경세포의 활성화가 중뇌변연 도파민성계의 활성화를 통해서 일어남을 의미한다.
생리식염수 투여군은 8274.7±2361.2cm, 메스암페타민 단독 투여군은 45550.0±3911.2cm, 防風通聖散 25 mg/kg투여군은 42096.3±10824.2cm, 50 mg/kg 투여군은 42015.5±7136.6cm보였고, 防風通聖散 100 mg/kg투여군은 23495.4±5315.8cm로 메스암페타민 단독 투여군에 비해 통계적으로 유의한 감소를 나타내었다(Fig. 2, Fig. 3).
이상의 결과에서, 防風通聖散은 급성 메스암페타민 중독모델에서 보행성 활동량을 감소시키고, 신경활성 지표인 c-Fos 활성을 감소시키므로, 약물중독을 억제시키는 효과를 보여주어 약물중독 치료제로써의 가능성을 시사한다.

후속연구

防風通聖散 100 mg/kg 투여군에서는 메스암페타민 단독 투여군에 비해 보행성 행동량이 유의하게 감소하였고, c-Fos 발현 역시 측핵과 선조체에서 감소하였다. 그러므로 防風通聖散은 급성 메스암페타민에 의한 행동량의 증가와 신경활성의 지표인 c-Fos의 발현을 감소시킴으로써 치료약물의 보조식품 뿐만 아니라 치료제로써 메스암페타민 중독의 치료 및 예방에 이용될 수 있을 것으로 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	단ㆍ장기간의 메스암페타민 사용은 어떤 문제를 초래할 수 있는가?	단ㆍ장기간의 메스암페타민 사용은 정신병적 증상, 우울, 불안, 주의력 결핍 등의 정신적인 문제와 식욕이나 수면의 감퇴, 체중감소, 호흡의 증가 등의 신체적인 변화5)를 초래한다. 예를 들어, 메스암페타민과 같은 정신흥분성 약물들은 단회 투여시 rat과 mice에서 도파민, 노르에피네프린, 세로토닌과 같은 신경전달물질의 분비를 증가시키고6), 증가된 도파민에 의해 행동적 변화(locomotor activity)가 일어난다고 알려져 있다7,8).
	메스암페타민은 무엇인가?	메스암페타민(methamphetamine, N-methyl-1-phenyl 2-aminopropane)은 코카인과 같은 강력한 중추신경계 흥분제1)로, 麻黃의 주성분인 에페트린으로부터 합성된 약물이다. 국내에서는 흔히 ‘히로뽕(philopon)’으로 불리어지며2), 1980년대 이후로 메스암페타민의 밀매와 사용이 급격히 증가하고 있으며, 현재에는 30~40대에서 가장 많이 남용되는 마약류3)이다.
	메스암페타민은 국내에서 흔히 무엇이라 불리는가?	메스암페타민(methamphetamine, N-methyl-1-phenyl 2-aminopropane)은 코카인과 같은 강력한 중추신경계 흥분제1)로, 麻黃의 주성분인 에페트린으로부터 합성된 약물이다. 국내에서는 흔히 ‘히로뽕(philopon)’으로 불리어지며2), 1980년대 이후로 메스암페타민의 밀매와 사용이 급격히 증가하고 있으며, 현재에는 30~40대에서 가장 많이 남용되는 마약류3)이다. 최근 한국마약퇴치운동본부의 통계에 따르면 2011년도 1월에서 9월까지의 메스암페타민의 압수현황(20, 166g)이 전년도 같은 기간(2010년 1월~9월: 10,084g)에 비해 2배 이상 증가한 것으로 보고4) 된 것으로 보아 현대인들의 메스암페타민에 의한 약물 의존도가 증가하고 있으며, 그에 따른 폐해도 심각할 것으로 생각되어진다.

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동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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