[논문]건강기능식품 기능성원료로서 창녕양파추출액의 지표성분 Quercetin 분석법

전선영; 정은정; 백정화; 차용준

doi:10.3746/jkfn.2011.40.4.565

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건강기능식품 기능성원료로서 창녕양파추출액의 지표성분 Quercetin 분석법

Analytical Method Validation of Quercetin in Changnyeong Onion Extract as a Functional Ingredient for Functional Health Food

한국식품영양과학회지 = Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition v.40 no.4 , 2011년, pp.565 - 569

전선영 (창원대학교 식품영양학과 ) ; 정은정 ( 창원대학교 식품영양학과 ) ; 백정화 ( 창원대학교 식품영양학과 ) ; 차용준 ( 창원대학교 식품영양학과)

초록

용어
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개별인정형 건강기능식품 기능성 원료로 개발한 창녕양파추출액의 표준화를 위해 지표성분으로 quercetin을 설정하였으며, HPLC를 이용하여 지표성분 quercetin의 분석법을 확립하며 그에 따른 유효성 검정을 실시하고자 하였다. 유효성 검정 결과, 본 시험법에서 표준용액의 피크유지시간과 창녕양파추출액의 피크유지시간이 일치하였으며 동일한 spectrum을 나타내어 특이성을 확인하였다. 검량선의 상관계수($R^2$)는 0.9986로 높은 직선성을 보여 분석에 적합함을 알 수 있었으며, 검출한계는 0.2 mg/L, 정량한계는 0.5 mg/L 로 설정되었다. Quercetin의 회수율은 0.05 mg/mL에서는 82.36~95.26%, 0.075 mg/mL는 82.70~98.24%, 0.1 mg/mL은 87.91~95.11%의 범위의 회수율을 보였으며, intra-day에서의 정밀도(RSD)는 0.10~3.28%, inter-day에서는 0.96~5.79%의 정밀도를 나타내어 창녕양파추출액의 지표성분인 quercetin의 분석법은 적합한 시험법임이 검증되었다.

Abstract

Validation of quercetin as a marker compound in the standardization of Changnyeong onion extract developed for functional health food was attempted by analytical method. The specificity was satisfied with retention time and photo diode array (PDA) spectrum by analysis of quercetin using HPLC and comparison with standard compound. It showed a high linearity in the calibration curve as coefficient of correlation ($R^2$) of 0.9986, and the limit of detection (LOD) and limit of quantitation (LOQ) were 0.2 mg/L and 0.5 mg/L, respectively. Recovery rate test with quercetin concentration of 0.05, 0.075 and 0.1 mg/mL was revealed in the high range of 82.36~95.26%, 82.70~98.24% and 87.91~95.11%, respectively. The intra-day and inter-day precision in quercetin for Changnyeong onion extracts was 0.10~3.28% and 0.96~5.79%, respectively. Therefore, application of quercetin was validated in analytical method as a marker compound in Changnyeong onion extracts.

주제어

#quercetin #validation #onion #marker compound #functional food

본문요약
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문제 정의

따라서 본 연구에서는 개별인정형 건강기능식품 기능성 원료로 개발할 목적으로 창녕양파추출액의 표준화를 위해 지표성분으로 quercetin을 설정하였으며, HPLC를 이용하여 지표성분 quercetin의 분석법을 확립하며 그에 따른 유효성 검정을 실시하고자 하였다.

따라서 본 연구에서는 개별인정형 건강기능식품 기능성 원료로 개발할 목적으로 창녕양파추출액의 표준화를 위해 지표성분으로 quercetin을 설정하였으며, HPLC를 이용하여 지표성분 quercetin의 분석법을 확립하며 그에 따른 유효성 검정을 실시하고자 하였다.

제안 방법

0.001, 0.002, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1 mg/mL의 단계적으로 희석한 quercetin 표준용액을 HPLC로 분석하여 검량선을 작성하였으며 Fig. 4와 같은 검량선을 나타내었다.

0.001, 0.002, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1 mg/mL의 단계적으로 희석한 quercetin 표준용액을 HPLC로 분석하여 검량선을 작성하였으며 Fig. 4와 같은 검량선을 나타내었다. 검량선의 상관계수(R²)는 0.
Inter-day는 1일 1구간으로 3일간 진행하였고 intra-day는 1일 3구간(9:00 AM, 3:00 PM, 9:00 PM)으로 나누어 진행하였으며, 각 시험은 구간마다 3회 9반복하여 HPLC로 분석하였다.

정밀성: 시료(창녕양파추출액)를 전처리법에 따라 처리된 시험용액을 inter-day와 intra-day로 나누어 정밀성 실험을 실시하였다. Inter-day는 1일 1구간으로 3일간 진행하였고 intra-day는 1일 3구간(9:00 AM, 3:00 PM, 9:00 PM)으로 나누어 진행하였으며, 각 시험은 구간마다 3회 9반복하여 HPLC로 분석하였다. 분석하여 얻어진 면적을 이용하여 검량선에 의하여 정량한 농도별 검출농도의 표준편차를 검출 농도로 나눈 비의 백분율로 계산하였다.
각 시험은 3회 9반복하였으며 HPLC로 분석하여 얻어진 면적을 표준용액의 면적과 비교하여 회수율을 구하였다.

1 mg/mL의 세 가지 농도를 각각 첨가하여 회수율 실험을 실시하였다. 각 시험은 3회 9반복하였으며 HPLC로 분석하여 얻어진 면적을 표준용액의 면적과 비교하여 회수율을 구하였다.
개별인정형 건강기능식품 기능성 원료로 개발한 창녕양파추출액의 표준화를 위해 지표성분으로 quercetin을 설정하였으며, HPLC를 이용하여 지표성분 quercetin의 분석법을 확립하며 그에 따른 유효성 검정을 실시하고자 하였다.

개별인정형 건강기능식품 기능성 원료로 개발한 창녕양파추출액의 표준화를 위해 지표성분으로 quercetin을 설정하였으며, HPLC를 이용하여 지표성분 quercetin의 분석법을 확립하며 그에 따른 유효성 검정을 실시하고자 하였다. 유효성 검정 결과, 본 시험법에서 표준용액의 피크유지시간과 창녕양파추출액의 피크유지시간이 일치하였으며 동일한 spectrum을 나타내어 특이성을 확인하였다.
개별인정형 건강기능식품 기능성원료로 등록하기 위한 지표성분으로서 의약품 등 분석법의 밸리데이션에 대한 가이드라인(12)을 근거로 하여 특이성(specificity), 직선성(linearity), 정확성(accuracy), 정밀성(precision), 검출한계(limit of detection, LOD, S/N=3.3) 및 정량한계(limit of quantitation, LOQ, S/N=10)로 시험법을 검증하였다.

개별인정형 건강기능식품 기능성원료로 등록하기 위한 지표성분으로서 의약품 등 분석법의 밸리데이션에 대한 가이드라인(12)을 근거로 하여 특이성(specificity), 직선성(linearity), 정확성(accuracy), 정밀성(precision), 검출한계(limit of detection, LOD, S/N=3.3) 및 정량한계(limit of quantitation, LOQ, S/N=10)로 시험법을 검증하였다.
또한 표준용액과 창녕양파추출액의 PDA spectrum을 측정에서도 동일한 spectrum을 나타내어 본 시험법의 특이성을 확인하였다(Fig. 3).

2와 같이 다른 물질과 간섭 없이 성분이 분리되었으며 표준용액의 피크유지시간과 창녕양파추출액의 피크 유지시간이 일치하였다. 또한 표준용액과 창녕양파추출액의 PDA spectrum을 측정에서도 동일한 spectrum을 나타내어 본 시험법의 특이성을 확인하였다(Fig. 3).
이를 water : 5% acetic acid : acetonitrile(40:30:30, v/v)을 이용하여 0.001, 0.002, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1 mg/ mL로 단계적으로 희석하여 0.45 μm membrane filter로 여과한 것으로 표준용액으로 사용하였으며, 표준용액을 이용하여 작성한 표준검량선으로부터 quercetin 함량을 구하였다.

이를 water : 5% acetic acid : acetonitrile(40:30:30, v/v)을 이용하여 0.001, 0.002, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1 mg/ mL로 단계적으로 희석하여 0.45 μm membrane filter로 여과한 것으로 표준용액으로 사용하였으며, 표준용액을 이용하여 작성한 표준검량선으로부터 quercetin 함량을 구하였다.
작성된 표준검량선으로부터 각 농도별 peak의 Signal to Noise(S/N) 비를 구하여 S/N비가 3.3이 될 때 검출한계, S/N비가 10이 될 때 정량한계를 계산하였다.

1 mg/mL의 단계적으로 희석한 quercetin 표준용액을 HPLC로 분석하여 peak 면적비에 대한 농도비의 관계를 표시하는 표준검량선을 작성하였다. 작성된 표준검량선으로부터 각 농도별 peak의 Signal to Noise(S/N) 비를 구하여 S/N비가 3.3이 될 때 검출한계, S/N비가 10이 될 때 정량한계를 계산하였다.
정밀성: 시료(창녕양파추출액)를 전처리법에 따라 처리된 시험용액을 inter-day와 intra-day로 나누어 정밀성 실험을 실시하였다.

정밀성: 시료(창녕양파추출액)를 전처리법에 따라 처리된 시험용액을 inter-day와 intra-day로 나누어 정밀성 실험을 실시하였다. Inter-day는 1일 1구간으로 3일간 진행하였고 intra-day는 1일 3구간(9:00 AM, 3:00 PM, 9:00 PM)으로 나누어 진행하였으며, 각 시험은 구간마다 3회 9반복하여 HPLC로 분석하였다.
직선성, 정량한계 및 검출한계: 0.001, 0.002, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1 mg/mL의 단계적으로 희석한 quercetin 표준용액을 HPLC로 분석하여 peak 면적비에 대한 농도비의 관계를 표시하는 표준검량선을 작성하였다.

직선성, 정량한계 및 검출한계: 0.001, 0.002, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1 mg/mL의 단계적으로 희석한 quercetin 표준용액을 HPLC로 분석하여 peak 면적비에 대한 농도비의 관계를 표시하는 표준검량선을 작성하였다. 작성된 표준검량선으로부터 각 농도별 peak의 Signal to Noise(S/N) 비를 구하여 S/N비가 3.
창녕양파추출액의 quercetin 분석은 Crozier 등(10)과 Wang과 Helliwell(11)의 방법을 변형하여 실시하였으며, Hewlett Packard 1100 series HPLC system(Palo Alto, CA, USA)으로 분석하였다.

창녕양파추출액의 quercetin 분석은 Crozier 등(10)과 Wang과 Helliwell(11)의 방법을 변형하여 실시하였으며, Hewlett Packard 1100 series HPLC system(Palo Alto, CA, USA)으로 분석하였다. 분석조건은 Table 1과 같으며, 분석용 칼럼은 ZORBAX C₁₈(4.
특이성: 표준용액과 전처리방법으로 처리한 창녕양파추출액을 HPLC로 분석한 뒤 크로마토그램을 비교하여 quercetin peak가 분리되는지 확인하였으며 Photo diode array(PDA) spectrum을 측정하여 동일한 spectrum을 나타내는지도 확인하였다.

특이성: 표준용액과 전처리방법으로 처리한 창녕양파추출액을 HPLC로 분석한 뒤 크로마토그램을 비교하여 quercetin peak가 분리되는지 확인하였으며 Photo diode array(PDA) spectrum을 측정하여 동일한 spectrum을 나타내는지도 확인하였다.
회수율: 본 연구에서 사용한 전처리법을 이용하여 quercetin이 함유되어 있지 않은 공시료(우유)에 표준용액 0.05, 0.075, 0.1 mg/mL의 세 가지 농도를 각각 첨가하여 회수율 실험을 실시하였다.

회수율: 본 연구에서 사용한 전처리법을 이용하여 quercetin이 함유되어 있지 않은 공시료(우유)에 표준용액 0.05, 0.075, 0.1 mg/mL의 세 가지 농도를 각각 첨가하여 회수율 실험을 실시하였다. 각 시험은 3회 9반복하였으며 HPLC로 분석하여 얻어진 면적을 표준용액의 면적과 비교하여 회수율을 구하였다.
회수율은 quercetin이 함유되어 있지 않은 공시료(우유)에 표준용액 0.05, 0.075, 0.1 mg/mL의 세 가지 농도를 첨가하고 앞의 전처리법에 의해 처리한 뒤 HPLC로 분석하여 검출되는 농도를 측정하였다.

회수율은 quercetin이 함유되어 있지 않은 공시료(우유)에 표준용액 0.05, 0.075, 0.1 mg/mL의 세 가지 농도를 첨가하고 앞의 전처리법에 의해 처리한 뒤 HPLC로 분석하여 검출되는 농도를 측정하였다. Table 2에 나타난 바와 같이 quercetin의 회수율은 0.

대상 데이터

본 실험에서 사용한 창녕양파추출액은 Cha 등(8)의 방법에 따라 창녕양파(지리적표시제 제30호)를 세척 및 세절한 다음 천연조향제(다시마, 당귀, 천궁, 차즈기, 갈근, 감초)와 함께 가열추출(96～99℃) 후 여과 및 농축하여 제조한 것(9)을 시료로 사용하였다.

본 실험에서 사용한 창녕양파추출액은 Cha 등(8)의 방법에 따라 창녕양파(지리적표시제 제30호)를 세척 및 세절한 다음 천연조향제(다시마, 당귀, 천궁, 차즈기, 갈근, 감초)와 함께 가열추출(96～99℃) 후 여과 및 농축하여 제조한 것(9)을 시료로 사용하였다. 분석을 위해 시료는 칭량하여 60% ethanol 40 mL와 6 N HCl 5 mL를 첨가하여 용해시킨 후 95℃에서 2시간 동안 환류 냉각하였다.
분석조건은 Table 1과 같으며, 분석용 칼럼은 ZORBAX C18(4.6×150 mm, 5 μm, XDB-C18, Hewlett Packard Co.)을 사용하였다.

분석조건은 Table 1과 같으며, 분석용 칼럼은 ZORBAX C18(4.6×150 mm, 5 μm, XDB-C18, Hewlett Packard Co.)을 사용하였다.
이러한 생리적 기능성을 다량 함유한 양파를 소재로, 지역 농가의 소득을 창출하며 개별인정형 건강기능식품 기능성 원료로 개발, 등록하기 위해 지리적 표시 제30호 창녕양파를 이용하여 창녕양파추출액을 제조하였다.

이러한 생리적 기능성을 다량 함유한 양파를 소재로, 지역 농가의 소득을 창출하며 개별인정형 건강기능식품 기능성 원료로 개발, 등록하기 위해 지리적 표시 제30호 창녕양파를 이용하여 창녕양파추출액을 제조하였다.

성능/효과

Quercetin의 회수율은 0.05 mg/mL에서는 82.36～95.26%, 0.075 mg/mL는 82.70～98.24%, 0.1 mg/mL은 87.91～95.11%의 범위의 회수율을 보였으며, intra-day에서의 정밀도(RSD)는 0.10～3.28%, inter-day에서는 0.96～5.79%의 정밀도를 나타내어 창녕양파추출액의 지표성분인 quercetin의 분석법은 적합한 시험법임이 검증되었다.

5 mg/L로 설정되었다. Quercetin의 회수율은 0.05 mg/mL에서는 82.36～95.26%, 0.075 mg/mL는 82.70～98.24%, 0.1 mg/mL은 87.91～95.11%의 범위의 회수율을 보였으며, intra-day에서의 정밀도(RSD)는 0.10～3.28%, inter-day에서는 0.96～5.79%의 정밀도를 나타내어 창녕양파추출액의 지표성분인 quercetin의 분석법은 적합한 시험법임이 검증되었다.
검량선의 상관계수(R2)는 0.9986로 높은 직선성을 보여 분석에 적합함을 알 수 있었으며, 검출한계는 0.2 mg/L, 정량한계는 0.5 mg/L로 설정되었다.

유효성 검정 결과, 본 시험법에서 표준용액의 피크유지시간과 창녕양파추출액의 피크유지시간이 일치하였으며 동일한 spectrum을 나타내어 특이성을 확인하였다. 검량선의 상관계수(R²)는 0.9986로 높은 직선성을 보여 분석에 적합함을 알 수 있었으며, 검출한계는 0.2 mg/L, 정량한계는 0.5 mg/L로 설정되었다. Quercetin의 회수율은 0.
유효성 검정 결과, 본 시험법에서 표준용액의 피크유지시간과 창녕양파추출액의 피크유지시간이 일치하였으며 동일한 spectrum을 나타내어 특이성을 확인하였다.

개별인정형 건강기능식품 기능성 원료로 개발한 창녕양파추출액의 표준화를 위해 지표성분으로 quercetin을 설정하였으며, HPLC를 이용하여 지표성분 quercetin의 분석법을 확립하며 그에 따른 유효성 검정을 실시하고자 하였다. 유효성 검정 결과, 본 시험법에서 표준용액의 피크유지시간과 창녕양파추출액의 피크유지시간이 일치하였으며 동일한 spectrum을 나타내어 특이성을 확인하였다. 검량선의 상관계수(R²)는 0.
이상의 분석결과, 본 연구의 기기분석법과 유효성검증을 통해 건강기능식품 기능성 원료로서의 창녕양파추출액의 표준화를 위해 존재하는 지표성분인 quercetin의 분석이 가능함을 확인하였다.

이상의 분석결과, 본 연구의 기기분석법과 유효성검증을 통해 건강기능식품 기능성 원료로서의 창녕양파추출액의 표준화를 위해 존재하는 지표성분인 quercetin의 분석이 가능함을 확인하였다.
표준용액과 시료 전처리방법으로 처리한 창녕양파추출액의 크로마토그램을 비교하여 quercetin peak가 분리되는 지를 확인한 결과, Fig. 2와 같이 다른 물질과 간섭 없이 성분이 분리되었으며 표준용액의 피크유지시간과 창녕양파추출액의 피크 유지시간이 일치하였다.

특이성은 불순물, 분해물, 배합성분 등의 혼재 상태에서 분석대상물질을 선택적으로 정확하게 측정할 수 있는 능력으로, 다른 물질과의 간섭 없이 성분이 분리되는 것에 의해 특이성을 확인하게 된다. 표준용액과 시료 전처리방법으로 처리한 창녕양파추출액의 크로마토그램을 비교하여 quercetin peak가 분리되는 지를 확인한 결과, Fig. 2와 같이 다른 물질과 간섭 없이 성분이 분리되었으며 표준용액의 피크유지시간과 창녕양파추출액의 피크 유지시간이 일치하였다. 또한 표준용액과 창녕양파추출액의 PDA spectrum을 측정에서도 동일한 spectrum을 나타내어 본 시험법의 특이성을 확인하였다(Fig.

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핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
양파	양파란?	백합과에 속하는 다년생 식물 양파(Allium cepa L.)는 백합과에 속하는 다년생 식물로 quercetin, quercitrin, rutin 등의 flavonoid 물질이 풍부하여 다양한 생리적 기능성을 가지는 것으로 알려져 있다(1,2). 특히 양파의 주된 flavonoid 성분인 quercetin은 벤젠환의 탄소에 -OH기와 탄소의 2와 3사이의 이중결합, 4의 탄소위치에 carbonyl기, 그리고 A고리와 B고리에 결합되어 있는 -OH기에 의해서 항산화 활성을 갖는 구조를 가지고 있어 활성산소의 산화활동을 억제하거나 제거하는 능력이 매우 강하다(3,4)(Fig.
양파	양파에 포함된 flavonoid 물질은?	quercetin, quercitrin, rutin 등 양파(Allium cepa L.)는 백합과에 속하는 다년생 식물로 quercetin, quercitrin, rutin 등의 flavonoid 물질이 풍부하여 다양한 생리적 기능성을 가지는 것으로 알려져 있다(1,2). 특히 양파의 주된 flavonoid 성분인 quercetin은 벤젠환의 탄소에 -OH기와 탄소의 2와 3사이의 이중결합, 4의 탄소위치에 carbonyl기, 그리고 A고리와 B고리에 결합되어 있는 -OH기에 의해서 항산화 활성을 갖는 구조를 가지고 있어 활성산소의 산화활동을 억제하거나 제거하는 능력이 매우 강하다(3,4)(Fig.
quercetin	양파의 quercetin성분이 혈중지질 농도를 저하시키는 효과를 가지는 경로는?	혈액 중의 βlipoprotein과 β-lipoprotein cholesterol의 작용을 유의적으로 억제하여 혈중지질 농도를 저하시키는 효과 1). 또한 collagen에 의해 촉진되는 혈소판의 활성을 억제시켜 혈행 개선효과를 가지며, 혈액 중의 βlipoprotein과 β-lipoprotein cholesterol의 작용을 유의적으로 억제하여 혈중지질 농도를 저하시키는 효과가 있는 것으로 알려져 있다(5,6).

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전선영(11) 정은정(35) 백정화(8) 차용준(95)

참고문헌 (15)

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